Journal of Carcinogenesis, 2005; 4: 9-9 (más artículos en esta revista)

Intercaladas conducto de células es punto de partida en el desarrollo de carcinoma ductal pancreático?

BioMed Central
Ryo Wada (ryo5573@q01.itscom.net) [1], Kaoru Ogawa (ryo5573@q01.itscom.net) [3], Toshikazu Yamaguchi (ryo5573@itscom.net) [4], Takayuki Tanizaki (ryo5573 @ itscom. Net) [1], Michio Matsumoto (ryo5573@q01.itscom.net) [1]
[1] Departamento de Patología, Hospital Juntendo la Universidad de Shizuoka, Shizuoka, Japón
[2] Departamento de Patología (I), la Universidad de Juntendo, Facultad de Medicina, Tokio, Japón
[3] Departamento de Medicina Interna, Hospital Juntendo la Universidad de Shizuoka, Shizuoka, Japón
[4] Centro de I + D, Biomedical Laboratories, Inc, Kawagoe, Saitama, Japón

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Resumen
Antecedentes

Aunque es bien sabido que el carcinoma ductal pancreático pueden desarrollar con una relación a la hiperplasia de las glándulas mucosas (MGH) con atipia (PanIN-1B por PanIN sistema), el punto de partida de este atípico MGH no está claro. Para saberlo, hemos examinado el páncreas tejido utilizando muchos métodos descritos a continuación.

Métodos

1. Veintisiete páncreas resecado quirúrgicamente muestras de tejido, incluidos pancreático ductal carcinomas (PDC), pancreatitis crónica y el páncreas normales, se investigaron mediante coloraciones de inmunohistoquímica para MUC1, MUC6, 45M1, Ki67 y p53. 2. Extracción de ADN y análisis de K-ras mutación en el codón 12 utilizando el método microdissection: Los bloques de parafina con 16 regiones, incluidas las células intercaladas del conducto (IC) adjacant a la atípica MGH se prepararon para la extracción de ADN. La mutación de K-ras codon 12 fue analizado y enriquecido en comparación reacción en cadena de polimerasa de la enzima-ligado minisequence ensayo (PCR-ELMA).

Resultados

1. En el páncreas normal, aunque no de células positivas se observó en 45M1, p53, Ki67, el citoplasma de la IC fueron siempre positivas para MUC1 y, en ocasiones, positivo para MUC6. En el páncreas con la inflamación o la fibrosis, MGH fue positiva para MUC6 y 45M1. MGH y atípico fue positiva para MUC1, MUC6 y 45M1. Algunos IC adyacente a la atípica MGH fue positiva para Ki67 así como atípicos MGH. El carcinoma de células en todos los casos de PDC se difusa positivo para MUC1, 45M1, p53 y Ki67, y focally positivo para MUC6. 2. En mutaciones K-ras, se analizaron las regiones incluidas IC adyacente a la MGH atípico, ya que la inmunohistoquímica apomucin coloraciones de estas regiones parecen a los del PDC como se ha descrito anteriormente. Y K-ras mutación fue confirmada en 12 de 16 regiones (75%). Todas las mutaciones son una única mutación, en 6 regiones GTT se detectó, en 4 regiones GAT se detectó y en 2 se detectó región AGT.

Conclusión

Algunos intercaladas conducto de células puede ser el punto de partida del carcinoma ductal pancreático, porque las exposiciones de mucina expresiones, Ki67, p53 y K-ras mutación en algunas intercalaciones de conductos de células se parecían a los de la hiperplasia de las glándulas mucosas o carcinoma ductal pancreático.

Antecedentes

El carcinoma ductal pancreático (PDC) es fatal, aunque su tamaño es muy pequeño [1, 2]. Por lo tanto, es muy importante conocer las características de las lesiones pre-cancerosas del PDC para la medicina preventiva y la detección temprana de PDC.

Se ha sabido que la hiperplasia de las glándulas mucosas (MGH) (metaplasia de células goblet) es una de las lesiones pre-cancerosas de PDC [3 - 5], y hoy, la histogénesis del PDC ha sido aceptada por un modelo de una secuencia de Cambios morfológicos, de nombre PanIN el sistema [6], en la que el grado inferior PanIN se cree que a mayor grado de intercambio y, por último, a PanIN PDC [7 - 9]. MGH y sin atipia almostly es igual a PanIN-1A MGH y con atipia almostly es igual a PanIN-1B en este sistema [6 - 9].

El principal objetivo del presente estudio fue investigar el punto de partida de MGH como lesiones pre-cancerosas de PDC.

Métodos

Veintisiete páncreas resecado quirúrgicamente muestras de tejido, incluidos 14 casos de PDC, que consistía en adenocarcinoma tubular moderadamente diferenciado, el 7 de los casos de pancreatitis crónica y 6 casos de la normal de páncreas, fueron evaluados en el Departamento de Anatomía Patológica, Hospital Juntendo la Universidad de Shizuoka entre 1998 y 2004. El consentimiento informado para los exámenes médicos se describe a continuación se obtuvo de todos los pacientes.

