Breast Cancer Research, 2005; 7(2): R248-R255 (más artículos en esta revista)

Claudin 7 de expresión y localización en la glándula mamaria normal murino y murino tumores mamarios

BioMed Central
Brigitte Blackman (beeblackman@hotmail.com) [1], Tanya Russell (tanya.russell @ uchsc.edu) [1], Steven K Nordeen (Steve.nordeen @ uchsc.edu) [1], Daniel Medina (dmedina @ bcm . Tmc.edu) [2], Margaret C Neville (peggy.neville @ uchsc.edu) [1]
[1] Universidad de Colorado Health Sciences Center, Denver, Colorado, EE.UU.
[2] Baylor College of Medicine, Houston, Texas, EE.UU.

Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons License (http://creativecommons.org/licenses/by/2.0], que permite el uso irrestricto, la distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que la obra original sea debidamente citada.

Resumen
Introducción

Claudins, asociada a la membrana tetraspanin proteínas, están normalmente asociados con los estrictos los cruces de las células epiteliales en los que confieren una variedad de propiedades de permeabilidad a la barrera transepithelial. Uno de los miembros de esta familia, claudin 7, se ha demostrado que el ser humano se expresa en el epitelio mamario y algunos tumores de mama. Para establecer las bases para experimentos funcionales en esta molécula, se examinaron la expresión de desarrollo y localización de claudin 7 en el epitelio mamario murino y en una selección de tumores mamarios murinos.

Método

Se usó el tiempo real de reacción en cadena de polimerasa, mRNA localización in situ e inmunohistoquímica (IHC) para examinar la expresión y localización de claudin 7. Congelados secciones fueron examinadas por microscopía confocal digital para colocalización con el apretado nudo de la proteína-ZO1.

Resultados

Claudin 7 es constitutivamente expresada en el epitelio mamario en todas las etapas de desarrollo, y la relación de su mRNA a la de la queratina 19 es casi constante a través del desarrollo. Por IHC, claudin 7 se encuentra en la parte basolateral de la célula en el que parecía ser localizado para discretos vesículas. Escasa colocalización con el apretado nudo de andamios-ZO1 proteína se observó. Resultados similares se obtuvieron de IHC epitelio de la vía aérea y algunos túbulos renales, pero claudin 7 hizo en parte colocalize con ZO1 en EPH4 células, una normal línea de células mamarias murinas, y en el epidídimo. La molécula fue localizada en el citoplasma de MMTV-neu trasplantable murino y la línea celular TM4, TM10, y TM40A, en la que su relación con citoqueratina fue mayor que en el epitelio mamario normal.

Conclusión

Claudin 7 es constitutivamente expresada en el epitelio mamario en unos niveles de igualdad en todo el desarrollo, así como en los tumores murinos examinados. Si bien es capaz de localizar a los cruces apretado, en el epitelio de la glándula mamaria, la vía aérea, y el riñón es su mayor o por entero a punctata citoplásmica estructuras, a menudo cerca de la superficie basolateral de las células y posiblemente asociados con membranas basolaterales. Estas observaciones sugieren que claudin 7 pudieran estar implicados en el tráfico de vesículas a la membrana basolateral, posiblemente frente al citoplasma de la estabilización de vesículas o participar en las interacciones célula-matriz.

