Journal of Neuroinflammation, 2005; 2: 18-18 (más artículos en esta revista)

Microglial respuestas a péptido amiloide β opsonization y el tratamiento con indometacina

BioMed Central
Ronald Strohmeyer (RWStrohmeyer@NNU.edu) [1], Carl J Kovelowski (cjkovelowski@yahoo.com) [1], Diego Mastroeni (diego.mastroeni @ sunhealth.org) [1], Brian Leonard (brian.leonard @ sunhealth . Org) [1], Andrew Grover (andrew.grover @ sunhealth.org) [1], Joseph Rogers (joseph.rogers @ sunhealth.org) [1]
[1] Centro de Roberts LJ, Sun Health Research Institute, 10515 West Santa Fe Drive, Sun City, AZ 85351 EE.UU.

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Resumen
Antecedentes

Estudios recientes han sugerido que la inmunización pasiva o activa con anti péptido β-amiloide (A β) anticuerpos pueden potenciar microglial limpieza de los depósitos de A β del cerebro. Sin embargo, en un ensayo clínico en humanos, varios pacientes desarrollaron secundaria respuestas inflamatorias en el cerebro que son suficientes para detener el estudio.

Métodos

Hemos utilizado un sistema de cultivo in vitro para modelar las respuestas de microglia, derivados de la rápida autopsias de pacientes con enfermedad de Alzheimer, a un β depósitos.

Resultados

Opsonization de los depósitos con anti-A IgG β 6E10 mayor microglial a quimiotaxis y fagocitosis de A β, así como exacerbado microglial secreción de la citoquina pro-inflamatoria TNF-α e IL-6. La indometacina, un régimen común de fármacos antiinflamatorios no-(AINE), no tuvo ningún efecto sobre microglial quimiotaxis o fagocitosis, pero sí inhiben significativamente el aumento de la producción de IL-6 después de un β opsonization.

Conclusión

Estos resultados son consistentes con bien sabido, diferencial AINE acciones en funciones de la célula inmune, y sugieren que la administración concomitante de AINEs puede servir como un útil de los β inmunización, que permita sin trabas la limpieza de A β mientras mojado secundaria, la inflamación relacionados con los eventos adversos.

Antecedentes

Quimiotaxis y fagocitosis de las respuestas a microglia β péptido amiloide (A β) han sido deducirse de las evaluaciones postmortem autopsia [1 - 3], los estudios en animales [4, 5], y de un modelo in vitro de roedores en cultivo en el que microglia se coloca directamente sobre la enfermedad de Alzheimer (AD) cortical secciones [5, 6]. A pesar de que estos valiosos experimentos confirman que se agrupan en torno a microglia y puede ayudar a despejar una β depósitos, se han planteado nuevas preguntas acerca de los efectos de los diferentes agentes en estos microglial interacciones con un β. En particular, varios estudios han indicado que el opsonization de A β depósitos con anti-A β facilita microglia anticuerpos mediada por un aclaramiento de β [6, 7]. Aquí, la unión de los anticuerpos a la A β objetivo presumiblemente aumenta microglial y reconocimiento de las respuestas posteriores a la meta a través de los receptores Fc expresadas por la microglia [6, 7]. Sobre la base de estos resultados, se ha sugerido que las respuestas a un microglial β podría representar una respuesta inflamatoria tan beneficiosa que la acción de antiinflamatorios podrían ser en realidad perjudiciales como tratamiento para la AD [8]. Por otra parte, varios estudios epidemiológicos [9, 10] han informado disminución en el riesgo de AD en común de las personas que toman fármacos antiinflamatorios no esteroides (AINE).

