Journal of Carcinogenesis, 2005; 4: 12-12 (más artículos en esta revista)

Caracterización de similar a la insulina-el factor de crecimiento II (IGF II) ARNm positivo hepática alterada focos y expresión de IGF II en carcinoma hepatocelular durante diethylnitrosamine hepatocarcinogenesis inducida en ratas

BioMed Central
Biswajit Mukherjee (biswajit55@yahoo.com) [1], Shampa Ghosh (shampabuk@yahoo.com) [1], Tanushree Das (tanushreedas-in@yahoo.com) [1], Manika Doloi (manikadoloi@yahoo.co. En) [2]
[1] Department of Pharmaceutical Technology, Jadavpur University, Kolkata 700 032, India
[2] Department of Biochemistry and Nutrition, All India Institute of Hygiene and Public Health, C.R. Avenue, Kolkata 700 073, India

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Resumen
Antecedentes

Similar a la insulina-el factor de crecimiento II (IGF II) ha sido implicado en la patogénesis de la neoplasia de diferentes tejidos, incluyendo el hígado de las ratas y los hombres. Este factor de crecimiento se cree que ejercen su efecto durante la proliferación celular. Durante el proceso de desarrollo de carcinoma hepatocelular (CHC), los diferentes focos aparecen hepática alterada. Se cree que están putativo precursores de la HCC en ratas y en el hombre. Así, para estudiar la función del gen en la definición de un modelo de hepatocarcinogenesis fue el objetivo de esclarecer su papel en el cáncer de diversos fenotipos durante toda la etapa de desarrollo del cáncer, a la derecha de las anteriores lesiones preneoplásicas a HCC

Métodos

Antisentido hibridación in situ se utilizó la técnica aquí para caracterizar el tipo (s) de los focos en los que ARNm IGF II había expresado durante el desarrollo de hepatocarcinogenesis inducida por diethylnitrosamine y promovido por fenobarbital en ratas. Diversas lesiones focales se han clasificado en función de las etapas y los tamaños junto con los patrones de expresión de IGF II en ellos. Inmunohistoquímicos para la detección del antígeno nuclear de células proliferantes (PCNA) se hizo para detectar el papel de los genes en preneoplásicas y neoplásicas proliferación celular.

Resultados

IGF II expresión se encuentra en el almacenamiento de glucógeno de las células acidófilas focos de máxima seguida de las lesiones de células mixtas y menos en los basófilos lesiones. La expresión de IGF II se encontró que era predominante en el HCC. La expresión del gen también se encuentra en la periferia de las células del hígado espongiosis, que se cree que son los precursores de esto carcinoma de células. Se observó que existe una correlación directa entre la expresión de IGF II y la inmunohistoquímica para la detección de PCNA.

Conclusión

Se puede concluir que la expresión del gen de IGF II juega un papel importante durante el desarrollo de la neoplasia y el gen se expresa en la secuencia de acciones de glucógeno-ricos-acidófilas lesiones a glucógeno pobres basófilos lesiones a HCC con un patrón de expresión "de alto Baja-alta "en términos de grado de expresión. Por otra parte, el papel esencial de los genes en la etapa inmediata iniciación de la carcinogénesis (primeras semanas) y HCC durante el desarrollo no puede ser ignorada. Así, esta expresión se puede utilizar como un buen marcador para la detección muy precoz del desarrollo tumoral, proceso y puede guardar números de las futuras víctimas del cáncer por muy detección temprana de esta enfermedad.