Introducción

El claudins forman una gran familia de proteínas de membrana tetraspanin cree que el principal obstáculo a la formación de las proteínas de los cruces apretado, la célula-célula contactos en la frontera apical de las células epiteliales que paracellular control de la circulación de solutos. Estas proteínas son muy conservadas, con cuatro dominios transmembrana y dos bucles hidrofóbicas extracelular; este último se cree que las células de mediar en la adhesión celular [1], y para conferir propiedades específicas paracellular permeabilidad sobre monocapas de células [2, 3]. Claudin 7 comparte la general características estructurales de la familia, principalmente en sus diferentes amino-terminal citoplásmico cola [4]. La molécula ha demostrado ser asociados con las células epiteliales en la mama humana [5], y su pérdida se asocia con algunas de mama y de cabeza y cuello, tumores malignos [5, 6]. Se ha demostrado que se expresa en partes del túbulo renal [7] y el epitelio de la vía aérea [8], en la que se localiza a los aspectos basolateral de las células. Aquí nos muestran que claudin 7 es constitutivamente presentes en el epitelio de la glándula mamaria murino, de nuevo localizados, y no ajustado a los cruces, pero a punctata estructuras en o cerca de la superficie basolateral de las células. Estuvo presente en todas las fronteras de células murinas de varios tumores mamarios. Sin embargo, la proteína puede localizar a los cruces apretado, como lo demuestra el parcial colocalización con ZO1 cultivadas en células epiteliales mamarias y epidídimo, lo que sugiere una posible doble función según el tipo de tejido.

Método
Animales y preparación de tejidos

Ratones CD-1, comprado a Charles River Laboratorio de Cría (Wilmington, DE), se mantuvieron en el USDA-aprobado Animal Resource Center de la Universidad de Colorado Centro de Ciencias de la Salud. Todos los procedimientos fueron aprobados por el Cuidado de Animales institucional y el empleo. El cuarto glándulas mamarias de ratones hembra virgen a los 3, 6 y 12 semanas de edad, de los ratones hembra en los primeros meses de gestación (5-7 días), a mitad de la gestación (12 días) y el final de la gestación (18 días), en los días 2 Y 10 de la lactancia, y los días 21 y 29 de la involución se colectaron después de matar con una dosis letal de pentobarbital. Hígado, pulmón y riñones se obtuvieron de ratones hembra virgen y epidídimo de ratones machos. El día en que se observaron tapones vaginales se cuenta como el primer día del embarazo. Ratones overexpressing el Her2 / neu oncogén [9] se obtuvieron de los Laboratorios Jackson, y los tumores mamarios fueron disecados y congelado cuando llegaron a alrededor de 0,5 cm de diámetro. El trasplante de modelos tumorales TM4, TM10L, TM40 y se mantienen en el laboratorio, tal como se describe Medina [10]. Los tejidos fueron flash-congelado en nitrógeno líquido en el Tri-Zol reactivo (Gibco BRL, Life Technologies) para la purificación de RNA total. Para las extracciones de proteínas, el tejido se lavaron dos veces en 1 ml de solución salina amortiguadora de fosfato (PBS) y, a continuación, en 3 volúmenes del 1% Nonidet P40 buffer (25 mM Hepes-NaOH, pH 7,4, 150 mM NaCl, 4 mM EDTA, 1% Nonidet P40), que contiene inhibidores de la proteasa (10 μ g / μ l leupeptina, 10 μ g / μ l aprotinina, 10 μ M pepstatin A, 1 mM phenylmethylsulphonyl fluoruro, en dimetil sulfóxido). Por hibridaciones e inmunohistoquímica de tejidos congelados en el lugar, fueron colocados en los tejidos de tejido-Tek OCT 4583 Compuesto (Sakura, Torrance, CA) y en la pantalla-y isopentane congelados en nitrógeno líquido. Todas las muestras fueron almacenadas a - 70 ° C hasta que esté listo para su uso.

La caracterización de un anticuerpo contra la claudin 7

Un anticuerpo de conejo se hizo en contra de la costumbre de la carboxi-terminal del péptido murino claudin 7, APRSYPKSNSSKEYV, por Zymed Laboratories (San Francisco, CA). Esta afinidad de los anticuerpos purificados obligado sólo un péptido de 23 kDa por el Western Blot, no tienen una reacción cruzada con claudin 1, su más cercano congénere, en claudin-1-Cos células transfectadas o en la frontera de la apical del epitelio mamario claudin 1 donde está presente En ocasiones complejos, y sólo teñidas epitelios donde su ARNm se ha demostrado. Tinción fue bloqueada por la preincubación de los anticuerpos con el péptido. Cos transfectadas con células de longitud completa claudin 7 fueron manchados por este anticuerpo, pero no por un anticuerpo contra claudin 1.

