Reproductive biology and endocrinology : RB&E, 2005; 3: 33-33 (más artículos en esta revista)

MRNA expresión y localización de bNOS, eNOS y iNOS en el cuello del útero en humanos prematuros y término del trabajo

BioMed Central
Susanne Abelin Törnblom (Susanne.Abelin @ kbh.ki.se) [1], Holger Mutilar (homaul@t-online.de) [2], Aurelija Klimaviciute (Aurelija.Klimaviciute @ kbh.ki.se) [1], Robert E Garfield (rgarfiel@utmb.edu) [2], Birgitta Byström (Birgitta.Bystrom @ kbh.ki.se) [1], Anders Malmström (Anders.Malmstrom @ medkem.lu.se) [4], Gunvor Ekman - Ordeberg (Gunvor.Ekman-Ordeberg @ kbh.ki.se) [1]
[1] Departamento de la Mujer y del Niño, de la División de Obstetricia y Ginecología, Karolinska University Hospital, Karolinska Institute, 171 76 Estocolmo, Suecia
[2] Departamento de Obstetricia y Ginecología, de la División de Ciencias Exactas y Reproductiva de la Universidad de Texas Medical Branch, Galveston, Texas, TX 77555-1062, EE.UU.
[3] Department of Obstetrics and Gynaecology, University of Heidelberg, 69115 Heidelberg, Germany
[4] Departamento de Medicina Experimental de Ciencias, BMC, de la Universidad de Lund, 221 84 Lund, Suecia

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Resumen
Antecedentes

El parto prematuro es la causa principal de la mortalidad neonatal y la morbilidad. No habrá parto prematuro sin un ablandamiento del cuello uterino. El óxido nítrico (NO), se muestra un mediador plazo de maduración cervical. El objetivo de este estudio fue investigar la expresión mRNA de los tres isómeros de NO synthases (NOS), y para identificarlos por inmunohistoquímica humanos en el cuello uterino en el parto prematuro en comparación con el plazo.

Métodos

Los tres isómeros de NOS inducible (iNOS), endotelial (eNOS) y neuronales (bNOS) - fueron investigados en el cuello uterino humano. La expresión de ARNm se determinó a través de Real-Time Multiplex RT-PCR. La localización de synthases en el tejido del cuello del útero se analizaron mediante inmunohistoquímica. Se obtuvieron biopsias de cuello uterino de 4 grupos de mujeres sin signos clínicos de infección: prematuros (PTL), el término del trabajo (TL), sin trabajo de parto prematuro (PTnotL) y no en el plazo de trabajo (TnotL) de los pacientes. Uno-Way ANOVA, Kruskal-Wallis, "t" de Student o la prueba de Mann-Whitney se aplicaron en su caso para determinar diferencias estadísticamente significativas entre los grupos.

Resultados

Los pacientes en trabajo de parto prematuro tenían significativamente (p <0,01) los niveles de ARNm más alto de todos los tres isómeros NOS comparación con los de término del trabajo. Mujeres sin trabajo, independientemente de la edad gestacional, por lo tanto, con inmaduras cérvix, había eNOS mRNA significativamente menor en comparación con los niveles a los que están en trabajo de parto (p <0,01). Inmunoreactividad para los tres NO synthases se observó en cada muestra examinada en todos los grupos. La tinción bNOS fue el más destacado.

Conclusión

Los niveles de mRNA fueron mayores en el grupo de trabajo de parto prematuro en comparación con las mujeres a término el trabajo. El aumento significativo de la eNOS mRNA expresión, la de inmaduras a la situación favorable del cuello uterino durante el trabajo, puede indicar un papel de la eNOS y apoya el papel del NO en el proceso de maduración cervical. Todos los tres synthases se identificaron por inmunohistoquímica en todos los grupos de estudio.

