Immunity & ageing : I & A, 2005; 2: 10-10 (más artículos en esta revista)

Respuesta inmunitaria a los polisacáridos de neumococo 4 y 14 personas mayores y en los adultos jóvenes. I concentraciones de anticuerpos, y la avidez de actividad funcional

BioMed Central
Kris Kolibab (kkolibab@mco.edu) [1], S Louise Smithson (smithson@mco.edu) [1], Anne K Shriner (ashriner@mco.edu) [1], Sadik Khuder (skhuder@mco.edu) [1], Sandra Romero-Steiner (sandra.steiner @ cdc.hhs.gov) [2], de George H Carlone (george.carlone @ cdc.hhs.gov) [2], MA Julie Westerink (mwesterink@mco.edu ) [1]
[1] Departamento de Medicina, Colegio Médico de Ohio, Toledo, Ohio, EE.UU.
[2] Respiratory Diseases Branch, Division of Bacterial and Mycotic Diseases, National Centers for Infectious Diseases, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA 30333, USA

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Resumen

Streptococcus pneumoniae es un patógeno grave en todo el mundo y el centro de atención de numerosos proyectos de desarrollo de la vacuna. En la actualidad, la más aceptada sustituto marcador para evaluar la eficacia de una vacuna es utilizar ELISA. Medición de la concentración de anticuerpos por ELISA sin reducción de los anticuerpos de reacción cruzada causas una sobrestimación de la concentración de anticuerpos y, por lo tanto, la protección, esto es más notable en las personas de edad, un grupo en situación de riesgo para esta infección. Se comparó la respuesta inmune a la neumocócica polisacáridos (EPA) 4 y 14 de los 20 jóvenes y 20 adultos de edad avanzada. Antes y después de la vacunación y de las concentraciones de anticuerpos IgG de avidez de anticuerpos contra PPS4 y PPS14 se mide a través de dos diferentes inmunoadsorbentes ligados a enzimas (ELISA), la absorción de los protocolos. Todos los sueros fueron pre-ya sea absorbido con polisacárida de la pared celular (CPA), o CPS y serotipo 22F de polisacáridos.

Antes y después de la vacunación de las concentraciones de anticuerpos IgG para el serotipo 4, pero no 14, se redujo significativamente con la absorción de los gastos adicionales con serotipo 22F de polisacáridos en ambos grupos de edad. Jóvenes y ancianos demostraron un aumento significativo de la validez de la vacunación hasta después de la concentración de anticuerpos, ya sea utilizando el método de absorción; opsonophagocytic y los títulos de anticuerpos en respuesta a ambos PPS4 y PPS14. Los coeficientes de correlación entre los ensayos de ELISA y opsonophagocytic fueron mejorados por el aumento de la absorción con el serotipo 22F en respuesta al serotipo 4, pero no serotipo 14 en todos los grupos de edad. Opsonophagocytic los títulos de anticuerpos en un subgrupo de edad avanzada (> 77 años de edad) fueron significativamente más bajos que los opsonophagocytic concentraciones de anticuerpos en los adultos jóvenes.

Estos resultados sugieren la importancia de eliminar la cruz de reacción de anticuerpos por ELISA mediciones de la absorción de suero y de un deterioro relacionado con la edad en la respuesta de anticuerpos a los polisacáridos de neumococo.

Antecedentes

Streptococcus pneumoniae es un importante patógeno humano responsable de infecciones graves en todos los grupos de edad en todo el mundo. Las infecciones neumocócicas se estima que causa alrededor de 40000 muertes por año [1], y son una de las principales causas de muerte en los Estados Unidos [2]. La mayor incidencia de las infecciones neumocócicas tiene lugar en los extremos de edad, en los muy jóvenes y en los ancianos. La tasa de mortalidad de las enfermedades invasoras pneumoccoal aumenta con la edad y se estima en 20% en los 65 años de edad y el 40% en los 85 años de edad o más. Por otra parte, S. Pneumoniae, es la causa más común de neumonía adquirida en la comunidad entre las personas de edad [3], y la quinta causa de muerte en los 65 y más años [4, 5].