Protocolo de tiempo real de reacción en cadena de polimerasa

Por tiempo real de la transcriptasa inversa de la reacción en cadena de polimerasa, ARN se purificó con el sistema de Qiagen: 1 μ g de DNasa tratados RNA se utilizó para cada reacción. Triplicado muestras de tejidos se analizaron por duplicado con la ABI Prism 7700 secuencia sistema de detección, con el pulmón como control positivo. Primer secuencias fueron los siguientes: murino claudin 7, adelante 5 '-CGAAGAAGGCCCGAATAGCT-3' (338-337), inversión de 5 '-GCTACCAAGGCAGCAAGACC-3' (407-388), probe5 '-GCCACAATGAAAACAATGCCTCCAGTCA-3' (359-386) ; Murino citoqueratina 19, adelante 5 '-TTTAAGACCATCGAGGAC-3', inversión de 5 '-TCATACTGACTTCTCATCTCAC-3'.

La inmunohistoquímica y la microscopía confocal digital

Rat anti-ratón ZO1 de anticuerpos se obtuvo de Chemicon International Inc (Temecula, CA). Muestras de tejido se redujeron a 10 μ m de espesor de los bloques congelados, con Damon / IEC división fijado en minotome - 18 a -20 ° C. Los artículos fueron recolectados en Cell-Tak revestidos coverslips y se fija más vapor-con paraformaldehido durante 15 min. Secciones nunca se deja secar. PBS se añadió cuidadosamente a fin de no perturbar las secciones. Tejido se permeabilized con 1% Tritón X-100 durante 15 minutos, enjuagarse bien con PBS y bloqueado sterifiltered con 10% de suero normal de burro por 20 min. Todas las soluciones de anticuerpos fueron microfuged durante 20 min antes de su uso. El claudin anticuerpo fue diluido 1:1000. Primaria incubaciones fueron de 1 hora a 21-22 ° C, seguido de una amplia lavados en PBS, en general, seis veces durante 5 minutos cada una. Secundaria anticuerpos fueron diluidos, de conformidad con las instrucciones del fabricante, en PBS solo. El anfitrión de todas las especies secundarias de anticuerpos fue burro y secundaria todos los anticuerpos se adsorbido cruzada contra las proteínas de suero de ratón. Los anticuerpos utilizados fueron conjugado con fluoresceína, CY3 o CY5. Secundaria anticuerpos se combinaron con 0,6 μ g / ml 4,6-diamidino-2-phenylindole, e incubadas en el tejido de 1 hora. Coverslips fueron lavadas brevemente y permite a remojo durante la noche en PBS.

Las imágenes se capturaron con SlideBook software (Intelligent Imaging Innovations, Inc, Denver, CO) en un microscopio Nikon Diaphot TMD equipados para fluorescencia con una lámpara de xenón y filtro de ruedas (Sutter Instruments, Novato, CA), fluorescente filtros (Chroma, Brattleboro, VT), refrigerado dispositivo acoplado por carga cámara (Cooke, Tonawanda, NY) y de pasos de motor (Intelligent Imaging Innovations, Inc, Denver, CO). Multi-flúor imágenes se fusionaron, deconvolved, y con renormalizado SlideBook software.

Resultados
Expresión del desarrollo del claudin 7 mRNA en la glándula mamaria

Figura 1a muestra claudin 7 la expresión de genes en función de la etapa de desarrollo de la glándula mamaria de ratón a partir de la virgen de los animales (no embarazadas no lactantes), a través del embarazo (días P5, P12 y P18), la lactancia (días L2, L10, y L19), y la involución (días L22 y L29). Aumento de la expresión de genes de más de 1.000 veces entre la virgen y la lactancia temprana glándula, la nivelación a través de la lactancia y la reducción de tarde en la involución (día L29) con la pérdida de las células epiteliales. Determinar si la expresión de claudin 7 es una función de la etapa de desarrollo o el número de células epiteliales, que también examinó la expresión de la queratina 19, que se encuentra sólo en las células del epitelio luminal [11]. Como puede verse, claudin 7 de expresión paralelo al de la queratina 19. Además, la proporción de claudin 7 a la queratina 19 (Fig. 1a, la línea de puntos) es relativamente constante durante todo el embarazo y la lactancia temprana, el aumento sólo más tarde durante la lactancia, cuando la expresión de mRNA de queratina 19 disminuye considerablemente.

