Journal of Carcinogenesis, 2005; 4: 6-6 (más artículos en esta revista)

Las hembras apareadas con aparición de cánceres UADT y en la región genital tienen una mayor frecuencia de cualquiera de Glutatión S-transferasa M1/T1 nula genotipo

BioMed Central
Sameer G Jhavar (drrajivsarin@rediffmail.com) [1], Rajiv Sarin (drrajivsarin@rediffmail.com) [1], Supriya Chopra (drrajivsarin@rediffmail.com) [1], Ashwin Kotnis () [drrajivsarin@rediffmail.com 3], Rita Mulherkar (drrajivsarin@rediffmail.com) [3], Roger A'Hern (drrajivsarin@rediffmail.com) [4], Jai Prakash Agarwal (drrajivsarin@rediffmail.com) [1], Kishore Shyam Shrivastava (drrajivsarin @ Rediffmail.com) [1], Ketayun A Dinshaw (drrajivsarin@rediffmail.com) [1]
[1] Departamentos de Oncología de Radiación, Tata Memorial Centre, Mumbai, India
[2] Unidad de Genética del Cáncer, Tata Memorial Centre, Mumbai, India
[3] Sección de Ingeniería Genética, Tata Memorial Centre, Mumbai, India
[4] Hospital Royal Marsden NHS Trust, Londres, Reino Unido

Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons License (http://creativecommons.org/licenses/by/2.0], que permite el uso irrestricto, la distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que la obra original sea debidamente citada.

Resumen

Aero Tracto digestivo superior (UADT) es el sitio más común para el desarrollo de la segunda en mujeres después del cáncer primario del cáncer cervical. Glutatión S-transferasa (GSTM1 y / o T1) null genotipo modula el riesgo de desarrollar cáncer de UADT (primaria así como segundo cáncer). El objetivo de este estudio fue evaluar la diferencia de frecuencias de genotipo GST nula en las hembras apareadas con cánceres UADT y en la región genital, en comparación con las hembras apareadas con cánceres en el UADT y no genital región. Cuarenta y nueve mujeres con un cáncer en el UADT y otro cáncer (en todos los sitios y no-genital-genital) se identificaron de una base de datos de los pacientes con múltiples tumores primarios y fueron analizadas por el genotipo GSTM1 y T1 además de los factores conocidos, tales Como la edad, hábitos de tabaco, el alcohol y los hábitos de la historia familiar de cáncer. Las frecuencias de nulo GSTM1, GSTT1 nulo, y ya sea nula GSTM1/T1 fueron mayores en mujeres con pares de ocurrencia de cáncer en los genitales y UADT sitio (54%, 33% y 75% respectivamente) en comparación con las hembras apareadas con casos de cáncer en El UADT y no genital sitios (22%, 6% y 24% respectivamente). La frecuencia significativamente mayor heredado de cualquiera de GSTM1 / T1 null genotipo en las mujeres con un par de casos de cáncer en la región genital y UADT (p = 0,01), sugiere que estas mujeres son más susceptibles a los daños por agentes carcinógenos, en comparación con las mujeres que tienen cánceres UADT En asociación con el cáncer en lugares no genitales.

Introducción

Precisa estimación del riesgo para el desarrollo de segundos cánceres en la cabeza y cuello, pulmón, de esófago y, también conocido como el Alto Aero-Tracto Digestivo (UADT), es difícil debido al origen multifactorial y de la interacción entre genes y medio ambiente [1].

El Glutatión S transferasa (GST) de la familia de enzimas codificadas por al menos cinco loci-alfa, mu, theta, pi y gamma desintoxicar agentes carcinógenos del tabaco [2], y desempeñar un papel importante en la interacción entre genes y medio ambiente de riesgo asociados para el cáncer. Los resultados de un reciente meta-análisis y se agruparon de 4635 casos y 5770 controles, el apoyo ampliamente estudiada de asociación con el genotipo GST heredado el riesgo de desarrollar carcinomas de células escamosas (SCC) en el UADT. Además los resultados apoyan la noción de que el riesgo se incrementa cuando los genotipos en múltiples loci GST se consideran [3]. Los pacientes con el segundo (sincrónico y metacrónico) cánceres en el UADT también tienen una mayor frecuencia de genotipo GST nula (en particular, GSTM1 y T1) en comparación con aquellos con cánceres único [4 - 7].

