BMC Complementary and Alternative Medicine, 2005; 5: 17-17 (más artículos en esta revista)

Acciones de protección de un extracto crudo de hexano Pterodon emarginatus frutas y nitrosative contra el estrés oxidativo inducido por ejercicio aguda en ratas

BioMed Central
BA Paula Fernanda (fbapaula@yahoo.com.br) [1], Cibele MCP Gouvêa (cibelegouvea@hotmail.com) [2], Patrícia P Alfredo (patriciaalfredo@yahoo.com.br) [3], Ione Salgado (ionesm @ Unicamp.br) [4]
[1] Departamento de Análises Clínicas e Toxicológicas, Escola de Farmacia e Odontologia de Alfenas (EFOA), Alfenas, MG, 37130-000, Brasil
[2] Departamento de Ciências Biológicas, Farmacia e Escola de Odontologia de Alfenas (EFOA), Alfenas, MG, 37130-000, Brasil
[3] Facultad de Fisioterapia, Universidade de Alfenas, MG, 37130-000, Brasil
[4] Departamento de Bioquímica, Instituto de Biologia, Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP), Campinas, SP, 13083-970, Brasil

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Resumen
Antecedentes

El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto de un extracto crudo de hexano (HCE) de Pterodon emarginatus sobre el estrés oxidativo y nitrosative inducida en el músculo esquelético, hígado y cerebro de ratas ejercerse plenamente.

Métodos

Adulto de sexo masculino ratas fueron sometidas a graves ejercicio normalizado de las contracciones de la tibialis anterior (TA) músculo (100 Hz, 15 min) y tratados oralmente con la HCE (una vez o tres veces con una dosis fija de 498 mg / kg), y antes de Después del ejercicio agudo. Las concentraciones séricas de creatina quinasa actividad fue determinada por un método cinético y la infiltración de macrófagos análisis histológico de músculo TA. Peroxidación lipídica se midió como malondialdehido (MDA). La producción de óxido nítrico se evaluó midiendo la formación de nitrito, utilizando reactivo de Griess, de nitrotirosina y fue evaluada por el Western Blot.

Resultados

Las concentraciones séricas de creatina quinasa actividades en los controles (111 U / L), el aumento de 1 h después de ejercicio agudo (443 U / L). Agudo ejercicio también aumentó la infiltración de macrófagos en el músculo TA; los niveles de peroxidación lipídica en el músculo TA (967%), hígado (55,5%) y el cerebro (108,9%), así como los niveles de nitrito en el 90,5%, 30,7% y 60% , Respectivamente. El patrón de formación de nitrotirosina también se vio afectada por graves ejercicio. El tratamiento con infiltración de macrófagos disminuyó HCE, la peroxidación lipídica, el nitrito de producción y los niveles de nitrotirosina a los valores de control.

Conclusión

Aguda inducida por el ejercicio funcional de la estimulación eléctrica en ratas dio lugar a incremento de la peroxidación lipídica, los niveles de nitritos y nitrotirosina en el cerebro, el hígado y el músculo esquelético. El ejercicio de protocolo, que implicó la contracción muscular excéntrica, también causó algunos trauma muscular, asociado a un exceso de esfuerzo, dando lugar a la inflamación. El extracto de P. Emarginatus abolido la mayoría de estos procesos oxidativos, lo que confirma la alta actividad antioxidante de este petróleo que se utilizan en infusiones de la medicina popular en contra de los procesos inflamatorios.

Antecedentes

Aunque el ejercicio tiene efectos saludables, arduos o acostumbrados ejercicio físico puede causar morfológicos insulto a la del miocardio y del músculo esquelético que participan en la actividad, así como a otros órganos [1]. Tejido daños resultantes de aguda o crónica ejercicio va de fibra perturbación considerable daño a subcelulares [2, 3]. Tales daños pueden surgir de estrés oxidativo causado por especies reactivas de oxígeno (ROS), que trate de obtener respuestas diferentes, en función del órgano o del tejido y sus niveles de antioxidantes endógenos [1]. En respuesta a la contracción excéntrica daño muscular inducido, neutrófilos y macrófagos migran al sitio, infiltrarse en el tejido muscular, activación de las citoquinas, y producir más ROS [4, 5]. Estas actividades pueden abrumar las defensas antioxidantes naturales de la célula y dar lugar a la peroxidación lipídica y el retraso en la aparición de daño muscular [4, 5]. El aumento de los niveles de peroxidación lipídica se han detectado después de sprint ejercicio en muestras de sangre de los atletas entrenados sprint [6] y en el músculo esquelético de las ratas después de sprint y agudo ejercicio [3, 5].

