Breast Cancer Research, 2005; 7(3): R306-R313 (más artículos en esta revista)

Evaluación de la proliferación, la apoptosis y la renovación celular de los índices humanos epitelio mamario durante la fase folicular y lútea del ciclo menstrual

BioMed Central
Maria Alicia H Navarrete (chile@stanford.edu) [1], Carolina M Maier (cmaier@stanford.edu) [2], Roberto Falzoni (falro@uol.com.br) [3], Luiz Gerk de Azevedo Quadros ( Quadros.toco @ epm.br) [1], Geraldo R Lima (no disponible) [1], Edmund C Baracat (baracat.gineco @ epm.br) [1], CP Nazário Afonso (nazario.gineco @ epm.br ) [1]
[1] Departamento de Gyneology, División de Mastología, Universidad Federal de São Paulo, São Paulo, Brasil
[2] Departamento de Neurocirugía, Stanford University School of Medicine, Stanford, California, EE.UU.
[3] APC Patología, São Paulo, Brasil

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Resumen
Introducción

Durante el ciclo menstrual, la glándula mamaria pasa por sucesivas oleadas de la proliferación y la apoptosis. En las células epiteliales mamarias, hormonales y no hormonales factores que regulan la apoptosis. Para determinar los efectos cíclicos de los esteroides gonadales sobre la homeostasis de mama, se evaluó el índice apoptótico (AI) determinado por terminal deoxynucleotidyl transferasa mediada dUTP nick fines de etiquetado (TUNEL) en la tinción de las células epiteliales mamarias humanos durante el ciclo menstrual espontáneo y correlacionada con celular Proliferación según lo determinado por la expresión de Ki-67 en el mismo período.

Métodos

Del tejido normal del seno se obtuvieron muestras de 42 pacientes seleccionados al azar en la proliferativa (n = 21) y lútea (n = 21) a la producción. Ciclo menstrual fase de caracterización se basaba en la fecha de la última menstruación y posteriores, y en los niveles de progesterona sérica obtenidos en el momento de la biopsia.

Resultados

El índice de proliferación (IP), que se define como el número de Ki-67-positivas por 1000 núcleos de las células epiteliales, fue significativamente mayor en la fase lútea (30,46) que en la fase folicular (13,45; P = 0,0033). La IA se define como el número de células TUNEL-positivas por cada 1000 células epiteliales. El promedio de los valores de AI en ambas fases del ciclo menstrual no fueron estadísticamente significativas (P = 0,21). Sin embargo, el índice de renovación celular (CRI = PI / AI) fue significativamente mayor en la fase lútea (P = 0,033). Una importante variación cíclica de la PI, y la IA se observó CRI. PI y AI se produjo el pico alrededor de la 24 ª día del ciclo menstrual, mientras que los valores elevados de CRI en el 28 º día.

Conclusiones

Llegamos a la conclusión de que la actividad proliferativa depende principalmente de las fluctuaciones hormonales, mientras que la actividad apoptótica es probablemente regulado por los anticonceptivos hormonales y no hormonales factores.

Introducción

Las transformaciones cíclicas y cinética celular de la glándula mamaria han sido por mucho tiempo objeto de una intensa investigación. El interés en las alteraciones causadas por acciones de esteroides, específicamente en la proliferación epitelial, ha aumentado drásticamente en la última década debido a un creciente número de carcinomas de mama en la población femenina [1]. También existe una necesidad inmediata de más exacta predictores de riesgo de cáncer de mama, particularmente en vista de los diversos ensayos de quimioprevención en curso.

La comprensión de los factores y mecanismos que regulan la hormona relacionada con los cambios en la mama normal humanos es crucial, debido a alteraciones en la estructura y la función de mama durante el ciclo menstrual podrían predisponer a este tejido maligno y, por tanto, cambios en el desarrollo de cáncer de mama. En el presente estudio se centra en las células epiteliales, que es el principal objetivo de la carcinogénesis, como se ha demostrado en diversos estudios histológicos que indican que la mayoría de los tumores de mama se plantean en la célula epitelial de la población [2].