Similar a la asociación visto en cánceres UADT, GST nula genotipo se ha asociado con el riesgo de desarrollar el virus de papiloma humano (VPH)-principal positivo el cáncer cervical en las mujeres [8, 9] y también con otros tipos de cáncer como el cáncer de mama primario [10 ] Y primaria de cáncer de tiroides [11].

Las mujeres con un cáncer primario de VPH relacionados (especialmente cuello uterino) desarrollar segundos cánceres en el UADT con un aumento de la frecuencia [12 - 14]. La transmisión de VPH ha sugerido que se cuenta, en parte, por la aparición de cánceres en parejas en estas anatómicamente distintos sitios de UADT y cuello uterino. La exposición a los carcinógenos del tabaco se ha sugerido como cofactor sinérgica [15, 16]. El mecanismo por el que la infección por VPH, necesarias para el desarrollo de cáncer cervical [17], las causas de cánceres UADT está claro [18]. Recientemente se ha demostrado que la interacción entre la infección viral (especialmente VPH) y xenobióticos enzimas como GSTM1 podría modular el riesgo de cáncer, sin embargo la evidencia proviene de estudios in vitro solamente [19].

No existen estudios en la literatura evaluación de la asociación de los genotipos GST nula y el riesgo de desarrollar segundos cánceres en el UADT en las mujeres, sobre todo después de los cánceres primarios en sitios genital. Se identificaron las hembras con un par de cáncer en el UADT en asociación con otro cáncer (en todos los sitios-genital y no genital) y analizaron el genotipo GSTM1 y T1 además de los factores conocidos como la edad, hábitos de tabaco, el alcohol y los hábitos de la historia familiar de Cáncer.

Pacientes y métodos
Los pacientes

De un registro de 150 pacientes con neoplasias múltiples Primaria (NMP) en Tata Memorial Hospital, Mumbai, durante el período de 1996 - 2004, todas las mujeres, que cumplían los siguientes criterios fueron seleccionados: 1) sincrónico o metacrónico aparición de la segunda primaria del cáncer 2) la confirmación histológica o citológica de las dos primarias; 3) Uno de los dos tipos de cáncer fue un SCC en el UADT. Modificado Hong criterios [20] fue utilizado para diferenciar el segundo cáncer primario o metastásico de difusión directa a partir del primer cáncer.

Detalles acerca de la edad, el sitio de la primera el cáncer, el sitio del segundo cáncer, la histología, de la categoría, los antecedentes de cáncer en los parientes de primer grado, los hábitos de tabaco (fumadores o humo), el consumo de alcohol (normal, ocasionalmente o nunca) y la radioterapia para el cáncer de la primera Se tomó nota de los pacientes tanto de las entrevistas y registros médicos. Detallada y exacta cuantificación de la exposición al tabaco y el alcohol no estaba disponible en todos los casos. Tampoco se tuvieron en detalles acerca de la historia sexual y reproductiva disponibles.

Extracción de ADN

Habiendo obtenido un consentimiento informado, 5-10 ml de sangre periférica muestra fue tomada en tubos de EDTA estéril. El ADN se extrajo de los leucocitos de pellets obtenidos a partir de la sacarosa por lisis de sangre, purificada por el fenol: cloroformo y suspendido en Tris-EDTA buffer y almacenados a -20 ° c.

