Particle and Fibre Toxicology, 2004; 1: 3-3 (más artículos en esta revista)

ROS mediada por TNF-α y MIP-2 de la expresión génica en macrófagos alveolares expuestos a polvo de pino

BioMed Central
Huayan Long (huayan_long@hotmail.com) [1], Tingming Shi (Tmingshi@yahoo.com) [2], Paul J Borm (P. Borm @ HSZuyd.nl) [2], Juha Määttä (juha.maatta @ ttl . Fi) [3], Kirsti Husgafvel-Pursiainen (Kirsti.Husgafvel-Pursiainen @ ttl.fi) [3], Kai Savolainen (Kai.Savolainen @ ttl.fi) [3], Fritz Krombach (krombach@med.uni- Muenchen.de) [1]
[1] Instituto de Investigaciones Quirúrgicas de la Universidad de Munich, Munich, Alemania
[2] Institut für Umweltmedizinische Forschung, de la Universidad de Düsseldorf, Düsseldorf, Alemania
[3] Departamento de Higiene y Toxicología Industrial, Instituto Finlandés de Salud Ocupacional, de Helsinki, Finlandia

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Resumen
Antecedentes

Los síntomas respiratorios, el deterioro de la función pulmonar, asma y se han comunicado en los trabajadores expuestos al polvo de madera en una serie de estudios epidemiológicos. El pathomechanisms, sin embargo, no se conocen bien. En este sentido, hemos realizado un estudio de los efectos de polvo de pino (PD) y bomba de calor, pino tratado (HPD) sobre la liberación de especies reactivas de oxígeno (ROS) y los mediadores de la inflamación en rata macrófagos alveolares.

Métodos

El factor de necrosis tumoral-alfa (TNF-α) y la proteína inflamatoria de macrófagos-2 (MIP-2) liberación de proteínas, TNF-α y MIP-2 mRNA expresión, y la generación de ROS se estudiaron como puntos finales después de que el tratamiento de ratas con los macrófagos alveolares PD o HPD. En otra serie de experimentos, los antioxidantes glutatión y N-acetil-L-cisteína se incluyeron en combinación con el polvo de madera. Para determinar la endógeno oxidativo y capacidad antioxidante de polvos de madera, la resonancia de spin electrónico (ESR) se usó la espectroscopía.

Resultados

Después de 4 h de incubación, tanto PD HPD y provocó una significativa (p <0.05) el aumento de la expresión de mRNA de TNF-α y MIP-2, así como una concentración que dependen de la liberación de TNF-α y MIP-2 de proteínas. Curiosamente, PD inducida por un valor significativamente mayor de TNF-α y MIP-2 de producción de HPD. Por otra parte, un significativo aumento de la producción de ROS se observó en los macrófagos alveolares expuestos a los dos PD y HPD. En presencia de los antioxidantes glutatión y N-acetil-L-cisteína, el PD-y HPD inducida por la liberación de ROS, TNF-α y MIP-2 se redujo significativamente. Por último, los análisis de resonancia de spin electrónico demostrado una mayor capacidad antioxidante endógeno de HPD en comparación con el PD. La endotoxina no estuvo presente en ninguno de los dos muestra de polvo.

Conclusión

Estos resultados indican que el polvo de pino es capaz de inducir la expresión de TNF-α y MIP-2 en los macrófagos alveolares de rata por un mecanismo que es, al menos en parte, mediada por ROS.

Antecedentes

Además de cáncer nasal chino-[1], la exposición al polvo de madera se ha demostrado que se asocia con una gran variedad de afecciones agudas y crónicas no malignas respiratorias efectos en la salud, así como irritación de los ojos y la dermatitis [2, 3]. Sin embargo, los mecanismos subyacentes que participan no se conocen bien y controvertido tema de la discusión. Aunque se han encontrado marcadores de inflamación nasal y en el lavado broncoalveolar de madera de los individuos expuestos polvo [4 - 6], otros estudios no corroboran la hipótesis de que la inflamación juega un papel en el polvo de madera inducida por obstrucción de la vía aérea [7]. Por otra parte, estudios recientes no apoyan la hipótesis de que las denuncias relacionadas con la exposición al polvo de madera son mediados por IgE [8, 9].