Aunque varios grupos han examinado la actividad proliferativa de las células epiteliales en la mama normal en todo el ciclo menstrual [3 - 8], una limitación en estos estudios es el uso concomitante de anticonceptivos orales por muchos de los pacientes estudiados. Además, los estudios con la timidina etiquetado índice proliferativo demostrado que la actividad disminuye con la edad [7, 8], lo que exige la normalización de los datos para reducir la variabilidad. Por último, estos estudios no ofrecen una explicación clara de la hormona relacionada con variaciones en la muerte celular programada (apoptosis) y la mitosis (proliferación) observadas durante el ciclo menstrual.

Es bien sabido que la glándula mamaria sufre modificaciones morfológicas durante el ciclo menstrual. Proliferación epitelial es mayor durante la fase lútea, lo que sugiere una influencia sinérgica de los estrógenos y la progesterona [9, 10]. Obra de Ferguson y Anderson [5] y por Anderson y colegas [6], utilizando un modelo de regresión lineal, sugiere que existen variaciones cíclicas en los niveles de apoptosis epitelial, con la máxima expresión de apoptosis en el 28 º día del ciclo menstrual, aproximadamente 3 días Mitótico después de la punta. Esto coincide con la disminución de los niveles de estrógeno y progesterona al final del ciclo menstrual. Aunque pequeño temporal se encontraron diferencias entre los dos fenómenos, el autor declaró que no era posible suponer una relación entre la mitosis y la apoptosis en los estudios. Debido a que el número de células sometidas a la muerte de las células es muy bajo, se evaluó la frecuencia de apoptosis por lóbulo mamarias (lóbulos aproximadamente el 50 por caso). Los pocos en apoptosis observada parecía ser distribuidos al azar en el lóbulo, central y periférico dentro de los conductos. Los autores también incluyeron pacientes en los que ni la apoptosis ni mitosis se puede observar, que requieren la manipulación matemática de los datos obtenidos en todos los casos examinados con el fin de obtener mitótico y apoptótico frecuencias. De hecho, en el estudio de Anderson y colegas [6], todavía no está claro si la apoptosis actividad descrita se hizo más intensa al final de la fase lútea, ya que sigue el aumento de la actividad mitótica en los días antes o porque es más independiente que durante Período del ciclo menstrual.

Para aclarar los efectos cíclicos de los esteroides gonadales sobre la homeostasis de mama, se evaluó el índice apoptótico (AI) en las células epiteliales mamarias humanas (por terminal deoxynucleotidyl transferasa mediada dUTP nick fines de etiquetado (TUNEL) tinción [11]], durante el espontáneo (natural) Ciclo menstrual y se correlacionó con la proliferación celular que determine expresión Ki-67 [12] durante el mismo período. Asimismo, la correlación con los niveles de progesterona de apoptosis y proliferación independientemente de la fase del ciclo.

Materiales y métodos
Los pacientes

La serie consta de 42 pacientes (edad 21,8 ± 6,1 años (media ± desviación estándar), rango 14 a 38 años) sometidos a la extirpación de los fibroadenomas, una condición pensamiento no se asoció con un mayor riesgo de cáncer, en el Departamento de Gyneology, Mastología División, la Universidad Federal de São Paulo, Escuela Paulista de Medicina. Junta de revisión institucional se obtuvo la aprobación y los pacientes firmaron un consentimiento informado antes de la inscripción en el estudio. Los criterios de inclusión para la entrada en el estudio fueron las siguientes: sexo femenino, los ciclos menstruales regulares (intervalos de 28 ± 2 días) en los últimos 6 meses, y con una conocida fecha de la última menstruación. Los criterios de exclusión fueron: uso de la terapia hormonal en los 12 meses anteriores, el embarazo, las mujeres de enfermería en los últimos 12 meses, los pacientes con cualquier tipo de patología endocrina, o pacientes que toman cualquier tipo de medicación en el momento en que el tejido para el estudio se obtuvo.

Los pacientes sometidos a un completo examen médico, la ecografía y punción aspiración con posterior análisis microscópico para confirmar que la lesión es benigna mamaria. Todos los pacientes fueron distribuidos de forma aleatoria en dos grupos de acuerdo a la fase de su ciclo menstrual, el cual fue determinado por la fecha de la paciente anterior, así como en posteriores período menstrual: el grupo A, la fase folicular (edad 23,5 ± 6,6 años (media ± DE)) ; Grupo B, la fase lútea (edad 20,0 ± 5,2 años). Los niveles de progesterona fueron examinados por radioimmunoassays, con valores de 3,0 ng / ml o más considera compatible con la actividad lútea adecuada [13].