PCR

Multiplex reacción en cadena de la polimerasa (PCR) se realizó de manera simultánea o genotipo GSTM1 y el GSTT1 genes humanos Fibroblasto interferón β-1 gen (IFN β-1). El IFN gen β-1 se utilizó como control interno de amplificación fracaso. El primer secuencias fueron los siguientes

1) GSTM1: F: 5 'CTG GAT TGT AGC AGA TGC ACT 3' y R: 5 'CTG CCC TAC TTG ATT GGG GAT 3', que genera un fragmento de 273 pb;

2) GSTT1: F: 5 'GGT ACT CTT TTC AAC CAC ATC TC 3' y R: 5 'CAT TCA CCG GAT GGC CAG CA 3', que genera un fragmento de 459 pb y

3) IFN β-1: F: 5 'GGC AGT GGT ACA ACA AGG CG 3' y R: 5 'GCC ACA GGA GCT TCT GAC AC 3', que genera un fragmento de 170 pb.

El gen GSTM1 y GSTT1 o interferón fueron co-gen amplificado en un 15 μ l de mezcla de reacción que contiene un total de 50 ng de DNA genómico como la plantilla, 2,6 μ M de cada primer GSTM1, o 2,6 μ M de cada primer GSTT1, y 2,6 μ M de Interferón cada cebador, 1,2 mM de cada dNTP, 1 × PCR buffer (que contiene 20 mM Tris, pH 8,4, 50 mM KCl), 2 mM de MgCl 2 y 0,6 unidades de Taq polimerasa (Amersham). El perfil de PCR para la amplificación del gen GSTM1, consistió en una etapa inicial de fusión a 94 ° C por 9 min seguido de 30 ciclos a 94 ° C por 1 min, 55 ° C por 1 min y 72 ° C durante 1 min, con un Paso final a 72 ° C durante 10 min de elongación. El perfil de PCR para la amplificación del gen GSTT1, consistió en una etapa inicial de fusión a 95 ° C durante 9 min seguido de 30 ciclos a 94 ° C por 1 min, 66 ° C por 1 min y 72 ° C durante 1 min, con un Paso final a 72 ° C durante 10 min de elongación.

Electroforesis en gel

Los productos de PCR fueron separados ya sea en geles de agarosa al 2% o el 12% geles de poliacrilamida y fueron vistos por la tinción de bromuro de etidio o tinción de plata, respectivamente. En la presencia de la reacción de PCR a 170 bp (IFN β-1) sola banda y la ausencia de un mayor 273 bp (GSTM1) o 459 pb (GSTT1), la banda indica nula genotipo de la muestra. En el ensayo de PCR cuando ambos Interferón y GST fragmentos estaban ausentes entonces se indicó que tanto la PCR no tuvo éxito o el ADN se degrada.

Análisis estadístico

Los pescadores se empleó la prueba exacta de evaluar la significación estadística de la diferencia entre proporciones de los diversos factores (número de tabaco chewers, nulo GSTM1, GSTT1 nulo, ya sea GSTM1 / T1 null).

Resultados
En general los datos de todas las mujeres

Cuarenta y nueve mujeres con un par de SCC en el UADT en asociación con otro cáncer (en genitales y no genitales sitios relacionados) se identificaron. La mediana de tiempo hasta el desarrollo del cáncer en parejas (o segundo cáncer) fue de 4 años. La edad media al diagnóstico de cáncer de la primera en todas las mujeres fue de 51 años y que el cáncer de la segunda era de 60 años. Los sitios más comunes son el cáncer de la primera cavidad oral (n = 17), la región genital (n = 15), y esófago incluidos cricoides posterior a la región (n = 12). La información sobre los antecedentes de cáncer familiar está disponible en 42 mujeres y 6 (14,3%) tuvieron un pariente de primer grado afectados con cáncer. De las 45 mujeres que se dan detalles de los hábitos se disponía, 25 (56%) fueron chewers tabaco mientras que sólo 1 (2%) fumaba. De los 29 pacientes en los que el GSTM1 y T1 genotipo que se ha hecho, la frecuencia de GSTM1 nulo, GSTT1 nulo y, o bien se GSTM1/T1 nula 35%, 17% y 45%, respectivamente.

