La prevalencia de virus GB tipo C en las zonas urbanas de los estadounidenses infectados con el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1

En 1995, varios grupos de forma independiente comunicó el descubrimiento de dos nuevos virus, que se denominó virus GB tipo C (GBV-C) y el virus de la hepatitis G, respectivamente (en revisión [1]]. Posteriormente, estos virus se encontraron dos cepas de un nuevo virus de ARN que pertenecen a la familia Flaviviridae. GBV-C (la designación utilizada en este trabajo) es alejadas a los virus de la hepatitis C (VHC) con el que comparte alrededor del 30% de homología de aminoácidos. Si bien el VHC repeticiones principalmente en hepatocitos, el GBV-C se replican en ambos-T (CD4 ⁺ y CD8 ⁺⁾ y linfocitos B. GBV-C no se sabe que causan enfermedades en los seres humanos, pero puede establecer una infección crónica en la que el virus puede estar presente en la sangre. Después de años de la infección, las personas infectadas espontáneamente claro GBV-C [1], aunque las razones de este fenómeno no se conocen. En la mayoría de los casos, la liquidación de GBV-C se asocia con la seroconversión a la cubierta del virus glicoproteína E2. Paradójicamente, la viremia puede persistir a pesar de la presencia de anticuerpos anti-E2, y la limpieza pueden ocurrir en ausencia de seroconversión. GBV-C puede ser transmitida a través de varias vías, incluyendo el contacto sexual, la exposición a sangre contaminada y la transmisión vertical. Hasta la fecha, la epidemiología de GBV-C es no del todo comprendidas.

De interés, la infección por GBV-C parece alterar el curso de virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) la infección. Tras un primer informe en 1998 [2], varios estudios han demostrado que las personas, que están co-infectadas con el GBV-Cy el VIH-1, un bajo nivel de viremia por VIH-1 y superiores de células CD4 ⁺ T cuenta que las personas infectadas con VIH-1 por sí sola [3 - 8]. Sin embargo, otros estudios no han apoyado esta asociación [9 - 13]. Un informe reciente no ha encontrado pruebas de que el GBV-C activa la co-infección mejora de la supervivencia de 12 a 18 meses después de la seroconversión del VIH-1 [6]. Las tasas de supervivencia en las personas con la persistencia de viremia GBV-C, sin embargo, una proporción significativamente mayor de 5 a 6 años después de la infección por VIH-1.

GBV-C se sabe que la prevalencia es mucho más alta en el VIH-1 seropositivos (> 75%) [3, 5, 6, 13], en comparación con los donantes de sangre sanos (10-20%) [14]. En la mayoría de los casos, esta observación se basa en la evaluación de los grupos de pacientes compuesta principalmente de los hombres, que tienen sexo con hombres (HSH). La epidemiología de la GBV-C entre el VIH-1 seropositivos, residentes de las propias ciudades, cuyos factores de riesgo, la etnia y el género son distintos, no se conoce. En el presente estudio se evaluaron la prevalencia de la infección por GBV-C en una población que consiste principalmente de los infectados por el VIH, urbana afro-americanos.

La población de estudio consistió de 353 infectadas por VIH-1 con regularidad los pacientes que asistieron a un gran urbana clínica de VIH-1. Los pacientes fueron reclutados en un período de 3 meses entre febrero y abril de 2004. El estudio fue aprobado por la junta de revisión institucional de Saint Michael's Medical Center y el consentimiento informado se obtuvo de todos los participantes antes de la recogida de muestras. Se obtuvieron muestras de sangre para análisis de GBV-C ARN y de los anticuerpos anti-E2, y para la medición de VIH-1 en plasma de los niveles de RNA, CD4 ⁺ T-células y serología para VHC. El tratamiento fue independiente, determinado por el médico.

Estudios de los niveles de ARN del VIH, anticuerpos contra el VIH, VHC y anticuerpos fueron realizados por los laboratorios comerciales.

