Journal of Circadian Rhythms, 2005; 3: 9-9 (más artículos en esta revista)

Efecto de la separación de basura en 24 horas ritmicidad de plasma de prolactina, hormona folículo-estimulante y hormona luteinizante niveles en lactantes conejo hace

BioMed Central
Pilar Cano (pelayos@med.ucm.es) [1], Vanessa Jiménez (pelayos@med.ucm.es) [1], P Maria Álvarez (pilar@med.ucm.es) [2], Mario Alvariño (josemario . Rodriguez@upm.es) [3], P Daniel Cardinali (cardinal@mail.retina.ar) [4], Ana Esquifino I (pelayos@med.ucm.es) [1]
[1] Departamento de Bioquímica y Biología Molecular III, Facultad de Medicina, Universidad Complutense de Madrid, 28040 Madrid, Spain
[2] Departamento de Biología Celular, Facultad de Medicina, Universidad Complutense de Madrid, 28040 Madrid, Spain
[3] Departamento de Producción Animal, ETSI Agrónomos, Universidad Politécnica de Madrid, España
[4] Departamento de Fisiología, Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires, 1121 Buenos Aires, Argentina

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Resumen
Antecedentes

Este trabajo describe el efecto de una camada de 48 h de separación, el 24-h pautas de la prolactina plasmática, la concentración de LH y FSH en las mujeres lactantes conejos mantenido bajo una luz-oscuridad 16:8 fotoperíodo (luces encendidas en 0800 h).

Métodos

Grupos de 6-7 mujeres lactantes conejos mantenido con sus camadas o separados de ellos por 48 h fueron muertos por decapitación en el día 11 después del parto, a las 6 diferentes momentos a lo largo de un ciclo de 24 h, a partir de 0900 h. Los niveles plasmáticos de prolactina, FSH y LH se mide por doble anticuerpo específico radio-inmunoensayo.

Resultados

Nivel plasmático de la prolactina en el control y separados hace cambiado de una manera similar a lo largo del día, mostrando dos valores máximos, en 0500-0900 y en 1700-2100 h h, respectivamente. La basura separación significativamente aumentada de plasma FSH y LH y perturbado su 24 h ritmicidad.

Conclusión

Dado que estudios anteriores habían demostrado que la hojarasca de separación durante cortos períodos de tiempo aumentó la receptividad sexual y la fecundidad de las tes, los cambios en la FSH y LH informó pueden influir en la masiva liberación de la hormona liberadora de gonadotropina, LH y FSH desencadenado en el apareamiento o la inseminación artificial en la hojarasca - Madres separados.

Introducción

En la enfermería conejos, receptividad sexual y la fecundidad logrado después de la inseminación artificial es la depresión durante el período de lactancia, presumiblemente a través de un antagonismo entre los anticonceptivos hormonales y gonadotropina liberación de prolactina [1 - 3]. Varios estudios han demostrado que la separación de los tes de su camada durante cortos períodos de tiempo, antes de la inseminación artificial, es muy eficaz para estimular la actividad ovárica en la madre [4 - 6], con cambios endocrinos que pueden explicar la activación de la función ovárica [7 - 9] Por lo tanto, de la separación de sus camadas no podría ser un procedimiento eficaz para aumentar la eficiencia de cría en virtud de las condiciones de explotación [5 - 7].

Cabe señalar que los estudios publicados sobre los cambios endocrinos que tienen lugar en la basura después de la separación tes se han realizado en los puntos sola vez en el ciclo diario, generalmente por la mañana, que es un importante inconveniente, en vista de la naturaleza de la circadiano La secreción de las hormonas de la pituitaria implicados [10, 11]. De hecho una serie de funciones circadiano han sido examinados en conejos [12 - 17], pero no hay información sobre las 24 h patrón de la hormona de liberación. Esto nos llevó a realizar el presente estudio cuyo objetivo era examinar el efecto de la separación de la basura durante 48 h en 24 h cambios en el plasma de prolactina (PRL), hormona folículo estimulante (FSH) y la hormona luteinizante (LH) de los niveles de tes. En concreto, hemos tratado de responder a dos preguntas: (i) ¿la represión de un importante estímulo neuroendocrino y circadiano como la estimulación de los pezones por la lactancia afectan a las crías de las 24 h cambios en la gonadotropina y la liberación de prolactina?, (Ii) cambios en la podría Los niveles circulantes de hormona de estar relacionado con el aumento de la eficiencia de cría ubicada después de la separación de la basura tes?