Neumocócica polisacárido capsular (EPA) es un importante factor de virulencia de S. Pneumoniae y reduce la fagocitosis en la acogida [6, 7]. La vacuna neumocócica autorizados en la actualidad consta de 23 serotipos de EPA purificado, que representan el 76-90% de las cepas que causan IPD [8, 9]. La EPA capsular vacuna se basa en la observación de que los anticuerpos contra la cápsula de protección contra la enfermedad por el aumento de complemento dependiente de la fagocitosis [6]. La vacunación antineumocócica se recomienda para todas las personas de 65 y más años en los Estados Unidos, sin embargo, indican estudios de la eficacia de la protección disminuyó entre esta población objetivo, a pesar de los niveles de protección de los anticuerpos anti-neumocóccica [10, 11]. Las causas subyacentes de la disminución de la eficacia de la vacuna mérito investigación.

Informes de la disminución de la eficacia de la vacuna en los ancianos pobres, bien puede reflejar la funcionalidad de la vacuna anti-EPA inducido anticuerpos específicos o de anticuerpos incompatibles mediciones. La protección se mide por análisis in vitro de opsonophagocytosis por anticuerpos anti-polisacárido y sirve como un marcador subrogado de protección clínica [12]. Sin embargo, el ensayo se opsonophagocytic mano de obra intensiva y difícil de realizar y por lo tanto poco práctica, la hora de analizar un gran número de muestras. Por lo tanto, los métodos alternos para la medición de las concentraciones de anticuerpos contra el neumococo, es decir, ELISA, se han desarrollado. Más práctico que opsonophagocytic ensayos, el polisacárido-medido las concentraciones de anticuerpos específicos por ELISA no están relacionados necesariamente con la actividad funcional de los anticuerpos. El desarrollo de un método de ELISA que refleje con precisión la actividad funcional de anticuerpos y puede servir como un marcador sustituto de la protección es de la mayor importancia.

El inmunoadsorbentes ligados a la enzima (ELISA) método utilizado para medir PPS-las concentraciones de anticuerpos específicos ha cambiado considerablemente a lo largo de los últimos 20 años. La presencia de la pared celular de polisacáridos (CPA), covalentemente ligada al tipo específico de polisacáridos, dirigido a la mala correlación entre la concentración de anticuerpos y la eficacia de la vacuna neumocócica [13, 14]. La toma de conciencia de que la medición de anticuerpos anti-CPS causado una sobreestimación de la lucha contra la concentración de anticuerpos EPA dio lugar a una modificación de la neumocócica ELISA procedimiento para incluir un paso de absorción, la eliminación de la pared celular de polisacáridos anticuerpos dirigidos [13, 15]. Estudios recientes han demostrado que la absorción adicional de sueros con CPS y serotipo 22F EPA aumenta significativamente la correlación entre la concentración de anticuerpos y la actividad en comparación con opsonophagocytic CPS absorción solas [16].

Anteriormente, un estudio realizado en adultos mayores demostraron una disminución significativa en la actividad opsonophagocytic en respuesta a PPS4 normal a pesar de las concentraciones de anticuerpos [17]. La disminución en la actividad funcional de anticuerpos aumenta con la edad y fue el serotipo específico. La respuesta inmune a PPS14, según lo determinado por la concentración de anticuerpos y de anticuerpos opsonophagocytic actividad, está bien conservada en las personas de edad. Sin embargo, en este estudio, una versión anterior de la EPA-ELISA confiando únicamente en la absorción de CPS se utilizó para determinar la concentración de anticuerpos. Por lo tanto, no específicos de reacción cruzada de anticuerpos podría haber sido responsable de la discrepancia entre la concentración de anticuerpos y la actividad opsonophagocytic a PPS4.

El objetivo de este estudio fue el de volver a evaluar la respuesta de los ancianos (> 65 años de edad) y los adultos PPS4 a PPS14 empleando la recientemente modificada PPS-ELISA específico. Hemos realizado el presente estudio para dilucidar la naturaleza de la respuesta inmune a los ancianos EPA, en un esfuerzo por definir correlatos de protección en el envejecimiento de la población. En caso de que las personas de edad respuesta contienen una proporción significativa de baja avidez, cruz anticuerpos que reaccionan como ya se sugirió [17] es de esperarse que la absorción con PPS 22F tendría un mayor impacto en la concentración de anticuerpos y la avidez de las mediciones en las personas de edad más jóvenes.