ARN total fue extraído a partir de 100 μ l de suero utilizando un RNAeasy Mini Kit (Qiagen, Valencia, CA). Veinte y cinco por ciento de los aislados de ARN se utiliza para la transcripción reversa (RT) y la primera ronda de PCR. RT-PCR se realizó en un solo tubo utilizando el AccessQuick RT-PCR System (Promega, Madison, WI). Tanto de primera y segunda ronda de PCR se realizó utilizando hibridación de los primers que a 5 'no traducido regiones de un infecciosas GBV-C clon (GenBank adhesión no. AF121950, nt 54 a 389). Primers para la primera ronda de RT-PCR se GBVF1 5'-CCGACGCCTATCTAAGTA GACGC y GBVR1 5'-TCAACTCGCCGGATAAACCTATTGG. Primers para la segunda ronda de PCR se GBVF2 5'-GTGACAGGGTTGGTAGG y GBVR2 5'-GACATTGAAGGGCGACGTGG. Productos de PCR se detectó un 1,5% en geles de agarosa al 0,5 μ g / ml de bromuro de etidio. La banda espera tamaños son los 336 y 231 pb para la primera y segunda ronda de PCR, respectivamente. Conocido GBV-C positivo en suero (generosamente proporcionado por el doctor J. Stapleton, de la Universidad de Iowa, Iowa City, IA) y negativos (solución salina) los controles se incluyeron en cada ensayo. Las muestras arrojando resultados fueron ambiguos PCR volver a prueba utilizando ARN recién extraídos del original sueros. Una reacción se consideró positiva si bien la primera o segunda ronda de PCR producido una banda del tamaño esperado. El ensayo fue validada utilizando in vitro transcritas GBV-C ARN junto con positivas y negativas de muestras de control.

Los anticuerpos contra el GBV-C sobre glicoproteína E2 se detectaron utilizando el μ Plate anti-HGenv prueba de ELISA (Roche Diagnostics, Indianapolis, IN) de acuerdo con el protocolo del fabricante, que se resume a continuación. Una dilución de 1:20 de cada muestra de suero se añadió a una solución que contenga incubación de los vehículos pesados-E2 antígeno determinado, con biotina de anticuerpos anti-E2. Esta solución se añade a un streptavidina revestida de microplaca. Después de la placa se lavó una vez con la solución de lavado, POD-etiquetados, anti-Fc γ anticuerpos humanos fueron agregados a la placa, seguida de la solución de sustrato ABTS ^®. Se dio lectura de absorbancia a 405 nm. Una muestra fue considerada positiva si la A ≥ ₄₀₅ de la línea de corte el valor calculado de acuerdo con el protocolo del fabricante (0,2 veces la suma de los controles positivos y negativos). Las muestras son de + / -15% del valor de corte se repitieron utilizando sueros recién diluido.

Un chi-cuadrado o la prueba exacta de Fisher se utilizó para analizar las variables categóricas. El grupo de medios se compararon por cualquiera de la prueba t de Student, Mann-Whitney U test o prueba de Wilcoxon rango suma. Valores de p <0,05 se consideraron para indicar significación estadística y todos los valores de p son dos caras.

De los 353 sujetos estudiados, 208 (59%) eran hombres y 145 (41%) eran mujeres. La media de edad dentro de la cohorte fue de 46,4 años, y una media de CD4 ⁺ de células T fue 416 células / mm ^3. El plasma de cada paciente se realizarán las pruebas de la presencia de ARN del GBV-C, y la lucha contra la glicoproteína E2 anticuerpos. ARN del GBV-C se detectó en el 23,2% (82/353) de los sujetos. Entre esas pruebas positivas para el GBV-C ARN, 13 (16%) fueron también resultaron positivos para los anticuerpos anti-E2. Dentro de la población de estudio, el 32,3% (114/353) positivo en la prueba de anticuerpos anti-E2 solamente, mientras que el resto de temas (157/353) resultó negativo para ambos GBV-C ARN y de los anticuerpos anti-E2. En general, el 56% de la población estudiada tenía pruebas de que el GBV-C exposición, que se define como un resultado positivo, ya sea para el GBV-C ARN o anticuerpos anti-E2.

Entre los temas de estudio, el principal del VIH-1 en los factores de riesgo son el uso de drogas intravenosas (UDI) (53,8%) y el contacto heterosexual con una persona que utiliza drogas por vía intravenosa (32,6%) (Tabla 1]. La mayoría de la población inscrita (71,4%) fue afro-americana. No hubo diferencias significativas en el GBV-C entre la condición de sexo, la raza o el VIH-1, factor de riesgo (Tabla 2].

Aunque GBV-C se piensa que es transmitida por rutas similares como el VHC, la prevalencia de anticuerpos del VHC no era fuertemente asociados con la exposición GBV-C (Tabla 3]. Un total de 163 sujetos fueron positivos para anticuerpos contra el VHC. Entre estos, el 61% (99/163) también fueron positivos para cualquiera de viremia GBV-C, o de anticuerpos anti-E2, mientras que el 51% (97/190) de los anticuerpos del VHC negativo de la población había pruebas de que el GBV-C exposición.