Antecedentes

Similar a la insulina-el factor de crecimiento II (IGF II somatomedin) b [A] es un polipéptido mitógenos tener semejanza estructural a la proinsulina y similar a la insulina-el factor de crecimiento I (IGF I) [somatomedin C] [1, 2]. IGF II se sabe que está ampliamente distribuido en diversos fetal y neonatal tejidos humanos y de ratón, incluyendo el hígado [3 - 5], pero limitada en el adulto de rata tejidos [6], con la excepción del cerebro [7]. También ha sido implicado en la patogénesis de la neoplasia de diferentes tejidos, incluyendo el hígado de las ratas y los hombres [8 - 11]. El factor de crecimiento se cree que ejercen su efecto durante la proliferación celular a través de endocrinos, autocrinos y paracrinos mecanismos [12]. En el cáncer de mama células epiteliales, IGFII se informó de que sirva de estímulo y crecimiento autocrina IGFII sobreexpresión se sugirió que es capaz de mediar en la progresión maligna [13]. Expresión de IGFII en roedores sigue siendo elevada en torno a su nacimiento y es indetectable dentro de las tres semanas [14]. Pero la reactivación de este gen ha sido reportada en diversas neoplasias HCC incluidos en ratas. IGF II expresión ha demostrado ser reactivado durante la progresión neoplásica de los nódulos de CHC [15]. IGFII reactivación se informó a ser un fenómeno común en hepatocarcinogenesis independientemente de las especies y el proceso de hepatocarcinogenesis [11]. La reactivación endógena de IGF II se sugirió a ejercer un efecto estimulante del crecimiento a través de IGFI y IGFII / receptores de manosa 6 fosfato [16]. Se dijo que IGFII podría desencadenar una proliferación de híbridos a través de la señal de insulina / IGFI los receptores estimulados por el IGF exógenos [17]. Carcinógeno tratamiento puede generar IGFII microambiente en preneoplásicas focos que llevan a la ventaja selectiva de crecimiento para este celular.

Hepatocarcinogenesis químicas es un proceso complejo y de múltiples y es la favorita de modelo en ratas para estudiar el mecanismo de transformación de una célula normal en maligna (s) de la población [18]. Durante el proceso de desarrollo de HCC de la hapatocytes normal, aparecen focos hepática alterada. Estos focos son los precursores putativo de HCC, en la rata, y probablemente en el hombre [19, 20]. Dependiendo de las características morfológicas y bioquímicas hepatocelular cambios durante el proceso de desarrollo normal de los hepatocitos a HCC inducida por diversos agentes carcinógenos químicos, las radiaciones, las hormonas, la hepatitis crónica viral y la manipulación de roedores transgénicos, tres principales lesiones hepatocelulares alterados de la glycogenotic, mixto de células y basófilos Las lesiones de células se han distinguido [21]. La secuencia predominante de los cambios celulares comienza con glycogenotic clara y acidófilas (retículo endoplásmico liso-ricos) hepatocitos y avanza a través de fenotipos intermedios en la mezcla de las poblaciones de células a glucógeno de los pobres, homogénea basófilos (ribosome-ricos) que prevalece en fenotipos celulares indiferenciadas HCC.

Altos niveles de IGF II expresión de genes y proteínas han sido encontrados en una amplia variedad de tumores humanos y de roedores [8 - 10]. IGF II se ha reivindicado como uno de los más importantes factores de crecimiento, jugando papel en la progresión de la enfermedad neoplásica [22]. Pero el advenimiento de la expresión del gen de IGF II durante el desarrollo de la neoplasia se ha mantenido a ser dilucidado. Antisentido la técnica de hibridación in situ se ha utilizado aquí para explorar el tipo (s) de los focos en los que el IGF II mRNA se expresa en la etapa de conversión de los hepatocitos neoplásicas durante diethylnitorsamine (DENA) y fenobarbital inducida promovido hepatocarcinogensis en ratas Sprague-Dawley.

Materiales y métodos

Los experimentos se realizaron en el tejido hepático de los hombres ratas Sprague-Dawley (comprados en la India Instituto de Biología Química, Kolkata, India). El peso inicial de los animales fueron aproximadamente 130 g. Ellos se mantuvieron a temperatura (22 ° C) y la humedad (55% HR) y las condiciones fueron alimentados con dieta basal [23] y tuvieron libre acceso al agua. Los animales fueron divididos en cuatro grupos-Grupo A (que tiene 15 animales), el grupo B, C y D (que tiene 10 animales en cada uno de los tres grupos). Un grupo de animales fue normal los animales no tratados. Grupo B, C y D animales fueron tratados carcinógeno grupos. Carcinógeno Todos los animales tratados fueron tratados con DENA, 200 mg / kg de peso corporal, por vía intraperitoneal al inicio del experimento, es decir, de día cero. Grupo C y D animales se promovieron con fenobarbital 0,05% en la dieta basal [24]. Grupo B animales fueron sacrificados en la 8 ª semana de estudio anteriores lesiones preneoplásicas, grupo B, los animales fueron sacrificados en la 22 ª semana de estudio mixta y basófilos y lesiones grupo C, los animales fueron sacrificados a las 36 ª semana de desarrollo como HCC se informó que tendrá lugar entre 32-36 semanas [25]. En cada caso, cinco normales de control de animales fueron sacrificados con los respectivos tratados grupos B, C y D para la comparación. Todos los animales fueron unfed durante 12 h antes de que se sacrificaron por dislocación cervical y los animales fueron sacrificados entre el 9 y el 10 de la mañana del hígado fueron retirados, en rodajas (5-10 mm de grosor) y snap-fueron congelados en isopentane precooled con nitrógeno líquido a -- 150 ° C. Los tejidos fueron almacenadas a - 80 ° C, mientras no se utiliza.