Las muestras fueron fijadas en formalina al 10% para la solución 1 - 5 días y preparado por la reducción de las lesiones en 4 - 5 mm secciones. Las secciones fueron incluidos en parafina, seccionadas en un espesor de 4 μ m y teñidas con hematoxilina y eosina (HE) y muchas coloraciones de inmunohistoquímica se describe a continuación. Y después de estas coloraciones, algunos bloques de parafina se utiliza para la extracción de ADN.

1. Coloraciones de inmunohistoquímica fueron realizados por la avidina-biotina-peroxidasa método

Anti-oncogénica p53 (p53: DO7, anticuerpo monoclonal, Inc Novocastra, UK), anti-MUC1 glicoproteína (MUC1: humanos CA 15-3, DF3, anticuerpo monoclonal, DAKO, EE.UU.), contra la glucoproteína MUC6 (MUC6: CLH5 , Anticuerpo monoclonal, Inc Novocastra, Reino Unido), anti-humano mucina gástrica-45M1 (45M1, anticuerpo monoclonal, Inc Novocastra, UK) y anti-Ki-67 (MIB-1, anticuerpo monoclonal, Coulter Inc Japón, el Japón ) (MUC1 y MUC6 en una dilución de 1:50, 45M1 en la dilución de 1:50, p53 en la dilución de 1:100 y Ki67 en la dilución de 1:100). Cada tinción se realizó con 15 minutos de tratamiento por microondas.

2. Extracción de ADN y análisis de K-ras mutación en el codón 12

En 16 regiones, incluidas las células intercaladas del conducto (IC) adyacente a la atípica MGH (panIN-1B), la existencia o inexistencia de los K-ras codon 12 mutación fue investigado, debido a que la expresión inmunohistoquímica de la IC son muy interesantes, tal y como se describe En los resultados, y K-ras codon 12 mutación es bien conocido como uno de los populares anomalías genéticas de PDC y MGH [10 - 13].

Los bloques de parafina con el objetivo de los focos se prepararon para la extracción de ADN. El objetivo de los focos se microdissected usando una aguja de calibre 20-, la comparación de la diapositiva con HE posición de la misma. ADN extraído fue diluido con 5 ml de TaKaRa DEXPAT (para la extracción de ADN de Parafina-embebido de tejido, Inc TaKaRa Biomédicas).

La mutación de K-ras codon 12 fue analizado y enriquecido en comparación reacción en cadena de polimerasa de la enzima-ligado minisequence ensayo (PCR-ELMA) [14, 15]. En PCR-ELMA, aguas arriba de la primera y segunda PCR fueron 5'-TAAACTTGTGGTAGTTGGAACT-3 ', aguas abajo de la primera PCR fue 5'-GTTGGATCATATTCGTCCAC-3', y después de la segunda PCR fue 5'-CAAATGATCTGAATTAGCTG-3 '. La primera reacción de PCR se realizó con 1 μ l de lisado ADN, de 100 μ M dNTP, 1,5 mM de MgCl 2, 1 μ M de cada uno de los cebos, 0,625 U Taq polimerasa de ADN y 1 × PCR buffer [que contiene 10 mM Tris-HCl (pH 8,3 a 25 ° C), 50 mM KCl y 0,001% (w / v) gelatina] en el termociclador. Y 10 μ l de la segunda PCR producto desnaturalizado se hibridó con sondas para la detección de la K-ras codon 12 de tipo salvaje (GGT) y seis mutantes (GAT, GCT, GTT, AGT, CGT y TGT) de ADN fueron inmovilizados, a los 55 ° C durante 30 minutos, y 100 μ l de biotinated A, y 0,01 U de TdqDNA polypmerase se añadieron incubatuon y se continuó a los 55 ° C durante 30 minutos.

En el desarrollo, de 100 μ l de avidine-peroxidasa de rábano conjugada figura y la mezcla se realizó a temperatura ambiente durante 30 minutos, y 100 μ l de tetramethylbenzidine sustrato (TMB) se containd y las placas se realizaron en la oscuridad a temperatura ambiente durante 20 minutos . Y 100 μ l de solución es dejar de contenidos y de la luz absorbancia de cada muestra, se midió por espectrofotometría (Multiskan Multisoft, Labsystems, Tokio) con un filtro de 450 nm de longitud de onda (Figura 1].

Resultados
1. Los estudios inmunohistoquímicos tejido de páncreas (Tabla 1]

En el páncreas normal (acinal celular: 100 regiones, IC: 100 regiones, de conductos: 100 regiones), aunque no de células positivas se observó en 45M1, p53, Ki67, el citoplasma de la IC fueron siempre positivas para MUC1 (Figura 2] y, a veces, Positivo para MUC6.