A finales de involución, día L29, claudin 7 expresión es menor que la de la queratina 19, por razones que no son claras, pero probablemente tienen que ver con los tipos y las características de las células del epitelio glandular presente durante fines de remodelación. Similares resultados fueron obtenidos a partir de análisis de microarrays (datos no presentados). Hibridación in situ con el 35-S etiquetados ARN sondas a claudin 7 mostró que el ARNm fue localizado en el epitelio de la virgen, embarazadas, madres en periodo de lactancia y los animales (Fig. 1b]. Llegamos a la conclusión de que, en la glándula mamaria normal, claudin 7 es un marcador de células epiteliales expresadas en aproximadamente constante a través de los niveles de desarrollo. Los cambios muy grandes en los niveles de expresión durante el embarazo, muy probablemente, reflejan un aumento en el número de células como el epitelio mamario se expande de un sistema de conductos escasa en la glándula virgen, a una densa masa de células madres en periodo de lactancia en una glándula en la que el tejido adiposo es en gran medida Obliterado.

Immunolocalization de claudin 7 en la glándula mamaria

Hemos hecho y caracterizado una afinidad de los anticuerpos purificados contra la cola citoplásmica de claudin 7 (ver Métodos), que resultó muy satisfactoria para ambos Western-Blots (Fig. 2a] e inmunohistoquímica en ambas secciones de parafina y congeladas. En vista de la bien conocida asociación de claudins apretado con los cruces, nos sorprendió encontrar que claudin manchado la región basolateral de las células mamarias en todas las fases de desarrollo (Fig. 2b, c]. Una estructura ductal rodeado de estroma adiposo se muestra en la virgen; alvéolos de las embarazadas y lactantes glándulas También se muestran (Fig. 2b]. Tinción fue bloqueado cuando el anticuerpo se preabsorbed con el péptido claudin 7 contra el que se hizo (Fig. 2b, abajo a la derecha). Al igual que con el análisis in situ, la mancha sólo se observó en células epiteliales luminales. Aunque parece que hay algunos colocalización de claudin 7 con tinción para el apretado nudo de andamios-ZO1 proteína en la parte inferior de poder imágenes de la Fig. 2b, en un aumento mayor (Fig. 2c] claudin 7 es totalmente localizado a la basal y lateral citoplásmica Regiones, en el que a menudo parece puntiforme en la naturaleza, sobre todo cuando no se apposed de cerca a la frontera de células. Stain fue excluido de los núcleos (azul) y en gran parte de los cruces apretado (verde), como lo demuestra la superposición entre el verde y el rojo mancha en la Fig. 2c. Parece probable que exista tinción en la membrana basolateral de este tejido, pero la membrana basal y lateral de la células epiteliales mamarias están profundamente infolded y localización de la membrana no se puede evaluar a los posibles aumentos con el microscopio de luz.

Inmunohistoquímica cuando se utiliza en la caracterización de claudins, siempre existe la preocupación de que la cruz-anticuerpo reacciona con otro claudin especies. Hemos encontrado claudins 1, 3, y 8 en el epitelio mamario murino (MC Neville, datos no publicados), pero claudin 7 mancha muestra totalmente diferentes patrones de estos claudins. Como se muestra en la Fig. 2a, claudin 1 está localizado en la posición de las ocasiones presentan complejos; claudin 3 está presente en el epitelio de las glándulas virgen y embarazada, mientras que claudin 8 sólo está presente durante la lactancia. Estos experimentos se describen en detalle en otra parte.