Serial secciones se prepararon materiales de los congelados con un micrótomo Reichert-Jung. Ellos fueron estudiados histológicamente por la reacción del ácido periódico de Schiff, azul de toluidina y hematoxilina-eosina para detectar diferentes focos hepática alterada (26, 27). Lesiones preneoplásicas fueron divididos en tres categorías de acuerdo con sus respectivas tamaño y la superficie total de los ocupados parénquima hepático (<1 mm,> 1 mm de <3 mm,> 3 mm), como se describe anteriormente [28] . Estas secciones seriadas se utilizaron para la hibridación in situ con sentido y anitsense digoxigenina etiquetados sondas de ARNm de IGF II y reacción inmunohistoquímica para antígeno nuclear de células proliferantes (PCNA).

In vitro de transcripción de Digoxigenin (DIG)-etiquetados sentido y antisentido IGF II mRNA

Un par de base de 860 (pb) codificación región fragmento de cDNA rIGF II extendió entre EcoRI-EcoRI ploylinker sitio de pGEM-4 de vectores (Fuente: H. Hacker, DKFZ, Alemania, obtenida de un Riccio, Universita degli studi di Napoli Federico II, Napoli, Italia) se transformó en XL1-azul de las células de E.coli. El plásmido también religated y propagado en el competentes para obtener las células frente a la orientación de la codificación de 860 bp fragmento de cDNA rIGF II. SP6-RNA polimerasa se utiliza para generar tanto sentido y anitsense riboprobes de Xba I linealizadas de plásmidos de la orientación opuesta. Transcripción in vitro se llevó a cabo, utilizando digoxigenina (DIG)-ARN etiquetado-Kit de Boehringer Mannheim, Mannheim, Alemania. Las concentraciones de los sentido y antisentido sondas se calcula mediante el uso de Ácido Nucleico Detección Kit (Boehringer-Mannheim, Mannheim, Alemania). El método se basa en la comparación entre las intensidades de color y ranura blots DIG etiqueta estándar (Boehringer-Mannheim, Mannheim, Alemania) (Figura 1] y el experimental riboprobes. Electrophoresing por las sondas que contienen formaldehído en gel de agarosa al 1% la pureza de la etiqueta sondas se revisaron (Figura 2].