A pesar de que este estudio representa un análisis transversal, se evaluó la relación entre la infección por GBV-C, y la condición de VIH-1 viremia o CD4 ⁺ T cell count. GBV-C, la exposición se asoció con un mayor porcentaje de pacientes con CD4 de células T ^+> 350 células / mm ³ (p <0,05, Tabla 4]. Además, el 46,3% de los pacientes con viremia GBV-C ha plasma HIV-1 RNA niveles <500 copias / ml, en comparación con el 36,9% de los pacientes que resultó negativo para el GBV-C ARN y de los anticuerpos anti-E2. Esta tendencia, en tanto que sugieren un efecto del GBV-C en la co-infección VIH-1, no fue estadísticamente significativa. Sin embargo, un análisis por separado de los 13 pacientes que dio positivo en la prueba para ambos GBV-C ARN y de los anticuerpos anti-E2 reveló una asociación significativa entre la infección por GBV-C, y la baja de plasma HIV-1 RNA (p <0,05, Tabla 5]. En general, para toda la cohorte, el GBV-C estatuto no tuvo ningún efecto sobre la media del plasma VIH-1 RNA o de la media de los niveles de CD4 ⁺ T-cell count.

Este informe es el primero en describir la prevalencia de GBV-C en un centro de la ciudad compuesta fundamentalmente de la población infectadas por VIH-1 de los afroamericanos. Estudios anteriores, que se centró en el VIH-seropositivos varones homosexuales, encontró pruebas de antes o actual de la infección por GBV-C en el 74 a 85% de los sujetos [3, 5, 6, 13]. En contraste, sólo el 56% de la población estudiada aquí positivo en la prueba del ARN del GBV-C, y / o anticuerpos anti-E2. El análisis de VIH-1, los factores de riesgo no mostraron una correlación significativa entre específicos comportamientos de alto riesgo para el VIH-1 y el GBV-C exposición.

Nuestros resultados comprenden datos de la cohorte más grande estudiado hasta la fecha. Dentro de la población estudiada, se observó una tasa de 61% de la exposición GBV-C entre 163 pacientes VHC positivos de anticuerpos; una suma no muy diferente a la de los anticuerpos del VHC negativo pacientes (51%). En conjunto con los resultados publicados, estos datos indican que el GBV-C puede ser transmitida de manera más eficiente por el contacto homosexual masculino que por tanto el uso de drogas intravenosas o el contacto heterosexual. Alternativamente, la infección con el GBV-C puede haber ocurrido a una tasa más elevada en nuestra población, pero cualquiera de viremia GBV-C, o de anticuerpos anti-E2 respuestas pueden haber disminuido con el tiempo en algunos pacientes. Previa a la exposición para el GBV-C puede tener prestados los individuos dentro de la población inmune a la infección secundaria con este flavivirus. Dentro de esta cohorte, también estudió una gran población de mujeres infectadas por el VIH (n = 145) y se encontró una tasa similar de la exposición GBV-C (55%) a la que se encuentra en los hombres (57%).

Aunque el efecto del GBV-C en la infección por VIH-1 sigue siendo controvertido, la mayoría de los estudios han mostrado superiores de células CD4 ⁺ y la disminución del VIH-1 en la carga viral en el GBV-C viremic pacientes. Nuestro estudio sugiere un efecto similar entre una población con características incluyendo la etnicidad, el género y la transmisión de los perfiles que los que se informó anteriormente. En nuestra cohorte, el 77% de los pacientes que dio positivo en la prueba para ambos GBV-C ARN y de los anticuerpos anti-E2 ha plasma HIV-1 RNA niveles <500 copias / ml. Si bien estos datos representan un pequeño número de pacientes, el porcentaje baja con el VIH-1, carga viral fue estadísticamente superior en estos pacientes en comparación con los de los otros grupos. La coexistencia de viremia GBV-C, y de anticuerpos anti-E2 puede ser un marcador de largo plazo de la infección por GBV-C, que recientemente se ha demostrado que se correlaciona con un mejor resultado en infectadas por VIH-1 individuos [6].

Nuestro estudio estaba limitado en varios aspectos, entre ellos la falta de seguimiento longitudinal. Además, no hemos podido recopilar datos suficientes sobre la duración de la infección por VIH-1 y el posible impacto de la terapia antirretroviral de estos pacientes. La última restricción puede compensarse con el hecho de que casi todos los pacientes infectados con el VIH en esta gran cohorte recibieron terapia antirretroviral en virtud de un nivel relativamente coherente practica dentro de un único entorno clínico.

Más estudios longitudinales será necesario el VIH-1 en pacientes infectados de aclarar los posibles efectos de GBV-C co-infección. Nuestros datos apoyan la hipótesis de que el GBV-C viremic pacientes con VIH-1 responder mejor a la terapia, que ha sido sugerido por otro estudio [15]. Esta posibilidad tiene que ser probado prospectivamente. Nuestros datos también sugieren que los comportamientos asociados con la transmisión de VIH-1 en el centro de la ciudad están menos relacionados con el GBV-C, la exposición que en otros entornos de alto riesgo.