Agudo ejercicio también aumenta el óxido nítrico (NO) y la formación de NO sintasa (NOS) actividad [7, 8]. Reid [9] propone que, además de ROS, NO puede desempeñar un papel importante en el músculo esquelético, y los músculos que intervienen en la contracción repetitiva NO puede producir suficiente para influir en el equilibrio oxidante-antioxidante. NO ha sido implicado en el control metabólico de los músculos por sus efectos en la entrega de sangre, la captación de glucosa, la fosforilación oxidativa, la contractilidad, y de excitación-contracción de acoplamiento [10]. Sin embargo, la exposición a reactivas de oxígeno y nitrógeno especies (RONS) puede causar la peroxidación lipídica en las membranas celulares, que a su vez puede generar especies que dañan las células y proteínas promover su degradación [11]. Estas acciones pueden perjudicar el rendimiento, la integridad y el metabolismo de las células musculares [4]. Además del aumento de la peroxidación lipídica siguiente ejercicio aguda, los efectos de nitration es necesario considerar, sobre todo porque tirosina nitration es frecuentemente ligado a la proteína alterada en función de las enfermedades inflamatorias [12]. Protein nitration Se ha sugerido que un producto final de los óxidos de nitrógeno altamente reactivas intermedias (por ejemplo, peroxinitrito) formado en las reacciones entre el NO y oxígeno derivados de especies como la superóxido. Sin embargo, Gunther et al. [13] se describe un mecanismo de NO dependiente de tirosina nitration que no requiere de la formación de óxido de nitrógeno altamente reactivas intermedias, tales como el dióxido de nitrógeno o de peroxinitrito. Peroxidasas también pueden oxidar el nitrito de dióxido de nitrógeno radical, que puede causar nitration de tirosina y residuos de tirosina en proteínas [14].

Pterodon emarginatus Vog. (Leguminosae, Papilonaceae), popularmente conocido como sucupira branca, es una especies de árboles nativos de amplia distribución en todo el centro de Brasil, en los estados de Goiás, Minas Gerais y São Paulo. Sucupira infusiones se usan en la medicina popular para el tratamiento de reumatismo, dolor de garganta y la parte posterior del hueso de los problemas [15]. Pterodon ha cercaricidal aceite de la semilla de las actividades [16], una aguda acción antiinflamatoria en ratas [17] y un efecto analgésico en Ratones [18]. El aceite de la semilla contiene diterpenes y furanditerpenes [19]. El más ubicuo furanditerpene de p. Emarginatus frutas es de 6 α, 7β-di-hydroxyvouacapan-17 β-oic ácido [19], la actividad antiinflamatoria de los cuales se ha evaluado en modelos experimentales de roedores pata edema inducido por carrageenin nistatina y [17, 20].

Aunque ha habido una serie de informes sobre la actividad antiinflamatoria de Pterodon petróleo, no ha habido una investigación de su actividad antioxidante. El objetivo del presente trabajo fue investigar la actividad antioxidante y el efecto sobre la producción de nitrito de hexano extracto crudo de P. Emarginatus frutos muy ejercido en ratas.

Métodos
Animales

El presente estudio es en el cumplimiento de los principios y directrices del Instituto Brasileño de Experimentación Animal (COBEA) y ha institucionales aprobación ética por el Comité de Ética de Experimentación Animal, Escola de Farmacia e Odontologia de Alfenas / Centro Universitario Federal (Efoa / Ceufe ; Permiso: 15/04/2004).