En la última década, nuestro laboratorio ha desarrollado métodos para el cultivo de microglia rápidos (<4 horas) autopsias cerebrales de pacientes con EA [11, 12]. Estas culturas singularmente coincidir con la especie, etapa de desarrollo, y estado de la enfermedad AD temas, y proporcionar los listo experimental manipulability que es útil en la evaluación de complejos procesos fisiológicos tales como la quimiotaxis, fagocitosis, actividad secretora, de drogas y de las respuestas. Con el fin de analizar cuantitativamente esos procesos en el contexto de la interacción con un microglial β, que sembró AD microglial en los pozos que contienen las culturas pre-β1 agregados A-42 lugares secos hasta el piso así. Posteriores experimentos mide la migración de las células a la A β manchas, la fagocitosis de la A β puntos, en favor de la secreción de citoquinas inflamatorias, y los efectos que sobre estos procesos cuando un β espacios se opsonized con un anti-β Un anticuerpo microglia o cuando fueron tratados con un régimen común de nonsteroidal Anti-inflamatorio (AINE), la indometacina. En general, opsonization con un aumento de anticuerpos β microglial a la migración y la fagocitosis de A β. La indometacina había muy poco o ningún efecto sobre estas respuestas, pero sí significativamente microglial inhibir la secreción de IL-6.

Métodos
AD microglia culturas

Culturas de la microglia de rápidos (<4 horas) autopsias de los seis antemortem a evaluar, neuropathologically confirmados AD pacientes fueron preparados utilizando nuestros métodos publicados anteriormente [11, 12]. Por inmunoreactividad, estas culturas son consistentemente negativos para la neurona, astrocyte, oligodendrocyte, fibroblastos y marcadores, consistentemente positiva para múltiples marcadores de microglia activada, y de fácil mantenerse en el grado de pureza de 98% o superior [11, 12]. Microglia culturas de los seis AD pacientes se utilizaron para ensayos bioquímicos. Adicional culturas de uno de estos pacientes se utilizaron para la evaluación cuantitativa de quimiotaxis y fagocitosis, y otros dos más de las culturas de estos pacientes se utilizaron para la reproducción cualitativa de la quimiotaxis y fagocitosis resultados. En 3-7 días después de galvanoplastia, la microglia se trypsinized y replated a 50000 células / así en el de 12 y placas. Antes de replating, 2 μ l de una solución de 1 mM A β1-42 (Bachem) en PBS (pH 7.4) se ha secado hasta el piso así. Cada bien recibido dos de esos puntos A β, y hay tres pozos por condición experimental, de modo que un total de seis puntos A β se cuantificaron por condición experimental. Medio libre de suero se utiliza en todo el experimentos. Control de los pozos que no contiene un β o no microglia También se prepararon.

El tratamiento con anti-A β anticuerpos

Antes de la siembra con microglia, pozos seleccionados fueron pretratadas con vehículo (medio) o sólo con 10 μ g / ml 6E10 (Signet Laboratories), un anticuerpo monoclonal de ratón dirigido contra los primeros 17 (N-terminal) aminoácidos de la secuencia de un β. En algunos experimentos, de 2 μ g / ml concentración de 6E10 se incluyó con el fin de evaluar los efectos de una dosis más baja.

El tratamiento con indometacina

Antes de la siembra con microglia, pozos seleccionados fueron pretratadas con vehículo (medio) o con sólo 1,0 μ g / ml indometacina. La indometacina, a 1,0 μ g / ml, y el vehículo también se repondría en el Days 3, 6, y 9 en el curso medio de los cambios. El 1,0 μ g / ml es la concentración de indometacina en el extremo superior del rango normal fisiológicamente logrados en la sangre después de dosis terapéuticas de la droga [13], y fue elegido para asegurarse de que cualquier fracaso de la indometacina a afectar a la quimiotaxis o fagocitosis de A β no fue Debido a la falta de dosificación de medicamentos. En algunos experimentos, un 0,1 μ g / ml concentración de la indometacina, que se encuentra en el extremo inferior del rango normal fisiológicamente logrados en la sangre después de dosis terapéuticas, se incluyó con el fin de evaluar los efectos en una menor concentración.