El tejido mamario se obtuvo con un anestésico local sin vasoconstrictores (2% se utilizó lidocaína), en alrededor de la 1:00 de la tarde para minimizar los efectos de los ritmos circadianos en la hormona de liberación [4, 14] y sobre la cinética celular [15, 16]. El parénquima mamario tejido extraído (por lo menos 1 cm de la lesión) fue en cifras brutas, sin alteraciones microscópicas [17].

Histopatología, inmunohistoquímica y TUNEL

Después de la fijación en formol al 10% e incluidas en parafina, tejidos muestras fueron cortadas en secciones de 4 μ m, en deparaffinized xileno hidratado y en una serie de lavados de etanol, teñidas con hematoxilina y eosina, y se examinaron para cualquier anormalidades patológicas. TUNEL tinción se realizó con la ApopTag Plus Apoptosis in situ Detección Kit (Oncor, Gaithersburg, MD, EE.UU.). Muestras de tejido fueron deparaffinized hidratado y como se indica más arriba, y despojado de proteínas por incubación con 20 μ g / ml de proteinasa K (42 º C) durante 15 min. Los trozos fueron lavados en agua destilada y PBS e incubadas en el 3% de H 2 O 2 para eliminar peroxidasas endógenas. Después de equilibrio, las secciones fueron incubadas a 37 ° C en la terminal deoxynucleotidyl transferasa (TdT) enzima y sustrato digoxigenina-etiquetados para 1 hora. Antidigoxigenin se aplicó entonces, y la detección se realiza con diaminobenzidine solución de sustrato. Las secciones fueron counterstained con verde de metilo, despejado, y montadas. Secciones DNAse I tratados con la enzima se utilizaron como controles positivos (Amersham, Cleveland, OH, EE.UU.), y de las secciones de la que se omitió la enzima TdT se utilizaron como controles negativos. Secciones adyacentes se utilizaron para Ki-67 tinción inmunohistoquímica. Secciones se deparaffinized, hidratado, incubadas con proteinasa K, lavados en agua destilada y PBS, y se incubaron con 3% de H 2 O 2 como se indica arriba. El bloqueo de suero se aplicó durante 20 min y de las secciones fueron incubadas en forma secuencial primaria ratón anti-humano Ki-67 anticuerpo (1:100, clon Ki-S5, Dako, Carpinteria, CA, EE.UU.) durante 1 hora, con biotina de conejo anti-ratón IgG (Dako LSAB kit) durante 12 min, y reactivo ABC (avidina y biotina peroxidasa de rábano complejo) durante 30 min (ABC kit, Vector, Burlingame, CA, EE.UU.). La detección se realiza con diaminobenzidine sustrato hasta que la solución deseada intensidad de la tinción se obtuvo (3 a 5 min). Las secciones fueron counterstained con hematoxilina y eosina, despejado, y montadas.

Evaluación cuantitativa de Ki-67 y expresión TUNEL positividad se realizó en las células epiteliales de la glándula mamaria anatómicamente normal (sin cambios fibroquística), incluyendo conductos central y periférico dentro de los lóbulos; mioepiteliales y células linfoides fueron excluidos. Las células apoptóticas se cuentan como si fueran sólo TUNEL-positivas y mostraron nuclear morfología característica típica de la apoptosis (es decir, las células que contienen los núcleos más pyknotic cuerpos apoptóticos). Los sucesivos cuenta, realizada por individuos cegados a los grupos, se realizaron hasta 1000 células por muestra de tejido se ha examinado. Dos índices así obtenidos fueron: el índice de proliferación (IP), que se define como el número de Ki-67-positivas por 1000 núcleos de las células epiteliales, y la AI, que se define como el número de células TUNEL-positivas por cada 1000 células epiteliales contados. A partir de estos valores el índice de renovación celular (CRI = PI / AI) se obtuvo.

