Filaria Journal, 2005; 4: 3-3 (más artículos en esta revista)

El subcutánea filarial movimientos de las larvas infectantes se vean afectados en vacunados en comparación con los hosts infectados primaria hosts

BioMed Central
Simon A Babayan (s.babayan @ ed.ac.uk) [1], Tarik Attout (attout@mnhn.fr) [1], Phat N Vuong (none@disclosed.xx) [3], Laetitia Le Goff (la . Legoff@wanadoo.fr) [1], Jean-Charles Gantier (jc.gantier @ cep.u-psd.fr) [4], Odile Bain (bain@mnhn.fr) [1]
[1] Parasitologie Comparée et Modèles Expérimentaux, Muséum National d'Histoire Naturelle, Paris, Francia
[2] Institutos de la Evolución, Inmunología e Infecciones de Investigación de la Universidad de Edimburgo, Edimburgo, Reino Unido
[3] Unité d'Anatomie et de Cytologie pathologiques, Hôpital St Michel, Paris, Francia
[4] Laboratoire de Parasitologie, Faculté de Pharmacie, Chatenay-Malabry, Francia

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Resumen

Nuestro objetivo en este estudio es observar los movimientos de las larvas infectantes de filarial tras la inoculación en el mamífero hospedador, y para evaluar el efecto de la vacuna en la migración de larvas, in situ. Aquí presentamos las grabaciones de las larvas avanzan a través de los tejidos subcutáneos y de los ganglios linfáticos inguinal primaria ratones infectados o vacunados. Se utilizó la filaria Litomosoides sigmodontis en ratones BALB / c que fueron necropsiados 6 horas después de la inoculación reto de 200 larvas. Tejido subcutáneo secciones fueron tomadas del sitio de la inoculación y larvas fueron filmadas con el fin de cuantificar sus movimientos. Nuestro análisis mostró que las larvas subcutáneas eran menos móviles en los ratones vacunados que en la primaria de los ratones infectados y tenían más leucocitos adjunto a la cutícula. Proponemos que esta reducción de la motilidad puede resultar en el fracaso de la mayoría de las larvas de eludir la reacción inflamatoria, con lo que un posible mecanismo involucrado en los principios de la protección inducida por la vacuna.

Apreciación

La protección efectiva inducidos por la vacunación con irradiado larvas se ha evaluado en todos los sistemas estudiados filarial [1 - 3]. Estudios previos han demostrado también que una característica de la respuesta inmune generada por las vacunas es irradiado larvas de una fuerte polarización Th2 [4 - 8]. Con el modelo Litomosoides sigmodontis en ratones [9], la protección se ha demostrado que se produzca en las primeras 48 horas después de la inoculación, y que la muerte de las larvas tiene lugar en el tejido subcutáneo como en la primaria de los ratones infectados [10]. Sin embargo, mientras que sólo los neutrófilos infiltran en el tejido este primaria ratones infectados, los eosinófilos también están presentes en los ratones vacunados, y en conjunto con las células B para la cuenta de protección [11]. En ambos primaria ratones vacunados y los infectados, las larvas que sobreviven son las que penetran en los vasos linfáticos [11 - 14].

Procesos inflamatorios, unidas o no con el sesgo de Th2, afectan a los celulares y extracelulares de la composición del tejido subcutáneo, por lo tanto, la modificación de sus propiedades físicas [15 - 21]. Por lo tanto, parece pertinente para investigar los efectos de la vacunación temprana, pero en esta fase decisiva de la migración de las larvas, más precisamente, en la movilidad de las larvas que pasa por los tejidos conectivos de los ratones. De hecho, filarias, al igual que sus antepasados de vida libre, con una poderosa musculatura y órganos sensoriales consistentes en la cabeza y amphids papilas que permiten autónomas y los movimientos direccionales. En dos no filarial nematodos parásitos, la motilidad se ha estudiado en el ingenuo y inmunizados anfitriones, y una reducción evaluaron [22, 23].

El análisis de la mecánica de la actividad filarial nematodes en tejidos subcutáneos en el inicio de la infección requiere un protocolo adaptado.