Hombre ratas Wistar (270 ± 20 g) fueron obtenidos de la Efoa / Ceufe. Las ratas fueron alojados en una sala de temperatura controlada en un 12 h de luz / oscuridad calendario con los alimentos y el agua disponible ad libitum. Las ratas fueron asignados a seis grupos experimentales: (1) grupo de control descansado, (2) ejerce plenamente grupo; (3) descansado grupo tratado con p. Emarginatus extracto crudo de hexano (HCE), (4) muy ejerce grupo tratado con la p. Emarginatus HCE 0,5 horas antes del ejercicio, (5) muy ejerce grupo tratado con la p. Emarginatus HCE 0,5 horas después del ejercicio (6) y ejerce plenamente grupo tratado con tres administraciones de HCE dado a las 24 h, 12 h, y 0,5 horas antes del ejercicio. Las ratas se sacrificaron 1 h, 6 h y 48 h HCE después de la administración (grupo 3) o después del ejercicio agudo (grupos 2, 4-6). Para la determinación de los niveles de CK ratas fueron sacrificados de inmediato o 1 h, 6 h y 48 h después del ejercicio. Para cada tratamiento, 8-10 ratas fueron utilizados, tal como se especifica en la figura de leyendas.

Agudo ejercicio

Las ratas fueron muy funcional ejercida mediante la estimulación eléctrica para producir uniformes de la activación repetitiva de la rápida tibialis anterior (TA) muscular, de acuerdo con Matsuura et al. [21] con modificaciones. En pocas palabras, los animales fueron en caja cuadrada y dos electrodos (1 cm 2) Luego se fija en la piel de las piernas de su derecho a extremos proximal y distal del músculo TA. TA músculo es estimulado eléctricamente (Neurodyn II-Ibramed) a través de un electrodo con 10 s pulsos cuadrados de onda bifásica y interpulse de 10 s de 5 V durante 10 min. Estimulación de frecuencia de 100 Hz, con una sobre-off de 1:1.

Extracto de una planta de preparación y administración a ratas

Pterodon emarginatus Vog. Frutos se cosecharon en el estado de Minas Gerais, Brasil. Un extracto crudo de hexano (HCE) se preparó de acuerdo con Carvalho et al. [20]. En pocas palabras, los frutos son de tierra, en presencia de hexano usando una batidora industrial y luego colocado en una percolación a temperatura ambiente y, sucesivamente, se lava con hexano. La extracción de líquido se recogió, filtrada y concentrada rotatorios por evaporación bajo presión reducida. El resultado HCE tenía un carácter aceitoso y una densidad de 0,98 g / mL y se administra por vía oral (por sonda) a las ratas, en una o tres dosis a 498 mg / kg de peso cada uno.

Las concentraciones séricas de creatina quinasa (CK) y lactato de la actividad a nivel determinaciones

Se obtuvieron muestras de sangre por punción cardíaca de ratones anestesiados, ya sea antes o después del ejercicio agudo. La actividad de CK en suero se determinó por un ensayo colorimétrico (Kit CK-NAC, de Bayer), en 340 nm, y se expresó en U / L, donde 1 U resultado en la phoshorylation de 1 mmol de creatina por min a 25 ° C. Las concentraciones de lactato sérico se determinaron por un ensayo colorimétrico a 550 nm, utilizando lactato oxidasa [22].

Análisis histológico

El tibialis anterior (TA) muscular fue retirado de todas las ratas y fija en el 4% (v / v) formalina, incluidas en parafina, cortadas longitudinalmente en secciones de 5 μ m y teñidas con hematoxilina-eosina. La densidad de los macrófagos y en la medida en fibra muscular daños se estimaron en el punto contando morfometría, utilizando 15 campos seleccionados al azar de 0,625 mm 2 por sección.

Medición de TBARS en el cerebro, el hígado y el músculo TA

Como un índice de daño oxidativo, peroxidación lipídica fue evaluada utilizando el nivel de ácido tiobarbitúrico sustancias de reacción (TBARS) prueba [23]. Cerebro, el hígado y el músculo TA se homogeneizada en cuatro volúmenes de 0,1 M buffer fosfato salino (PBS) y se centrifuga a 3000 g, 4 ° C, durante 10 min. Alícuotas (0,5 ml) de cada homogenado mezclado con 0,5 ml de una solución que contiene 2% de ácido tiobarbitúrico, 0,5 mL de HCl 25% y 45 μ l de 2% BHT (hidroxitolueno butilado). Las mezclas se calienta a 95 ° C durante 10 minutos y luego se centrifuga. El sobrenadante se transfirió a una cubeta de cuarzo y la absorción se midió a 532 nm. La absorción de los valores se transformaron en las concentraciones de MDA usando 1,1,3,3-tetraethoxypropane (TEP) como estándar.