La detección de mRNA de IGF II por hibridación in situ

Hibridación in situ se realizó el 6 de μ m cryosections de las muestras de hígado mediante el uso de un procedimiento de modificación de Braissant y Walhi [29]. El cryosections fueron fijadas por primera vez a 50 ° C durante 30 segundos sobre una placa caliente y delipidified con cloroformo durante 5 min cada vez que sea necesario. Las secciones fueron fijadas en paraformaldehído al 4% en buffer fosfato salino, pH 7,4, (PBS) durante 1 hora. Las diapositivas fueron tratados con PBS que contenía activa DEPC (dietil pyrocarbonate) durante 30 min seguido de un lavado de 4 × SSC, de 15 min. Prehybridization se realizó utilizando hibridación de amortiguación (se mencionan más adelante), excepto el sulfato de dextrano y Denhardt la solución de 1 hr. A los 52 ° C. Esta fue seguida por la hibridación a 50 ° C durante la noche en una cámara húmeda. Cada 10 ml de buffer de hibridación figura 5 ml formamida desionizada, 2,4 ml de DEPC agua tratada, 2 × 20 ml de la cooperación Sur-Sur, pH 7,0, 1 g de sulfato de dextrano, 200 × 50 μ l de la solución Denhardt, desnaturalizado levadura t-RNA (10 mg / ml) Y 400 μ l de ADN de esperma de salmón desnaturalizado (10 mg / ml) μ l junto con respectivas sondas desnaturalizado por calentamiento a 80 ° C durante 3 min., Seguida de inmediato de enfriamiento en hielo. Después de la hibridación, las secciones se lavaron en 2 × SSC a temperatura ambiente (RT) durante 30 min, luego de nuevo con 2 × SSC a 60 ° C, durante 30 min. Esto fue seguido de 1 × SSC por 30 min y 0,1 × 1 hr para la cooperación Sur-Sur, a 60 ° C con una frecuencia moderada agitación. Después de lavar el rigor, las diapositivas se incubaron con buffer Tris-NaCl, pH 7,5 al 0,5% bloqueante (Boehringer-Mannheim, Mannheim, Alemania) en RT sobre una plataforma de agitación con una baja velocidad. Las secciones fueron incubadas con anticuerpos anti-DIG-anticuerpo policlonal conjugado con fosfatasa alcalina (Boehringer-Mannheim, Mannheim, Alemania) (1:5000) en NaC1 Tris-buffer, pH 7,5 a 2 horas a RT en la plataforma de agitación con una baja velocidad . Después de la incubación, las secciones fueron lavadas con buffer de lavado (Tris-NaC1 buffer, pH 7,5, con 0,3% entre 20) por 10 min a TA. Esto fue seguido de dos lavados con 15 min Tris-NaC1 buffer, pH 7,5. La sección se equilibrada con detección de amortiguación (100 mM Tris-HC1, 100 mM NaC1 y 50 mM MgC1 2, 6H 2 O), pH 9,5 durante 5 min y se hizo uso de la tinción de nitroblue tetrazolium / bromochloroindolylphosphate (NBT / BCIP) en la detección de amortiguación . Counter También se realizó la tinción de vez en cuando.

Inmunohistoquímicos para la detección del antígeno nuclear de células proliferantes

PCNA fue demostrado por los siguientes métodos de Enzmann et al. [30] y Bannasch et al [31]. Brevemente 6 μ m criostato secciones fueron secadas al aire después de la fijación en acetona durante 10 minutos seguido de un tratamiento con un 2% de H 2 O 2 en metanol para bloquear peroxidasas endógenas. Luego, la muestra se incubó en el 3% de albúmina sérica bovina durante 30 min para prevenir reacciones inespecíficas seguido de incubación con anticuerpo monoclonal de ratón a PCNA, diluido 1:1600 (PC10 Dako), la noche a 4 ° C. PCNA núcleos positivos se identificaron mediante el uso de la fosfatasa alcalina-etiquetados streptavidine complejo biotina (Dako LASB2 Kit, AP). Luego las secciones se tiñeron con nuevos fuschin-Myer y la haemetoxylin.

IGF II mRNA focos positivos se estimaron en zonas seleccionadas al azar de cada una de las secciones que contiene hepática alterada focos de animales de experimentación. Los resultados fueron evaluados estadísticamente mediante ANOVA seguido por exacta de Fisher Test de otra mencionado.

Resultados

La determinación de la morfométricas lesiones focales mostró que la incidencia de lesiones preneoplásicas (es decir, almacenamiento de glucógeno focos / acidófilas focos [Figura 3], las lesiones focales de células mixtas y basófilos lesiones focales [Figura 4] fueron de 100% en el grupo B, C y D animales. El tamaño y la densidad numérica de las distribuciones de lesiones preneoplásicas se muestra en la Tabla 1. Promedio densidad numérica se mostró como máximo (1498 ± 33 por cm 3 de tejido hepático) en el caso de los animales del grupo D, que fue seguido por el grupo C (968 ± 16 por cm 3 de tejido hepático) y grupo B (412 ± 28 por cm 3 de tejido hepático) animales. El lesiones preneoplásicas se clasificaron con respecto a su tamaño y sus áreas de los territorios ocupados en parénquima hepático. Se observó que los animales del grupo B Carcinogénesis en el que se había iniciado con DENA y animales fueron sacrificados después de 8 semanas, el 81% tenía lesiones focales tener tamaño inferior a 1 mm, es decir más pequeñas lesiones focales y el 19% de las lesiones se encontraban en el rango de tamaño de 1 mm-3 mm. Grupo C ha 52% menos de lesiones de 1 mm. Lesiones fueron el 44% entre 1 mm y 3 mm de tamaño y 4% de las lesiones fueron mayores de 3 mm. En el grupo D animales, siete de cada diez animales se encontraron para desarrollar HCC (Tabla 2] y Tenían más intermedio (1 mm-3 mm) y grande (mayor de 3 mm), en comparación con las lesiones más pequeñas lesiones.