En las instalaciones de procesamiento de la madera, la proporción de polvo respirable de madera oscila entre el 6% y el 75% del total de la madera en aerosol [2]. Partículas de polvo respirable de madera puede depositar en los alvéolos pulmonares e interactuar con los macrófagos alveolares, un tipo de células que juega un papel importante en la fagocitosis y remoción de las partículas inhaladas. Tras la interacción con las partículas nocivas, macrófagos alveolares puede producir un amplio espectro de mediadores pro-inflamatorios, como el factor de necrosis tumoral-alfa (TNF-α) y la proteína inflamatoria de macrófagos-2 (MIP-2), así como reactivas de oxígeno (ROS) Y especies de nitrógeno [10 - 13]. TNF-α es una de las citocinas preeminente que actúa como iniciadora de procesos inflamatorios en el pulmón [14]. Las quimiocinas MIP-2 que se conoce para mediar neutrofílica respuestas inflamatorias en el pulmón [10, 15]. ROS han demostrado no sólo el daño a las células por peroxidizing lípidos y alterar el ADN y las proteínas, sino también para ejercer funciones de señalización y modular la transcripción de genes [16, 17]. Además, ROS se propuso para mediar en la liberación de TNF-α y MIP-2 en los macrófagos alveolares expuestos a partículas nocivas [18]. Curiosamente, un reciente estudio demostró que la exposición al polvo de pino ROS inducida por el aumento de la producción y causó la muerte de las células murinas en ambos RAW 264,7 macrófagos y leucocitos polimorfonucleares humanos [19].

Pine es una de las más ampliamente utilizadas en la madera de las especies de madera y la industria de elaboración de varios estudios han demostrado que la exposición a polvo de pino inducida por síntomas respiratorios, la reducción de la función pulmonar, asma y [3, 20 - 22]. Por otra parte, el pino es una de las especies más comunes de la madera utilizada para el tratamiento térmico, uno de los procesos de tratamiento para la estabilización y preservación de la madera. Después del tratamiento térmico de la leche, tanto propiedades físicas y químicas de la madera son los cambios en [23].

El objetivo del estudio fue investigar el efecto de polvo de los no tratados, así como de un tratamiento térmico de pino en la producción de TNF-α, MIP-2, y ROS primaria por los macrófagos alveolares de rata y, para aclarar el papel del estrés oxidativo en el polvo de pino - Inducida por la producción de citoquinas.

Métodos
El polvo de madera

El polvo de pino sin tratar (PD) y bomba de calor, pino tratado (HPD) se obtuvo de la Kuopio Instituto Regional de Salud en el Trabajo (Kuopio, Finlandia). Los polvos fueron producidos usando una recogida de polvo frente a la máquina de moler con 400-arena lijado papel. Para los análisis de distribución de tamaño de partícula, el polvo de madera especímenes, revestida de oro de 170 segundos con BAL-TEC SCD 005 Sputter Recubridor (BAL-TEC AG, Liechtenstein), se examinaron en un JEOL JSM-6400 microscopio electrónico de barrido (JEOL Inc, Peabody , MA) en una aceleración de voltaje de 20 kV. Más de 1700 partículas de polvo se analizaron cada una de las micrografías de electrones. Más del 95% de las partículas de polvo de madera de pino y de ambos a un tratamiento térmico de pino tiene un diámetro de menos de 5 μ m (Tabla 1]. El contenido de endotoxina en la DP y HPD como LAL analizados con un coágulo de ensayo (Charles River, Alemania) estaba por debajo del límite de detección de 0,06 EU / ml. Para los experimentos, pino de polvo, suspendida en medio RPMI-1640 con 10% de suero de ternera fetal, ultrasonicated, y vortex.

Colección de los macrófagos alveolares

Hombre ratas Sprague-Dawley (Charles River, Sulzfeld, Alemania) fueron anestesiados por una inyección intraperitoneal de pentobarbital sódico (30 mg / kg de peso corporal) y muerto por exsanguination de la aorta abdominal. Los pulmones se lavaged diez veces con 10 ml de estéril, no pirogénicos fosfato de búfer solución salina (PBS; Serva, Heidelberg, Alemania). Las muestras se agruparon centrifuga a 300 g durante 10 minutos, y el pellet de células se lavaron dos veces y volvió a suspenderse en RPMI 1640 (Seromed, Munich, Alemania) suplementado con L-glutamina, gentamicina (0,16 mg / ml), y 10% inactivado por calor suero fetal bovino (SFB; Gibco BRL, Eggenstein, Alemania). Total de células fueron evaluados con un nivel hemocitómetro (Coulter Electronics, Krefeld, Alemania). Secado al aire cytocentrifuged frotis servido para determinar las poblaciones celulares después de la tinción con May-Grünwald-Giemsa. La preparación de las células contenidas broncoalveolar sobre 97-100% macrófagos alveolares. Célula de viabilidad que determine azul de tripan exclusión fue superior al 90%.

