Journal of Autoimmune Diseases, 2005; 2: 6-6 (más artículos en esta revista)

Expresión de gen inhibidor de TNF en la glándula lagrimal promueve la recuperación de la producción de lágrimas y de la estabilidad de la lágrima y la reducción de inmunopatología en conejos con autoinmune inducida dacryoadenitis

BioMed Central
Melvin D Trousdale (mtrousdale@doheny.org) [1], Zenjin Zhu (zzhu@doheny.org) [1], Douglas Stevenson (dstevenson@doheny.org) [1], Joel Schechter E (schechte@usc.edu) [2], Thomas Ritter (thomas.ritter @ charite.de) [3], Austin K Mircheff (amirchef@usc.edu) [4]
[1] Doheny Eye Institute de la Universidad del Sur de California, Los Angeles, CA
[2] Departamento de Neurobiología Celular y, la Escuela Keck de Medicina de la Universidad del Sur de California, Los Angeles, CA
[3] Instituto de Inmunología de la medicina de la Universidad Humboldt de Berlin, Alemania
[4] Departamento de Fisiología y Biofísica, Facultad de Medicina Keck de la Universidad del Sur de California, Los Angeles, CA

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Resumen
Antecedentes

La causa más común de esta infección, la morbilidad en los países desarrollados es el ojo seco, de los que muchos casos se deben a la insuficiencia lagrimal. El ojo seco afecta a unos 10 millones en los Estados Unidos., La mayoría de los cuales son mujeres. En los EE.UU. solamente, se estima que 2 millones de pacientes con síndrome de Sjögren han disfuncionales glándulas lagrimales y graves de ojo seco, y no existe un tratamiento satisfactorio. Estos pacientes se beneficiarían si su tejido lagrimal función podría ser restaurado.

Métodos

El efecto de la transferencia mediada por adenovirus del factor de necrosis tumoral (TNF) - gen α inhibidor sobre autoinmune inducida dacryoadenitis se evaluó en un modelo de conejo. Transgén proteína soluble fue detectado en lágrimas por ELISA de los 7 días siguientes a la transducción.

Resultados

Dos semanas después de la inducción de la enfermedad con los linfocitos activados, la producción de lágrimas, según lo determinado por la prueba de Schirmer, se redujo en un 40% aproximadamente, mientras que la estabilidad de la película lagrimal, según la medición de tiempo de ruptura lagrimal (BUT), disminuyó en un 43%. Adenovirus mediada por la terapia génica utilizando AdTNFRp55-Ig de 2 semanas después de la inducción de la enfermedad, se tradujo en el regreso de la producción de lágrimas a los niveles normales de la semana 4. En el grupo tratado la enfermedad, desgarro, pero que mejora sensiblemente la semana 4. Puntuaciones de rosa de bengala, un indicador de la superficie corneal defectos, el aumento de la enfermedad después de la inducción y disminuyó después de la terapia genética. En la glándula lagrimal, los CD4 de células T CD8 a la proporción era de 4:1 en el grupo de la enfermedad en comparación con 1:2 en el grupo tratado. La infiltración de las células T y las células CD18 + se redujo aproximadamente un 50% después de la terapia genética.

Conclusión

Llegamos a la conclusión de que los niveles terapéuticos de los inhibidores de TNF soluble se lograron en la glándula lacrimal y en la superficie corneal. Antiinflamatorio la expresión de genes de citoquinas podría ofrecer una modalidad terapéutica potencial para el tratamiento de dacryoadenitis autoinmune, una vez se disponga de los vectores adecuados.