Resultados

Todos los voluntarios fueron examinados inmune competente basado en el historial médico completo de células sanguíneas, el total de los niveles de inmunoglobulinas y cuantitativa de células B y células T subconjunto estudios. No hubo diferencia cuantitativa en el número de las células B o CD4 + y CD8 + T en células de los jóvenes frente a adultos mayores participantes (Tabla 1].

Anticuerpos Anti-neumocócica Concentraciones

Anti-PPS4 y PPS14 Se determinaron las concentraciones de anticuerpos por ELISA de los dos métodos, ya sea con la absorción o CPS CPS + PPS22F. La media geométrica de las concentraciones de anticuerpos IgG (μ g / ml) y 95% IC se muestran en la Tabla 2.

En respuesta a PPS4 un aumento significativo de la validez de la vacunación hasta después de la concentración de anticuerpos se detectó por ambos métodos de ELISA en ambos grupos de edad (p gama 0,003 - 0,005). Cuando ambos métodos ELISA se compararon una reducción significativa en la concentración de anticuerpos se observó siguientes CPS + PPS22F absorción de los jóvenes voluntarios "antes y después de suero inmune (18,6%, p = 0,033 y 14%, p = 0,036, respectivamente) y las personas de edad de los voluntarios Pre-inmune (28,4, p = 0,008) pero no inmune después de los sueros (11,4%, p = 0,142). No hubo diferencias significativas en los niveles de anticuerpos detectados entre los jóvenes y las personas mayores en los voluntarios antes y después de la vacunación, ya sea usando sueros método de absorción, aunque los jóvenes pre-suero inmune tiende a demostrar inferior media geométrica de las concentraciones (GMC). Sin embargo, más personas mayores que jóvenes de manifiesto un doble o un mayor aumento de pre-post inmunización (83% frente a 50%).

En respuesta a PPS14, un similar aumento significativo en la validez de la vacunación hasta después de la concentración de anticuerpos se detectó en todos los grupos (p rango 0.001-0.006). Cuando ambos métodos ELISA fueron comparados no hubo diferencias significativas en las concentraciones de IgG en suero de los jóvenes utilizando cualquiera de los métodos. Sin embargo, en los ancianos la adición de absorción PPS22F redujo significativamente la concentración de IgG detectadas en post-(10,6%, p = 0,013) pero no antes de la inmunización de sueros (0,8%, p = 0,367). Hubo una tendencia hacia la disminución de las concentraciones de anticuerpos en el suero pre-inmune de los jóvenes en comparación con las personas de edad, aunque esto no fue significativo. El post-inmune anti-PPS14 concentraciones de anticuerpos no fueron también significativamente diferentes entre los grupos de jóvenes y de edad avanzada. Sin embargo, más personas mayores que jóvenes demostraron una o dos veces mayor aumento en la concentración de IgG en suero, el 90% y 55%, respectivamente.

Nuestro estudio fue diseñado para comparar la reacción inmune a la EPA en los adultos jóvenes (18 - 30 años) a los ancianos (> 65 años de edad). Sin embargo, varios estudios [17, 18] indican que el más antiguo de edad avanzada (> 77 años de edad) demuestran una disminución significativa en la respuesta inmune a la EPA. Por lo tanto, analizados los resultados obtenidos en un subgrupo de personas de edad> 77 años dentro de la población estudiada. En este pequeño subgrupo (n = 6) adicional de absorción con PPS22F dado lugar a un considerable descenso significativo, pero no en medir la concentración de anticuerpos en el 28% de pre-inmune y el 15,6% después de los sueros inmunes, en comparación con los adultos jóvenes. Un aumento significativo de la validez de la vacunación hasta después de la concentración de anticuerpos en respuesta a PPS4 sólo se encuentra cuando los sueros fueron absorbidos con CPS (p = 0,05) pero no cuando los sueros fueron absorbidos con CPS PPS22F + (p = 0,069). No hubo aumento significativo de la validez de hasta después de la vacunación los niveles de anticuerpo contra PPS14 para cualquiera de los métodos (p = 0,094 para ambos). Aunque, después de la vacunación anti-IgG PPS14 GMC de los jóvenes adultos del grupo no fue significativamente diferente de las personas de edad, es significativamente más alto que el sub-grupo de personas de edad> 77 años utilizando los dos métodos de absorción (p = 0,035 y p = 0,022). Hubo una reducción en la proporción de este subgrupo que demuestra un doble o un mayor aumento de los niveles de IgG pre-post inmunización, en respuesta a ambos PPS4 (29%) y PPS14 (43%) que en aquellos en que todas las personas mayores (50% y 55% respectivamente) y los jóvenes (83% y 90% respectivamente).