Cuando IGFII de genes expresados, lesiones preneoplásicas se compararon con los distintos tipo de focos hepática alterada (HAF), como el almacenamiento de glucógeno lesiones focales, lesiones focales de células mixtas, y basófilos lesiones focales, se constató que el 98% de almacenamiento de glucógeno lesiones focales expresó IGFII [ Figuras 5, 6, 7]. Una vez más el 74% de las lesiones focales de células mixtas expresó IGFII donde, una vez más, principalmente por almacenamiento de glucógeno hepatocitos se encontraron para expresar IGFII no los basófilos células. Muy pocos basófilos con lesiones focales de células IGFII se detectó la expresión de los genes. En estas lesiones, hubo, algunas células que contienen glucógeno (como se ha visto con la tinción de PAS). Como las lesiones que contienen predominantemente células basófilos, que se clasificaron bajo basófilos lesiones. Por lo tanto, considera que pueden ser las células de almacenamiento de glucógeno mostró IGFII expresión en los basófilos lesiones. Sólo el 5% de los basófilos hepática alterada focos se encontraron para expresar IGFII aunque los resultados son estadísticamente no significativos. Como se describe anteriormente en el grupo D animales, siete de cada diez animales se encontraron para desarrollar HCC y que había algunos de alta expresión en los hepatocitos periféricos de tumor. También hubo cierta expresión en el tumor de las zonas [Figuras 8, 9, 10, 11].

Hepatocitos proliferación fue establecido por la demostración de PCNA (Antígeno nuclear de células de proliferación). PCNA hepatocitos positivos y no se detectó en hepatocitos carcinógeno grupos tratados, así como los grupos no tratados normal. Cinco veces más altos que el valor numérico de las células PCNA positivos se detectó en el carcinógeno animales tratados en comparación con los animales no tratados normal (Tabla 3] y PCNA positivas células carcinógeno en los animales tratados eran en su mayoría (alrededor del 85%) se limita a la zona de la lesión. Es interesante que la cuenta fue mayor en las lesiones de almacenamiento de glucógeno, así como en el Comité de Contratos (datos no presentados). Esto indica que la proliferación fue mayor durante la primera etapa, es decir, en la etapa inmediatamente posterior puesta en marcha, así como en el HCC.

En el tejido hepático de los animales del grupo D, algunos dispersos spongiotic pericytoma se han notado. Este spongiotic pericytoma También se cree que ser el precursor de perisinusoidal sarcomas de células [32]. Son muy pocos en número, pero se encuentran en el tejido hepático de todos los animales en el grupo D. Sin embargo, no se les encuentra en todos los tejidos de diapositivas de los mismos animales. Cuando IGFII expresión de la posterior diapositivas fueron estudiados se observó que el gen IGFII no expresar en el ámbito de la spongiotic del hígado. Pero IGFII alta expresión fue observado en el periférico hepatocitos [Figuras 12, 13, 14, 15]. PCNA positivas las células también se detectó predominantemente en la periferia de las células del hígado espongiosis.

Discusión

Un predominante secuencia de cambios celulares a partir de la aparición de focos de la glycogenotic glucógeno basófilos focos de los pobres, lo que HCC a través de distintas poblaciones de células mixtas, se ha observado en los roedores durante el desarrollo de HCC inducida por diversos agentes carcinógenos químicos, hormonas, la radiación, Infección viral crónica y la manipulación transgénica [19, 20]. Durante este proceso con varios cambios fenotípicos que parece sugerir una progresiva celular dedifferentiation.