Antecedentes

El ojo seco afecta aproximadamente a 10 millones de estadounidenses, la mayoría de los que son mujeres. Una de las formas más graves de ojo seco se encuentra en pacientes con síndrome de Sjögren. Una combinación de inmunológicos, genéticos, hormonales, y los factores ambientales pueden desempeñar un papel en el desarrollo de autoinmunidad de la glándula lagrimal [1 - 3]. Insuficiencia lagrimal es responsable de algunas formas graves de ojo seco y puede ser causada, en parte, por la infiltración linfocítica. El infiltrado inflamatorio productos tóxicos factores que actúan como mediadores inmunes, lo que resulta en la reducción de la función secretora causada por la atrofia del tejido secretor y de la disfunción del tejido sobreviviente [4, 5].

Ambos modelos murinos y conejo han sido utilizados para esclarecer los mecanismos de las enfermedades autoinmunes glándula lagrimal. Nuestro Centro de Superficie Ocular grupo de investigación informó de que autólogo de linfocitos de sangre periférica (PBL) proliferan cuando co-cultivadas con conejo glándula lagrimal células epiteliales [6]. Estos linfocitos activados dacryoadenitis inducida por el plazo de 2 semanas cuando se inyecta en el conejo de donantes restantes del contralateral glándula, lo que proporcionó un modelo in vivo de autoinmune dacryoadenitis [7, 8]. La disfunción de la glándula lagrimal inducida, que se caracteriza por la disminución de la producción de lágrimas basal, la reducción de la estabilidad de la lágrima, alteración de la tinción de la superficie corneal, y la mayor presencia de los linfocitos T CD4 +, imita varias características importantes de la queratoconjuntivitis sicca y síndrome de Sjögren.

Factor de necrosis tumoral (TNF) - α es una citoquina pro-inflamatoria producida principalmente por monocitos y macrófagos, células, aunque otros muchos son también los productores. Se trata de una citoquina pleiotrophic con dos receptores conocidos y muchos efectos reguladores, incluyendo la citotoxicidad, la lucha contra la infección, el crecimiento de modulación, y la diferenciación celular. Kolls et al. [9] producido un recombinante de proteínas capaces de unirse y de la neutralización de TNF y lymphotoxin. El producto, una proteína de fusión formada por unirse a la humana 55-kDa dominio extracelular del receptor de TNF a un ratón IgG cadena pesada, se une la participación de TNF por dos de sus tres receptores. Kolls et al. [9] construyó un vector adenoviral con una codificación de la citomegalovirus promotor quimérico inhibidor de TNF (AdTNFRIp55-Ig). Más tarde, en un modelo de trasplante, Ritter et al. (2000) [10] demuestra que el vector puede ser una útil herramienta de la terapia génica para el control de la inflamación. Utilizando el mismo vector, hemos demostrado que la expresión del gen inhibidor de TNF-reprimidas por la activación de los linfocitos lacrimal células epiteliales de células mixtas en las reacciones [11].

Anteriormente, en un estudio de la utilización profiláctica de los mismos parámetros clínicos, que informaron de que las pruebas soluble TNF-inhibidor de la proteína parcialmente suprime la aparición de síndrome de Sjögren-al igual que las características basales de la reducción de la producción de lágrimas, así como los relacionados con immunohistopathology autoinmune inducida dacryoadenitis [12] . El actual manuscrito presenta pruebas de que AdTNFRIp55 Ig-terapia genética de los conejos con el tratamiento establecido autoinmune dacryoadenitis resultados en la mejora de las características clínicas, como el incremento en la producción de lágrimas basal, un aumento de la estabilidad de la lágrima, y una reducción de la superficie corneal defectos. La terapia también se redujo la intensidad de la infiltración de células inmunitarias.