Isotipo de inmunoglobulina y la subclase

El isotipo de inmunoglobulina predominante expresado en la respuesta a ambas PPS4 y PPS14 constaba de IgG. A pesar de un aumento significativo de la validez de hasta después de la inmunización, el GMC de la EPA-IgM e IgA específicos de las concentraciones de anticuerpos en respuesta a los PPS no superior a un microgramo por mililitro en jóvenes o ancianos. Por otra parte, no hubo diferencias significativas en ninguno de los dos anticuerpos IgM o IgA en concentraciones de jóvenes versus ancianos. Adicional de absorción con PPS22F reducido tanto IgM e IgA en las concentraciones de jóvenes y ancianos por igual, pero no de manera significativa.

Como se muestra en el cuadro 3, la respuesta a IgG PPS4 y PPS14 estaba dominado por la subclase IgG2 en los adultos jóvenes y de edad avanzada como en el informe anterior [19, 20]. En respuesta a PPS4, el 67,5 a 80,5% del total de anticuerpos IgG consistió en medir la concentración de IgG2, sin diferencia significativa entre los jóvenes y las personas mayores o pre-hasta después de la inmunización. Del mismo modo, de la pre-y post-inmune PPS14 total de anticuerpos IgG específicos, 63,7 a 73% de la respuesta consistió en IgG2 con ninguna diferencia significativa entre los grupos de edad.

EPA-IgG1 anticuerpos específicos también fueron fácilmente detectables y aumentó considerablemente después de la vacunación en ambos grupos de edad. En general, los anticuerpos IgG1 representados 9,5 a 11,2% del total de anticuerpos IgG en respuesta a PPS4 y el 18,7 a 25,4% del total de anticuerpos IgG se mide en respuesta a PPS14. No hubo diferencias significativas en ninguno de los dos detectó anticuerpo IgG1 concentración o porcentaje de uso entre los jóvenes y los ancianos.

Adicional de absorción de los sueros con PPS22F no afecta ni antes o después de la inmunización IgG1 PPS4 o PPS14 concentraciones en ninguno de los dos grupos de edad o de la IgG2 respuesta a PPS14. Sin embargo, en respuesta a PPS4, absorción con PPS22F redujo significativamente antes y después de la vacunación en concentraciones IgG2 jóvenes y ancianos (17 a 27% con p = 0,019 a 0,025).

Actividad Opsonophagocytic

Opsonophagocytic actividad se mide en antes y después de la inmunización contra el neumococo de suero de los serotipos 4 y 14. La media geométrica de los títulos (GMT) y los intervalos se muestran en la Tabla 4.

En respuesta a los serotipos 4 y 14 tanto de los jóvenes como de edad avanzada y demostraron un aumento significativo de la validez de hasta después de la inmunización (p gama 0,0003-0,001). No hubo diferencia significativa entre los títulos opsonophagocytic en jóvenes y ancianos, ya sea para polisacáridos (p rango 0.203-0.754). Sin embargo, cuando el mayor subgrupo se analizó por separado hubo un aumento significativo en la actividad opsonophagocytic sólo en respuesta a serotipo 14 (p = 0,04) pero no en respuesta al serotipo 4 (p = 0,214). El puesto de vacunación para los títulos de la mayor de serotipo 4 subgrupo (35.92 GMT) y 14 (90,51) fueron significativamente inferiores a las de los donantes jóvenes (p = 0,03 y 0,02), todos los donantes de edad avanzada (p = 0,01 para ambos) y el grupo de jóvenes Personas mayores (p = 0,002, 0,001).