Determinación de nitrito en el cerebro, el hígado y el músculo TA

Nitrito es un producto estable final de NO, y su concentración se determinó por el método de Griess [véase [24]]. Cerebro, el hígado y el músculo TA se homogeneizada en cuatro volúmenes, de 30 mM Tris-HCl buffer, pH 6,8, conteniendo 5 mM EDTA, 250 mM sacarosa, 30 mM KCl, 2% β-mercaptoetanol, PMSF (100 μ g / ml), benzamidine (5 μ g / ml), aprotinina (2 μ g / ml) y leupeptina (2 μ g / ml), y luego se centrifuga (12000 × g, 4 ° C, 15 min). Se determinaron las concentraciones de proteína por el colorante azul de Coomassie vinculante método [25] usando albúmina sérica bovina como estándar. Alícuotas (1,0 ml) de la homogeneizado se eliminaron y se diluye con 1,0 ml de reactivo de Griess (1% sulphanilamide, 2% de ácido fosfórico y 0,1% naphthyl etilendiamina dihidrocloruro). La absorbancia del cromóforo formado durante diazotization del nitrito con sulphanilamide y posterior acoplamiento con naphthylethelene diamine se midió a 545 nm. Apropiadas en blanco y controles se ejecutarán en paralelo.

Análisis Western Blot

Alícuotas (30 μ g) de la proteína de cerebro, el hígado y el músculo TA se ejecutan en un 9% mediante geles de sodio-dodecil sulfato de electroforesis en gel de poliacrilamida y fueron transferidas por electroforesis noche a la mañana, a 4 ° C, a las membranas de nitrocelulosa en 20 mM Tris, 192 mM glicina Y 20% de metanol. Las membranas fueron bloqueadas durante 1 h a 4 ° C en Tris-salina tamponada con 30% de Tween 20 y el 50% Tritón X-100 (TBSTT) con 1% de BSA. Los blots fueron incubadas durante 2 h con anticuerpos anti-nitrotirosina (1:1000) (Sigma) en TBSTT con BSA 1% a temperatura ambiente. Las membranas se lavaron cinco veces en TBSTT con 0,1% de BSA, y se incubaron durante 1 h conjugado con peroxidasa de cabra anti-IgG (1:2500) (Amersham) en TBSTT con BSA 1% a temperatura ambiente. Los blots fueron nuevamente lavadas cinco veces en TBSTT con 0,1% de BSA y luego visualizar utilizando un reforzada Chemiluminescence (ECL) sistema de detección (Amersham) [26].

Análisis estadístico

Los resultados se expresaron como el medio ± SE de la serie de mediciones (experimentos independientes) se muestra. Las comparaciones estadísticas se realizaron mediante ANOVA y la prueba de Tukey-Kramer, con P <P <0,05 indicando importancia.

Resultados
Agudo ejercicio aumenta la creatinina sérica, la actividad quinasa

Las concentraciones séricas de creatina quinasa (CK), el aumento de la actividad ejercida en ratas. Máxima actividad de CK fue visto 1 h después del ejercicio agudo y se mantuvo elevada hasta 48 h después del ejercicio (Fig. 1]. La concentración de lactato sérico aumentado también en el ejercido ratas (75,36 ± 1,48 mg / dL, n = 8) en comparación con los controles (54,67 ± 3,06 mg / dL, n = 8).

HCE reduce la infiltración de macrófagos en TA muscular aguda inducida por el ejercicio

Como se muestra en la Fig. 2, ejercicio intenso aumento de la infiltración de macrófagos en el tibialis anterior (TA) muscular. Mayor densidad se observó ya las 6 horas después del ejercicio y después de 48 horas todavía era elevada. Para nuestro estudio, hemos elegido un ejercicio que implicaba un protocolo polymetric (excéntrica) componente muscular. Ejerce, por tanto, carentes ratas experiencia tanto polymetric estrés oxidativo y, con este último causando algunos traumatismos musculares, asociados con el exceso de ejercicio, dando lugar a la inflamación. La administración oral de la HCE por sí solo no afecta a la densidad de los macrófagos en el músculo TA. Sin embargo, el aumento de la densidad de los macrófagos, que se observan en el músculo de TA muy ejerce ratas se redujo significativamente, cuando se administró la HCE 0,5 horas antes o después de 0,5 horas agudo ejercicio. Cuando la HCE se administró 0,5 horas después del ejercicio agudo, la densidad celular de los macrófagos reducido casi a los valores de control 48 horas después del ejercicio, indicando su eficacia contra el retraso de aparición de los traumatismos musculares.