Antecedentes

La frecuencia de los nacimientos prematuros no ha cambiado significativamente durante las últimas dos décadas y de los mecanismos básicos subyacentes a la iniciación de ambos prematuros y de término la maduración cervical y la mano de obra siguen siendo desconocida [1]. No hay tratamiento eficaz para el trabajo de parto prematuro (PTL) que reduce la mortalidad perinatal e inhibe pretérmino existe [2]. Para llevar a cabo un parto prematuro el contracciones miometriales deben coordinarse con una maduración prematura del cuello del útero. La remodelación cervical detectada clínicamente, consta de ablandamiento, effacement y dilatación. Esto corresponde a grandes cambios en la matriz extracelular (ECM), la composición y la remodelación tisular por enzimas proteolíticas [3, 4]. La maduración cervical procedimiento es que se considere una reacción inflamatoria. Los 100 veces más de interleukines es probable que se encargan del reclutamiento de leucocitos / afluencia de glóbulos blancos desencadenar el proceso inflamatorio [1, 5, 6].

Muchos estudios han puesto de manifiesto la importancia del óxido nítrico (NO) como un importante mediador en numerosos procesos biológicos en los humanos. NO controles de los elementos clave que permiten la reproducción y la producción es esencial para mantener el embarazo [7]. Es sintetizado por cualquiera de los tres NO synthases (NOS) - inducible (iNOS), endotelial (eNOS) y neuronales (bNOS) - desde el aminoácido L-arginina y oxígeno a una cantidad igual de NO y citrulline [8]. Dos de las enzimas NOS, bNOS y eNOS, se expresó y constitutivamente dependiente de calcio. La tercera enzima, iNOS, es independiente de calcio y puede ser inducida por diversas citoquinas. INOS NO sintetiza en grandes cantidades durante un largo período de tiempo [9]. BNOS y eNOS se producen en cantidades más pequeñas que la iNOS.

El papel del NO como un mediador inflamatorio en la maduración cervical es compleja, pero parece ser importante - NO se ha propuesto para actuar como el efector final en este proceso [10]. Los resultados de estudios anteriores son contradictorios, pero los tres NO synthases han sido identificadas en el cérvix humano al término del embarazo [11 - 14]. NO amplifica la cascada de citoquinas en la respuesta inflamatoria aguda [15]. Junto con PGE 2 y IGP es el más potente vasodilatador y estimula las metaloproteinasas de la matriz (MMPs), la actividad en el tejido del cuello del útero [15, 16]. En 1997 Chwalisz Garfield y planteó la teoría de que NO local de la permeabilidad vascular inducida por la infiltración de leucocitos, la activación de MMPs y también modulación de la síntesis de proteoglicanos durante la remodelación del cuello del útero [17]. NO-administrado localmente donantes inducir la maduración cervical en los seres humanos [18]. Se ha comprobado que para aumentar la enzima COX-2 que la actividad de lo que hasta regula la síntesis de prostaglandinas y la conduce a un aumento de las emisiones de PgE 2 y PgF 2 α [19]. Las prostaglandinas pueden ser los mediadores de NO impulsado por la maduración cervical y dilatación [1]. El cervical bNOS la expresión de la proteína ha demostrado ser significativamente superior al término del trabajo (TL) en comparación con el período no en el trabajo [12, 14]. Estos datos contradicen el estudio de Ledingham et al. Que no se pueda demostrar ninguna bNOS aumento de la expresión de la proteína después de la aparición de la mano de obra en comparación con el primer trimestre del embarazo [13]. Un aumento de la expresión de iNOS mRNA ha sido registrada en el tejido del cuello uterino en el plazo de trabajo en comparación con el estado que no están embarazadas [11]. Un estudio publicado recientemente ha demostrado que el óxido nítrico, los niveles de metabolitos en el líquido cervical en la mujer va más allá de término fue 4,5 veces (p <0,001) más baja que en la entrega de la mujer a término [20].

Para nuestro conocimiento, no existen estudios de investigación de EEUU que hasta ahora expresión y localización de los prematuros en la maduración cervical.

El objetivo de nuestro estudio fue investigar la expresión del mRNA y de proteínas de localización de los tres isómeros de NOS humanos en el cuello del útero durante el parto prematuro, y compararla con las condiciones en plazo. Por lo tanto, estima que la expresión de mRNA bNOS, eNOS y iNOS, mediante Real-Time Multiplex RT-PCR y synthases identificados y localizados mediante inmunohistoquímica.