Métodos
Animales, procedimientos quirúrgicos y evaluación clínica

Mujeres conejos blancos Nueva Zelandia (3.5-4 kg) se obtuvieron a partir de irlandeses granjas (Norco, CA). Todos los animales fueron utilizados de conformidad con la Asociación para la Investigación en Visión y Oftalmología (ARVO) Resolución sobre uso de animales en investigación clínica oftalmológica. Los animales se mantuvieron en una instalación plenamente acreditada por la Asociación Americana para el Laboratorio de Ciencia Animal. Clínicos se realizaron pruebas sobre todos los ojos antes de la experimentación. Los ojos fueron inicialmente examinadas por dos investigadores de la lámpara de hendidura mediante biomicroscopía, después de la prueba de Schirmer colirio anestésico tópico (0,5% tetracaine), la determinación del tiempo de ruptura película lagrimal (BUT lacrimógenos), y la tinción con rosa de bengala, y no se detectaron defectos de la córnea. Test de Schirmer tiras de papel para medir la producción de lágrimas fueron comprados a Chauvin Pharmaceuticals Ltd (Romford, Essex, Reino Unido), fluoresceína de Alcon Laboratories Inc, (Fort Worth, TX.) Rosa de bengala y tiras de Akorn, Inc, (Abita Springs, LA ).

Los resultados se registraron en un diagrama de córnea y anotó mediante un sistema de clasificación estandarizado [13]. La intensidad de la tinción de la medial y lateral conjuntiva bulbar y de la córnea fue clasificado, el grado máximo para cada uno de estos tres ensayos fue de 3, para un total de la categoría de máximo 9 por ojo.

Después de la anestesia, la glándula lacrimal izquierda fue extraído quirúrgicamente de cada conejo para la preparación de la glándula lagrimal purificada células epiteliales (pLGEC) que se describió anteriormente [6, 11]. Sangre periférica también se han tomado para la preparación de linfocitos.

Cultivo de células inmuno y reactivos

Hepatobiliares Stim Cultura Medio se adquirió de Becton Dickinson, (Bedford, MA). Ham's F12 medio y antibiótico / antimicótico mezclas se compraron productos de Gibco BRL, (Rockville, MD). Dulbecco modificada de Eagle mediano y fetal bovino sueros fueron adquiridos de Omega Científico, (Tarzana, CA). Albúmina sérica bovina (BSA), inhibidor de tripsina de soja, ácido linoleico y fueron adquiridos de Sigma Chemical Co (St. Louis, MO). Timidina tritio (3 H-timidina) se adquirió de DuPont NEN Research Products, (Wilmington, DE). Los anticuerpos monoclonales para conejo CD4, CD8, CD18 y se compraron de Spring Valley Labs, (Woodbine, MD). Antisuero de conejo cabra a los linfocitos T antígeno (RTLA) se obtuvo de los laboratorios Cedar Lane (Hornby, Ontario, Canadá). Biotina-etiquetados de cabra anti-ratón IgG Fc burro y cabra anti-IgG fueron adquiridos de Chemicon International, (Temecula, CA). El Vectastain Elite ABC kit se obtuvo de Vector Laboratories Inc, (Burlingame, CA). Yoduro de propidio se adquirió de Sigma (St. Louis, MO).

Autólogo de células mixtas y de la inducción de la reacción autoinmune dacryoadenitis

Descripciones de la escisión de la glándula lagrimal, de purificación de las células acinares, y los procedimientos de reacción de células mixtas se han publicado con anterioridad [6, 7, 12]. Purificada glándula lagrimal células epiteliales y PBL se aislaron y cultivaron por separado durante 2 días. Mezcla de reacciones de células se realizaron con el mismo número (1 x 10 6) de la autotransfusión y PBL 2500 RAD γ-irradiado pLGEC, entonces co-cultivadas durante 5 días. Las células fueron cultivadas también en placas de 96 pozos en las mismas condiciones, pero por medio de 1 × 10 5 células de cada uno de los tipos para controlar la proliferación de PBL. Las células fueron incubadas con 1 μ Curie, de 3 H-timidina y cosechado 24 Horas más tarde utilizando un modelo Brandel PHD 290 ™ muestra la cosechadora (Gaithersburg, MD). Un LS 6000IC beta scintillation counter (Beckman Instruments, Inc, Fullerton, CA) fue usado para la medida 3 H-timidina incorporación. Un mínimo de 6 pozos se contó para obtener datos representativos. Linfocitos de sangre periférica de células mixtas reacciones con un índice de estimulación superior a 2 se considera que contienen linfocitos activados y, por tanto, a ser el adecuado para la inducción de dacryoadenitis.