Materiales y métodos
Animales

El estudio se realizó en 84 multíparas, madres en periodo de lactancia de California x Nueva Zelanda Blanco cruce femenino tes conejos. Los animales fueron alojados en las instalaciones de investigación del Departamento de Producción Animal, Universidad Politécnica de Madrid, bajo el control ciclos de luz-oscuridad (LD 16:8, luz sobre a las 8:00 h), alojadas en jaulas individuales de metal, alimentado en libitum utilizando un Dieta comercial de pellets (Laboratorio Conejo Chow, Purina Mills, Torrejón de Ardoz, Madrid, España) y tener acceso a agua de la llave ad libitum. El estudio se realizó de acuerdo a las directivas del Consejo de Europa central y oriental (86/609, de 1986) para el cuidado de animales de experimentación. Grupos de 6-7 mujeres lactantes conejos se mantuvieron con sus camadas o separados de ellos durante 48 horas, comenzando en diferentes momentos (es decir, a las 09:00, 13:00, 17:00, 21:00, 01:00 o 05 : 00 h). El noventa y cinco por ciento de los no amamantados los cachorros entre 03:30 y 04:30 h durante el oscuro período, como se ha descrito previamente [16]. El día 11 después del parto, la que fueron muertos por decapitación en 6 diferentes puntos de tiempo en todo un ciclo de 24 horas a partir de las 0900 h. La sangre fue recogida en la herida cervical y el plasma se separó para medir la concentración de prolactina y gonadotropina.

Terapia hormonal de ensayos

Plasma prolactina, FSH y LH, se midieron los niveles en el duplicado de las muestras tomadas por RIA métodos específicos [18] usando AFP-991086, AFP-472176 y AFP-3120489 anticuerpos de prolactina, FSH y LH respectivamente, facilitados por el Instituto Nacional de Salud (NIH, Bethesda, MD, EE.UU.) y el Dr AF Parlow (Harbour-UCLA Medical Center, CA, EE.UU.). Las hormonas son etiquetados con 125 I por el método de Cloramina-T [19]. Los títulos de anticuerpos fueron utilizados para prolactina 1:62500, 1:45000 para FSH y LH 1:250000 de ensayos, respectivamente. El volumen de plasma utilizado fue de 10 μ l (ensayo de la prolactina), 75 μ l (FSH ensayo) y 100 μ l (LH ensayo). Staphylococcus aureus (preparado por el Departamento de Fisiología Vegetal, UAM, Madrid, España) se utiliza para precipitar el obligado Fracción [18]. Los ensayos fueron previamente validado en nuestro laboratorio [18]. Todas las muestras se midieron en el mismo ensayo de correr para evitar las variaciones inter-ensayo. De los límites de detección de prolactina, FSH y LH fueron 0,125, 0,48 y 0,05 ng / mL, respectivamente. La intra-ensayo coeficiente de variación, calculada a partir de un pool de plasma mide diez veces en el mismo ensayo, fue <5%.