El DIG sistema de detección utilizado aquí se ha reivindicado a ofrecer una mucho mayor sensibilidad y detectabilidad de los sistemas de detección radiactivos [33, 34]. El uso de este sistema, tratamos de localizar el IGF II la expresión de genes en diferentes tipo (s) de los focos durante DENA inducida hepatocarcinogenesis. La predicción de la expresión de genes se encuentra en hepática alterada focos de almacenamiento de glucógeno, que se ha reivindicado a ser principios de lesiones preneoplásicas [32] junto con algunas expresiones en focos de las poblaciones de células mixtas. Alta expresión También se detectó en el HCC. Es mayor en la periferia, así como el almacenamiento de glucógeno de las células tumorales. Esta observación es apoyada por la observación de Sohda et.al que demostraron que la localización de IGF II mRNA en las zonas menos diferenciadas, que consiste en la presencia de tumores en la periferia del nido tumoral [35]. De la expresión se detectó en el almacenamiento de glucógeno focos de hepatocitos alterados, en comparación con las células del tumor. Esto sugiere que existe una expresión diferencial de mRNA de IGF II durante el desarrollo de preneoplasia a neoplasia. Fetal transcripciones de IGF II expresar alto en el hombre y el cáncer de hígado en roedores [6]. En humanos, las transcripciones expresar muy fetal en el HCC, lo que sugiere que el IGF-II expresión es tarde evento durante el desarrollo de cáncer de hígado [36]. Por otra parte, una correlación inversa entre la expresión de IGF-II y la diferenciación celular, en la rata [37]. Una vez más, se ha constatado que la expresión de IGF II es predominante en la vida fetal y neonatal de la rata y se niega con el día después de su nacimiento, cuando IGF I se determina que el aumento y cree que asumir el papel de la IGF II [6] . Al mismo tiempo el aumento de patrón de las expresiones del IGF Iy TGF α, durante algunas condiciones preneoplásicas y neoplásicas [35] sugiere también que el IGF Iy TGF α Mayo contrarrestar la actividad de IGF II.

Entre los distintos métodos disponibles, dos importantes métodos de estudio de la proliferación de las células del cáncer son la medición de la tasa de síntesis de ADN y la reacción de inmunohistoquímica para el antígeno nuclear de células proliferantes (PCNA) [30, 31]. Demostración de PCNA ha informado a ser un valioso método no trazador para la detección de células proliferantes. Informe sugiere el método se utiliza para detectar la proliferación de células en fase S, G2 y G1 finales de las fases de los ciclos de la célula [32]. PCNA positivas hígado de células resultaron ser significativamente mayor (p <0,001) en este estudio carcinógeno en los animales tratados en comparación con los animales normales de control. Superior de etiquetado índice PCNA se observaron en IGF II expresó lesiones (en su mayoría ricos en glucógeno lesiones), en comparación con los otros IGF-II no expresados o poco-expresó lesiones hepáticas (mezcla de células de las lesiones de células y basófilos) en las zonas estudiadas hepática. Esto sugiere que el IGF II expresó en todas las células de las lesiones son más proliferan en la naturaleza en comparación con los otros coordinadores de las lesiones y, por supuesto, la extra-hepáticas focales. El índice de etiquetado se encontró de nuevo a ser más elevada en HCC. Esto indica que el cáncer de desarrollo es más rápido durante ricas en glucógeno focales de desarrollo (que predominantemente expresó IGF II) y durante la etapa de HCC.

Espongiosis del hígado se han encontrado interesante sólo en el grupo C de los animales (en seis de cada diez animales). Se comprobó que se encuentra dispersa en la naturaleza. En toda observación que fueron sólo 18 en números (en 50 diferentes muestras de tejido hepático de los siete animales del grupo C). Así pues, parece que aparecen en la progresión de la fase de proceso canceroso, por lo menos durante DENA inducida hepatocarcinogenesis. Espongiosis del hígado también se describe como spongiotic pericytoma se cree que son los posibles precursores de los tumores malignos [32]. También ha sido clasificado como perisinusoidal (esto) sarcomas de células [33]. Las lesiones clasificadas como espongiosis del hígado se ha informado al progreso pericytomas a que se han relacionado con perisinusoidal células (células de esto). Así, el estudio de estas células puede ayudar a comprender transformación neoplásica de ellos. En el presente estudio se han hecho esfuerzos para caracterizar diversos focos preneoplásicas hepática alterada hepática y carcinoma celular junto con espongiosis del hígado. Espongiosis del hígado se han detectado mediante hematoxilina y eosina, azul de toluidina y la tinción de PAS. Consecutivos secciones se compararon con la IGFII expresiones y se ha observado que la expresión predominante de IGFII se observaron en la periferia hepatocitos, pero no en los agujeros de la spongiotic formaciones que se cree que se rellena con un material finamente amorfa que muestra metachromasia (Acid Mucopolysaccharide depósito) [32]. El IGFII expresión parece ser más dominante en la periferia de la spongiocyst hepatocitos del hígado. PCNA células positivas también fueron detectadas en los alrededores donde la IGFII expresiones se notó. Una vez más IGFII expresión ha afirmado que se asocia con el desarrollo de carcinoma hepatocelular (CHC), por varios autores [34, 35]. Así, el estudio más que apoya la espongiosis del hígado son posiblemente el origen de los tumores malignos [32]