Dos millones de linfocitos estimulada fueron inyectados en la región central de las inferiores glándulas lagrimales de los ojos el derecho de los respectivos donantes conejos utilizando un calibre de 25 mariposa aguja en una jeringa de tuberculina. Con el fin de evitar el daño a los tejidos causado por la rápida expansión de volumen, el volumen de micro-sistema de entrega se fijó para entregar 10 μ l en intervalos de 10 segundos (10 μ l × 20 repeticiones = 200 μ l). Conejos recibir estimulado las células de la reacción de células mixtas son en lo sucesivo denominado inducido dacryoadenitis (ID) animales.

Vectores y transducción in vivo

Construir un adenovirus que transportaba a los inhibidores de TNF-gen (AdTNFRp55-Ig) descrito anteriormente se utilizó [9, 10]. En pocas palabras, una proteína de fusión que se formó por la unión humana 55-kDa TNF receptor (TNFRp55) dominio extracelular con una pesada cadena de ratón IgG (TNFRp55-Ig) de la estabilidad. Fue entonces subcloned en la pACCMV vector recombinante para generar anuncios expresando la TNFRp55-Ig quimérico molécula. Este vector de anuncios, que había un promotor del citomegalovirus humano, expresó TNFRp55-Ig soluble que tiene la capacidad de bloquear completamente el TNF-α y lymphotoxin-α. La mitad de la identificación de los animales descritos anteriormente se transduced con AdTNFRp55 Ig-(1 × 10 8 ufp en 0,2 ml inyectados en cada glándula lagrimal después de los síntomas clínicos de la enfermedad mostró establecido. Estos animales son lo sucesivo denominado ID / o tratados ID / AdTNFRI). Hay 5 o más animales en cada grupo de estudio.

Colección de tejidos y immunohistopathology

Todos los animales fueron sacrificados al final de 4 semanas (es decir, la semana 4 fue de 2 semanas después de la terapia génica). Inferior glándulas lagrimales de los ojos fueron extirpados derecho y disecados longitudinalmente en dos partes. Una parte se fijó en formalina al 10% e incluidos en parafina, la segunda parte fue incorporado en la temperatura óptima de corte compuesto de Ultramar (PTU) (Miles, Inc, Elkhart, NJ), snap-congelado en nitrógeno líquido y se almacenan a -70 ° C hasta que el estudio histológico. Cryosections de la transduced tejidos fueron fijados en el 4% paraformaldehído, entonces counterstained con yoduro de propidio (50 μ g / ml). Un mínimo de 5 campos fueron seleccionados al azar y fotografiado con un microscopio confocal de células para el análisis. La parafina de muestras de tejidos embebidos se seccionaron a 5 μ m, entonces deparaffinized y teñidas con hematoxilina y eosina (H & E) para el examen microscópico de luz. La OCT-muestras de tejidos embebidos también se seccionaron a 5 μ m usando un criostato, fijados en acetona refrigeradas (4 ° C), secado al aire, entonces rehidratada en buffer fosfato salino-immunohistologic para tinción. Después de las secciones que estaban bloqueadas con el 5% BSA durante 15 min, que o bien fueron incubados a temperatura ambiente durante 1 hora o humidificado en una cámara a 4 ° C durante la noche con anticuerpos primarios: ratón anti-CD18 (1:1000), de cabra anti - RTLA (1:300), CD4 o CD8 (1:200). Las secciones fueron incubadas con biotina especies secundarias de anticuerpos específicos durante 60 minutos a temperatura ambiente. Las secciones fueron lavadas de nuevo, entonces apagado con el 0,3% de H 2 O 2 en el 40% de metanol durante 15 min, incubadas en ABC de reactivos para 30 minutos, enjuagar tres veces más, luego desarrollado durante 3 min. Controles negativos se realizaron utilizando anticuerpos para cada 1% de suero normal de la misma especie que los de primaria o secundaria se deriva de los anticuerpos como sustitutos de los ya sea primaria o secundaria de incubación. Hematoxilina counterstain se aplicó antes de montar. Células teñidas positivos que exhibe un intenso color marrón y se distinguen fácilmente desde el fondo azul. La sección entera fue escaneada y analizada con un Sistema Automatizado de celulares Imaging (SIAC ®: ChromaVision Medical Systems, Inc, San Juan Capistrano, CA). SIAC, una propiedad, de color basado en la tecnología de imágenes con microscopio automatizado, proporciona datos cuantitativos, incluyendo por ciento positiva, la intensidad de puntuación, y la zona de medición. ChromaVision sistema está diseñado para medir la superficie total ocupada por todas las celdas en una sección de escaneado y el porcentaje de esa zona que está ocupada por las células que expresan el marcador específico de células de CD4, CD8, CD18, o RTLA. Cuatro secciones de cada glándula se analizan en busca de un total de 20 secciones escaneadas por grupo. Los datos se muestran como media ± desviación porcentual positiva.