Claudin 7 localización en otros tipos de células

Sukumar y colegas [5] informó de que claudin 7 fue localizado en el estrecho de los cruces humanos línea celular de carcinoma mamario MCF-7, utilizando un anticuerpo dirigido hacia la cola citoplásmica de la proteína humana, que se diferencia por un aminoácido de la proteína de ratón. Por tanto, nuestro estudio claudin 7 tinción en el ratón normal de las células mamarias línea EPH4 [12, 13]. Figura 3a muestra la distribución de claudin y ZO-1 en las células EPH4. Claudin 7 claramente colocalizes con ZO-1 con un poco menos compacto de distribución, como lo demuestra la zy imagen en la parte superior de la figura, así como la imagen justo debajo de xy. Una dispersión de las vesículas que contienen citoplásmica claudin 7 también se puede ver. Este hallazgo sugiere que claudin 7 es capaz de localizar a los cruces apretado, una conclusión apoyada por la distribución de claudin 7 en el epidídimo (Figura 3b], donde claudin 7 colocalized con ZO-1 en la apical fronteras de algunas células, pero no a otras . Punctata citoplásmica mancha para claudin 7 también puede observarse en algunas células.

Claudin 7 mRNA se informó en el pulmón y el riñón, hígado con ser negativo [4]. Por tanto, nuestro estudio estos tejidos y claudin 7 encontró que estaba presente en células que recubren las estructuras bronquiolares de pulmón, donde su distribución es principalmente citoplásmico como se observó anteriormente [8] (Fig. 3c]. Sin embargo, un cuidadoso examen de una en blanco y negro la imagen en el más alto aumento en el luminal de las células de esta estructura muestra algunos claudin 7 a ser colocalized con ZO-1, lo que sugiere que también podría estar asociado con cruces apretado en estas células. No había ninguna mancha en los alvéolos pulmonares. En la corteza renal encontramos claudin 7 localizado sólo a ciertos sectores, como la conexión de los túbulos y conductos cortical recogida por Li y sus colegas [7], donde se mancha claramente basolaterales (Fig. 3d]. Porque nuestros anticuerpos es diferente de la utilizada por Li y sus colegas, nuestro hallazgo confirma esta localización. A mayor aumento fueron la mancha es puntiforme, como en el epitelio mamario y de las vías respiratorias. No específicos claudin mancha se observó en el hígado (Fig. 3e]. Estos resultados indican que claudin 7 es capaz de localizar a los cruces apretado, al igual que en las células epiteliales mamarias en cultivo y del epidídimo; sin embargo, en la glándula mamaria, la vía aérea, y el riñón es su mayor o por entero a punctata citoplásmica estructuras, a menudo cerca de la superficie basolateral de Las células y posiblemente asociados a la membrana basolateral. En ningún tejido de la proteína se observó en los núcleos.

Claudin 7 localización en tumores mamarios

Se examinaron cuatro tipos de tumor mamario: los tumores que surgen en el ratón transgénico que expresa la Erb2 receptor bajo el control del promotor del virus de tumor mamario [9], y tres trasplantable tumores obtenidos de la DG de laboratorio [10]. Todos los tumores expresó claudin 7 niveles de mRNA en no más de dos veces que en la lactancia la glándula mamaria cuando normalizado a ribosomal RNA (Fig. 4a]. Aunque son tumores más estrechamente relacionados con la glándula embarazadas, madres en periodo de lactancia que elegimos la glándula para la comparación porque, al igual que los tumores, que se compone en gran parte de las células epiteliales. Curiosamente, la proporción de claudin 7 a la queratina 19 en los tumores varió de 4 a 60 veces que en la lactancia la glándula, lo que refleja una menor expresión de la queratina 19, y posiblemente una pérdida de diferenciación, en los tumores. En todos los tumores murinos examinados en el presente caso, claudin 7 fue localizado en la región perimembrane, como demuestra la sección de la TM4 tumor (Fig. 4b]. Ninguno de estos tumores mostraron ZO1 manchas, lo que indica que carecen de los cruces apretado, de manera que la claudin 7 observado aquí probablemente asociada con vesículas de membrana basolateral y, posiblemente, con membranas, como en el normal de las células de la glándula mamaria. Sukumar y colegas [5] observaron una pérdida de claudin 7 de expresión en algunos tumores humanos, en particular los tumores lobular. Sin embargo, este hallazgo no fue cierto en el caso de los tumores mamarios de ratón examinados.