Análisis estadístico

Los análisis estadísticos se realizaron con el análisis de la varianza para los datos continuos seguido de la prueba t de Student, y con pruebas no paramétricas (Mann-Whitney U test) para los no continua de datos (la gestación y la paridad). La prueba exacta de Fisher se utilizó para verificar la homogeneidad de las muestras en relación con la historia de enfermería. La variación en la frecuencia de proliferación y apoptosis en relación con las variaciones en el ciclo menstrual, así como la variación en la frecuencia de proliferación y apoptosis en relación con los niveles de progesterona se midieron con modelos de regresión lineal y cuarto grado polinomio curvas (Polnom Programa de la Universidad de Manchester , Manchester, Reino Unido), como se indica. Todos los datos se expresan en los medios ± SD; P <0,05 fue considerado significativo.

Resultados

No hubo diferencias entre los pacientes en el grupo A (fase folicular) y grupo B (fase lútea) en función de la edad de inicio de la menstruación (12,8 ± 1,3 y 12,7 ± 1,4, respectivamente), el número de embarazos, número de partos, la lactancia y la historia.

La media de PI para el grupo A fue de 13,5 ± 9,8, significativamente menor que en el Grupo B, que tiene una IP de 30,5 ± 22 (P = 0,003, por la prueba t de Student). Fotomicrografías representante de los pacientes que muestran expresión Ki-67 para ambos grupos se muestran en la Fig. 1a, b. La IA para ambos grupos fue muy similar: el grupo A (4,4 ± 1,8) y grupo B (5,2 ± 2,4, P = 0,21). TUNEL-positivas representante células de pacientes de cada grupo se dan en la Fig. 1C-E; Fig. 1f muestra una muy magnificadas de células TUNEL-positivos que muestran los rasgos característicos de la condensación de la cromatina y de los órganos de apoptosis. La CRI para el grupo A (3,8 ± 3,4) también fue significativamente menor que para el grupo B (7,4 ± 6,6, P = 0,03).

Los datos muestran que, en un intervalo de 28 días, el número de proliferación, apoptosis, y la renovación celular acontecimientos varían en función del tiempo. Las regresiones lineales para cada uno de los índices se muestra en la Fig. 2a, c, e. La variabilidad cíclica muestra que la proliferación de los valores más altos se producen cerca del final del ciclo menstrual, mientras que la IA es mayor al principio y al final del ciclo menstrual. El CRI muestra variaciones cíclicas, con valores significativamente más cerca de la 28 ª día del ciclo menstrual (P = 0,033). El polinomio de cuarto grado curvas muestran que ni la IP (P = 0,6; Fig. 2b] ni el CRI (P = 0,25; Fig. 2f] es estadísticamente diferentes a lo largo del curso del ciclo menstrual. En contraste, hay una significativa variabilidad cíclica en la AI (P = 0,038; Fig. 2d]. Las ecuaciones matemáticas que mejor representan la PI y la IA son las de regresión lineal y el polinomio de cuarto grado curva, respectivamente. Cuando estos se superponen, después de ajuste matemático de la media hora visible de expresión Ki-67 con el de la apoptosis, es evidente que los valores máximos para ambos índices (PI y AI) coinciden en alrededor de la 24 ª día del ciclo menstrual. En este punto, la regresión lineal de la PI es tangente a la polinómica de cuarto grado (Fig. 2g].

Además, los niveles de progesterona, independientemente de la fase del ciclo, se correlacionan con la proliferación. En la apoptosis no es así, porque hemos encontrado una disminución de la apoptosis en los niveles de progesterona superior a los 15 ng / ml (Fig. 2h].

Es importante señalar que, en relación con el número total de células presentes, el número de células epiteliales en proliferación o la apoptosis en cualquier momento durante el ciclo menstrual era muy pequeño, y las células se distribuyeron en todo el lobulillos mamarios.

Discusión

La glándula mamaria sufre cambios cíclicos en respuesta a las fluctuaciones hormonales del ciclo menstrual. El epitelio responde a los cambios hormonales por sistémica regional proliferación, diferenciación y muerte celular programada, también conocida como apoptosis [18]. En el presente estudio de tejido mamario normal se observó que esta epiteliales respuesta está limitada a una pequeña fracción de las células, lo que sugiere que es probable que la reglamentación local de la supervivencia y la muerte celular en este tejido. Se obtuvieron resultados similares y por Andres Strange [18], que también indicó que las células sometidas a la proliferación o la apoptosis fueron aislados, distribuidos en varios lóbulos mamarios, y coloca cerca de la luz.