HCE reduce la peroxidación lipídica en el músculo TA, el cerebro y el hígado aguda inducida por el ejercicio

La peroxidación lipídica, evaluada por la formación de TBARS (MDA), se evaluó en el cerebro, el hígado y el músculo tibialis anterior. Aumento de la peroxidación lipídica aguda después del ejercicio en todos los tejidos analizados (Fig. 3A]. TBARS formación de la más alta se observó en TA muscular, con un aumento del 967%, seguido de cerebro (109%) y el hígado (55,5%). El tiempo máximo en que la peroxidación lipídica se observó después del ejercicio difieren entre los tejidos - 48 h en el cerebro y las 6 horas en el hígado y el músculo TA. TA en el músculo, el MDA niveles todavía elevados después de 48 h (Fig. 3A].

Con base en los resultados se muestra en la figura 3A, se estudiaron los efectos de la HCE sobre la peroxidación lipídica en el músculo TA 6 h y 48 h después del ejercicio agudo. En el cerebro y el hígado, los efectos de la HCE se analizaron en 48 horas y las 6 horas después de ejercer aguda, respectivamente. El efecto de la HCE sobre la peroxidación lipídica fue evaluada por la administración del extracto antes de 0,5 horas y 0,5 horas después del ejercicio agudo. Estos tratamientos completamente disminuyó la peroxidación lipídica en el cerebro y los tejidos del hígado (Fig. 3B]. Sin embargo, en el músculo TA, la HCE es eficaz en la reducción de la peroxidación lipídica sólo 48 horas después del ejercicio agudo; de los niveles todavía elevados de MDA 6 h después de ejercicio agudo (Fig. 3C]. Luego examinó el efecto de las tres administraciones de una dosis fija (498 mg / Kg), de 24 h HCE dado, 12 h, y 0,5 horas antes de ejercer aguda. Este protocolo redujo significativamente la TA TBARS en el músculo 6 h después del ejercicio (Fig. 3C], lo que indica que este tratamiento es más eficaz en la reducción de la peroxidación lipídica aguda inducida por el ejercicio en el músculo TA, en comparación con un único protocolo de tratamiento.

HCE reduce los niveles de óxido nítrico en TA músculo, el cerebro y el hígado aumentado en un agudo ejercicio

Como se muestra en la Fig. 4A, la concentración basal de nitrito en el músculo TA era de siete y seis veces mayor que en el cerebro y el hígado, respectivamente. A pesar de esta diferencia, el aumento de ejercicio agudo de la producción por el nitrito de 60,0%, 30,7% y 90,5% en el cerebro, el hígado y el músculo TA, respectivamente. El máximo los niveles de nitrito en el cerebro, el hígado y el músculo se observaron TA 48 h, 6 h y 1 h después del ejercicio, respectivamente (Fig. 4A]. HCE Cuando se administró 0,5 horas antes o después de 0,5 horas agudo ejercicio, el nitrito de la producción disminuyó a los niveles basales en todos los tejidos (fig. 4B]. Los efectos de la HCE en la producción de nitrito se evaluaron en 1 h (TA muscular), 6 h (hígado) y 48 h (cerebro) después del ejercicio, ya que, en los tiempos en que encontró la máxima producción de nitrito en los respectivos tejidos (Fig. 4A] . El efecto de la HCE fue similar, con independencia de que se administra tres veces o una sola vez (datos no presentados).