L. sigmodontis larvas se obtuvieron a lo descrito previamente [24]. Seis semanas de edad, ratones BALB / c, de Charles River, Cléon, Francia, fueron vacunados con tres inoculaciones de las larvas infectantes irradiado a lo descrito previamente [11]. Los ratones fueron retados con 200 larvas (L3) inoculados por vía subcutánea en la región lumbar derecha. Todos los experimentos se ajustaba a los procedimientos y el Ministerio francés de Agricultura reglamentos de la experimentación con animales (1987).

Seis horas después de la inoculación desafío, los ratones fueron sacrificados, su piel separados de los animales y la cara interna hasta colocarse en una disección bordo. El inguinal ilíaca y los ganglios linfáticos se muestra a continuación, colocado entre un portaobjetos de microscopio y cubierta antideslizante, ligeramente aplastado luego observó bajo el microscopio.

Un total de diez ~ 50 μ m de espesor rebanadas de tejido subcutáneo se tomaron de la zona donde los gusanos fueron inoculadas con una hoja de afeitar, progresivamente, en espiral fuera de dicha zona. Las secciones fueron montadas para su examen bajo el microscopio, en una gota de RPMI 1640 (Fig. 1]. Las larvas que se encuentran en el borde de la muestra subcutánea o cortar por la hoja de afeitar no se incluyeron en el estudio. Cada ratón se estudió durante no más de una hora. Los preparativos que figuran en vivo gusanos fueron registrados digitalmente directamente con el microscopio, con Adobe Premiere ® 5,0 a 25 fotogramas por segundo. Tres aumentos se utilizaron: × 10, y × 25 × 100. Las grabaciones se prolongaron durante 30 segundos para cada movimiento y de la magnificación de los gusanos evaluados durante ese período con los siguientes criterios: tipo de movimientos (ondulado o no coordinados), la progresión hacia adelante o hacia atrás, la velocidad, las oscilaciones de la cabeza. El no paramétrico de Mann & Whitney U test fue usado para comparar los grupos.

Cinco primaria de los ratones infectados y 5 ratones vacunados fueron necropsiados 6 horas después de la tarea. En el microscopio de disección, la zona inoculada se identifican fácilmente porque el tejido subcutáneo tiene un aspecto gelatinoso, hinchada por edema y estaba densamente infiltrado por los leucocitos en particular en los ratones vacunados. Un total de 2000 se inocularon L3, de los cuales el 1,95% fueron identificados y filmados: 39 en el tejido subcutáneo y 4 en el ganglio linfático inguinal. Esta baja proporción de recuperación indica que las larvas se encontraban fuera de la zona de estudio. Las larvas extraída de los ganglios linfáticos son todos de una primaria de la infección del ratón. Ellos a veces onduladas y progresó rápidamente, aunque al parecer con la mala coordinación (archivo adicional 1); sin embargo, una buena coordinación se obtuvo cuando se ejerció presión sobre la hoja de la cubierta.

Las observaciones de larvas en los tejidos subcutáneos se informó de acuerdo con los siguientes criterios, que fácilmente discriminar a los que están en primaria infectados de los vacunados en ratones: la intensidad de los movimientos, las ondulaciones y la progresión del gusano de la cabeza, y adjunta a la célula huésped o Contra la larva. El cuadro 1 da detalles acerca de las larvas filmado y el número de larvas de cada categoría.

En ambos grupos de ratones, el tejido subcutáneo preparación en la que había larvas onduladas como un gel de consistencia. En primaria de los ratones infectados por larvas de la cabeza osciló de un lado a otro en un estimado de ángulo de 20 ° del eje del cuerpo. El resto del cuerpo ondulado: bien coordinado de las curvas en forma de S trasladado de la cabeza a la cola, cuando las larvas avanzado, y de la cola a la cabeza cuando las larvas se trasladaron hacia atrás (archivo adicional 2]. Las larvas fueron en general vigorosos, a menudo progresan con interés en los tejidos subcutáneos como observó en el 74% de los gusanos de estudio. En este entorno, las larvas llevado adelante por ellos mismos aprovechándose de las partes más densas de los tejidos (archivo adicional 2]. En primaria los ratones infectados sus movimientos alcanzó 2,87 en una escala de 5, que corresponde a los movimientos rápidos (Fig. 2]. Hemos logrado medir la distancia algunas larvas cubiertos: 8 mm en 30 segundos, lo que corresponde a 1,5 cm por minuto.