Proliferación y apoptosis en el tejido mamario normal está influida por varios factores, incluyendo la fase del ciclo menstrual, la edad cronológica, la edad de mama, el uso de anticonceptivos orales (sobre todo si nulíparas) y la paridad reciente [19]. Por lo tanto, es imprescindible utilizar criterios estrictos al seleccionar los pacientes para los estudios de tejido mamario normal. Varios estudios anteriores han examinado en el volumen de negocios de células morfológicamente normales de epitelio de la glándula mamaria humana [4 - 8, 16, 20 - 22]. Sin embargo, la interpretación de los resultados de estos estudios es difícil por cuatro razones: en primer lugar, el estado menstrual y la paridad de los grupos no se informó de [23], en segundo lugar, los estudios incluyeron pacientes de la perimenopausia y / o la edad de la menopausia [5, 8, 23 - 25], en tercer lugar, varios de los pacientes estudiados estaban utilizando anticonceptivos orales [5, 8, 24, 26], y en cuarto lugar, no existen datos disponibles acerca de, o no hay evaluación de la fase del ciclo menstrual con Los niveles de progesterona [5, 8, 23, 24, 26]. En el presente estudio, todo lo anterior se evaluaron parámetros y / o de su control.

Revisado por Brown y Gatter [27], el IP de cualquier tejido está determinada por la fracción de crecimiento, la cual puede ser evaluada por la expresión Ki-67, y el tiempo que tarda la célula para completar el ciclo celular. Así, los tejidos en los que muchos se encuentran en células de un largo ciclo de mostrar una amplia expresión Ki-67, pero no un gran PI. En cambio, los tejidos en los que algunas células se encuentran en un ciclo corto tienen una mayor PI, pero pocos Ki-67-células positivas. Porque Ki-67 se expresa a lo largo del ciclo celular (G1, S, G2 y fase M), es rápidamente degradada y no se encuentra en las células en la reparación del ADN [12], su expresión sólo proporciona información acerca de si una célula está en el ciclo , Pero no sobre la duración del ciclo. De acuerdo con estudios anteriores [5, 20], nos encontramos con que el IP (el número de Ki-67-positivas por 1000 núcleos de las células epiteliales) del epitelio mamario humano es significativamente mayor en la fase lútea del ciclo menstrual, tanto en el momento de Evaluados por la media de los medios y cuando se mide por regresión lineal.

Los mecanismos por los cuales las hormonas esteroides estimulan el crecimiento del epitelio mamario son controvertidos y siguen siendo la fuente de intensa investigación. Diversos estudios sugieren que la regulación de la proliferación celular se produce a través de tres mecanismos principales, a saber, mediado por los receptores [28 - 36], un autocrina y paracrina bucle [37], y los votos negativos [38, 39]. Entre los específicos de los receptores de hormonas que participan, dos receptores de estrógenos (RE) son de particular interés: ER-α, el subtipo predominante en la glándula mamaria, y ER-β [40]. En el tejido mamario normal, la fracción de células epiteliales que expresan ER es pequeño [41]. Estudios recientes han demostrado que la ER es un ligando dependiente de factor de transcripción, que representa la latencia de la mayoría de las respuestas estrogénica en tejidos diana [42]. La ER puede regular la transcripción de genes, ya sea directa o indirectamente y, en función de los patrones de co-regulador de la contratación para el ligando-receptor-gen de reunión, puede obtener ya sea la estimulación o inhibición de los efectos biológicos específicos [43]. Además, la unión del estrógeno a la sala de emergencia puede ser modulada por la progesterona [44]. Actuando a través de los receptores de progesterona, la progesterona es el regulador fisiológico negativo de la activación de estrógenos [45].

Es posible que la hormona esteroide fluctuaciones influyen en la activación de la transcripción de genes en células mamarias objetivo. Estas células objetivo manifestar diferentes tipos y niveles de proteínas reguladoras en la primera y segunda fase del ciclo menstrual. Requieren de un período de latencia para iniciar la transcripción de factores reguladores que activan el ciclo celular, que culminó con una mayor proliferación en la segunda fase del ciclo menstrual.