Análisis estadístico

Después de determinar que la homogeneidad de varianza fue asumido defendible y que la distribución unimodal y nonskewed parece, el análisis estadístico de los resultados fue realizada por una de dos vías análisis factorial de la varianza (ANOVA). Generalmente, el ANOVA incluyó la evaluación de los efectos del grupo (es decir, la aparición de diferencias en los valores medios entre los grupos de control y separados), de los efectos de la hora del día (que se produzcan cambios de diario) y de la interacción entre los dos factores (la separación y la Tiempo, de la que la inferencia acerca de las diferencias en el calendario y la amplitud se puede obtener). A one-way ANOVA seguido de Student-Newman-Keuls' prueba era entonces empleado para mostrar que el tiempo fueron significativamente diferentes puntos dentro de cada grupo experimental para definir la existencia de picos. Una Prueba t de Student para evaluar las diferencias entre los grupos experimentales, en particular los intervalos de tiempo. Los valores de p inferior a 0,05 se consideraron las pruebas de significación estadística.

Resultados

La Figura 1 muestra los niveles de prolactina en el plasma a través de un ciclo de 24 h en el control de sí y en sí separados de sus camadas durante 48 h. Analizados como un factor principal en un ANOVA, significativo momento del día se produjeron cambios (F = 35,4, p <0,00001), con ausencia de cualquier efecto significativo separación de la basura. Tanto en el control y separados hace, nivel plasmático de prolactina cambiado a lo largo del día mostrando dos valores máximos, en 0500 - 0900 h, y en 1700 - 2100 h, respectivamente (p <0,001, Figura 1].

La Figura 2 muestra de las 24 h cambios en la concentración plasmática de FSH en el control de sí y en sí separados de sus camadas durante 48 h. Analizados como un factor principal en un ANOVA, la hojarasca separación niveles de FSH aumentada en un 37% (F = 104,6, p <0,00001). Un efecto significativo de la hora del día y de una interacción significativa "la hora del día x hojarasca separación" se encontraron (F = 41,1 y 23,3, p <0,00001, respectivamente), es decir, un único máximo en la primera mitad del período de la luz Se observó en los controles mientras que dos valores máximos, en 0500 - 0900 h, y en 1700 - 2100 h, respectivamente, fueron encontrados después de la separación de hojarasca.

La Figura 3 muestra de las 24 h los cambios en las concentraciones plasmáticas de LH. Un efecto significativo de la separación de la basura y la hora del día era evidente (F = 16,1, p <0,0001 y F = 2,51, p <0,03, ANOVA). La basura separación traído un pequeño aunque significativo aumento del 16% en el promedio de los valores circulantes de LH. Como demuestra la interacción significativa "la hora del día x hojarasca separación" que se encuentra (F = 29,4, p <0,00001), la hojarasca de separación de plasma LH perturbado el ritmo de desplazamiento de su fase de máximo 12 h, de las 1300 h en los controles de 0100 H en las madres separadas (Figura 3].

Discusión

Las preguntas planteadas en la Introducción pueden ser ahora respondidas. En primer lugar, nuestros resultados indican que los patrones de las 24 h de plasma de FSH y LH, pero no de prolactina, cambiado significativamente en la enfermería después de conejos separación de la basura durante 48 h. En segundo lugar, la basura perturbado separación de las 24 h ritmicidad de plasma de la concentración de FSH y LH y causó un aumento moderado en su concentración (como cuando se evaluó la media valores de 24 h). Anteriores estudios en conejos demostraron que la hojarasca de separación durante cortos períodos de tiempo aumentó la receptividad sexual y la fecundidad de la tes [4 - 9]. Por lo tanto, los cambios en las gonadotropinas informó de este documento puede ser un reflejo de los mismos mecanismos implicados en la masiva liberación de la hormona liberadora de gonadotropina (GnRH), LH y FSH desencadenado en el apareamiento o la inseminación artificial en la hojarasca de las madres separadas.