Citoquímica y inmunocitoquímica

Para la evaluación cualitativa de las respuestas a un microglial β, microglial culturas se fija brevemente con paraformaldehido 4% tamponada, entonces immunoreacted noche a la mañana con 1:1000 (0,5 μ g / ml) de anticuerpos LN3 (MP Biomédicas) dirigido contra el complejo principal de histocompatibilidad de tipo II glicoproteína de superficie celular , Utilizando nuestros métodos publicados anteriormente [11, 14, 15]. Vectastain ABC kits (Vector Laboratories) fueron empleados del fabricante utilizando protocolos para detectar inmunoreactividad con óptica de campo claro. A β manchas podrían ser lo suficientemente resueltas, en estas condiciones, por sus modestos opacidad bajo la óptica de campo claro. Para visualizar un β manchas en la fagocitosis experimentos, los pozos fueron lavarse suavemente con agua destilada (3 × 5 minutos para cada uno), incubadas con el 0,1% Thioflavine S (Sigma) durante 10 minutos, una vez lavada en agua destilada (5 min), luego deshidratados Y fijos con paraformaldehido 4% tamponada. En experimentos adicionales, A β inmunocitoquímica se aplicó en algunos pozos a fin de ilustrar gráficamente un β remoción y microglial absorción de A β. En estos estudios, las culturas con un microglial β fueron brevemente los puntos fijos con paraformaldehido 4% tamponada y se incubaron durante la noche con 1:1000 (1 μ g / ml), anti-β Un anticuerpo 4G8 (Signet Laboratories). Detección de inmunoreactividad se utilizó Vectastain ABC kits (Vector Laboratories) y del fabricante sugiere protocolos.

Microglial la migración a un β spots

Microglial culturas fueron evaluados en el día 3 y el día 9 después de la primera galvanoplastia. Cada una β de los cuales se visualizan en la etapa de contraste óptica a 100 × (10 × objetivo), y fotomontajes se realizaron in situ y de la zona circundante a un radio de 2 mm desde el lugar perímetro. Una red se coloca sobre los fotomontajes. El número y los porcentajes de microglia dentro de los cuatro 500 μ m × 500 μ m (0,25 mm 2) cuadros centrado en la A β terreno y dentro de los cuatro conjuntos de 500 μ m × 500 μ m cuadrados progresivamente a mayores distancias desde el lugar se registraron. La distancia de los intervalos de los cuadros fueron 0, 500, 1000, 1500, y 2000 μ m de la β Un terreno, y cada intervalo de distancia se midió por cuadruplicado (Fig. 1]. Un total de 141455 microglia fueron contados individualmente a mano de esta forma. Quimiotaxis fue evaluada por los cambios en la distribución de microglia relativa a la A β puntos en el tiempo, con distribuciones relativamente plano indicativo de la poca o ninguna quimiotaxis, y cada vez más negativas pendientes de las distribuciones indicativas de la migración hacia la A β puntos (Fig. 1]. Laderas de las distribuciones (m) se define operacionalmente como el "índice de quimiotaxis" [15] para cada condición, y la fiabilidad estadística de las medidas se evaluó con el impulso de productos de Pearson (R) con la estadística y análisis de la varianza (ANOVA) técnicas . El más simple ANOVAs evaluaron, para cada condición de tratamiento, diferencias significativas en las distribuciones de microglia más de la progresiva distancia de los intervalos de un β lugar, con porcentaje de microglia en una distancia (en cada cuadro), como la variable dependiente y la distancia de un punto β ( 0, 500, 1000, 1500, y 2000 μ m) como único factor. R de Pearson fue luego ejecute la estadística de la confirmación de que las alteraciones en microglial eran compatibles con las distribuciones de quimiotaxis (es decir, mostraron una significativa correlación negativa con la distancia de A β), en lugar de algún otro patrón de respuesta. La dependencia de la dosis se evaluó utilizando ANOVAs de dos vías, con porcentaje de microglia como la variable dependiente, la distancia de la A β terreno como el primer factor, y las dosis de drogas como el segundo factor. Interacciones significativas de la distancia con lo que la dosis de drogas proporcionó evidencia estadística de que las diferentes dosis de drogas diversamente afectados microglial distribuciones. Un enfoque similar se adoptó para las comparaciones de las diferentes condiciones de tratamiento (por ejemplo, un anti-β anticuerpos exposición ± tratamiento con indometacina). Todos los datos se recolectaron por un técnico ciego a la condición experimental.