En el de mama, la proliferación y la apoptosis de los epitelio mamario se producen en respuesta a los estrógenos y otras hormonas. Uno de los ejemplos clásicos de la apoptosis es la involución de la lactancia después de la glándula mamaria, en el que la pérdida de hormonas lactogénicas resultados en el colapso de la glándula debido, en gran parte, a una eliminación programada de las células epiteliales mamarias diferenciadas [46]. En el presente estudio se observa que la apoptosis actividad no varían significativamente entre las fases folicular y luteal. Por otra parte, nuestros resultados muestran que la apoptosis alcanza valores máximos en la mitad de la fase lútea (en el sobre el día 24 del ciclo menstrual), pero también existe una pequeña elevación en TUNEL-positivas acerca de los núcleos en el tercer día del ciclo. Esto contrasta con el estudio realizado por Ferguson y Anderson [5], que encontraron importantes variaciones cíclicas en la frecuencia de apoptosis. La razón de la discrepancia en los resultados no es clara pero podría estar relacionada a diferencias en la metodología y los criterios de selección de pacientes. También es importante señalar que en el estudio de Ferguson y Anderson [5] la importancia de las variaciones cíclicas sólo es evidente en el logaritmo de la transformada, o matemáticamente ajustado, los valores de la mitótico y apoptótico en contra de las frecuencias día del ciclo menstrual. En el presente estudio no hay necesidad de transformar ninguno de los valores obtenidos, y encontramos que la curva que mejor se ajuste a los resultados es el polinomio de cuarto grado.

También es probable que tengan lugar variaciones cíclicas de la tasa con la que mitótico y apoptótico ocurren eventos, afectando así a los períodos de tiempo en el que estos fenómenos son visibles [47]. Los valores atípicos en los datos pueden estar relacionados con este fenómeno.

El número de eventos y la velocidad a la que se producen concomitantemente no se han evaluado. Por lo tanto, es posible que el aumento de los eventos durante la fase lútea del ciclo menstrual es simplemente debido al hecho de que estos eventos son visibles por más tiempo en esa etapa, y no porque el número absoluto de los acontecimientos es mayor en ese momento en relación con el Fase folicular. Por último, el aumento de los eventos en la fase lútea puede ser debido a una combinación de un aumento visible del tiempo y el aumento del número de eventos. Otros estudios con múltiples parámetros de análisis, lo que nos permite diferenciar entre el caso de los números, duración, y la tasa de aparición, son necesarios para comprender los efectos cíclicos de los esteroides gonadales sobre la homeostasis de mama.

Tejido mamario es uno de los mejores ejemplos de la complejidad de la relación biológica entre la proliferación celular y la muerte celular. La proliferación y la apoptosis en las tasas de la glándula mamaria varían en numerosas ocasiones durante toda la vida dependiendo de la edad, la fase del ciclo menstrual, paridad, la involución puerperal, y de la menopausia. Para estudiar el efecto dual de la proliferación y la apoptosis en las células epiteliales mamarias, utilizamos el CRI (calculado como PI / AI). Nos parece que, si bien tanto la proliferación y la apoptosis se producen a lo largo del ciclo menstrual, la máxima CRI valores ocurren en aproximadamente el 28 día del ciclo. Es importante señalar que la comparación aislada de la apoptosis y la proliferación de los índices tiene algunas limitaciones, ya que cada índice refleja tanto el número de veces que cada evento tiene lugar en la unidad de tiempo y la proporción de células de la población en condiciones de someterse a cada caso [ 48]. El CRI nos permite medir la frecuencia de aparición de la proliferación en relación con la apoptosis. Esto sirve para reducir o eliminar los efectos de las diferencias entre las muestras de células que no sean objeto de proliferación celular o apoptosis no contribuyen al cálculo del CRI [48].

En el presente estudio encontramos que los niveles de progesterona, independientemente de la fase del ciclo menstrual, se correlacionaron positivamente con la PI, como se ha visto en modelos animales [49]. Sin embargo, la AI con la progesterona disminuye los niveles de más de 15 ng / ml, lo que sugiere que la apoptosis es epiteliales mamarias probablemente depende de algo más que alteraciones en los niveles de progesterona.