El conejo presenta una forma poco frecuente de la atención de la maternidad, con una sola y muy breve visita (3-5 minutos) todos los días a la enfermera [20]. Esta visita diaria de la enfermería de la tes es muy regular, con algunos individuos que muestra el día a día de la variabilidad de sólo unos pocos minutos. Estrógenos, andrógenos, progesterona y prolactina fomentar la aparición de este comportamiento en sí [21] mientras que su mantenimiento depende de los estímulos de la basura (es decir, la maternidad es la respuesta modificados o suprimidos por la prevención de la madre / los jóvenes en contacto con el parto o en los primeros meses de lactancia) . A partir de una serie de estudios sobre la distribución de los estrógenos, andrógenos y los receptores de la prolactina, la cuantificación de la expresión de los genes inmediato-temprano, y las lesiones de las estructuras del sistema olfativo, se llegó a la conclusión de que los conejos se basan en el mismo extrahormonal hormonales y factores que estimulan la maternidad En el comportamiento de otros mamíferos a excepción de la muy peculiar patrón circadiano de enfermería que es único para conejos [22 - 24].

Desde las primeras observaciones por McNeilly y Friesen [25] se sabe que los niveles en sangre posparto de prolactina son similares en madres en periodo de lactancia y posparto nonlactating mujeres. Esa observación fue confirmada en el presente estudio en el que los niveles plasmáticos de prolactina, medido en seis intervalos de tiempo en un ciclo de 24 h (el más cercano al momento se encontraba en la enfermería 05:00 h), son esencialmente similares en el control y la basura separada hace . En mujeres lactantes, la succión evocó un aumento inmediato (3 - a 5 veces) en los niveles circulantes de prolactina, un efecto que simula por la estimulación táctil de las tetas [25]. Asimismo, en liebres, aumento significativo de los niveles de prolactina durante la lactancia, sólo después de la succión estímulos [26]. Cabe señalar que, en contraste con los conejos, los niveles plasmáticos de prolactina son significativamente modificado por la enfermería en la mayoría de las especies, el amamantamiento es un estímulo eficaz para enmascarar la señal de las 24 h liberación de prolactina [27, 28]. Esto no ocurre en los tes, los cambios circadiano de los niveles plasmáticos de prolactina restantes esencialmente sin cambios después de la separación de hojarasca (presumiblemente debido a la muy corto período de enfermería). Esto sugiere que el circadiano de la secreción de prolactina y de la respuesta de prolactina a la estimulación física de los pezones son independientes de los fenómenos que se producen en todo el período de lactancia.

Informes anteriores con sólo utilizar procedimientos de muestreo [8] indicaba que la basura separación tes través de la disminución de los niveles de prolactina y no afectó a la FSH. Las discrepancias son, posiblemente, depende de la frecuencia de muestreo y la hora del día de examen. En conjunto, los resultados subrayan la importancia de realizar estudios de las 24 h de tener una visión más precisa de los cambios hormonales.

La basura perturbado separación de las 24 h ritmicidad de las dos FSH y LH significativamente. McNeilly [29] sugiere que una reducción de los niveles plasmáticos de LH encontrados durante el período de luz podría ser enganchado a un aumento del patrón pulsátil de la liberación de GnRH hipotalámico. En el presente estudio, el no expuesto, la basura después de la separación, un inverso de 24 h patrón de la liberación de LH con los valores más bajos durante la fase de luz diaria fotoperíodo. Presumiblemente, el perturbado de 24 h ritmicidad de LH (y FSH) están vinculados a la mayor de apareamiento o la inseminación artificial inducida por la liberación de LH y FSH se encuentran en ¿separados de sus camadas.

En resumen, el presente estudio demuestra la existencia de las 24 h variaciones en la prolactina circulante, los niveles de LH y FSH en la enfermería hace. La basura de separación durante cortos períodos de tiempo, un procedimiento efectivo para estimular la actividad ovárica previa a la inseminación artificial, influye notablemente la secretora patrones de la FSH y LH, un hallazgo que puede estar relacionado con el mayor reflejo de la respuesta ovulatoria a apareamiento o la inseminación artificial se observó en Separados de sus cachorros. El valor específico de este estudio, en términos de aumentar la eficiencia de la cría deben ser explorados más a fondo.