Métodos
Material

Un total de 42 mujeres que se someten a los embarazos simples se incluyeron en el presente estudio. Los dos grupos de prematuros incluyeron 15 mujeres en trabajo de parto prematuro, (PTL) y 5 en prematuros no en el trabajo (PTnotL), por cesárea antes de que comience el trabajo de parto. Parto prematuro se define como la entrega antes de la 37 ª semana de gestación. Cada grupo de prematuros fue comparado con el mismo grupo en el largo plazo: 14 de la mujer en el plazo de trabajo (TL) y 8 en el plazo no trabajo en la cesárea (TnotL). No se encontraron diferencias significativas en relación con la edad materna, paridad y los partos prematuros anteriores entre los cuatro grupos.

Los grupos de trabajo se activa en el trabajo y demostró una dilatación de las pupilas maduras cérvix> 4 cm. En todos los pacientes por cesárea a la evaluación de la dilatación cervical se estableció inmediatamente antes de la cirugía, por el mismo obstetra (SAT) a través de un examen vaginal digital. Las mujeres en trabajo de parto prematuro o bien fueron obtenidos por vía vaginal o por cesárea de emergencia debido a malpresentation. La mujer en el plazo de trabajo también fueron entregados ya sea por vía vaginal o por cesárea de emergencia debido a que amenazan la asfixia fetal. La mujer en el trabajo no había inmaduras cérvix (Obispo Resultado <5p), y fueron por cesárea antes de que comience el trabajo de parto. Las indicaciones fueron prematuros o sospecha ablatio intra-retardo del crecimiento y el término indicaciones fueron la presentación podálica, humanitarias o de desproporción. Los pacientes con preeclampsia, la diabetes u otras enfermedades sistémicas fueron excluidos del estudio. En todas las mujeres signos clínicos de infección estuvieron ausentes, durante el parto, así como durante el período postpartal.

Este estudio se realizó después de recibir la aprobación del Comité de Ética local del Instituto Karolinska (Ref. N º 97-089) y el consentimiento informado de cada uno de los temas.

Inmediatamente después del parto, una biopsia del labio cervical anterior se tomó transvaginally (en la posición de las 12 en punto), con tijeras y pinzas. Nuestro grupo ha aplicado desde el 25 de años de esta técnica para obtener muestras incluidas escamosa y epitelio cilíndrico, vasijas, glándulas y ECM. Estas muestras fueron congeladas inmediatamente en nitrógeno líquido y se almacenan en lo sucesivo a los -70 ° C.

Debido a la limitada cantidad de tejido de cada mujer, todos de los diferentes análisis no puede ser realizada en cada muestra.

Determinación de mRNA
Real-time RT-PCR multiplex

El ADNc de las secuencias de humano iNOS, eNOS, y bNOS se obtuvieron de la base de datos de nucleótidos Entrez http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/; base de datos de números de acceso se muestran en el cuadro 1]. Primers específicos y sondas Taqman ® fueron diseñados utilizando software Primer Express ® (AppliedBiosystems; primers y sondas se muestran en el cuadro 1]. Alineación a otros genes humanos conocidos fue excluido por ejecutar un BLAST http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/.

Los experimentos se llevaron a cabo utilizando la ABI Prism ® 7700 Secuencia de detección del sistema (TaqMan ®) de AppliedBiosystems (Foster City, CA, EE.UU.).

Las condiciones de múltiplex RT-PCR fueron optimizadas y realizó de la siguiente manera (todos los productos de AppliedBiosystems Inc, Foster City, CA, EE.UU.) con la expresión de ARN ribosomal que actúa como patrón interno:

1 × TaqMan Buffer, 5,5 mM de MgCl 2, 300 μ M dATP, 300 μ M dCTP, 300 μ M dGTP, 600 μ M dUTP, 1,25 U AmpliTaq Gold ADN polimerasa (PCR TaqMan Core Kit de reactivos, Parte # N808-0228), 25 nM ribosomal RNA - Primer FWD, REV-Primer, y la sonda (Parte # 4308329), 20 U RNAse inhibidor (Parte # N808-0119), 12,5 U MultiScribe la transcriptasa reversa (Parte # 4311235). El primer objetivo del ARN y la sonda concentraciones utilizadas se muestran en el cuadro 1.