HCE impide nitration del cerebro y por el aumento de las proteínas musculares agudos ejercicio

Western blot utilizando un anticuerpo específico para nitrotirosina puesto de manifiesto diferentes patrones de tinción para el cerebro (48 h después del ejercicio), el hígado (6 h después del ejercicio) y músculo TA (1 h después del ejercicio), que son compatibles con la nitration de uno o más residuos de tirosina De las proteínas (Fig. 5]. En el cerebro, otras dos bandas (66 y 51 kDa) fueron detectados en el ejercido ratas. La administración de tres dosis de HCE (498 mg / kg cada una), en vista de las 24 h, 12 h, y 0,5 horas antes del ejercicio agudo, prevenir la formación de estas bandas, lo que indica que el extracto impedido inducida por el ejercicio de nitrotirosina formación en el cerebro. En el hígado, no nitrotirosina se detectó en el control o la HCE administrados ratas, pero en ratas ejercido tres bandas (66, 55 y 45 kDa) fueron evidentes y el tratamiento con HCE no impidió la formación de nitrotirosina en este tejido. TA en el músculo, la pauta triple banda y una banda de 66 kDa se observaron en el control. Estas bandas fueron menos intensas en la HCE administrados ratas. La ejercido ratas mostró una intensa banda de 97 kDa, además de la banda de 66 kDa y el triplete. En TA músculo de HCE-ejercido ratas, el etiquetado de los 97 kDa fue abolida y la intensidad de la tripleta se redujo, lo que indica que el extracto impedido la formación de nitrotirosina. La banda de 97 kDa puede estar relacionado con la actividad en el fagocito TA muscular.

Discusión

En este trabajo se examinaron los efectos de un HCE de Pterodon emarginatus sobre el estrés oxidativo y nitrosative aguda inducida por el ejercicio. Considerando que un gran número de estudios han probado los efectos de las vitaminas y los minerales en la prevención de la oxidación en el ejercicio, hay muy poca información sobre el efecto de extractos de plantas sobre la peroxidación lipídica y la formación de óxido nítrico durante el ejercicio agudo.

Un aumento de CK en suero y en la infiltración de neutrófilos y macrófagos aguda después de ejercicio se ha informado en los seres humanos y los animales [27 - 29]. Sin embargo, existe controversia acerca de las relaciones entre la cinética de CK y la hora en la que el más prominente de células musculares de producirse daños. El grado de daño muscular que se considera proporcional a la carga muscular [4]. Nuestros resultados mostraron que el aumento de la actividad CK aguda después de ejercicio, con un máximo de 1 h después de la actividad sigue siendo elevada y durante al menos 48 h. El número de células inflamatorias aumentó después de las 6 horas y también persistía durante más de 48 h. La HCE impedido a la fibra muscular daño inducido por la estimulación eléctrica, con independencia de que se dio antes o después del ejercicio agudo, y esto se refleja en la disminución de la densidad de los macrófagos en la HCE administrados ratas.

Aguda inducida por el ejercicio de la peroxidación lipídica en todos los tejidos estudiados, aunque hubo diferencias en la cinética de la peroxidación lipídica entre los tejidos. Estas diferencias han sido descritos anteriormente y que parece depender de factores como el consumo de oxígeno, oxidante susceptibilidad y la activación de enzimas antioxidantes y otros sistemas de reparación [1]. El aumento de los niveles de peroxidación lipídica también se han detectado en el músculo esquelético de las ratas después de aguda [3] y de largo plazo submaximal [4] ejercicio. Sin embargo, supramáxima ejercicio ROS puede producir más y ser más perjudicial. De hecho, hay un mayor aumento de los TBARS después de ejercicio de alta intensidad en el que la producción de lactato es sustancial si se compara con el ejercicio de intensidad moderada [3, 30]. Por otra parte, una relación significativa entre la concentración plasmática de lactato y de la peroxidación lipídica durante el ejercicio progresivo incremento ha informado [31]. De acuerdo con esto, lactato aumenta la generación de radicales hidroxilo por la reacción de Fenton resultante en la peroxidación lipídica [32]. Así, el aumento de la concentración de lactato se ve aquí después de ejercicio agudo podrían cuenta del aumento de los niveles de TBARS detectado en el músculo esquelético.

El TBARS aumentaron también en el hígado después de las 6 horas y en el cerebro después de 48 h de ejercicio agudo. En cambio, Kayatekin et al. [33] encontraron que los niveles de TBARS en el hígado fueron sin cambios después de aguda sprint ejercicio. Parte de la razón para estos hallazgos contradictorios puede atribuirse a la utilización de diferentes tipos e intensidades de ejercicio.