Tratamiento de las células

Macrófagos alveolares se ajustaron según el diferencial de células de 2 × 10 6 células / ml. Entonces, 100 μ l de las muestras de células fueron chapados a la suspensión de 96 pozos de fondo plano placas de cultivo celular (Nunclon Delta, Roskilde, Dinamarca), e incubadas a 37 ° C en 5% CO 2 y 21% O 2. Después de 2 h, no adherentes células fueron eliminadas por el lavado dos veces con RPMI 1640, y el adherente macrófagos alveolares fueron cubiertas con 100 μ l de la suspensión de polvo de pino en concentraciones que van de 5 a 200 μ g / ml. Como control negativo, 3 - μ m microesferas de poliestireno (Polysciences, Eppelheim, Alemania) se usa a una concentración de 100 μ g / ml. Como control positivo, Escherichia coli LPS serotipo 055: B5 comprado a Sigma Chemie (Taufkirchen, Alemania) se usa a una concentración de 100 ng / ml. En otra serie de experimentos, los macrófagos alveolares fueron tratados con 6 mM de glutatión reducido (GSH; Sigma-Aldrich, Steinheim, Alemania) o 20 mM N-acetil-cisteína (NAC; Sigma-Aldrich, Steinheim, Alemania) durante 30 min. Posteriormente, el medio de cultivo fue reemplazado con 100 μ l de la suspensión de pino polvo a una concentración final de 200 μ g / ml. Después de 4 h de incubación en la ausencia o presencia de GSH (6 mM) o NAC (20 mM), sobrenadantes fueron retirados y almacenados a -20 ° C. No hubo efecto de tratamiento, ya sea sobre la viabilidad celular, medida por un kit de ensayo de la LDH (Merck, Alemania).

RT-PCR

Total celular ARN fue extraído a partir de polvo de pino-expuestos macrófagos alveolares utilizando un kit de protección ribonucleasas (Rneasy Kit, QIAGEN, Hilden, Alemania). RT-PCR se realizó como se describió anteriormente [24]. Los oligonucleótidos (MWG-Biotech, Ebersberg, Alemania) fueron utilizados 5'-TGC AGC CTC CTC TTC TCA TT-3 'y 5'-TGT GGG TGA GGA GCA CAT AG-3' (EMBL: RNTNFAA, AC: X66539) De TNF, 5'-CAA TGC CTG ACG CAC CTA C-3 'y 5'-CAG TTA CCG AAC TTG TTG TTC-3' [25] para el MIP-2, y 5'-TCC CTC ATT AAG GTC AGC AA - 3 'y 5'AGA CTP ACA ACG GAT ACA TT-3' [26] para la limpieza de genes, glyceraldehyde-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH). Los tamaños de los productos de PCR fueron de 376 pb TNF, 194 pb para el MIP-2, y 309 pb para GAPDH. Productos de la PCR se visualizaron en geles de agarosa al 2% que contengan 1% bromuro de etidio. Por densitométricas análisis, BIO-1D V 96 programas (Vilber Lourmat, Marne La Vallee, Francia) fue utilizada.

TNF-α y MIP-2 ELISA

Las concentraciones de TNF-α y MIP-2 en la cultura sobrenadantes se determinó por ensayo inmunoenzimático (ELISA) usando kits disponibles comercialmente (Biosource, Solingen, Alemania).

Detección intracelular de ROS

Para detectar intracelular de ROS, 2 ', 7'-dichlorofluorescin diacetato (DCFH-DA) (MoBiTec, Göttingen, Alemania) se utilizó. DCFH-DA difunde en la célula y es hidrolizado por las esterasas intracelulares polar 2 ', 7'-dichlorofluorescin. Esto no fluorescente fluorescin analógica puede ser oxidado a muy fluorescente 2 ', 7'-diclorofluoresceno por oxidantes intracelulares [27]. Macrófagos alveolares se cultivaron a que se adhieran y se incubaron con 10 μ M DCFH-DA durante 30 min. Los cultivos fueron lavados dos veces con RPMI 1640 y, posteriormente, tratados como se describe anteriormente. Base de fluorescencia se midió con un fluorómetro (FLUOstar, BMG LabTechnologies, Offenburg, Alemania) inmediatamente después de los polvos de madera se añadieron. Después de 4 h de incubación bajo 37 ° C en 5% CO 2 y 21% O 2, fluorescencia se mide de nuevo. Los resultados se muestran como la variación porcentual de los valores basales. La adición de 1 μ M de H 2 O 2 sirvió como control positivo interno.