Transcripción reversa se realizó a los 48 ° C (30 min), seguido de la activación térmica de la DNA polimerasa (95 ° C, 10 min). PCR se llevó a cabo en funcionamiento 50-60 ciclos (desnaturalización: 95 ° C [15 s]; recocido: 60 ° C [1 min]).

El umbral de los ciclos (C T), en la que un aumento de la fluorescencia reportero por encima de la línea de base primera señal puede ser detectada, se determinó.

Las cantidades relativas de la meta de ARN se normalizaron a las cantidades de ARN ribosomal usando el comparativo (ΔΔ T C) Método según la TaqMan usuario Boletín # 2.

Inmunohistoquímica

Debido al pequeño tamaño de las biopsias, análisis de inmunohistoquímica se llevaron a cabo en sólo dos muestras en cada grupo de estudio.

Congelados secciones, 8 μ m de espesor, fueron montadas en gel de la cromatina revestida de láminas de vidrio. Las secciones fueron fijadas en el 2% paraformaldehide de búfer en fosfato salino (PBS), pH 7,4, durante 20 minutos, lavados en PBS, y después secadas al aire y se almacena a -20 ° hasta el análisis. Muestras de tejido fueron teñidas utilizando la avidina-biotina (ABC)-peroxidasa método. Cuando se analizaron rewashed en PBS por tres veces de cinco minutos. La actividad de peroxidasa endógena fue eliminado por el pre-tratamiento con 0,3% de peróxido de hidrógeno en metanol durante 30 minutos seguido por el lavado en PBS / BSA (0,05%).

Las diapositivas se incubaron durante la noche con el primer ratón anticuerpos monoclonales para iNOS, eNOS y bNOS 5 ug / ml (Transduction Laboratories, Lexington, Kx) en PBS que contenía 0,05% de albúmina sérica bovina. Posteriormente las secciones se incubaron directamente con el anticuerpo secundario (de caballo anti-ratón) diluido en el bloqueo de los sueros. Las secciones fueron lavadas con PBS / BSA, incubadas con ABC-complejo de 45 minutos, y luego rewashed en PBS / BSA. La reacción fue desarrollado utilizando el kit-DAB (diaminobenzidine) de Vector (Burlingame, CA, EE.UU.). Las láminas fueron lavadas en agua destilada. Counterstaining se realizó con el 10% del Haematoxylin Mayer por 3-4 minutos, posteriormente, las secciones se lavaron en agua. Para el control, fueron teñidos de esa forma, omitiendo la primaria de anticuerpos. Las diapositivas fueron montadas con glycerolgelatin. Para todos los exámenes inmunohistoquímicos la inmunoreactividad se verificó en el epitelio escamoso, el epitelio glandular, el estroma y endotelio vascular. Las diapositivas se clasificaron por tres observadores independientes utilizando la microscopia de luz. Tinción fue localizado, pero no se hizo ningún intento de cuantificar en la tinción de los diferentes grupos.

Análisis estadístico

Outliers fueron retirados de acuerdo con el criterio de Chauvenet. Los datos se verificaron luego de la normalidad. Uno-Way ANOVA seguido de múltiples comparaciones pairwise (Turquía) se realizó para determinar las diferencias entre los grupos cuando los datos se distribuyen normalmente, cuando los datos no se distribuyeron normalmente, de Kruskal-Wallis One-Way ANOVA seguido de múltiples comparaciones pairwise (Dunn's) se Utilizados. Para la comparación de sólo el 2 grupos, t-test o Mann-Whitney U-test se utilizaron en su caso. Un valor de p inferior a 0,05 se considera que indican significación estadística.