Antibody avidez de las mediciones

Avidez de los anticuerpos se determinó a través de tiocianato de sodio (NaSCN) en ambos métodos ELISA, tal como se describe. La media geométrica de las concentraciones (GMC, M NaSCN) y los intervalos se dan en la Tabla 5. La adición de PPS22F para el ensayo no cambió de forma significativa la avidez de las mediciones, antes y después de la inmunización, en jóvenes o personas mayores (p gama 0,053 - 0,715), excepto en los jóvenes anti-sueros PPS14 puesto de vacunación (p = 0,04). En respuesta a PPS4 no hubo diferencias significativas entre los jóvenes y las personas mayores en todos los grupos analizados (p gama 0,32 - 0,93). En respuesta a PPS14 una diferencia significativa se detectó entre los jóvenes y las personas de edad pre-sueros inmunes cuando absorbido con CPS sola (p = 0,03) y después de los sueros inmunes cuando absorbido con CPS y PPS22F (p = 0,03).

Anti-PPS4 anticuerpos demostraron un aumento significativo de la validez de avidez hasta después de la vacunación en personas mayores voluntarios por ambos métodos (p = 0,01, 0,003) pero no en los jóvenes (p = 0,147, 0,257). Young PPS14 anticuerpos anti-mostró un aumento significativo de la validez de hasta después de la vacunación cuando los sueros fueron absorbidos con CPS solo (p = 0,015) pero no CPS y PPS22F (p = 0,061). Avidez de las personas mayores PPS14 anticuerpos anti-antes y después de la inmunización fue muy diferente por ambos métodos (p = 0,007, 0,002).

En el subgrupo de personas de edad más antigua de lucha contra la PPS4, pero no anti-PPS14, anticuerpos, cuando se absorbe con CPS y 22F demostrado un aumento significativo de la validez de hasta después de la vacunación (p = 0.03). No hubo diferencias significativas entre las mediciones de avidez en este subgrupo en comparación con cualquiera de los jóvenes, todos los adultos mayores a los más jóvenes o ancianos.

Opsonophagocytic correlación entre la actividad de anticuerpos y las concentraciones de anticuerpos

Coeficientes de correlación de asociación (r valores) se determinaron entre log 2 niveles de anticuerpos IgG y log 2 opsonophagocytic títulos para PPS4 y PPS14 mediante la absorción de los sueros con CPS o CPS y PPS22F (Cuadro 6]. En respuesta a PPS4, el coeficiente de correlación aumentó siguientes CPS + PPS22F absorción en los adultos jóvenes desde un valor de 0,64 r (CPA absorción) a 0,81 (CPS + PPS22F absorción). Un incremento similar de 0,69 y 0,79 con CPS con CPS + PPS22F absorción se observó en las personas de edad. El subgrupo de ancianos> 77 años de edad mostró un coeficiente de correlación de 0,73 después de la absorción con CPS que el aumento a 0,87 después de la absorción con CPS y PPS22F. Así, todos los grupos de edad demostró una correlación significativa entre la concentración de anticuerpos y la respuesta de anticuerpos opsonophagocytic que la mejora adicional de absorción con CPS y PPS22F.

Además, todos los grupos de edad mostró una relativamente alta correlación entre la concentración de anticuerpos y la actividad funcional de anticuerpos en respuesta a PPS14. Adicional de absorción con PPS22F no mejoraron los coeficientes de correlación de asociación entre las concentraciones de anticuerpos IgG y opsonophagocytic títulos para PPS14. Todos los grupos de edad mostró una correlación significativa entre las concentraciones de anticuerpos y de anticuerpos opsonophagocytic actividad como en el informe anterior en adultos [16].

Opsonophagocytic correlación entre la actividad de anticuerpos y de anticuerpos avidez

También se determinó la asociación de los coeficientes de correlación (r valores) entre la concentración de NaSCN necesarios para reducir ELISA densidad óptica en el 50% y log 2 opsonophagocytic títulos para PPS4 y PPS14. En respuesta a PPS4, todos los grupos mostraron una relativamente pobre correlación entre la avidez y opsonophagocytic actividad (Cuadro 7], que mejoró ligeramente después de la absorción con CPS y PPS22F. En el subgrupo de ancianos> 77 años, la correlación de asociación era muy pobre, sin embargo el valor r mejorado notablemente desde 0,069 a 0,25 por absorción de los gastos adicionales con PPS22F.