Espectroscopía de resonancia de spin electrónico

Formación de radicales hidroxilo por polvos de madera fue evaluada por resonancia de spin electrónico (ESR), la espectroscopia, tal y como se describe anteriormente [28]. En pocas palabras, el polvo de madera suspensiones (20 mg / ml) se prepararon en agua pura. 100 μ l de esta suspensión se mezcla con 200 μ l de la trampa spin 5,5-dimetil-1-pyrroline-N-óxido (DMPO, 0,05 M en PBS) (Sigma, St Louis, MO) y 100 μ l de H 2 O 2 (0,5 M en PBS) (Fluka, Seelze, Alemania). La suspensión se incubó durante 15 min a 37 ° C en un baño de agua agitando, y filtrados a través de un filtro de 0,2 μ m (15 mm filtro de la jeringa, Satorius AG, Goettingen, Alemania) para eliminar las partículas de la suspensión. El filtrado fue inmediatamente trasladado a un capilar y se midió con un espectrómetro de ESR Miniscope (Magnettech, Berlín, Alemania). La actividad antioxidante de las suspensiones de polvo de madera fue medida mediante el uso de la etiqueta estable spin TEMPOL (Sigma, Steinheim, Alemania). TEMPOL fue agregado a la madera suspensiones de polvo (10 mg / ml) a una concentración final de 5 μ M, mixto e incubadas a 37 ° C durante 1 hora en un baño de agua agitando. Después de filtrado de la suspensión a través de un filtro de 0,2 μ m, el filtrado se midió como se mencionó anteriormente. ESR espectros se registraron a temperatura ambiente usando las siguientes condiciones instrumentales: Campo magnético: 3360 G, de barrido ancho: 100 G, el tiempo de búsqueda: 30 sec, número de exploraciones: 3, la modulación de amplitud: 1,8 G, receptor de ganancia: 1000. La cuantificación se llevó a cabo como la suma de total amplitud en la primera derivación de la señal de ESR, y los resultados se expresan en el total de amplitud en unidades arbitrarias.

Análisis estadístico

Los resultados se presentan como media ± SEM. Las comparaciones estadísticas se realizaron mediante ANOVA con Estudiantes RM-Newman-Keuls método de comparación múltiple de los procedimientos. Un valor de p <0,05 fue considerado significativo.

Resultados
TNF-α y MIP-2 mRNA expresión

Después de 4 h de exposición de los macrófagos alveolares a la DP y HPD, mRNA fue extraído y se recolectaron los sobrenadantes para la medición de citoquinas y quimioquinas. Un bajo, el nivel basal de TNF-α y MIP-2 mRNA expresión se observó en el control de los macrófagos. Comparado con el control, TNF-α y MIP-2 mRNA expresión en macrófagos alveolares expuestos a la DP y HPD fue significativamente aumentado. Curiosamente, PD inducida significativamente (p <0,05) mayores niveles de TNF-α y MIP-2 La expresión de mRNA HPD (Figura 1].

TNF-α y MIP-2 en libertad

Como se muestra en la Figura 2, la exposición de los macrófagos alveolares a ambos PD HPD y provocó una significativa (p <0.05) aumento de la producción de TNF-α y MIP-2 en comparación con las células control sin tratar. Este efecto fue dependiente de la concentración y ya observada en la concentración más baja de 5 μ g / ml. Por otra parte, indujo una PD 1.3-2.8 veces (p <0,05) mayor liberación de TNF-α y MIP-2 de HPD. Microesferas de poliestireno en una concentración de 100 μ g / ml, que sirvió de control negativo, no indujo un aumento en la producción de TNF-α y MIP-2. En contraste, la exposición a LPS a una concentración de 100 ng / ml, que sirvieron como control positivo, inducido por una fuerte liberación de los mediadores (datos no presentados).

ROS generación

Para detectar la producción de ROS en la DP-HPD-estimulado y macrófagos alveolares, el oxidante sensibles al colorante DCFH-DA se utilizó. Después de 4 h de incubación, polvos de madera en una concentración de 200 μ g / ml induce una significativa (p <0.05) el aumento de la generación de ROS en comparación con las células control sin tratar (Figura 3]. Sin embargo, el nivel de la PD-en la generación de ROS inducida por los macrófagos alveolares no fue estadísticamente diferente del nivel de HPD inducida por la generación de ROS. El tratamiento de las células con GSH (6 mM) o NAC (20 mM) causaron importantes represión de ambos PD-y HPD inducida por la generación de ROS.