Resultados
Determinación de mRNA

Real-Time Multiplex RT-PCR confirmó la presencia de mRNA de cada una de las tres isoformas de la enzima NOS en todas las biopsias.

Inmunohistoquímica

Como se mencionó anteriormente, sólo dos se examinaron muestras de cada grupo debido a la falta de material. Los tres isoenzimas fueron identificados y localizados en todas las muestras. El control negativo secciones para cada una de las synthases no mostró tinción. Aunque, no fue posible hacer la cuantificación de inmunoreactividad, pero hay algunas observaciones que se quiere centrarse en.

INOS se encuentran en el epitelio de muchas de las muestras y algunos iNOS se encontró en el estroma en todos los grupos de estudio (Fig. 2]. Hay una sola muestra que muestran iNOS en el endotelio vascular o en las células glandulares.

ENOS y prominente fue constitutivamente expresadas en el endotelio vascular en todos los grupos sin ningún tipo de diferencias visuales entre los que trabajan y no trabajan los grupos (Fig. 2].

BNOS mostró la más impresionante tinción de los tres isoenzimas, localizado en el estroma, el epitelio glandular y de la membrana basal del epitelio escamoso. La localización predominante fue el estroma. La impresión visual es que bNOS se expresó más en el que trabajan los grupos (Fig. 2].

Discusión

A pesar de la intensa investigación a través de los años, el complejo, pero bien coordinado de los mecanismos que controlan la aparición y el mantenimiento de la mano de obra sigue siendo unrevealed [1, 23 - 25]. Hasta ahora la investigación sobre el parto pretérmino ha sido principalmente se centró en la miometriales actividades, y sobre posibles inhibidores de trabajo de parto prematuro.

A nuestro entender, este es el primer estudio de investigación NOS isómeros expresión prematuros en el cuello del útero.

Nuestra hipótesis es que la remodelación se produce a cervical prematuro, así como a término. Parece pertinente para creer que una mujer de entrar en trabajo de parto prematuro se inicia a partir de un estado más inmaduras cervical de una mujer cerca de entrar en el trabajo o en el plazo [26]. Para lograr este objetivo más amplio de una remodelación muy inmaduras cervical estado, mayor nivel de iNOS, eNOS y bNOS mRNA en prematuros serían pertinentes. En este sentido, analizar las biopsias de las mujeres con parto pretérmino, sin signos de infección. Se identificó la presencia de los tres isómeros NOS mRNA pretérmino y término en el cuello del útero antes y después del inicio del trabajo. El hallazgo más destacado fue mayor en los niveles de mRNA de trabajo de parto prematuro en comparación con el plazo de trabajo.

La eNOS mRNA nivel fue significativamente mayor para el grupo de prematuros en el trabajo en comparación con todos los demás grupos. La eNOS mRNA niveles en la mujer no en el trabajo, por lo tanto, con inmaduras cérvix, fueron significativamente inferiores en comparación con los de trabajo, independientemente de la edad gestacional. Estos resultados pueden indicar una función para eNOS en la final de la maduración cervical muy ambos prematuros y plazo.

La iNOS mRNA niveles eran bajos, en general en todos los grupos, que muestran el valor más bajo en el término grupo de trabajo y el valor más elevado en el grupo de trabajo de parto prematuro. Sólo hemos encontrado dos trabajos anteriores, el análisis de iNOS mRNA y los niveles de eNOS en el cuello del útero humano embarazadas [11, 27]. Tschugguel et al. Señaló iNOS mRNA niveles más altos en el posparto en comparación con el grupo de no embarazadas controles mientras Yoshida et al [27] identificado tanto iNOS y eNOS mRNA en el primer trimestre cuello uterino. En el estudio de Ledingham et al. Que trabajan y no trabajan los pacientes fueron comparados a término el embarazo y la expresión de la proteína fue examinado por Western blot e inmunohistoquímica, sin diferencias de los tres synthases, iNOS, eNOS y bNOS, que se encuentra [13]. Estos diferentes resultados revelan la compleja historia de la mano de obra en comparación con la más uniforme proceso descrito en otras especies [7, 28].