En respuesta a PPS14, los coeficientes de correlación de asociación fueron mejores que los de respuesta a PPS4 (Cuadro 7]. La absorción de los gastos adicionales con PPS22F sin embargo, no afectan de manera significativa a los coeficientes de correlación de asociación.

Discusión

Las recientes mejoras en el método de ELISA utilizados para medir anti-polisacárido neumocócico anticuerpos específicos, con el fin de eliminar los anticuerpos no específicos, se han traducido en un aumento significativo de la correlación entre la concentración de anticuerpos y opsonophagocytic actividad [16]. A pesar de que esta metodología ha sido ampliamente evaluados en adultos sanos [16] el efecto de la absorción adicional de suero con PPS22F medidos en la respuesta de anticuerpos en los adultos de edad avanzada no se ha determinado. La presencia de la no serotipo específico, poco funcional anticuerpos puede, de hecho, explicar la discrepancia entre medido las concentraciones de anticuerpos y la actividad funcional de anticuerpos en las personas mayores.

Los resultados del presente estudio indican que tanto los adultos jóvenes y las personas de edad responden a la vacunación antineumocócica con un aumento significativo en EPA de la concentración de anticuerpos específicos, aunque el aumento de las veces la concentración de anticuerpos fue menor en los ancianos. Adicional de absorción con PPS22F dado lugar a una reducción significativa en la concentración de anticuerpos para PPS4 pero no afectó la concentración de anticuerpos para mediciones PPS14. Es probable que PPS14 no contiene antígenos de reacción cruzada o contaminantes, tal como se describe para otros polisacáridos neumocócica [16, 21, 22]. La disminución de medir los anticuerpos anti-PPS4 dado lugar a un aumento de la correlación entre la concentración de anticuerpos y la actividad de anticuerpos funcionales, en consonancia con los estudios anteriores [16]. A pesar de la disminución de los anticuerpos anti-PPS4 fue más pronunciada en la validez de los sueros inmunes, que no fue significativamente diferente entre los jóvenes y todos los adultos mayores y no afectó a veces de aumento de la concentración de anticuerpos post-vacunación. Los resultados de estudios anteriores [18, 23] Sin embargo, indican que una alteración en la respuesta inmune a la EPA se limita a la más antigua de ancianos. Aunque pequeño en número (n = 6), el análisis por separado de la tercera edad> 77 años de edad mostró una disminución de la importancia del aumento de pre-post, cuando los sueros se absorbió con PPS22F. Además de un menor número de voluntarios en este grupo de edad, mostró una doble o mayor aumento de la concentración de anticuerpos pre-puesto que cualquiera de los dos a los jóvenes o ancianos. Estos resultados sugieren que los estudios anteriores han demostrado que existe una sobreestimación de la concentración de anticuerpos y que esto puede ser particularmente crítico en la más antigua población de ancianos. La absorción de los gastos adicionales con PPS22F revelado así un posible deterioro en el cuantitativo a PPS4 respuesta de anticuerpos en el grupo de mayor edad.

Varios estudios han demostrado que la reducción o ausencia de anticuerpos funcionales actividad tenga relación directa con baja avidez de los anticuerpos y no necesariamente consecuencia de la baja concentración de anticuerpos [24, 25]. En concreto, se ha demostrado que después de los sueros de vacunación de personas mayores con baja correlación con la actividad opsonophagocytic baja avidez de IgG de anticuerpos [23]. Adicional de absorción con PPS22F, que sirve para eliminar los anticuerpos no específicos con baja avidez de suponer, en principio, debería dar lugar a una mayor avidez de medición. En respuesta a PPS4, la absorción de los sueros con CPS y PPS22F aumento de avidez de anticuerpos en los adultos jóvenes y las personas de edad, aunque este aumento sólo fue significativo en los jóvenes. Sin embargo, el moderado opsonophagocytic correlación entre los títulos de anticuerpos y la avidez de los anticuerpos en los jóvenes ya los ancianos, no ha mejorado significativamente tras la absorción con PPS22F. Estos datos sugieren que la alta avidez de los anticuerpos no son necesariamente funcional, o por el contrario, opsonophagocytic anticuerpos no son necesariamente de alta avidez. En cambio, en respuesta a PPS14, existe una fuerte correlación entre los títulos de anticuerpos y opsonophagocytic avidez de los anticuerpos en todos los grupos de edad, incluidas las personas mayores> 77. Del mismo modo, Romero-Steiner, et al. [23] encontraron una correlación significativa entre la actividad y el suero opsonophagocytic avidez de los anticuerpos, en particular en respuesta a PPS14. En la mayoría de las personas de edad avanzada, en concreto los> 77 años de edad, baja de anticuerpos opsonophagocytic actividad estaba directamente relacionada con la baja avidez de los anticuerpos.

