Virology Journal, 2005; 2: 28-28 (más artículos en esta revista)

Nueva Vibrio cholerae O1 biotipo ElTor bacteriófagos

BioMed Central
Anindito Sen (sena@mail.nih.gov) [1], N Amar Ghosh (anghosh@vsnl.net) [1]
[1] División de Microscopía Electrónica, Instituto Nacional de Cólera y Enfermedades, P-33, CIT Road, Scheme-XM, Beleghata, Kolkata-700010. India
[2] (Dirección Actual) Laboratorio de Biología Estructural, Sala 1504, Edificio 50, NIAMS / NIH Bethesda, MD, 20852, EE.UU.

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Resumen

Se reporta la presencia de tres nuevos O1 ElTor vibriophages llamado AS1, AS2 y AS3, aislado de la laguna de aguas residuales y aguas de las afueras de Kolkata. Algunos fagos, de nombre AS4, con cabeza hexagonal y anormalmente largas colas típicas rizado con las proyecciones, fueron encontrados en las muestras de agua.

Vibrio cholerae, el agente causal del cólera en el hombre, se clasifican en dos serotipos: O1 y nonO1 [1]. Las cepas O1 se divide en dos biotipos: Clásico y ElTor. Antes de 1961 la mayoría de las epidemias han sido causadas por el biotipo clásico. Pero con el paso del tiempo el biotipo clásico desapareció de la escena y la ElTor convertido en la principal causa el biotipo de Vibrio cholerae en los seres humanos. En 1993, el Vibrio cholerae serogrupo O139 hizo una explosiva aparición y causó una grave epidemia en el continente indio [2]. La enfermedad del cólera se propaga rápidamente a los lugares lejos del epicentro de su aparición. Desde el punto de vista epidemiológico, es importante rastrear la propagación de la enfermedad. Fagos escribir es un método ampliamente aceptado para hacer el seguimiento de epidemia de cólera [3]. El internacional fagos-escribiendo régimen de Basu y Mukerjee [3] incluye cinco fagos (I, II, III, IV y V). Pero en el transcurso del tiempo a escribir este régimen demostrado ser insuficientes en un gran número de cepas de Vibrio cholerae se encontraron untypeable utilizando este sistema. A fin de superar este problema escribiendo un nuevo régimen para el ElTor cepas se propuso en 1993 [4]. En los últimos tiempos vibriophages se encuentran en asombroso que se produzca en grandes cantidades en el medio ambiente en todo el mundo [5 - 8], que nos llevó a la búsqueda de nuevos fagos cólera de los recursos ambientales.

De aguas residuales y agua de la laguna se obtuvieron de diferentes lugares de las afueras de Kolkata. Durante el periodo de estudio la temperatura registrada fue de unos 32-38 º C y pH varió de 7,8 a 10. La muestra aguas fueron procesadas para el aislamiento de fagos, como se describe anteriormente [9] utilizando Vibrio cholerae O1 ElTor (MAK 757) como la propagación de la cepa. El procedimiento se repitió el agar nutriente o la aparición de placas. Los fagos fueron purificados a partir de una única placa discreta por el suave agar (0,9%), método de superposición. Fagos lisados fueron preparados de nutrientes en el caldo. Unas pocas gotas de cloroformo se añadieron a la recién preparada para eliminar los fagos lisado bacteriano contenido en el mismo. Los fagos lisados (casi 10 8 - 10 9 fagos / ml) fue objeto de ultracentrifugación a 35000 rpm durante 90 minutos en un Sorval T 865 rotor y "pellets" de fagos se obtuvieron. Los pellets de fagos se resuspendió en 1 ml de 50 mM, Tris-HCl pH 7,5, 20 mM, MgCl 2 (TM buffer) de concentración y de los fagos se almacenaron a 4 ° C. Los fagos fue purificado en un gradiente de sacarosa paso de 10% a 40%, tal como se describe anteriormente [6] utilizando un Sorval TW 668 swing-out rotor revolución en la velocidad de 35000 rpm durante 75 minutos. Los pellets de fagos purificados fueron resuspendido en 1 ml de TM de amortiguación y almacenadas a 4 ° C. Cinco microlitros de la suspensión purificada fueron depositados directamente en Pioloform recubiertos de malla de 300 rejillas de níquel, estabilizado con una fina capa de carbono, que permite absorber por dos minutos y el exceso de líquido se borró. Las muestras fueron teñidas con un 2% de acetato de uranilo acuoso (pH 4.5). Las rejillas se examinaron en FEI Tecnai 12 Biotwin microscopio electrónico de transmisión. Las mediciones de las dimensiones de la cabeza (distancia entre el frente apices), la longitud y el grosor de la cola se hace usando 'analySIS' software (SIS GmbH, Alemania). Calibración se realizó utilizando catalasa cristal con suplentes celosía avión espaciamiento de 8,75 nm y 6,85 nm (Agar Ciencia Ltd Inglaterra). Varios enteropatógenos fueron incluidos para probar la sensibilidad en contra de estos fagos. Culturas de los enteropatógenos fueron cultivadas a mediados diario de sus fases y como se chapada sobre césped (0,5% NaCl) placa de agar nutriente. Los céspedes están manchadas con unos 5-7 μ l de la lisados. El cuadro 1 muestra el resultado de la sensibilidad a fagos los diferentes agentes patógenos. Está visto que los fagos sólo son sensibles a Vibrio cholerae O1 y son resistentes al resto de las especies.