Estadísticas

Los datos recogidos de análisis clínicos y ChromaVision fueron sometidos a prueba "t" pareada o prueba de los rangos con signos de suma y el análisis de la varianza (ANOVA). Múltiples pruebas t de comparación se calcularon cuando ANOVA p ≤ 0,05. Significación estadística fue ajustada por el número de comparaciones pairwise con una corrección de Bonferroni.

Resultados
Autoinmune inducida dacryoadenitis y evaluación clínica

Autólogo de PBL, activado por la co-cultura con conejo glándula lagrimal células epiteliales, inducida dacryoadenitis el plazo de 2 semanas cuando se inyecta en el conejo de donantes restantes del contralateral glándula lagrimal. Evaluación clínica, incluyendo la producción de lágrimas basales (Fig. 1], el tiempo de ruptura lagrimal (Fig. 2] y la tinción con rosa de bengala (Fig. 3] se realizó en 10 conejos a los 0, 2 y 4 semanas después de la inducción de la enfermedad. Antes de la inducción de la enfermedad, el test de Schirmer resultados sobre la base de lecturas de 1 minuto, lo que representa basal normal de la producción de lágrimas para los dos grupos de estudio fueron 7,6 a 7,1 mm (Fig. 1]. Dos semanas después de la inducción de la enfermedad, la producción de lágrimas se redujo más de un 40% de las puntuaciones de 4,5 y 4,0, respectivamente. Las glándulas lagrimales de los animales en uno de los grupos fueron entonces transduced con AdTNFRp55-Ig; evaluación clínica se repitieron después de 2 semanas. Schirmer resultados de la terapia génica grupo (ID / tratados) aumentó a 8,1 mm, con indicación de la mejora de la secreción de lágrima, mientras que las puntuaciones de Schirmer para el grupo de enfermedades no tratadas (ID) se redujo a 3,9 mm.

Antes de la inducción de la enfermedad, desgarro, pero que fue de 20 segundos. Dos semanas después de la inducción de la enfermedad, desgarro, pero disminuyó to11.3 y 10,1 segundos, lo que indica una pérdida de la estabilidad lacrimógenos para ambos grupos. Cuatro semanas después de la inducción de la enfermedad, desgarro, pero que en el grupo tratado se aproxima más a la normalidad (16,2 seg), mientras que en el grupo no tratado, la estabilidad de la lágrima se mantuvo sin cambios (10,2 seg).