Las pruebas de la proliferación microglial

BrdU kits de tinción (Zymed / Invitrogen) se aplicaron a los pozos seleccionados a fin de evaluar si los cambios en las distribuciones microglial en el tiempo podría ser debido a la proliferación de microglia diferencial en relación con un β puntos frente a la migración de las células. La tinción con BrdU seguido las instrucciones recomendadas por el fabricante.

Microglial fagocitosis de A β spots

Al Día 12 postplating, pozos seleccionados fueron histológicamente reaccionó con Thioflavine S, tal y como se describe anteriormente, y visualizados en 100 × (10 × objetivo) con un microscopio confocal. El uso de la capacidad del microscopio confocal ópticamente a la sección de un objeto en distancias precisas, el número de 10 μ m óptico rebanadas de la palabra así a la cima de los restantes β Un spot fue grabado por un investigador ciego a las condiciones impuestas en cada pozo. Los datos fueron evaluados estadísticamente mediante 2-way ANOVAs, con terreno de espesor como la medida de resultado, el tratamiento de anticuerpos (sólo vehículo, 2 μ g / ml anti-A ↕ IgG, o 10 μ g / ml anti-A ↕ IgG) en el primer Factor, y el tratamiento con AINEs (sólo vehículo, 0,1 μ g / ml indometacina, o 1,0 μ g / ml indometacina) como el segundo factor.

Microglial la secreción de citoquinas

Evaluar los efectos de opsonization con anti-A β anticuerpos, microglial culturas se preincubated con vehículo o 10 μ g / ml anti-A monoclonal 6E10 β seguido por 4 horas de exposición a 0 o 10 μ M preaggregated A β1-42 (Bachem). Medio condicionado fue entonces objeto de TNF-α ELISA (R & D Systems) utilizando protocolos del fabricante. Para confirmar los resultados con otro de citoquinas pro-inflamatorias, y para evaluar la interacción de los anticuerpos con indometacina opsonization, microglial culturas se preincubated con vehículo o 10 μ g / ml 6E10, como antes, sino en la presencia o ausencia de 1 μ g / ml indometacina . Después de una incubación de 4 horas con 0 o 10 μ M A β1-42, el medio condicionado fue objeto de IL-6 ELISA (R & D Systems) utilizando protocolos del fabricante.

Resultados
Microglial la migración a un β spots

En general y dentro de cada condición de tratamiento hubo cambios en la distribución de microglial, en consonancia con quimiotaxis, que son a la vez visualmente aparente (Figs. 2A, 2C] y estadísticamente significativa (Figs. 2B, 2D]. Al Día 3, la mayor concentración de microglia fueron a mitad de camino entre la más distal y proximal de puntos de la A β spots (F = Distancia 40,1, P = 0,000; -. R = 17, P = 0,000; m = -. 016) (Fig . 2B]. Al Día 9, las mayores concentraciones de microglia se encontraban en o cerca de las manchas (F Distancia = 99,2, P = 0,000; -. R = 41, P = 0,000; m = -. 041) (Fig. 2D]. Microglia sembró en pozos sin un β spots se mantuvo esencialmente distribuidos al azar a lo largo de estos períodos de tiempo. Opsonization con anti-A β anticuerpos significativamente mayor quimiotaxis-como los cambios en las distribuciones microglial, un efecto que es especialmente prominente en el Día 9 (Tabla 1] (Fig. 3]. La indometacina no tuvo efecto significativo o evidente en los cambios de distribuciones microglial en el tiempo en ninguna de las β Un tratamiento de anticuerpos condiciones. De hecho, el mayor índice de quimiotaxis (pendiente) observado en el estudio se produjo en las más altas dosis de indometacina (1,0 μ g / ml indometacina más 10 μ g / ml anti-β A Distancia) (F = 38,9, P = 0,000; R = 0,69, P = 0,000; m = -. 073), y el segundo mayor índice de quimiotaxis se produjo en la segunda más alta dosis de indometacina (0,1 μ g / ml indometacina más 10 μ g / ml anti-β A Distancia) (F = 12,9, P = 0,000; R -. = 53, P = 0,000; m = -. 060 (Fig. 3].