Tres diferentes tipos de fagos, de nombre AS1, AS2 y AS3 se encontraron. Todos los tres jefes fagos han hexagonal con larga cola (figura 1]. Fagos AS1 y AS3 han hexagonal cabezas y colas contráctiles y cae en la familia de fagos Myoviridae mientras que AS2 tiene una cabeza hexagonal con organizaciones no contráctil cola y corresponde a la familia Siphoviridae (de acuerdo con el Comité Internacional del Comité Internacional para la Taxonomía Taxonomía de Virus Virus; 1982). Las dimensiones de la cabeza (distancia entre el frente apices), la longitud y el grosor de la cola de estos fagos se resumen en el cuadro 1. Morfológico comparaciones de estos tres fagos se hicieron con varios otros importantes escribiendo vibriophages hexagonal que poseen cabezas y colas largas se han hecho y se les da en el cuadro 1.

Del cuadro 1 nos encontramos con que los fagos AS1, AS2 y AS3 son morfológicamente diferentes a los demás escribiendo vibriophages. Si bien el estudio de estos fagos nos encontramos con algunos fagos (muy pequeñas en número), de nombre AS4, que tienen el diámetro de la cabeza casi igual a 65,24 ± 3,1 nm, longitud de la cola recta de casi 460,20 ± 11,2 nm de largo y rizado típica proyección de longitud 230,20 12,4 ± nm adjunto a la libre final de la cola. De hecho cada uno de los rizado tiene una proyección constante longitud de contorno de 38,8 ± 5,72 nm. El grosor de las colas es de 10,52 ± 0,86 nm (figura 2]. Para nuestro conocimiento, hasta la fecha, no vibriophage con tales anormalmente largas colas se informó. Sin embargo, Ackermann y DuBow [10] informó de dos no cultivadas rumen bacteriófagos con esas colas largas, pero no tiene ningún rizado proyecciones como se ha visto en AS4.

El aislamiento de estos nuevos fagos cólera de la red de alcantarillado y recogida de aguas de estanque las afueras de Kolkata, un alto el cólera es endémico región, (cuando un brote de cólera se produjo casi dos años atrás), lleva más importancia. Detallados estudios fisicoquímicos como la especificidad del hospedador, inmunológicos análisis, el estudio de proteínas estructurales, la inactivación térmica y luz, el crecimiento y las características de su amplio estudio de los genomas de estos recién aisladas vibriophages será útil para modificar el actual sistema de tipificación de fagos de Vibrio cholerae O1 biotipo ElTor untypeable Cepas, en el futuro, ya que es necesaria para el viejo y Basu Mukerjee [3] O1 biotipo ElTor escribiendo régimen de casi una década atrás.

Agradecimientos

Los autores agradecen al Dr SK Bhattacharya, director del instituto, para el estímulo y el tipo de cooperación.