Groupwise análisis

Los resultados fueron analizados por seguir dividiendo las mujeres en dos grupos (Cuadro 1): Grupo 1 (n = 19), mujeres que habían un par de SCC en el UADT junto con un cáncer en la zona genital y el Grupo 2 (n = 30), Mujeres que habían un par de SCC en el UADT junto con un cáncer en otros sitios (no región genital). En la mayoría de los casos (80% en el Grupo 1 y 86% en el Grupo 2), UADT cáncer producido segundo en orden cronológico. La mediana del tiempo para el desarrollo de cáncer de segundo fue de 5-años (rango 0-20 años) para las mujeres en el grupo 1 en comparación con los de 3 años (rango 0-24 años) para las mujeres en el Grupo 2. No se encontraron diferencias significativas en la mediana edad en el diagnóstico del primer cáncer, antecedentes familiares de cáncer o de los hábitos de tabaco entre los dos grupos. Cuello uterino es el sitio más común de cáncer genital en las mujeres en el grupo 1 (16/19, 84%), seguido de la vagina en una mujer, de cúpula vaginal y vulva en uno en uno. Los sitios de la segunda UADT cáncer en las mujeres en el grupo 1 fueron: cavidad oral (n = 7), orofaringe (n = 2), hipo faringe (n = 1), tráquea y pulmón (n = 4), incluido el esófago después de los cricoides (N = 4), tiroides (n = 1). En las hembras en el Grupo 2, la más común fue UADT no sitio del cáncer genital (22/30, 73%), seguido del de mama (n = 6), duodeno (n = 1), y la leucemia linfática crónica (n = 1 ). Histología del cáncer en la región genital en el sexo femenino en el Grupo 1 fue confirmado como SCC en la mayoría (18/19). En el resto de las mujeres la histología no se pudo confirmar que los registros habían desaparecido, sin embargo se confirmó que su cáncer de cuello uterino fue tratado con radioterapia, un tratamiento que nunca es dada sin confirmación histológica en nuestro hospital.

Nulos frecuencias de genotipo GSTT1, GSTM1 y bien T1 o M1 fueron más frecuentes en el grupo 1 en comparación con el grupo 2. La proporción de las mujeres que fueron nulas, ya sea para GSTM1 / T1 resultaron ser significativamente mayor en el grupo 1 que en el Grupo 2.

Discusión

Este es el primer estudio de evaluación de la asociación con el genotipo GST emparejado UADT aparición de un cáncer y el cáncer genital sitio. De los 49 pares de las mujeres con aparición de un UADT SCC con un segundo cáncer en cualquier sitio, 19 (39%) estaban relacionados con el VPH en los genitales sitio. Mayoría (84%) de los cánceres genitales son en el cuello uterino y en más de la mitad (68%) el cáncer genital se produjeron antes o dentro de los 6 meses de desarrollo de la UADT cáncer. Asociación entre los tumores malignos de la región genital y UADT (especialmente cuello uterino), ha sido observado por varios investigadores [13, 15]. Hemminki et al [14] estudiaron el patrón de la segunda de cáncer en las mujeres y se encontró un aumento constante en la segunda VPH relacionados con el cáncer cuando el cáncer es la primera en una de VPH relacionados con el sitio (anogenital, la piel, cabeza y cuello, cáncer rectal y esofágica). Un exceso de cáncer oral (incluidos los labios, boca, lengua, laringe y faringe), como se encontró en este estudio, seguido de cáncer de cuello uterino. Otros investigadores también han encontrado resultados similares en el pasado [12]. Utilizando los datos de incidencia de Vigilancia, Epidemiología y Resultados Finales (SEER), Spitz et al [15] encontraron un elevado ratio de incidencia normalizada (SIR) para el cáncer cervical después de un primer cáncer de la cavidad bucal y cáncer de laringe.