Diferencial frente a la proliferación de quimiotaxis

Proliferación de microglia más proximal a la A β spots, en lugar de una verdadera quimiotaxis, no explicó los cambios en microglial distribuciones que se exhibieron más de tiempo y en las diversas condiciones de tratamiento. Había poco o ningún BrdU tinción bajo ninguna condición (no se muestra) y, de hecho, hubo una leve pero significativa disminución de los números microglial en todas las condiciones y el tratamiento general de Día 3 (media microglial density/0.25 mm 2 en cada cuadro = 40,8 ± 0,3) a Día 9 (media microglial density/0.25 mm 2 en cada cuadro = 37,8 ± 0,4) (F = 34,5 En general, P = 0.000). De acuerdo con nuestra experiencia anterior, AD microglia estimulado con M-CSF como un control positivo mostraron poca o ninguna evidencia de la proliferación. Sin embargo, M-CSF-estimulado células THP-1 (una línea de los monocitos a menudo utilizado como un sustituto de la microglia) que se ejecuta en paralelo mostraron clara proliferación en las mismas condiciones de ensayo BrdU (datos no presentados).

Microglial fagocitosis de A β

Después de la incubación con microglia en virtud de las distintas condiciones experimentales, la visible degradación de los lugares de A β era evidente (Fig. 4A], mientras que un β manchas en los pozos que no contengan microglia permanecido intacta visiblemente en el mismo los períodos de tiempo (Fig. 4B]. Coincidiendo con la degradación de la A β manchas, microglia en el contacto con las manchas se convirtió en un β inmunorreactivas (Fig. 4A], mientras que exhibieron poca o ninguna A β inmunoreactividad antes de ser sembrado en los pozos (Fig. 4C]. Opsonization de A β puntos con 2 μ g / ml anti-A β anticuerpos 6E10 (F = 28,7, P = 0,006) o 10 μ g / ml anti-A β anticuerpos 6E10 (F = 35,3, P = 0,004) como resultado significativamente menor (delgado) Un β Puntos en comparación con la condición de control del vehículo (Fig. 4D]. Estos efectos no fueron significativamente materialmente o inhibidas por la indometacina, incluso en el más alto, 1,0 μ g / ml concentración indometacina (de 2 μ g / ml anti-A β ± 1,0 μ g / ml indometacina: F = 0,3, P = 0,639) (10 μ g / Ml anti-A más β ± 1,0 μ g / ml indometacina: F = 0,9, P = 0,402) (Fig. 4D].

Microglial la secreción de citoquinas

De acuerdo con nuestros estudios anteriores que abarcan una amplia gama de citocinas, quimiocinas, inflamatorios y toxinas [12], la exposición de microglia β significativamente a un aumento de la secreción de TNF-α (Fig. 5A] y la IL-6 (Fig. 5B], en comparación con las culturas Que no fueron expuestos a un β. Opsonization con 10 μ g / ml anti-A β anticuerpos 6E10 aumentado un β-inducida por TNF-α (Fig. 5A], y la secreción de IL-6 (Fig. 5B]. Aumento de la expresión de IL-6, sin embargo, se redujo significativamente por el tratamiento con indometacina (Fig. 5B]. La secreción de citoquinas suele ser bastante rápida respuesta que disminuye con el tiempo. Presumiblemente, las células receptivas de citoquinas son sometidos posteriormente a más largo plazo, como aumento de las respuestas quimiotaxis o fagocíticas comportamientos. En consonancia con esto, hemos observado cambios significativos en el TNF-α e IL-6, los niveles 4 horas después de la exposición de microglia a un β, pero no 3, 6 ó 9 días después de la exposición a un β (datos no presentados).

Discusión

En el presente estudio se encontró que AD microglia in vitro migrar hacia un β agregados, el intento de phagocytose agregados, y su aumento de la secreción de TNF-α e IL-6 en el proceso. Opsonization de A β agregados con anti-A β anticuerpos 6E10 aumentado estos procesos. Por el contrario, los AINE común indometacina no tenía material o efecto estadístico de la migración microglial o fagocitosis, pero inhibió el aumento de la secreción de IL-6 se observa con anti-A β opsonization.