Discusión

Encontramos claudin 7 a ser un elemento constitutivo del epitelio mamario, en donde es localizado en la región basolateral de la célula. La conclusión de que la relación de su mRNA a la de la queratina 19 es relativamente constante durante todo el ciclo de desarrollo sugiere que la molécula podría ser una alternativa marcador a la queratina de la proporción de células epiteliales en la glándula mamaria. No está claro si los más de 1000 veces más en la expresión entre la virgen de la glándula y el comienzo de la lactancia indica que el número de células epiteliales aumenta en esa proporción, porque parte del aumento podría ser una función de un aumento en el tamaño de la celda como Diferenciar las células. El rápido aumento entre la glándula y el embarazo virgen día 5 es coherente con los estudios que muestran un pico de la incorporación de timidina entre los días 2 y 5 de embarazo, cuando alrededor del 25% de las células estaban etiquetados [14, 15]. En ambos estudios, el etiquetado disminuyó después pero se mantuvo alrededor de 10% a casi el final del embarazo, en consonancia con el continuo aumento en ambos claudin 7 y queratina mRNA hasta el día P18.

Nuestros resultados son consistentes con las imágenes de claudin manchas en la glándula mamaria humana, en que una mancha difusa diaminobenzidene localización de la fosfatasa alcalina estuvo presente en todo el citoplasma [5]. Sin embargo, en este estudio no se trató de localizar claudin 7-mancha con apretado nudo de componentes. Basolaterales localización de otros claudins se ha observado. Claudin 1 fue localizado en el citoplasma en el epidídimo [16], [17] intestino, y la córnea [18]. Rahner y colegas [19] observó claudins 3, 4, y 5 que se distribuye lateralmente en diversas partes de la vía gastrointestinal. El descubrimiento de que claudin 7 se encuentra exclusivamente en la no-apretado nudo de las regiones mamarias y de las células epiteliales renales [7] sugiere que claudins podría tener funciones distintas de la regulación de la permeabilidad apretado de la salida. Nuestras imágenes parecen ser los primeros en mostrar claudin 7 mancha en la resolución lo suficientemente alta para mostrar puntiforme en la tinción citoplásmica mamaria, las vías respiratorias, renales y de las células epiteliales. Incluso en esta resolución, obtenido con confocal de imágenes digitales con una resolución de alrededor de 200 nm, no es posible discernir con certeza si claudin 7 se inserta en la membrana basolateral confusa de estos tipos de células. Si es así, es posible que las manchas representan vesículas citoplasmáticas en ruta hacia y desde la basolateral de las membranas, donde claudin 7 podría interactuar con los componentes de la matriz extracelular. Como precedente, claudin 11, un oligodendrocyte proteína, se ha demostrado que la interacción con la integrina α1-y para regular la proliferación y migración de oligodendrocitos en la cultura [20]. Otras posibilidades son que vesicular claudins podría regular apretado nudo de la permeabilidad por secuestrar apretado nudo de regulación de las moléculas fuera de la apretada cruces, o podrían estar involucrados en la estabilización de la vesícula compartimentos especializados en el citoplasma. Matsuda y colegas, utilizando time-lapse fotografía, han demostrado que claudin contienen vesículas citoplasmáticas pueden proceder de la brevedad de los cruces como la capa epitelial remodela [13]. Sin embargo, debido a claudin 7 es nunca observados en asociación con los cruces apretado en las células epiteliales mamarias, parece poco probable que estas vesículas tienen un origen en el complejo ocasiones. Nuestro modelo de células epiteliales mamarias, EPH4 células, está en posesión de un complemento de vesículas citoplasmáticas que podría permitir vivir de células estudios de imagen para determinar el origen y disposición de los claudin 7-vesículas que contienen. Es probable que la función de las vesículas puede ser mejor evaluado después de análisis de la composición de la claudin 7-citoplásmica vesículas que contienen.