En el páncreas con la inflamación o la fibrosis, el citoplasma de las epitheli en MGH [16 - 18] no tanto con atipia (50 regiones) y atipia (20 regiones) fue positivo para 45M1 (Figura 3] y MUC6. Y estos atípicos MGH (20 regiones), que se PanIN-1B por PanIN sistema [1], también fueron positivos para MUC1. No células positivas para p53 se observó en MGH con atipia o no atipia. Algunos IC adyacente a la atípica MGH (PanIN-1B) fue positivo para Ki67 (Figura 4].

El carcinoma de células en todos los casos (14 casos) fueron del PIDC difusa positivo para MUC1, 45M1, p53 y Ki67, y focally positivo para MUC6. A saber, en todos los casos, los núcleos de muchas de carcinoma de células fueron positivas para p53 y Ki67. Y en todos los casos, la expresión de MUC1, MUC6 y 45M1 apomucins se encontró en las membranas celulares de muchos de carcinoma de las células y los citoplasmas de las células de carcinoma de algunos.

2. K-ras mutación

En mutaciones K-ras, se analizaron las regiones incluidas IC adyacente a la MGH atípico, ya que la inmuno-histoquímico apomucins coloraciones de estas regiones se almostly iguales a los del PDC se ha descrito anteriormente. Y K-ras se comfirmed mutación, en 12 de 16 regiones incluidas IC adyacente a la atípica MGH (75%). Todas las mutaciones son una única mutación, en 6 regiones GTT se detectó, en 4 regiones GAT se detectó y en 2 se detectó región AGT.

Discusión

En general, la validez de neoplasia o neoplasia tendrá algunas características de su célula original y se puede desarrollar a partir de la proliferación celular en el órgano. Por lo tanto, es importante saber que las células normales tienen las características de la neoplasia o de la validez de la detección de neoplasia el punto de partida de la neoplasia.

Por lo tanto, en el presente estudio, la mucina expresiones que se conocen como una de las características del PDC [19 - 24] y K-ras mutación, que es muy famoso en el PDC anormalidad genética [10, 11] se investigó la falta de tejido neoplásico O la neoplasia.

Aunque los resultados obtenidos en el presente estudio puede ser poco novedosos y de apoyo de los hechos conocidos, estos resultados ponen de manifiesto que debería presente estudio fue correcta.

Es decir, en el estudio actual, los conductos células intercaladas (IC) fueron positivos para MUC1, aunque el otro epitheli normal del páncreas fueron negativos para él. En los otros informes, la positividad de MUC1 en el páncreas normal de la falta de coherencia, [22] positivos o negativos [21, 23]. La razón de esta discrepancia es unkown, sin embargo, en este estudio, el páncreas normal de los tejidos se obtuvieron a partir de la resección quirúrgica debido a la no-enfermedades de páncreas y rápidamente estos especímenes fueron fijados en formol solución. Por lo tanto, estos especímenes fueron adecuados para el examen histológico detallado en el páncreas normal, y los resultados del presente estudio debe ser fiable.

Y los resultados en el presente estudio indican que la mucina de los fenotipos atípicos MGH (PanIN-1B por PanIN sistema) tuvo una reacción positiva difusa para ambos MUC1 anti-manchas y anti-45M1 mancha, y tuvo una reacción positiva para spasely anti - La tinción con Ki-67, y estos resultados se asemejan a las del carcinoma ductal pancreático (PDC), con la excepción de la expresión de p53 (MGH: negativo, PDC: positivo). Las expresiones de la apomucins, Ki67 y p53 en el MGH y PDC en el presente estudio coincide con la mayoría de las de otros informes [20, 21, 23 - 26].

Se ha sabido que el K-ras mutación puede confirmar en el MGH y PDC [10 - 13] y los resultados del presente estudio también mostró que el K-ras codon 12 mutaciones fueron confirmados en las regiones incluidas IC adyacente a la atípica MGH humanos de páncreas (GGT → GTT en 6 regiones, GGT → GAT en 4 regiones y GGT → AGT en la región 2). Y algunos IC adyacente a la atípica MGH fue positiva para Ki67.

A saber, la IC adyacente a la atípica MGH (PanIN-1B), que es a veces de proliferación celular, tenía la expresión fenotípica de mucinas y de alta frecuencia de mutación de K-ras, así como PDC.

Por lo tanto, nos parece que algunos IC es el punto de partida del MGH y puede ser que se cree es el punto de partida del PDC, teniendo en cuenta la histogénesis de PDC (de grado inferior a PanIN grado superior PanIN, a PDC).

Más acerca de los estudios moleculares de células intercaladas del conducto pancreático en diversas enfermedades debe estar justificada.

Conclusión

Algunos intercaladas conducto de células puede ser el punto de partida del carcinoma ductal pancreático, porque las exposiciones de mucina expresiones, Ki67, p53 y K-ras mutación en algunas intercalaciones de conductos de células se parecían a los de la hiperplasia de las glándulas mucosas o carcinoma ductal pancreático.

Abreviaturas

IC, intercaladas conducto de células; PDC, el carcinoma ductal pancreático; MGH, hiperplasia de las glándulas mucosas

Agradecimientos

Los autores se agradecen a D. Mrozek de asistencia con manuscrito.