Nuestros resultados mostraron niveles de mRNA bNOS a ser mayor en los prematuros en comparación con los grupos de plazo. Las mujeres en trabajo de parto prematuro tenían significativamente más altos niveles de mRNA bNOS en comparación con el mismo grupo a término. Curiosamente, al comparar la mano de obra y no en los grupos de trabajo en el plazo prematuros y pacientes, respectivamente, encontramos que los grupos de trabajo no tuvieron mayor expresión mRNA bNOS niveles. Esto contrasta con el estudio de Bao et al. Donde una tendencia al alza de bNOS mRNA por RT-PCR durante el trabajo en comparación con el trabajo no fue observado.

La inmunoreactividad del NO synthases había diferentes localización. INOS fue identificado en el estroma y en el epitelio. Esto está en consonancia con las conclusiones anteriores [11, 14, 27]. Por otro lado, sólo se encuentran localizadas a la iNOS endotelio vascular en muy pocas secciones que Ledingham et al. Mostró iNOS proteína localizado en el endotelio vascular en general [13]. Las diferencias observadas pueden ser debidas al hecho de que Ledingham et al. Utilizan parafina-incrustados secciones de tejido cervical mientras que en nuestro estudio, al igual que Tschugguel et el. Y Yoshida et al. Utilizado cryosections. La eNOS tinción específica fue localizado en el endotelio de todos los grupos, que cuenta con el apoyo de investigaciones anteriores [11, 13, 14, 27].

BNOS mostró la más impresionante inmunoreactividad en nuestro estudio. Fue localizado al estroma, el epitelio glandular y en la membrana basal del epitelio escamoso. Estas observaciones de acuerdo con las conclusiones anteriores por Bao et al. A saber, los estudios sobre el tejido del cuello del útero de las mujeres embarazadas y de no [12]. Nuestros datos difiere de la de Ledingham et al. Que no pudo identificar bNOS glándulas en el cuello del útero [13]. Tschugguel et al no pudieron identificar cualquier bNOS a todos en el tejido cervical, pero esto puede ser debido al hecho de que se utilizó un anticuerpo policlonal, al tiempo que utiliza un anticuerpo monoclonal [11].

Una posible preocupación con respecto a la inmunohistoquímica análisis es que la interpretación de la localización de los diferentes NO synthases podría haber sido más fiable si un mayor número de biopsias se han estudiado. Debido a la escasez de material sólo dos biopsias de cada uno de los cuatro grupos se analizaron en este estudio.

En este estudio se ha tratado de incluir a las mujeres sin signos clínicos de infección, ni durante el trabajo de ejecución o de la entrega ni durante el puerperio. Sin embargo, es bien sabido que una infección sistémica o intrauterino puede causar un parto prematuro y la mano de obra [29]. En los estudios de casos a menudo muestra el aumento de la respuesta de citoquinas y sobre regulación de la síntesis de citocinas en comparación con el plazo de trabajo no infectadas. En Suecia, sólo alrededor del 25% - en un máximo - de los nacimientos prematuros parece tener un origen infeccioso, pero en otras partes del mundo, se estima que la infección se asocia con trabajo de parto prematuro / parto, en tanto como el 40% de los casos [30]. Como causal de la infección de trabajo de parto prematuro y el parto es más frecuente cuanto más baja es la edad gestacional, así como en prematuros rotura prematura de membranas [31].

Un nuevo enigma sobre la base de las conclusiones anteriores por nuestro grupo y otros es que una parte importante sobre regulación de los parámetros inflamatorios, citocinas, quimiocinas y MMPs son vistos también en vaginal normal de trabajo a término cuando no está presente la infección [1, 11, 32 - 35 ].