Claudin 7 expresión es inversamente correlacionado con el grado histológico en una gran serie de los tumores de mama [5]. Estos mismos autores encontraron, de manera similar a nuestras observaciones con EPH4 células, que claudin 7 colocalized con ZO1 en MCF7 células de cáncer de mama y también puede observarse en lugares citoplásmica. Estuvo presente en luminal de las células de mama humano, en donde la tinción diaminobenzidine parece estar localizado en la membrana basolateral, aunque es difícil sacar una conclusión firme en la ausencia de un marcador como ZO1 apical. Una imagen de carcinoma ductal in situ en papel que muestra una distribución de la mancha notablemente similar a la de la TM10 tumor se muestra en la Fig. 4b. Este tumor línea se ha demostrado que tienen una morfología ductal [10].

Por tanto, concluimos que bajo grado carcinomas de mama muestran una distribución de la tinción celular similar a la observada en los tumores murinos. Curiosamente, los tumores murinos claudin 7 mostró en la expresión mRNA nivel igual o superior a la de la glándula mamaria en lactancia, donde la mayor proporción de las células del epitelio luminal son las células que dan lugar a los tumores mamarios. TM4, la más tumorigénicos de estas líneas, tiene la más alta expresión claudin 7, aunque el nivel es muy variable y no muy diferente a las otras líneas de examen. Curiosamente, TM4 y el MMTV-neu tumor había ratios de claudin citoqueratina 7 a menos de un octavo de que en el lento crecimiento TM10 línea. Todos los tumores de claudin 7 a citoqueratina ratios significativamente más altos que los de la gestación o lactancia glándula mamaria. Estas observaciones sugieren que la pérdida de la arquitectura frente al citoplasma de la estabilidad otorgada por la queratina podría ser un evento temprano en la tumorigénesis. Junto con los datos del laboratorio Sukumar [5], podríamos especular que la pérdida de claudin 7, como ocurre en los tumores de alto grado, altera las interacciones célula-matriz, lo que permite un mayor grado de movilidad de las células y contribuyendo a la metástasis.

Conclusión

Claudin 7 es un componente constitutivo de epitelio mamario en todas las etapas de desarrollo, el mantenimiento de un nivel de la expresión de genes que es aproximadamente proporcional a la cantidad de tejidos epiteliales en la glándula. Las proteínas no se asocia con los cruces apretado, pero se encuentra en las estructuras de partículas en el citoplasma, en general, más densas en las fronteras basolateral de las células. Su distribución es similar en los tumores mamarios, por lo menos en más bien diferenciadas. Claudin 7 función en el epitelio mamario es actualmente desconocida, pero podría estar relacionado con el tráfico de vesículas o interacciones célula-matriz.

Abreviaturas

IHC = inmunohistoquímica; PBS =-buffer fosfato salino.

Conflicto de intereses

Los autores declaran que no tienen intereses en conflicto.

Contribuciones de los autores

BB realiza en tiempo real la reacción de polimerasa en cadena y experimentos in situ y participa en el desarrollo de anticuerpos y la inmunocitoquímica. Ella escribió el primer borrador del manuscrito. TR asistida con la inmunocitoquímica. SKN previstas general conocimiento molecular para el diseño experimental y un aporte valioso en el manuscrito. DM TM siempre la serie de tumores. MCN concibe el estudio, realizado el alta resolución inmuno análisis y completó el manuscrito para su presentación. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

Agradecimiento

Esta investigación fue apoyada por el Departamento de Defensa de subvención DAMC17-01-1-0211 y las subvenciones R37-NIH HD19547 y HD38129-P01 para MCN.