Efecto de los antioxidantes en la expresión de citoquinas y quimioquinas

Para dilucidar si el estrés oxidativo participa en la sobre regulación de la expresión de citoquinas inflamatorias, TNF-α y MIP-2 en libertad fue examinado en la DP-HPD-expuestos y macrófagos alveolares en la presencia o ausencia de los antioxidantes GSH y NAC. El tratamiento con NAC y ambos GSH significativamente (p <0,05) redujo el TNF-α y MIP-2 de liberación suscitado por la exposición de los macrófagos alveolares a la DP y HPD (Figura 4].

Oxidante endógeno y la actividad antioxidante de polvo de pino

ESR espectroscopia demostró que las suspensiones de ambos PD y formación de HPD causados • OH, en presencia de H 2 O 2. Sin embargo, la capacidad de la DP y el HPD para generar • OH no fue estadísticamente diferente (Figura 5]. La capacidad antioxidante de las suspensiones de polvo de pino se midió mediante el uso de la etiqueta TEMPOL spin estable. Curiosamente, HPD causó una reducción significativamente mayor de TEMPOL que PD, lo que indica que HPD tiene mayor capacidad antioxidante que PD (Figura 5].

Discusión

Una mayor prevalencia de la no malignas enfermedades respiratorias, como la bronquitis, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, alveolitis fibrosante criptogénica, y el asma se ha informado en los trabajadores expuestos a una variedad de polvos de madera [2]. Sensibilización a polvo de madera de algunas especies, como la madera de cedro rojo ha demostrado ser mecanismos involucrados en la generación de un relacionado con el trabajo asmáticos respuesta [29]. Sin embargo, estudios más recientes han demostrado que la sensibilización a polvo de madera de pino, roble, el haya y otras especies de madera no puede ser el único o incluso el mecanismo más importante que participan en el polvo de madera inducida por síntomas respiratorios [8, 9]. Por lo tanto, nuestro trabajo tuvo como objetivo investigar la no específicos de la respuesta inflamatoria pulmonar primario de macrófagos a polvo de madera de pino, una de las más ampliamente utilizadas en la especie de madera industria de transformación de la madera.

En este sentido, indican que el polvo de pino induce TNF-α y MIP-2 mRNA expresión, así como el TNF-α y MIP-2 de liberación de proteínas en los macrófagos alveolares de rata. Macrófagos alveolares son importantes en la tramitación de las partículas en suspensión en el aire y desempeñar un papel clave en la mediación de respuestas inflamatorias de los pulmones a través de la puesta en libertad de varias enzimas proteolíticas, reactivas de oxígeno y nitrógeno, las especies, los metabolitos del ácido araquidónico, citocinas como el TNF-α, y quimiocinas como MIP -2 [11]. TNF-α desempeña un papel importante como mediador de las vías respiratorias a la respuesta de las partículas. Los estudios han demostrado que una variedad de agentes que provocan la inflamación pulmonar marcada puede activar los macrófagos alveolares a la liberación de TNF-α, mientras que los agentes con limitada actividad inflamatoria de macrófagos no estimulan la producción de TNF-α. MIP-2 juega un importante papel de mediador de la respuesta inflamatoria neutrofílica de los pulmones a partículas de roedores, tales como el cuarzo y el amianto crocidolita [10]. TNF-α y MIP-2 es la expresión de genes bajo el control de redox-sensibles relacionados con la inflamación, tales como factores de transcripción NF-κ B. La activación de NF-κ B está regulada a través de un número de segundos mensajeros, incluyendo el calcio y el ROS [16]. Además de proporcionar pruebas de que el polvo de pino estimula tanto el TNF-α y MIP-2 mRNA producción y liberación de proteínas de los macrófagos alveolares de rata, nuestro estudio demuestra claramente que el polvo de pino estimula la generación de ROS en los macrófagos alveolares, como ya se indica en el ratón y macrófagos Leucocitos humanos por Naarala et al. [19].