Opsonophagocytic actividad depende de la avidez de los anticuerpos y de las concentraciones de anticuerpos. En las personas mayores, en particular a los> 77 años, la falta de correlación entre la actividad funcional de anticuerpos y de anticuerpos avidez general se debió a las bajas concentraciones de anticuerpos. En cambio, algunos de los jóvenes voluntarios con bajo opsonophagocytic demostrado actividad moderada a alta concentración de anticuerpos con moderada o alta avidez de los anticuerpos. Estos datos sugieren que los adultos jóvenes, en particular, pueden generar altos niveles de anticuerpos de alta avidez, no opsonophagocytic dirigidos a epítopes. Sobre la base de estos datos, proponemos que por lo menos dos diferentes mecanismos pueden ser responsables de la discrepancia entre la concentración de anticuerpos y la actividad funcional de anticuerpos, es decir, pobres avidez de los anticuerpos y de anticuerpos dirigidos a la no opsonophagocytic epítopos presentes en el polisacárido neumocócico.

Si bien en general no existe diferencia estadística entre la respuesta de los jóvenes y las personas de edad se observó una tendencia hacia una disminución en la respuesta, que aumentó con la edad. Menos de la mayor subgrupo de ancianos respondieron a la vacuna con un doble o una mayor concentración de anticuerpos que en aquellos en que todas las personas mayores o jóvenes. Inmunosenescencia es un proceso en curso con la edad, como la edad del paciente el sistema inmune sigue disminuyendo. Así, en estudios destinados a la detección de la mayoría de las diferencias con el envejecimiento, los futuros estudios deberían tratar de inscribir a personas mayores de edad, es decir, los más de 75 años de edad.

Conclusión

Nuestro estudio indica que la absorción adicional de suero con PPS22F resultados en una mejor correlación entre la concentración de anticuerpos medido y funcional de la actividad de anticuerpos en adultos jóvenes y de edad avanzada. La eliminación de los anticuerpos específicos no podrá, sin embargo, de particular importancia en la evaluación de PPS específicos de la concentración de anticuerpos en personas mayores y puede descubrir previamente un-observó diferencias cuantitativas en la respuesta de anticuerpos.

Métodos
Voluntarios Humanos / vacunación

Healthy adultos jóvenes (<30 años) y voluntarios ancianos (> 65 años) se les pidió que participaran en este estudio. Ancianos voluntarios fueron reclutados de la comunidad, así como de la medicina interna general en el Colegio Médico de Ohio. Los jóvenes voluntarios fueron reclutados a partir de la población estudiantil en la MCO. Cada individuo fue interrogado acerca de antes de la vacunación antineumocócica, medicamentos, enfermedades anteriores y actuales de salud. Además, hemos obtenido sanguíneo completo (CBC), la química perfil amplio incluyendo las funciones renal y hepática y de la albúmina sérica, el total de células B, células T subconjuntos y el total de IgG, IgM e IgA en todos los niveles de estudio de los candidatos. Los individuos previamente inmunizados con la vacuna neumocócica y de cualquier persona que se consideran en inmunocomprometidos base de medicamentos (quimioterapia, los preparativos de esteroides, agentes inmunosupresores incluyendo agentes anti-TNFa), anterior o actual enfermedad (enfermedad neumocócica anterior, esplenectomía, enfermedad auto-inmune, final Renal o enfermedad hepática, VIH positiva, el trasplante de órganos o el cáncer) y los que tienen anormal CBC, químicos, Bo células T o de los niveles de inmunoglobulinas no califican. El consentimiento informado se obtuvo de todos los participantes a través de protocolos revisados y aprobados por la Junta de Revisión Institucional del Colegio Médico de Ohio.