Los cambios en relación con las distribuciones microglial A β puntos en el tiempo se explica por la mayor parsimonia quimiotaxis respuestas a un β. Proliferación de microglia más proximal a un β agregados no se observa y, de hecho, BrdU reactividad, un marcador de proliferación celular, es insignificante en todas las distancias de los agregados. Chemokinesis, pero no mayor movimiento de las células, también no parecen explicar los resultados, ya que la migración microglial exhibió el gradiente características de quimiotaxis, con aumento progresivo en la densidad de microglia a distancias más proximal a un β agregados. Además, microglia son ahora bien establecida para expresar los receptores que puede mediar quimiotaxis conductas, y que parecen tener una β como ligando. Estos incluyen el receptor scavenger de macrófagos [16 - 18], el receptor de avanzada glycation finales (RAGE) [15], el receptor péptido formil [19], y otros [20, 21]. RAGE, en particular, se ha demostrado para ayudar a mediar en la migración a un microglial β spots in vitro en un paradigma similar al que se usa aquí, y esta migración puede ser inhibida por anti-fragmentos Fab RAGE [15].

AD microglia in vitro también mostraron comportamientos compatibles con la fagocitosis de A β agregados. Introducir el paradigma, la microglia mostraron poca o ninguna A β inmunoreactividad. Después de 12 días de incubación, con un β manchas, la microglia son muy inmunorreactivas para un β y la disminución de puntos de tamaño. A β sin manchas microglia se mantuvo esencialmente intacto durante el mismo período de tiempo. Anterior ultraestructurales y otros estudios [3, 22, 23] también han identificado un β filamentos dentro de microglia en las proximidades de A β AD depósitos en la corteza. Aunque sigue siendo posible que la intracelular A β dentro de la AD en microglia cerebral puede haber sido producida por las células [24] en lugar de phagocytosed de un depósito extracelular, esto evidentemente no es el proceso observado en el presente los estudios in vitro. Se concluye, por tanto, que AD microglia in vitro phagocytose hacer un agregado β depósitos. En vista de la accesibilidad experimental del modelo, será de interés en el futuro para evaluar el destino de phagocytosed molecular A β cultivadas en AD microglia.

La exposición a los agregados A β también indujo un aumento significativo de TNF-α y de la secreción de IL-6, lo que confirma nuestros experimentos anteriores [12] y los de otros [25 - 27] con el TNF-α, IL-6, y una amplia gama de quimiocinas, Citoquinas, y las toxinas inflamatorias tales como reactivas de oxígeno y nitrógeno especies. Vías para mejorar el TNF-α y de la secreción de IL-6 se han demostrado, con inclusión de NF-kB y la C / EBP transcripcional mecanismos, que son patológicamente-mayor en las regiones vulnerables de la AD cerebro [28, 29].

Opsonization de A β spots con anti-A β anticuerpos 6E10 significativamente mayor microglial migración a las manchas, la fagocitosis de las manchas, y la secreción de citoquinas. Opsonization de similares efectos sobre la migración y fagocitosis microglial También se ha informado de utilizar anti-A β anticuerpos y una preparación in vitro de roedores en cultivo en el que se sembró en microglia postmortem AD corteza secciones cargadas de un β depósitos [6]. Fab soluble que contiene fragmentos de la región Fc de ligando del receptor Fc vinculante inhibido A β eliminación en este paradigma. Estos efectos son consistentes con los clásicos mecanismos de anticuerpos opsonization inmune de los objetivos por los anticuerpos específicos de epítopos en el blanco. Scavenger células que expresan receptores para la región Fc de los anticuerpos se dirigen a o pasado a concentrarse en el lugar donde los anticuerpos meta sujeta reside. La activación de los receptores Fc, además, activa las células scavenger, ataque y promoción de la fagocitosis. Recientemente, científicos de Elan Pharmaceuticals han tratado de aprovechar estos mecanismos para mejorar la limpieza de un β, mediante la inmunización con una β para conducir la lucha contra la producción de β-A anticuerpos para un posterior β opsonization [6, 30]. Aunque existe controversia sobre el sitio exacto de acción de los anticuerpos (por ejemplo, el cerebro frente a la circulación periférica) [6, 30, 31], este enfoque hace claramente significativa en el resultado y, a veces, dramáticas reducciones de A β carga en modelos de ratones transgénicos [6] , Así como el modelo in vitro probado aquí, y también puede haber sido eficaz en humanos de las pacientes que recibieron la inmunización A β [30].