Nuestros resultados también muestran que la peroxidación lipídica inducida por el ejercicio agudo fueron notablemente mayor en el cerebro que en el hígado. De hecho tejido cerebral tiene alto contenido de los sustratos oxidables, como los ácidos grasos poliinsaturados, pobres y de baja actividad de catalasa hierro vinculante capacidad que la hace particularmente expuestos a estrés oxidativo daño [1].

Aunque la HCE de p. TBARS emarginatus reducido en la formación de todos los tejidos, es más eficaz en el músculo TA cuando se administra en tres veces antes de ejercer. Así, la disminución de los niveles de MDA visto después de la administración de la HCE indica que el extracto tiene actividad antioxidante. El mayor nivel de HCE necesarios para prevenir la peroxidación lipídica en el músculo de asistencia técnica de acuerdo con los mayores niveles de peroxidación lipídica visto en este órgano después de la estimulación eléctrica.

Nitrito es un metabolito estable de NO y se puede utilizar como un indicador general de la formación de NO in vivo. El aumento de los niveles de nitrito como consecuencia del aumento de la actividad NOS se han observado en el músculo esquelético después de la actividad contráctil [34]. En nuestro estudio, el aumento de la aguda ejercicio en todos los niveles de nitrito de los tejidos. TA en el músculo, un aumento en la producción de nitrito y peroxidación de lípidos se produjo dentro de 1 h después del ejercicio agudo. Sin embargo, en el cerebro y el hígado, el aumento de los niveles de nitrito se produjo a las 48 h y 6 horas después de ejercer aguda, respectivamente, y el aumento de la peroxidación lipídica después de las 6 horas en el cerebro y el hígado. Estos hallazgos indican que a pesar de las diferencias en el tiempo de respuesta de los órganos de ejercicio agudo, todos ellos sufren estrés oxidativo y nitrosative. Además, los traumas causados por la aguda ejercicio en el músculo mostró ser transferibles a otros órganos. Sin embargo, los niveles más altos de estos compuestos fueron detectados en el músculo TA, probablemente porque es el lugar de la lesión directa.

Nuestros resultados también muestran que el nivel basal nitrito en el músculo TA fue cinco veces mayor que en el cerebro y el hígado. Esto podría explicarse en parte por el hecho de que el músculo esquelético tiene una relativamente alta NOS actividad en comparación con otros órganos [35]. Agudo ejercicio aumenta la actividad NOS [8] y, por tanto, la formación de NO [7] en el músculo. El aumento de la formación de nitrito visto después del ejercicio puede estar mediado por el aumento de contenido de calcio intracelular de las fibras musculares durante la contracción, que se activan NOS. En consonancia con esta observación es la de que ambos de la expresada constitutivamente isoformas de NOS (eNOS y nNOS) requieren de calcio como cofactor para la activación [36], y existen pruebas de que el calcio extracelular también puede mejorar NOS activación durante el aumento de la carga [37]. Por lo tanto, como el calcio entra en la sarcoplasm, no sólo inducir la contracción muscular, pero también se activa de calcio dependen de los productos básicos, constitutivamente expresado isoformas de la NOS.

La HCE en la reducción de la producción de nitrito TA muscular cuando se administra antes o después del ejercicio agudo. El extracto fue también eficaz en los tejidos del hígado y el cerebro, donde la disminución de la formación de nitrito aguda inducida por el ejercicio. Nuestros resultados de la peroxidación lipídica y la formación de nitrito de acuerdo con los informes anteriores, lo que indica que la tasa de producción de NO en el hígado de la rata es similar a la tasa de producción de anión superóxido [38].