Las reclamaciones relacionadas con un importe de más de expresión del gen de IGF II en el hígado y tumores pre-neoplásicas lesiones hepáticas durante hepatocarcinogenesis en modelos animales y en humanos HCC fueron muy variables. Una posible participación de un bucle autocrino IGF II en la patogénesis de hepática lesiones preneoplásicas y neoplásicas se han vinculado con la asociación alélica de desequilibrio con un incremento en la expresión del gen de IGF II en lesiones pre-cancerosas [36, 42].

El trabajo ha demostrado que el desequilibrio alélica de la expresión génica de IGF II fue visto en las primeras lesiones pre-cancerosas durante hepatocarcinogenesis, pero no se observó en bien y moderadamente diferenciado HCC.

Así, algunos trabajadores se considera la expresión del gen de IGF II como un evento temprano. Mezcla de informes se encuentran que se cobró la expresión de IGFII ya sea en preneoplasia [37, 38] o durante HCC [34, 35]. La expresión de más de IGF II en HCC ha afirmado que se asocia con re-patrón de expresión de IGF II transcripción se producen a través de la activación de los promotores p2 fetal - p4 con una pérdida de actividad de los adultos promotor p1 [36]. Curiosamente, más de la expresión de IGF II se encontró en el almacenamiento de glucógeno preneoplásicas lesiones focales máximo, en comparación a la de la basófilos lesiones.

En las lesiones focales de células mixtas, así como lesiones basófilos, las expresiones eran bajas y en las lesiones focales de células mixtas la expresión es particularmente limitado a los ricos células glucógeno. Cuando la expresión es predominante en casi toda la lesión, esta ha sido considerada como una de IGF II expresó su lesión en el presente estudio. Así, la tendencia de IGF II más de expresión en nuestro estudio fue en la secuencia de "alto-bajo-alto", en "focos de almacenamiento de glucógeno - focos de células mixtas - basófilos lesión - HCC". Esto sugiere que el IGF II más de expresión no sólo es la primera cita, pero el caso demasiado tarde. La expresión de genes, entre otros, que parece ser responsable de cáncer proceso de iniciación, así como en la progresión de la HCC. Pero su papel en la progresión de la neoplasia preneoplasia a lo que queda por esclarecer. De este modo más de expresión de este gen o la proteína puede ser más de expresión se puede usar para detectar el cáncer en las primeras etapas o en el HCC y, por tanto, puede ser considerado como un futuro medios de diagnóstico para la detección de cáncer hepático y sus etapas y IGFII expresión génica 33 Podría ser considerada como uno de los mejores marcadores para la detección precoz de células preneoplásicas putativo, así como en HCC químicamente inducida hepatocarcinogenesis. Una investigación ulterior de la expresión génica se justifica en el interés de mejorar la detección del cáncer. Por lo tanto, esto puede llevar a una mejor prevención del cáncer. Una vez más, en contraste con muchos otros genes o proteínas expresiones IGFII tiene ventaja particular para su uso en la detección de posibles carcinógenos y promotores, ya que no se expresa en lesiones con algunos no xenotoxic productos químicos [39]. Además se informó de IGFII gen para expresar en niveles altos en los dos espontáneos [40] y [41] inducida por lesiones hepáticas en las primeras etapas de desarrollo [37, 38] y en el HCC [32, 33].

Agradecimientos

El trabajo se ha llevado a cabo con los subsidios financieros (UGC, conceder no.7-5/2004 (AR), ICMR subvención no. 45/11/2003-PHA/BMS y DAF subvención no. A/97/00771)