La tinción con rosa de bengala resultados antes de la inducción de la enfermedad comenzó a 0,2 y aumentó a 2,6 para ambos grupos a las 2 semanas. A las 4 semanas, las puntuaciones en el grupo tratado se redujo a 1,6 mientras que las puntuaciones para el grupo sin tratamiento seguido aumentando (3,4).

Infiltrados de células inmunes

Examen microscópico de H & E-manchado normal glándula lagrimal (Fig. 4A] reveló poco dispersos linfocitos, células plasmáticas y macrófagos ubicados en toda la glándula. Glándulas de animales con dacryoadenitis inducida (con y sin tratamiento en la Fig. 4B y 4C, respectivamente) figuran infiltrados de células inmunes, que consta de pequeñas a grandes focos que manchados positivos para CD4 (Fig. 4D y 4E, respectivamente), CD8 (Fig. 4F y 4G, respectivamente), RTLA (Fig 4H y 4I, respectivamente), y CD18 (Fig 4J y 4K, respectivamente) entre los antígenos ubicados en torno a ductos y acinos y vénulas. De vez en cuando, CD8 + se observaron células acinares y en el epitelio ductal, y algunas zonas han acinares morfología atípica.

El cuadro 1 se presenta un resumen del análisis cuantitativo de las células CD4 +, CD8 +, RTLA +, CD18 + y células inmunes presentes en el tejido de la glándula lagrimal. En el tejido normal, la proporción de CD4 + a CD8 + manchadas zona fue aproximadamente de 1:1.4 (0,34% y 0,49% de la zona manchada fue ocupado por CD4 + y células T CD8 +, respectivamente). Cuatro semanas después de la inducción de la enfermedad, la relación cambió a alrededor de 3:1 (es decir, 1,20% y 0,47%, como se ha explicado anteriormente). En las secciones normales de la glándula lagrimal, el 1,65% de la superficie se RTLA + 0,17% y se CD18 +. Cuatro semanas después de la inducción de la enfermedad, se produjo un aumento significativo de RTLA + CD18 + y células en el tejido lagrimal (13,2% para RTLA + y 9,68% para las células CD18 +). Después de la terapia genética, el número de CD4 +, CD18 + y RTLA + células disminuido, y los CD4: CD8 ratio volvió a 1:2 (0,8% y 1,63%, respectivamente). En comparación con el ID de grupo, la disminución significativa de los CD4 +, CD18 + y RTLA + se encontró en las células tratadas AdTNFRI glándulas lagrimales (p <0,001), mientras que las células CD8 + aumentaron significativamente después de la terapia genética (p <0,0001).

Discusión

Las glándulas lagrimales producen la mayor parte del fluido que es esencial para el mantenimiento de la superficie ocular y tejido saludable para mantener un buen interfaz de refracción de la luz que entra en el ojo. Insuficiencia lagrimal puede ser el resultado de ambos mecanismos inmunes y no inmune. En nuestro modelo animal de dacryoadenitis autoinmune, linfocitos autólogos activados desencadenar una infiltración linfocítica que menoscaba la función glandular, simulando el síndrome de Sjögren. En este sistema, la glándula lacrimal disfunción de las células epiteliales, lo que resulta en la reducción de la producción de lágrimas y una pérdida de la estabilidad de la lágrima [12].