La transmisión de VPH ha sugerido que se cuenta, en parte, por la aparición de cánceres en parejas en estas anatómicamente distintos sitios de UADT y el cuello del útero y el hábito de fumar se ha sugerido como cofactor sinérgica [15]. Sin embargo, el tabaco sin humo es una forma predominante de tabaco consumida por las mujeres en la India [21] y un estudio reciente de la India ha puesto de manifiesto una correlación positiva de los hábitos de tabaco sin humo, con el riesgo de cáncer del cuello del útero [22]. Además, los resultados de otro estudio de la India encontró más del 80% de los cánceres orales en las mujeres atribuibles al hábito de tabaco sin humo, en comparación con la insignificante influencia de fumar y beber en el cáncer oral en las mujeres [23]. En concordancia con estas cifras, el 44% de las mujeres del grupo 1, en nuestro estudio ha hábitos de tabaco sin humo, y ninguno de los pacientes, a excepción de una, ahumados.

El papel de GST polimorfismos en el desarrollo de segundos cánceres en el UADT ha sido el centro de muchos estudios realizados en diversos grupos étnicos [4 - 7]. En todos estos estudios la nula genotipo GST (GSTM1 y GSTT1 o), se ha visto con mayor frecuencia en los pacientes con cáncer en el segundo UADT en comparación con aquellos con cáncer en el único UADT. Los resultados del metanálisis publicado recientemente un análisis combinado y apoyo la idea de un mayor riesgo de cáncer de cabeza y cuello en los genotipos GST múltiples loci se consideran [3]. El 35% genotipo GSTM1 null frecuencia (en toda la población de mujeres con cáncer en el segundo UADT) en este estudio es muy similar a la GSTM1 null genotipo frecuencia de 36% en el estudio anterior, en los pacientes varones con cáncer en el segundo de UADT Antecedentes étnicos similares [7]. Sin embargo, la nula frecuencia de genotipo GSTT1 en los hombres fue de 41% frente a 17% en las mujeres de este estudio. Las diferencias en el sitio del cáncer y la forma de consumo de tabaco, lo que predispone al desarrollo de cáncer en un sitio concreto, entre hombres y mujeres podrían explicar la discordancia de género en el genotipo GSTT1 nulo frecuencias. Sin embargo el 41% y el 17% para la frecuencia nula genotipo GSTT1, en varones y mujeres, respectivamente, son superiores a 8-12% genotipo GSTT1 nulo frecuencia se encuentran en controles sanos de similar origen étnico que sugiere una verdadera asociación [24, 25].

GSTM1 y GSTT1 nulo genotipo frecuencias (54% y 33%) en las mujeres que habían segundo cáncer en el UADT en asociación con un cáncer en la región genital (Grupo 1) en el presente estudio son más elevadas que a) las respectivas frecuencias (22 % Y 6%) en las mujeres con cáncer en el segundo UADT en asociación con un cáncer en la región no genital (Grupo 2), b) las respectivas frecuencias (49% y 18%) que se encuentran en sujetos con cánceres UADT solo en dos estudios De un origen étnico similar [24, 25], c) las respectivas frecuencias (26% y 19%) que se encuentran en los hombres, con solo UADT cánceres de nuestro estudio anterior [7], y, d) las respectivas frecuencias (33% y 8% Y el 24% y 12%) que se encuentran en la India controles sanos [24, 25]. Esto sugiere que las mujeres que desarrollaron cáncer en el segundo UADT en asociación con el cáncer genital, en los sitios (Grupo 1 en este estudio) son posiblemente más susceptibles a daños provocados por agentes carcinógenos.

La asociación de GST polimorfismo y el riesgo de principal único cervical SCC ha sido estudiado en pacientes de sexo femenino de diversas etnias. GSTM1 null genotipo se ha encontrado a incurrir en un mayor riesgo de cáncer cervical en primaria mixta caucásicos, hispanos y afro-americanos población de pacientes En comparación con los controles [9]. Como sabio, en un estudio sobre 181 pacientes con carcinoma de cuello uterino coreano, Kim et al [8], mostró una correlación positiva entre los genotipos GST y riesgo de carcinoma cervical, en comparación con los controles. En este estudio realizado por Kim et al, GSTT1 nulo genotipo se asoció con un mayor riesgo de cáncer cervical. Cuando los pacientes fueron estratificados según la edad, ya sea GSTM1 / T1 null genotipo fue significativamente más representadas en los pacientes con carcinoma de cuello uterino que fueron = 40 años. Sin embargo, en un estudio sobre 190 mujeres caucásicas, Chen et al [26], determinó ninguna asociación de GSTM1 nulo genotipo con el riesgo de cáncer cervical invasor. Otros investigadores han encontrado resultados similares a la que se encuentra en el estudio de Chen et al [26 - 28]. Las diferencias en el genotipo GST frecuencias de control en diversas poblaciones podrían explicar las diferencias observadas en los distintos estudios. Por ejemplo, la prevalencia del genotipo GSTM1 nulo en el Cáucaso, América y Corea población es similar (tan alto como 50%), mientras que la prevalencia de genotipos GSTT1 nulo varía de 15-31% en el 50-58% de los caucásicos en los coreanos y Chino.