Aparte de las fluctuaciones hormonales, hay varios factores que cambian durante el ciclo menstrual. Por ejemplo, varios familia Bcl-2 (de la regulación de la apoptosis) las proteínas se expresan en el epitelio mamario normal, incluidos los anti-apoptóticos proteínas Bcl-2, Bcl-X, y MIC-1, y el pro-apoptótica Bax. Se ha demostrado que la relación de estos diversos ratios de pro-apoptóticos y anti-apoptóticos miembros de la familia Bcl-2, en última instancia, determinar la sensibilidad o resistencia de las células a diversos estímulos de apoptosis [46]. Ferrieres y colegas [50] encontraron una correlación entre la expresión de Bcl-2 y los niveles de progesterona, con una mayor expresión de Bcl-2 en la fase folicular, disminuyendo como avanza el ciclo menstrual. En cambio, Sabourin y colegas [51] encontró que Bcl-2 se expresó preferentemente en lobular células epiteliales, con la máxima expresión en el ciclo de mediados de período y una drástica disminución al final del ciclo menstrual. A pesar de los distintos patrones de expresión de Bcl-2 en la primera parte del ciclo menstrual, los resultados de estos dos estudios sugieren que la regulación de la expresión de Bcl-2 en el tejido mamario es hormono-dependientes. Además, como se explica por Ferrieres y colegas [50], estos resultados sugieren una pérdida en el control de Bcl-2 por la progesterona en las enfermedades procedentes de los componentes del epitelio lobular.

Otra proteína que también está bajo control hormonal y sufre variaciones cíclicas a lo largo del ciclo menstrual es receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR). EGFR está involucrado en el control de la proliferación y, probablemente, la diferenciación de las células epiteliales normales de la mama. Gompel y colegas [52] han demostrado que la expresión EGFR en las células epiteliales mamarias es más fuerte en la fase lútea que en la fase folicular. Esto sugiere un efecto de las progestinas similar a la observada en líneas celulares de cáncer de mama, aunque no está claro si los altos niveles de EGFR se correlaciona con una mayor proliferación de los tejidos o diferenciación.

Conclusión

Nuestros datos indican que el número de eventos de proliferación y apoptosis variar durante el ciclo menstrual. La frecuencia con la que estos hechos se producen también está sujeto a variaciones cíclicas. El PI y el CRI son significativamente superiores en la fase lútea. La PI y culminará en la AI acerca de la 24 ª día del ciclo menstrual, mientras que el CRI picos en la 28 ª día. Elucidar los efectos cíclicos de los esteroides gonadales sobre la homeostasis de mama es fundamental si hemos de entender cómo alteraciones en la estructura y la función de mama durante el ciclo menstrual puede llevar a cáncer de mama.

Abreviaturas

IA = índice apoptótico; CRI = índice de renovación celular; EGFR = receptor del factor de crecimiento epidérmico; ER = receptor estrogénico; PBS =-buffer fosfato salino; PI = índice de proliferación; TdT = terminal deoxynucleotidyl transferasa; TUNEL = TdT-mediada dUTP nick fin de etiquetado .

Conflicto de intereses

Los autores declaran que no tienen intereses en conflicto.

Contribuciones de los autores

MAHN, el investigador principal, concebido en el estudio, fue responsable de todas las atención de los pacientes y los procedimientos quirúrgicos, y escribió el manuscrito. CMM TUNEL realizó la tinción inmunohistoquímica y, y la ayuda en la redacción del manuscrito. RF realiza el estudio patológico. LGAQ ayudó con el análisis estadísticos. GRL BCE y un aporte valioso en el manuscrito. ACPN supervisó el proyecto. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

Agradecimientos

Los autores Albert Maier gracias por su asesoramiento de expertos y el análisis estadístico, el Dr Chan Pak H por apoyar a los esfuerzos de investigación, y Elizabeth Hoyte cifra de preparación. Este trabajo recibió el apoyo de la Universidad Federal de São Paulo (MAHN) y por la Asociación Americana del Corazón beca posdoctoral no. 0120142Y (CMM).