En los ratones vacunados, los movimientos de las larvas se redujeron en comparación con lo que se había observado en la infección (promedio de 2 sobre 5, adicional archivo 3]. Un conveniente medida de los movimientos de las larvas es la amplitud de la cabeza de lado a lado los movimientos (archivo adicional 4]. Sólo el 8% (1 de los 13 filariae) de las larvas trasladó su cabeza hacia delante en ratones vacunados mientras que el 73% (11 de 15 filariae) hizo en la enseñanza primaria-ratones infectados. Además, se observó con mayor frecuencia las células adjunta a la cutícula de las larvas, en el tercio anterior del cuerpo (3 de los 17 gusanos frente a 1 de cada 10, los archivos adicionales 3 y 5]. Curiosamente, hemos observado que estos granulomas forma primero en el frente de la tercera parte de gusano (archivo adicional 5].

En conclusión, este estudio preliminar muestra que la vacunación por los anfitriones, los movimientos de los gusanos son significativamente perjudicada en comparación con la primaria de la infección y que acoge a más células de acompañar su cutícula, lo que contribuye a su muerte. Por lo tanto, sugiere que este sería impedir o retrasar la entrada en los vasos linfáticos a través de los cuales evadir la reacción inflamatoria y migrar a la cavidad pleural.

Conflicto de intereses

Los autores declaran que no tienen intereses en conflicto.

Contribuciones de los autores

SAB fue responsable de llevar a cabo los experimentos de laboratorio descritos en el manuscrito, incluida la preparación del ratón, disecciones, procesamiento de la muestra y el registro escrito y el manuscrito. TA y el PNV llevó a cabo el estudio histológico. LL registrada la presentan como secuencias de vídeo y archivos adicionales JCG siempre el microscopio, de hardware y software de su experiencia y de los preparativos para la filmación. OB es el investigador principal en el proyecto, y fue responsable de la obtención de subvenciones de apoyo para el proyecto, para el diseño experimental, el análisis de datos y la preparación del manuscrito.

Agradecimientos

Este estudio fue apoyado por la Comunidad Europea de subvención ICA4-CT-1999-10002.

Material suplementario
Archivo Adicional 1
Larva infectiva extraído de un ganglio linfático aplastado en RPMI medios de comunicación. The larva's movements are rapid and uncoordinated, as it has no grip on its immediate environment. Muchas células (en su mayoría linfocitos) están presentes en los medios de comunicación de todo el gusano. Magnificación: × 100.
Archivo Adicional 2
La larva infectiva en el tejido subcutáneo tiene una bien coordinada, de gran amplitud de movimiento en forma de S en la que se apoya en el tejido circundante para avanzar hacia adelante. La estructura fibrosa del tejido subcutáneo es visible, y muchos se infiltraron en las células (principalmente neutrófilos). Magnificación: × 200
Archivo Adicional 3
Larva de un ratón vacunado: ha reducido los movimientos con las oscilaciones de baja amplitud y una lenta progresión hacia adelante. El tejido tiene un aspecto denso, con muchas células infiltrado algunos de los cuales se puede ver la derecha contra la cutícula del gusano. El final de la secuencia se muestra la ausencia de la cabeza de lado a lado oscilaciones. Magnificación: × 100 y 500 ×.
Archivo Adicional 4
Registro detallado de la cabeza de una larva infectiva de un ratón vacunado. La cabeza es sólo ligeramente oscilante de lado a lado, y es atrapado en un denso gel-como la estructura con pocos elementos discretos. Esta larva ciertamente no han llegado a un buque linfático. Magnificación: × 500.
Archivo Adicional 5
Ejemplo de cómo las células y estructuras fibrosas subcutánea atribuyen a la cutícula de las larvas infectantes. En esta preparación, la larva fue liberado casi en la disección de los medios de comunicación, pero sigue siendo atribuida por formaciones granulomatosas en dos puntos, cerca de la cabeza y en todo el último tercio del cuerpo. Sus movimientos son rápidos, casi frenético. Magnificación: × 200.