Polisacárido neumocócico ELISA

ELISA se utilizó para determinar los anti-EPA anticuerpos humanos específicos, isotipos y subclases, en todos los voluntarios antes y 6 semanas después de la vacunación [23, 26]. Completa de los detalles respecto a este procedimiento se encuentran en el documento web: http://www.vaccine.uab.edu. EE.UU. referencia neumocócicas Antiserum 89SF, cortesía de la Dra Carl Frasch CBER / FDA, se utilizó como control en todo.

En pocas palabras, Nunc placas microtiter estaban cubiertas de PPS4 o PPS14 (ATCC, Rockville, Md). Humanos sueros fueron absorbidos con 5 μ g / ml de la pared celular de polisacáridos (CPA) o con 5 μ g / ml de CPS y 10 μ g / ml de serotipo 22F de polisacáridos (ATCC) y se incubaron durante 30 minutos [26]. Diluciones seriadas de los sueros absorbidos se añadieron a los pozos y se incuba. Horse-rábano etiquetados peroxidasa anti-humano isotipo y subclase específicos conjugados se añadieron y reacción desarrollado con σ-fenilendiamina (Sigma, St Louis), la absorbancia se leyó a 490 nm.

Avidez de anticuerpos ELISA

Avidez de los anticuerpos IgG a PPS4 y PPS14 fue determinado por el tiocianato de sodio (NaSCN), un chaotropic agente que interfiere con la interacción antígeno-anticuerpo [27]. La molaridad de NaSCN necesarios para elute 50% de los sujetos de anticuerpos se utilizó como medida de la avidez, la fuerza relativa de antígeno-anticuerpo vinculante. ELISA se realizó según lo descrito anteriormente [23]. Placas microtiter se crearon con NaSCN molaridad va de 0,0625 a 4 M M. Controles desinhibido consistió en muestras de suero y espacios en blanco. Todas las muestras séricas fueron analizadas por duplicado. Avidez se expresó como la molaridad de NaSCN requerida para inhibir el 50% de unión de suero sin inhibiciones.

Los ensayos Opsonophagocytic

Opsonophagocytic ensayos se realizaron a lo descrito previamente [23, 28] para medir los anticuerpos funcionales contra PPS4 y PPS14. En pocas palabras, viable neumococo se permite a los pre-opsonize diluido en serie con bomba de calor, inactivado sueros. Suero de conejo recién nacido (Pel Freez-, Brown Deer, WI) se agregó como fuente de complemento (12,5%). Lavados, las células diferenciadas se añadieron en un efector 400:1: proporción de células objetivo. Después de la incubación, para permitir que se produzca la fagocitosis, una alícuota era de plata de la noche a la mañana y se incuba a 37 ° C con 5% de CO 2. Opsonophagocytic El título fue determinado como el recíproco de la dilución con> 50% matanza en comparación con el control de los pozos sin suero.

Estadísticas

La media geométrica de la concentración de IgG reactiva con PPS4 y PPS14 se calcularon para cada grupo. Pre-hasta después de la inmunización valores se compararon mediante pares de la prueba t de Student, jóvenes y ancianos fueron comparados utilizando dos muestras, unpaired la prueba t de Student. Coeficientes de correlación y valores de p se calcularon utilizando la transformación de Fisher Z utilizando log 2 base de opsonophagocytic títulos de anticuerpos y concentraciones. Los valores de p inferior a 0,05 se consideraron significativas. Los cálculos estadísticos se realizaron con el uso de software SPSS 11.5.1.

Conflicto de intereses

Ninguno de los autores de este documento tienen una asociación comercial o de otro tipo que pudieran causar conflicto de intereses.

Contribuciones de los autores

KK: realizaron pruebas ELISA, cotejar los datos, escribió proyecto inicial del manuscrito

SLS: adaptada para los ensayos de laboratorio, la revisión crítica del manuscrito, revisión final del manuscrito

AKS: opsonophagocytic realizado ensayos

SK: siempre clave estadística ayuda y asesoramiento

SRS: consultor en relación opsonophagocytic de ensayo, a condición de las líneas celulares y los controles

GMC: consultor respecto de ensayo ELISA, siempre críticos de control

MAJW: concibe el estudio, la revisión crítica del manuscrito

Agradecimientos

Este trabajo recibió el apoyo de la Administración Pública Grant, AG15978, del Instituto Nacional de Envejecimiento.