En vista de las diferencias conocidas de la población nula frecuencia de los genotipos y sus riesgos asociados para el cáncer cervical a través de diversos grupos étnicos, es importante comparar nuestros resultados con los de estudios realizados en sujetos de un origen étnico similar. GSTM1 y GSTT1 nulo genotipo Frecuencias (54% y 33%, respectivamente) en las mujeres que tenían por lo menos uno de los cánceres en la zona genital (Grupo 1) en el presente estudio fueron similares a las respectivas frecuencias (57% y 20%, respectivamente) que se encuentran en las mujeres con Única (unpaired) los casos de cáncer cervical de la India [29] lo que sugiere que la asociación entre el genotipo GST y el riesgo de cáncer cervical en las mujeres del grupo 1, en nuestro estudio, es más probable que se de una verdadera asociación.

VPH es, sin duda, el principal agente causal en la SCC cervical y la prevalencia de VPH, principalmente HPV16/18 de más del 95%, se ha observado en tumores de pacientes con cáncer de cuello uterino de la India [30]. Las pruebas del VPH para la vinculación de la carcinogénesis oral también es cada vez mayor y una de las más altas tasas de prevalencia de 74% de VPH 16 y 18 en los tumores orales de tabaco sin humo habitués se han registrado en el sur de la India [31]. Como las infecciones por el VPH son transitorios, la ausencia de ADN de VPH no excluye la exposición anterior [32]. Curiosamente, aunque la mayoría de los pacientes con cáncer de cuello uterino son positivas para VPH [17], no todos los pacientes que tienen infección por VPH se va a desarrollar el cáncer [33]. Las interacciones entre genotipo y GST VPH puede ser una razón para esto. La evidencia de esto es de dos vías. Chen et al [19] la evaluación de la razón de la falta de asociación entre los genotipos GSTM1 nulo y el riesgo de cáncer cervical en su estudio epidemiológico demostró que la infección viral podría tener efecto potencial en la actividad de las enzimas metabolizadoras de xenobióticos, en particular GSTM1. Los resultados de su estudio plantea una cuestión de la forma crónica de las infecciones virales podrían afectar a celulares defensas contra agentes carcinógenos en general. La evidencia de otros estudios sugieren que la susceptibilidad heredada en forma de GST genotipo puede modular el riesgo de desarrollar cáncer relacionados con el VPH como lo demuestra el genotipo GSTM1 nulo, que, además de infección por VPH y el tabaquismo, se ha encontrado que aumenta el riesgo de desarrollar cáncer de cuello uterino [9]. Además, en los pacientes con cáncer de cuello uterino con una asociación positiva con el genotipo GST nula, como estudiado por Kim et al [8], VPH 16 o 18 infecciones fueron confirmados en todos.

Conclusión

Los resultados de nuestro estudio sugieren una asociación entre el genotipo GST nula y la aparición de cánceres en parejas en el UADT y relacionados con el VPH genital en las mujeres sitios. Aunque este es el primer estudio que informe de esta asociación, además de confirmación de estudios más amplios sobre los pacientes de diferentes orígenes étnicos es obligatorio.

Agradecimientos

SGJ gustaría dar las gracias a su esposa, Sudha, por su ayuda con la preparación del manuscrito.