Determinación del contenido de proteínas de nitrotirosina se utiliza con frecuencia para detectar el daño oxidativo a los tejidos. Protein nitration ha sugerido a ser una final muy blanco de óxido de nitrógeno reactivo intermedias (por ejemplo, peroxinitrito) formado en las reacciones entre el NO y oxígeno derivados de especies como la superóxido. Dado que NO se realiza por una variedad de tipos de células, la oportunidad para la formación de una tirosina iminoxyl radicales libres que existe en cualquier proteína tyrosyl radical en el que se produce la formación [13]. Además, mieloperoxidasa y peroxidasa también pueden oxidar el nitrito de dióxido de nitrógeno a los radicales, que pueden participar en el nitration de residuos de tirosina en la proteína [14]. Western Blot mostró más de una banda de nitrotirosina en proteínas en todos los tejidos analizados. Agudo ejercicio aumento de nitrotirosina en la formación de los tejidos y la HCE impedido nitration de cerebro y músculo esquelético proteínas. La reducción de los niveles de nitritos y nitrotirosina formación por HCE indicó que el extracto impedido a la producción de especies reactivas de nitrógeno generados por la actividad de la NOS aguda después de ejercicio físico. En el hígado HCE no tuvo ningún efecto sobre la proteína nitration lo que sugiere que, al menos, parte de la formación y RNS nitration proteínas en el músculo están vinculados a la actividad fagocítico. Como la HCE presenta actividad antiinflamatoria, al parecer también para prevenir el daño oxidativo secundario, causado por los fagocitos activados.

La acción antioxidante de la HCE podría ser explicado en parte por su contenido de fenol y terpeno [19]. Estudios de la inhibición de la peroxidación lipídica han demostrado un papel de terpens fenoles y [39, 40]. Compuestos fenólicos tienen una alta reactividad a los lípidos peroxyl radicales, por lo que son capaces de interactuar con los ROS a interrumpir la propagación de la peroxidación lipídica [40]. Di Mascio et al. [41] mostró que furanos diterpenes aisladas de un extracto alcohólico de Pterodon sp tenía una alta capacidad de amortiguación singlets de oxígeno pero no a scavenge oxyradicals ya que el extracto no microssomal inhibir la peroxidación lipídica. A diterpene aislados de la planta Salvia miltiorrhiza fue demostrado inhibir la peroxidación lipídica en los riñones y el cerebro de rata homogeneizado, y su actividad se atribuyó a la presencia del anillo furano en su estructura [39]. En cerebro de ratón, extractos de plantas que contienen polifenoles inducida por NMDA inhibe la peroxidación lipídica y la glutatión restablecido los niveles [42].

Recientemente, se encontró nNOS para sustituir los compuestos fenólicos en su sitio activo, lo que indica que estas sustancias pueden actuar como inhibidores de la nNOS y también como antioxidantes [43]. Desde la HCE contiene constituyentes fenólicos, esto podría explicar la capacidad del extracto de inhibir la formación de nitrito en el cerebro y el músculo homogeneizado.

Conclusión

En conclusión, el ejercicio aguda inducida por la estimulación eléctrica funcional en ratas dio lugar a aumento de los TBARS, nitrito y los niveles de nitrotirosina en el cerebro, el hígado y el músculo esquelético y la infiltración de macrófagos en las fibras musculares. La HCE de p. Emarginatus abolido la mayoría de estos procesos oxidativos, proporcionando así un alto antioxidante y anti-inflamatoria aguda acción contra el ejercicio. A pesar de los bien documentados papel protector de la planta de sustancias antioxidantes y su capacidad para proteger contra los efectos nocivos de la oxidación, la mayoría de los estudios han examinado el efecto antioxidante de una sola clase de compuestos aislados o de un compuesto, principalmente in vitro. Nuestros resultados mostraron que un extracto crudo de P. Emarginatus había antiinflamatorias, antioxidantes y anti-nitrosative actividades en vivo en diversos órganos agudo ejercicio siguiente. Homogeneizado bruta de las plantas son en general menos costosos de obtener y más accesible a la población que un compuesto aislado. Por lo tanto, nuestros resultados apoyan los efectos beneficiosos de la Pterodon extracto utilizado popularmente, y sugerir su posible uso en el ser humano como agente terapéutico contra el daño oxidativo.

Conflicto de intereses

Los autores declaran que no tienen intereses en conflicto.

Contribuciones de los autores

FBAP llevado a cabo todos los experimentos y participó en la redacción del manuscrito, PPA participó en los experimentos de análisis histológico, CMCPG supervisó la labor de FBAP y PPA, participó en el diseño de la deriva del manuscrito y se coordinó el estudio y redactó el Manuscrito. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

Historia previa a la publicación

La historia previa a la publicación de este documento puede accederse en:

Agradecimientos

Este trabajo fue apoyado en parte por la Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) y por becas de investigación del Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) y la Coordinación de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES).