Journal of Carcinogenesis, 2005; 4: 7-7 (más artículos en esta revista)

SYK expresión humana en el cáncer de mama

BioMed Central
AE Elkak (aeraelkak@hotmail.com) [1], W AL Sarakbi (walsarakbi@hotmail.com) [1], Mokbel K (kefahmokbel@hotmail.com) [1]
[1] La Unidad de Mama, St George's Hospital y la Escuela de Medicina, Blackshaw Road London, SW17 0QT, UK

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Resumen
Antecedentes

Syk (esplénica Tirosina Kinase) es una proteína quinasa de receptores intracelulares que participan en la proliferación celular, la diferenciación y la fagocitosis. Se ha estudiado en T y los linfocitos B, células NK y de las plaquetas. La fuerte expresión de Syk en glándula mamaria llevado a la investigación de su posible función en la carcinogénesis mamaria. Ha habido muy pocos estudios acerca de su papel en el cáncer de mama con resultados contradictorios. Este estudio tiene como objetivo investigar la hipótesis de que Syk expresión es regulada por cáncer de mama en comparación con ANCT y la asociación entre su expresión y clinicopathological parámetros.

Materiales y métodos

ARNm se extrajeron de 48 especímenes de cáncer de mama. Syk relativa a la expresión del RNA ribosomal se determinó por RT-PCR y Taqman metodología. Mann-Whitney U test fue utilizado para examinar la asociación entre Syk expresión en el cáncer y la ANCT. Rango de correlación de Spearman se empleó la prueba para examinar la asociación entre Syk expresión en tumores y de los pacientes de edad, tamaño del tumor, el grado del tumor, los receptores de estrógeno y progesterona, metástasis a los ganglios linfáticos, invasión vascular y el resultado clínico.

Resultados

La mediana para el valor relativo de Syk expresión fue del 0,17 y el 0,18 (rango: 0,12 - 0,56 y 0,0 - 1,77) para los tumores y ANCT respectivamente. No se encontró asociación significativa entre Syk expresión en el cáncer y ANCT (p = 0,598) ni entre Syk expresión en tumores y de los pacientes de edad, tamaño del tumor, el grado del tumor, los receptores de estrógeno y progesterona, metástasis a los ganglios linfáticos, invasión vascular o pronóstico.

Conclusión

Este estudio muestra que Syk mRNA expresión no parece variar entre los tumores de mama y la ANCT. Asimismo, se observó ninguna asociación significativa entre Syk expresión y clinicopathological parámetros.

Introducción

El cáncer de mama y la progresión en el desarrollo se producen a través de un proceso de múltiples, incluyendo la activación y oncogén mutación o pérdida de genes suppresser tumor [1]. Proteína-tirosina quinasas (PTKs) han sido clasificadas en dos familias: transeuropeas de la familia de receptores de membrana y no los receptores de la familia [2 - 5]. Más de 30 receptores de tipo PTKs se han identificado en mamíferos y dividida en 11 subfamiliies [6], de los cuales mencionamos Tec, JAK, Sck, Fes, Abl, Fak, Scr y Syk [6, 7]. Syk PTKs familia comprende Syk y ZAP-70 [6]. Syk (su nombre de Spleen Tirosina Kinase) se asocia a los receptores de la superficie celular para amplificar las señales de los receptores activados por el interior de las células [6]. Syk familia contiene tándem Scr homología 2 (SH2) y c-terminal quinasa dominios interrumpido por dos interdomains AyB [8 - 12]. Syk reúne a los complejos de señalización en la membrana plasmática a través de la interacción entre sus dominios SH2 tándem y una tirosina-tirosina fosforilados immunoreceptor motivo basado en la activación (ITAM), y de esta unión activa Syk [6, 11, 13, 14], que es entonces tirosina fosforilados Por autophosphorylation [5, 6]. ITAM fosforilados en tanto se convierte en residuos de tirosina creación de sitios de unión de alta afinidad para el tándem SH2 dominios [15]. Receptores que contengan estas ITAMs acto de iniciar una cascada de activación [16]. Por ejemplo, la estimulación de los receptores de las células B (BCR) inicia una cascada bioquímica, en la que es la activación de PTKs antes conocido caso [16]. Por lo tanto, es contratado Syk, activado por la unión de SH2 a ITAM y luego posteriormente fosforilados por autophosphorylation. Syk activado fosforila su propio sustrato, que medie más funciones en las células [16]. Syk participa en la mediación de diversas respuestas celulares, como la proliferación, diferenciación y fagocitosis [12, 17, 18]. Esto incluye receptores de las células T (TCR) y la función thymocyte desarrollo [7, 12], de células B antígeno del receptor de señalización [19] y natural killer (NK), la diferenciación celular (aunque no esencial) y la activación plaquetaria por el colágeno [13]. Syk no es tirosina fosforilados en las células en reposo, posiblemente porque es dephosphorylated por la proteína tirosina fosfatasas específicas [6].

Syk expresión se encontró en una variedad de órganos, como el bazo, corazón, glándula mamaria [20] y en [21] hepatocitos, células haemtopoietic [22] y las células de carcinoma de colon [23]. En un artículo publicado en la revista Nature, Coopman et al [18] han informado de que Syk comúnmente se expresa en el tejido mamario humano normal, las lesiones benignas de mama y de bajo tumorigénicos líneas celulares de cáncer de mama que Syk ARNm y proteínas son bajas o no detectables en el carcinoma de mama invasivo De tejidos y líneas celulares. En contraste con eso, Fluck et al [20] demostraron que agresivo metastasising tumores de las glándulas mamarias expresó Syk de nivel superior en comparación con el bien diferenciado no metastasising tumores en un modelo murino de cáncer de mama. Más recientemente, Yuan y sus colaboradores [24] demostraron que con frecuencia se Syk inactivada a través de una vía epigenética en el cáncer de mama. El uso de líneas celulares de cáncer de mama, cáncer de mama y tejidos humanos y la metodología de PCR, los autores observaron que Syk se hypermethylated inactiva y, por tanto, en 12 (32%) de 37 tumores de mama que coincide con la de todos los vecinos del tejido normal del seno expuesto unmethylated DNA estado (es decir, Syk activa). Estas observaciones son consistentes con la hipótesis de que Syk funciona como un tumor suppresser metilación de genes y el ADN de este gen parece desempeñar un papel importante en la carcinogénesis mamaria [25, 26]. Otros autores [22, 27] han demostrado que Syk es un factor pronóstico en el cáncer de mama. Sin embargo, Wang et al, utilizando la técnica de immunoblotting, han descubierto que los tejidos de cáncer de mama expresaron Syk niveles de la variable en comparación con los tejidos de mama normal [5].

El presente estudio tiene como objetivo determinar Syk expresión mRNA en tanto el cáncer de mama y del tejido normal del seno adyacente (ANCT) mediante RT-PCR la metodología y la equivalencia de la expresión en los pacientes con cáncer de la edad, tamaño tumoral, grado tumoral, los receptores de estrógeno y progesterona, linfáticos Nodo metástasis, invasión vascular y el resultado clínico.

Materiales y métodos

Institucional directrices, y en particular la aprobación ética y consentimiento informado fueron seguidos. Los pacientes fueron tratados con extirpación local amplia o mastectomía y disección de los ganglios axilares. Los pacientes con estrógeno y / o progesterona positivo tumores recibieron tamoxifeno. La radioterapia adyuvante se administra a todos los pacientes que habían conservación de la mama y la cirugía de pacientes que se someten a una mastectomía para nodo positivo enfermedad. La quimioterapia se ajuste a los pacientes (<65 años) con enfermedad ganglionar o tumores de alto grado.

Una muestra de 50 mg y de un tumor otros 50 mg de macroscópicamente normales adyacentes del tejido normal del seno (ANCT) se obtuvieron a partir de cada paciente. Ellos se congelaron en nitrógeno líquido dentro de los 30 minutos de la escisión y almacenados a -70 ° C hasta su uso.

La extracción de RNA

ARNm se extrajo a partir del 25 de los tumores y se pongan en venta 23 ANCT Absolutamente utilizando ARN, RT-PCR Miniprep Kit (Stratagene), de acuerdo con el protocolo del fabricante. La extracción de RNA se llevó a cabo en un laboratorio distinto al utilizado para RT-PCR.

RT Paso

CDNA fue sintetizado. Condiciones de la transcriptasa inversa son 25 ° C durante 10 minutos, 48 ° C durante 30 minutos y 95 ° C durante 5 minutos. Genómica se realizarán las pruebas de la contaminación y eran prácticamente nulas.

PCR

Taqman RT-PCR se realizó para cada muestra utilizando ABI PRISM 7700 Sensor sistema de detección (Applied Biosystems). Los primers fueron diseñados utilizando el Primer Software de selección. Los cebos utilizados fueron AGC ATT AGA AGC AAA TGT CAT GCA (avance) y AAC CGC ATA TCC CGA TCA TC (inversa). PCR se llevó a cabo durante 40 ciclos de 15 segundos a 95 ° C y 1 minuto a 60 ° C.

La expresión de Syk relativa a la de ARN ribosomal se determinó utilizando el sistema de detección de secuencias de Software. Este experimento se llevó a cabo en tres ocasiones y la media de los valores se calcularon y se utiliza para el análisis estadístico. Los controles positivos y negativos se ribosomal RNA y agua estéril, respectivamente.

Análisis estadístico

Mann-Whitney U test fue utilizado para examinar la asociación entre Syk expresión en el cáncer y la ANCT. Rango de correlación de Spearman se empleó la prueba para examinar la asociación entre Syk expresión en tumores y de los pacientes de edad, tamaño del tumor, el grado del tumor, los receptores de estrógeno y progesterona, metástasis a los ganglios linfáticos, invasión vascular y el resultado clínico.

Resultados

25 tumores de mama y se pongan en venta 23 ANCT se incluyeron en este estudio los pacientes con edades comprendidas entre 25-75 años (mediana de 56,5, con una media de 56,80).

Syk expresión en tumores y ANCT

La mediana para el valor relativo de Syk expresión fue del 0,17 y el 0,18 (rango: 0,12 - 0,56 y 0,0 - 1,77) para los tumores y ANCT respectivamente. Mann-Whitney U test no mostró asociación significativa entre Syk expresión en el cáncer y ANCT (p = 0.598). (Figuras 1 y 2]

Syk correlación entre la expresión en tumores y parámetros clinicopathological

La expresión de Syk en tumores estuvo correlacionado con el de los pacientes de edad, tamaño del tumor, el grado del tumor (bien, moderadamente o pobremente differntiated), los receptores de estrógeno y progesterona estado (positivo, negativo o positivo débil), metástasis a los ganglios linfáticos, invasión vascular, y la recurrencia El resultado clínico (metástasis a distancia y de la muerte con una mediana de seguimiento de 1,95 años). Rango de correlación de Spearman prueba no mostró asociación significativa entre Syk expresión en tumores y de los pacientes de edad, tamaño del tumor, el grado del tumor, los receptores de estrógeno y progesterona, metástasis a los ganglios linfáticos, invasión vascular o pronóstico curvas de supervivencia. El cuadro 1 muestra el coeficiente de correlación y los valores de p de las variables estudiadas.

Discusión

Nuestro informe en el presente artículo representa el mayor estudio de la expresión Syk humanos en el cáncer de mama y ANCT. Ha Syk mRNA que se expresa tanto en el cáncer de mama humano y ANCT especímenes. Esta observación es consistente con la función de Syk establecido en el control de la proliferación celular y la señalización intracelular en las células epiteliales y immunocytes [12, 17, 18]. La falta de diferencias estadísticamente significativas entre Syk mRNA expresión en todo el tumor y ANCT especímenes observados en este estudio pueden representar un verdadero observación y, por lo tanto, Syk no debe ser considerado como un gen supresor tumoral. Esto no excluye, sin embargo, la presencia de diferentes niveles de expresión Syk malignas y benignas en células epiteliales mamarias. Los tumores de mama son lesiones heterogéneas [5] que contienen diversos componentes incluidos los fibroblastos y linfocitos. Este último puede hacer que hasta un 45% de todo el volumen del tumor de mama [28]. Se sabe que los linfocitos expresan niveles significativos de Syk y esto podría llevar a una falsa sobreestimación de Syk ARNm en las células del cáncer epitelial. Un cálculo más preciso de mRNA en Syk epiteliales elementos que se puede lograr mediante el uso de láser captura microdissection (LCM), con el fin de separar las células epiteliales de otros componentes en ambos tumores y la ANCT. Alternativamente, hibridación in situ y técnicas de inmunohistoquímica, pueden ser utilizados para identificar la fuente celular de la enzima (Coopman et al). El ANCT en nuestro estudio se obtuvo de macroscópicamente del tejido normal del seno más de 10 mm de distancia desde el tumor primario. Sin embargo, no se puede excluir la presencia maligna de las células epiteliales en estos especímenes, como la verificación de la ANCT histopatológico no se llevó a cabo. Otra limitación del presente estudio es el hecho de que hemos medido transcripción del mRNA en lugar de la proteína, que es el producto final eficaz del gen. Sin embargo, los datos experimentales de las líneas celulares de cáncer de mama sugieren que existe una buena correlación entre el mRNA y de la expresión de la proteína (Coopman et al). Además, la presencia de variantes de empalme Syk ARNm (Fluck et al) representa otra limitación a nuestra metodología de RT-PCR. Nuestros resultados también muestran que Syk mRNA expresión en los tumores de mama según lo determinado por RT-PCR la metodología es independiente de la etapa del tumor y, por tanto, es poco probable que desempeñar un papel pronóstico en pacientes con cáncer de mama.

Abreviaturas

Corr Coef: Coeficiente de correlación

Hist: Histología

LN: metástasis a los ganglios linfáticos

Vasc: invasión vascular

ER: los receptores de estrógeno

PR: receptores de progesterona

Rec: Repetición

OC: resultados clínicos