En una anterior, la transferencia de genes in vitro estudio, que informó de la glándula lagrimal transducing cultivadas con células epiteliales adenovectors con un inhibidor de TNF-gen, TNFRp55-Ig [11]. Expresión de los transgenes en estas células suprimida su capacidad de activar los linfocitos en una reacción de células mixtas. El inhibidor de TNF-soluble producto génico estuvo presente en los medios de cultivo de células de la transduced para un máximo de 4 semanas. En un estudio posterior de la transducción in vivo de la glándula lagrimal con el mismo vector, el transgén soluble TNF receptor de la proteína se detecta en las lágrimas después de 7 días, pero no a los 14 días [8]. Esta expresión transitoria es una conocida característica de adenovirus mediada por la transferencia de genes y se piensa que es una consecuencia de nonintegration del transgén ADN en el genoma celular y, posiblemente, la eliminación de las células transduced por el sistema inmunológico. A pesar de ello la expresión génica transitoria, se produjo un efecto beneficioso sobre la enfermedad inducida. Basal de la producción de lágrimas, la estabilidad de la lágrima, y defectos de la superficie ocular, tres parámetros clínicos comunes que se utilizan para diagnosticar el ojo seco [1], fueron mejorados. Sin tratamiento, la producción de lágrimas y de la lágrima, pero declinó en un 45% a un 50%, y la superficie ocular daños aumentó un 60%, sobre la base de un sistema de puntuación de la tinción con rosa de bengala que tiene una alta sensibilidad y especificidad para la superficie defectos. La intensidad de la infiltración de células inmunes en la glándula lacrimal también disminuyó.

Adenovirus vectores usados en terapia génica puede provocar una respuesta inmune en el receptor. Anteriormente, nos informó de que nuestra vector adenovirus, que expresa la proteína verde fluorescente (GFP) de genes utilizando el mismo como promotor CMV en AdTNFRp55-Ig, inducida similar número de CD4 + y CD8 + T las células a lo que se encuentra en las glándulas nontransduced normal, aunque los números de RTLA + y CD18 + presente en las células del tejido lagrimal hizo aumentar siguientes transducción [8].

También informó de que la reducción de la producción de lágrimas y lacrimógenos tiempo de ruptura de la era detectable 2 semanas después de la inducción de la enfermedad del ojo seco, y que estas características clínicas persisten durante al menos 6 semanas más en nuestro modelo [12]. Para este estudio, se eligió a intervenir terapéuticamente después de la enfermedad aguda es reconocible (es decir, 2 semanas después de la iniciación de la enfermedad) y en la evaluación a corto plazo de la terapia génica a las 4 semanas de tratamiento, sabiendo que la mediada por adenovirus inhibidor de TNF-expresión de los transgenes sería menos del 2 Semanas en nuestro sistema [8]. En el actual estudio se demostró que incluso la expresión transitoria del gen inhibidor de TNF-lagrimal en el tejido tiene un impacto deseable en las características clínicas y patológicas de dacryoadenitis establecido autoinmune. Para estudios futuros, parece que a largo plazo expresión de los transgenes sería apropiado, por lo que nuestro estudio de seguimiento a largo plazo de prueba utilizando una expresión AAV vector que lleva el gen inhibidor de TNF-.

Conclusión

Adenovirus mediada por la transferencia de genes TNFRp55-Ig a la glándula lagrimal resultado en la expresión del transgén y sus productos en la secreción de lágrimas. La presencia del inhibidor de la proteína TNF en la glándula lagrimal promovido la recuperación de la producción de lágrimas y de la estabilidad de la lágrima y la reducción de inmunopatología en conejos con la dacryoadenitis autoinmune. Parece que el ojo seco severo pueden beneficiarse de la regulación de TNF abajo.

Conflicto de intereses

Los autores declaran que no tienen intereses en conflicto.

Contribuciones de los autores

EMD y DS diseñado los estudios, ayudado en la interpretación y la redacción del manuscrito. ZZ era fundamentalmente de la realización de la evaluación clínica y la adquisición de datos inmunocitoquímica. JES AKM y ayudó a planificar el protocolo e interpretar los datos de importante contenido intelectual. TR participó en la planificación de todos los aspectos relacionados con la terapia génica y la interpretación de los resultados.

Agradecimientos

Los autores gracias Laurie LaBree para el análisis estadístico y Susan Clarke para la asistencia editorial. Gracias al Dr J. Kolls para prestar el inhibidor de TNF-gen. Este trabajo fue apoyado por el NIH subvenciones EY12689, EY05801, EY10550, EY03040 y subvenciones de Investigación para Prevención de la Ceguera, Inc