Lamentablemente, sin embargo, respuestas inflamatorias a menudo son un arma de doble filo. Receptor Fc vinculante que se conoce para mejorar la activación y pro-inflamatorias respuesta secretora de las células que soportan scavenger receptores Fc, y microglia hacer expresar estos receptores [6, 32]. El aumento de TNF-α y de la secreción de IL-6 observado en el presente después de los experimentos opsonization de A β agregados con un anti-A β de anticuerpos, 6E10, por lo que no es inesperado. En la activación, microglial células son, de hecho, bien establecido de secretar una amplia gama de mediadores de la inflamación que no sólo podría causar daños a las neuronas y neurites a nivel local, sino también, si es suficientemente activa, proporcionar a señalización periférica células inmunitarias para provocar un más generalizado Y grave respuesta como la que se informó en varias β-Un inmunizados letal pacientes que experimentaron reacciones adversas [30].

La gran mayoría de los AINE en uso hoy en día se basan en el principio de la inhibición de la ciclooxigenasa, y la inhibición de la ciclooxigenasa, a su vez, está bien establecido downregulate a una amplia gama de reactantes de fase aguda. Curiosamente, sin embargo, a los mecanismos de quimiotaxis y fagocitosis de una respuesta inflamatoria objetivo no son necesariamente dependientes de la ciclooxigenasa. En una encuesta, por ejemplo, de las 100 primeras publicaciones recuperado de PubMed utilizando la frase de búsqueda "Y quimiotaxis indometacina", la mayoría de los estudios no encontró efecto de la indometacina en la quimiotaxis, y algunos de los documentos de hecho informó de una mayor exposición quimiotaxis después de la indometacina . Estos resultados se han sugerido para explicar por qué los médicos prescriben comúnmente AINE para controlar la fiebre y otros secundarios respuestas inflamatorias sin ser excesivamente preocupados por obstaculizar inmune mediada por la eliminación de la inducción de la fiebre-agente. Del mismo modo, en el presente experimentos indometacina no tenía material o efecto estadísticamente significativo sobre microglial o quimiotaxis a la fagocitosis de A β agregados, pero sí inhiben significativamente la exacerbada respuesta de IL-6 en virtud de opsonized condiciones. Aunque nunca es seguro de que los resultados in vitro sean plenamente aplicables a la situación in vivo, estos resultados sugieren que la indometacina o un AINE como podría ser un útil complemento de las estrategias de inmunización A β.

Conflicto de intereses

JR es una co-inventor en una patente de Estados Unidos emitida abarca el uso de los fármacos antiinflamatorios no esteroides como tratamiento para la enfermedad de Alzheimer. Todos los demás autores declaran que no tienen intereses en competencia.

Contribuciones de los autores

JR concebido y diseñado los experimentos, realizados todos los análisis de los datos, y escribió el manuscrito. RS supervisó y participó en todos los experimentos. CJK realizó la quimiotaxis, fagocitosis, y de citoquinas experimentos. DM, BL, y AG preparado culturas y realizó histoquímica e inmunocitoquímica.

Agradecimientos

Esta investigación fue apoyada directamente por la Agencia Nacional de AGO7367. El apoyo institucional para la investigación de la enfermedad de Alzheimer fue proporcionada por el Arizona Alzheimer's Disease Core Center (P30 AG019610) (NIA) y la enfermedad de Alzheimer Consorcio de Arizona (Estado de Arizona). Damos las gracias a Kyle Mueller, Gita Seetharaman, y Leyla Descheny de asistencia técnica, y el doctor Emily Lue y el doctor Douglas Walker para el asesoramiento técnico.