Para investigado el papel del estrés oxidativo en el polvo de pino inducida por citoquinas y quimioquinas respuesta que el polvo de pino tratado expuestos macrófagos alveolares con los antioxidantes GSH y NAC. GSH desempeña un papel importante en el sistema antioxidante de trabajo como sustrato para la glutation peroxidasa, y se ha demostrado anteriormente que GSH extracelular puede elevar los niveles de GSH intracelular fagocitos y proteger contra el daño oxidante [30]. NAC es un tiol compuestos que pueden actuar como fuente de cisteína para la repleción de glutatión intracelular y actuar como consecuencia directa de ROS scavenger. NAC se ha demostrado que atenuar oxidante mediada por la toxicidad inducida por las fibras de crisotilo en ratas [31] y que disminuye la vía de óxido nítrico en macrófagos alveolares [22]. Hemos encontrado que el tratamiento con NAC GSH o atenuados pino polvo inducida por la generación de ROS, así como el TNF-α y MIP-2 de proteínas de liberación. Estos resultados son concordantes con estudios previos sobre la sílice y partículas ultrafinas [18, 33, 34] indican que el pino y el polvo inducida por el estrés oxidativo media, al menos en parte, la expresión de TNF-α y MIP-2 en los macrófagos alveolares.

Curiosamente, el polvo de pino sin tratar (PD) induce una respuesta inflamatoria es mucho más fuerte en los macrófagos alveolares que el polvo de pino tratada térmicamente (HPD). En consecuencia, hemos utilizado la espectroscopía ESR para evaluar la endógeno oxidativo y capacidad antioxidante de los serrines en estudio. Considerando que la capacidad de generar el radical hidroxilo no difirió entre PD y HPD, HPD exhibió una mayor capacidad antioxidante que PD. Como hemos demostrado en este estudio que el estrés oxidativo puede jugar un papel de mediador de la expresión de TNF-α y MIP-2, sugerimos que la mayor capacidad antioxidante de HPD Mayo neutralizar el estrés oxidativo y, por tanto, atenuar la expresión de TNF-α y MIP -2. Como se mencionó antes, tanto propiedades físicas y químicas de la madera cuando se cambió a un tratamiento térmico durante varias horas con temperaturas de hasta 230 ° C. En particular, la resina de pino se volatilizan con facilidad y casi eliminado por completo de la madera [23]. Uno de los componentes de la resina, δ-3-carene, ha informado a la disminución de la viabilidad de los macrófagos alveolares y afectan a la engulfment de partículas in vitro [35]. Otro componente de la resina de pino, abietic ácido, se ha demostrado que produce daños a la líticas alveolar, traqueal, bronquial y células epiteliales [36]. Más estudios para confirmar nuestros resultados y determinar las propiedades químicas y físicas de polvo de pino tratada térmicamente que pueden ser responsables de los efectos observados en este estudio. Recientemente, los metabolitos de extracto de corteza de pino han demostrado poseer actividad antioxidante y para inhibir las metaloproteinasas de la matriz (37).

En resumen, nuestros resultados indican que no específica, reacciones inflamatorias, mediada a través de la producción de ROS, pueden desempeñar un papel en los efectos pulmonares de polvo de madera. Sin embargo, no es claro en este estudio in vitro si el estrés oxidativo de conducción TNF-α y MIP-2 de proteínas liberación se debe a ROS obtengan directamente de las partículas de polvo o de las células, generados ROS.

Conclusiones

En este sentido, el polvo de pino demostrar que es capaz de inducir respuestas inflamatorias in vitro. El estrés oxidativo parece desempeñar un papel importante en el polvo de pino inducida por citoquinas y quimioquinas respuesta, lo que sugiere que partículas de polvo de madera pueden ejercer efectos pro-inflamatorios por un mecanismo que es, al menos en parte, mediada por ROS.

Contribuciones de los autores

HL realizó el aislamiento de los macrófagos alveolares, citológicos y posterior análisis bioquímicos, y la escritura y la preparación del manuscrito. TS y PJB realizado espectroscopía ESR. JM analizó la distribución de tamaño de partículas de polvo de la madera. KHP, KS, y FK participó en la dirección del estudio, así como en la escritura y la preparación del manuscrito. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

Agradecimientos

Agradecemos la excelente asistencia técnica de Anne-Marie Allmeling, de la Universidad de Munich, y Jaakko Säntti, Instituto Finlandés de Salud Ocupacional. Damos las gracias a Irma Welling, Lappeenranta Instituto Regional de Salud en el Trabajo, Finlandia, para ayudar en la obtención de los dos tipos de pino para la producción de polvo de madera. Este estudio fue apoyado por la Unión Europea 5 º programa marco, la acción clave 4, Medio Ambiente y Salud, Calidad de vida y gestión de los recursos vivos, Proyecto No QLK4-2000-00573.