Es bien sabido que las citocinas, quimiocinas, diferentes MMPs, prostaglandinas, Cyclooxygenas (COX), y NO son los mediadores de la inflamación. La extensa infiltración de las células inmunes, como los glóbulos blancos, neutrófilos y macrófagos en el estroma cervical producir citoquinas pro-inflamatorias y collagenases que promover y acelerar la degradación de la ECM. Las acciones de las prostaglandinas y el óxido nítrico se activan por estas reacciones en cascada y lleva a la madurado plenamente cuello uterino y la inducción del trabajo [5, 19, 22, 32, 33, 36 - 38].

Donantes de óxido nítrico son potentes cervical maduradores y la sobre regulación de NO por las citocinas proinflamatorias es propuesto para representar a la vía común final de la maduración cervical [7, 10, 15, 18 - 20]. NO estimula directamente la COX-II, y junto con el aumento de las citoquinas proinflamatorias IL-1, TNF-alfa e IL-8 resultados es el aumento de la producción de prostaglandina.

La mayor cantidad de macrófagos se asocia con una mejora de la actividad iNOS [13]. Una fuerte expresión de ARNm y proteínas bNOS en el estroma cervical a término en comparación con el de la no trabajan o no embarazadas estado es también visto [12, 39].

Este estudio reveló una frecuencia de bNOS en el cuello uterino durante el embarazo y el trabajo, que está de acuerdo con nuestras conclusiones anteriores de que el cuello uterino, en contraste con el útero, es bien inervadas durante el embarazo y el trabajo. El inmune relacionados con el proceso de maduración cervical puede estar regulada por la señalización neuronal por diferentes neurotransmisores [40, 41]. Yellon et al. También planteó la cuestión de por qué ha fracasado el tratamiento con antibióticos, ya sea para prolongar el trabajo o reducir la tasa de nacimientos prematuros. Teniendo en cuenta la teoría de que la remodelación de cuello uterino consiste en la activación de células inflamatorias inmunes es lógico que los antibióticos no tienen ningún efecto, ya que no afectan el tráfico de células inmunes. Por lo tanto, parece plausible que el rápido final de la maduración cervical no está relacionado a una infección exógena sino que se parte de una reacción inflamatoria fisiológica. Este proceso se ha registrado en el endometrio durante la menstruación, así como en el útero a la involución posparto [25, 42, 43].

Conclusión

Todos los tres isómeros de EEUU que se identificaron en el cuello del útero en humanos prematuros. La expresión mRNA de la NOS isómeros fue significativamente mayor en el grupo de prematuros en el trabajo en comparación con las mujeres a término el trabajo. Además, la eNOS mRNA nivel fue significativamente mayor durante el trabajo en comparación con el no en el trabajo, independientemente de la edad gestacional, que puede indica un posible papel de eNOS, en el final de maduración cervical.

En conclusión, nuestros resultados muestran diferencias en el pretérmino y término de la expresión mRNA NOS. Otros estudios sobre pacientes con infecciones prematuros están motivados, para dilucidar las posibles diferencias en la expresión de NO en PTL infecciosas con génesis en comparación con idiopática PTL.

Contribuciones de los autores

SAT ha seleccionado y contratado a los pacientes, recogidos todas las biopsias, participó en el diseño del estudio, hizo una parte de la extracción de ARNm, el manuscrito redactado. HM llevado a cabo en tiempo real de RT-PCR, realizó el análisis estadístico, estuvo involucrado en el análisis y la interpretación de datos de ARNm. AK participó en el análisis y la interpretación de los datos, redactó el manuscrito. REG participado en el diseño del estudio, discusión de los resultados, la redacción del manuscrito. BB participó en el diseño del estudio, la extracción de ARNm, la discusión de los resultados, la redacción del manuscrito. AM participó en el diseño del estudio, la extracción de ARNm, la discusión de los resultados y la revisión del manuscrito. GEO participado en el diseño del estudio, el análisis y la discusión de los resultados, la redacción y la revisión crítica del manuscrito. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

Agradecimientos

Los autores de este artículo quisiera dar las gracias a Berit Ståbi por la ayuda con inmunohistoquímica.

El presente estudio fue posible por el apoyo financiero de El sueco de Investigación (GEO 349-2002-7189 Grant, AM 7479) y El Instituto Karolinska Fondos.