Journal of Carcinogenesis, 2005; 4: 14-14 (más artículos en esta revista)

Mucina expresión fenotípica y alteración de los genes p53 gástrico super minutos adenocarcinoma bien diferenciado: Re-evaluación con la relación entre la histogénesis de adenocarcinoma bien diferenciado y metaplasia intestinal en el estómago distal

BioMed Central
Ryo Wada (ryo5573@q01.itscom.net) [1], Toshikazu Yamaguchi (ryo5573@q01.itscom.net) [3], Takayuki Tanizaki (ryo5573@itscom.net) [1]
[1] El Departamento de Anatomía Patológica, Hospital Juntendo Shizuoka de Juntendo University School of Medicine, de Shizuoka, Japón
[2] El Departamento de Patología (I), Juntendo University School of Medicine, de Tokio, Japón
[3] Centro de I + D, Biomedical Laboratories, Inc, Saitama, Japón

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Resumen
Antecedentes

Aunque la gástrico adenocarcinoma bien diferenciado en el estómago distal ha sido pensado para desarrollar a través de un carcinoma de metaplasia intestinal-secuencia, hay algunos disproofs de nuevos exámenes para mucina minutos-en el mismo tamaño de las lesiones tipo de carcinoma. El presente estudio fue realizado, y señala los nuevos resultados de la solución al problema de acuerdo con el punto que se ha descrito anteriormente.

Métodos

12 minutos super lesiones (menos de 1 mm de diámetro máximo) de adenocarcinoma bien diferenciado en el estómago distal (SMCa), que se detectaron a partir de la patológica exámenes de 210 especímenes de estómago resecado quirúrgicamente, y la mucosa adyacente a estas lesiones de carcinoma, se Examinado por inmunohistoquímica mucina coloraciones (MUC2 y CD-10: fenotipo intestinal, 45M1 y MUC6: fenotipo gástrico) y sobreexpresión de p53. Y el análisis de los errores de replicación de los microsatélites en el cromosoma 17 relacionados con el gen p53 (TP53 y D17S786) (RER-p53MS) se realizaron en SMCa lesiones, la mucosa adyacente a cada lesión y otros mucosa gástrica con metaplasia intestinal, ya que todas las lesiones mostraron SMCa Immunohistochemically sobreexpresión de p53, que se describe a continuación.

Resultados

1. El carcinoma de células en todos los SMCa lesiones fueron positivas para 45M1 y p53. Por otra parte, no carcinoma de células positivas para MUC6 se observó a pesar de que la pyloric glándulas y de la glándula remanente pyloric en el SMCa lesiones en el mismo diapositivas fueron positivos para MUC6. Diez lesiones (83%) había fenotípica mucina intestinal (10 lesiones: MUC2 (+), el 4 de lesiones: CD10 (+)). Dos lesiones (17%) fueron positivos para sólo 45M1 (mucina gástrica fenotípica). 2. Todos los de la mucosa adyacente a SMCa mostró metaplasia intestinal (tipo completo: 7 regiones, incompleta tipo: 5 regiones). 3. RER-p53MS se confirmó en el 42% (5 / 12 regiones), de SMCa, en el 42% (5 / 12 regiones) de la mucosa adyacente a SMCa y el 14% (6 / 42 regiones) de los otros metaplasia intestinal mucosa.

Conclusión

La mayoría de los super minutos adenocarcinoma bien diferenciado lesiones en el estómago distal, que había tanto gástrica e intestinal fenotípica mucina, se considera que el desarrollo de la zona proliferativa tubular con el tipo incompleta de la metaplasia intestinal y la alteración de genes p53, mientras que una parte De ellos, que sólo había fenotípica mucina gástrica, pueden derivar de los túbulos gástrico nativos (no de metaplasia del epitelio) con el gen p53 anormalidad.

Antecedentes

Aunque el adenocarcinoma gástrico diferenciadas ha sido pensado para desarrollar a través de una metaplasia intestinal-carcinoma secuencia [1 - 4], hay algunos disproofs [5] que el adenocarcinoma gástrico diferenciadas desarrolla tener una mala relación con la metaplasia intestinal, de los nuevos exámenes de mucina Minuto de tamaño carcinoma [6, 7] en el mismo tipo. Así, algunos problemas para que la histogénesis de la gástrico diferenciadas adenocarcinomaare considera que aún quedan.

Para aclarar la verdadera histogénesis del carcinoma del tracto digestivo, el extremadamente pequeño tamaño se encontraron lesiones de carcinoma y las lesiones de la mucosa incluidos cerca de los mismos, deben ser examinadas con silicona, y de las moléculas biológicamente. Dado que casi todas las lesiones del tracto digestivo desarrollar carcinoma de epitelio de la mucosa y en el minuto de tamaño carcinoma y las lesiones de la mucosa cerca de los mismos, puede expresar la condición inicial cuando cada uno de desarrollar carcinoma.

De acuerdo con el punto que se ha descrito anteriormente, el presente estudio se realizó y señaló los nuevos resultados de la solución a este problema.

En este estudio, en primer lugar, la inmunohistoquímica mucina-coloraciones y sobreexpresión de p53-, y secundaria, el error de replicación (RER), de los microsatélites (MS) en el cromosoma 17 del gen p53 relacionadas con la super minutos de tamaño diferenciado adenocarcinoma lesiones en el estómago humano , Cuya definición se describen a continuación, fueron investigadas, ya que el carcinoma de células fueron positivos p53 en carcinoma de todas las lesiones en el actual estudio, y los nuevos descubrimientos sobre histogénesis de adenocarcinoma gástrico fueron revelados.

Métodos

Doce lesiones tubulares proliferativa (dentro de 1 mm de diámetro máximo) con atipia celular y los límites para el barrio, que fueron diagnosticados como de alto grado de neoplasia intraepitelial de acuerdo a la clasificación de Viena y la OMS [8, 9] y como adenocarcinoma bien diferenciado De acuerdo a la clasificación de la Sociedad Japonesa para la Investigación del Cáncer gástrico [10] (la super minutos de tamaño adenocarcinoma bien diferenciado en el estómago distal: SMCa) (Figura 1 y 2], se detectaron en el estómago distal de los exámenes patológicos de 210 especímenes de estómago resecado quirúrgicamente con principios de cáncer, evaluó en el Departamento de Patología, Universidad Juntendo hospital y el Hospital de Shizuoka, entre 1982 y 2003. Aunque en los casos entre 1999 y 2003, el consentimiento informado para los exámenes patológicos y moleculares se obtainted de cada paciente, en otros casos, el consentimiento informado no se pudieron obtener debido a que el sistema del consentimiento informado para los pacientes fue construido en 1999.

El estómago especímenes descritas anteriormente se fija en 10% y la solución de formalina tamponada preparada por el corte de casi la totalidad de los estómagos en la zona 3 - 5 mm de ancho secciones. Cada sección se embebidos en parafina y teñidas con hematoxilina y eosina (HE). Y cada secciones con 12 SMCa lesiones antes descritas se redujeron en serie y teñidas con HE, y las mayores dimensiones de las lesiones se determinó (655 - 958 μ m). Los casos con SMCa lesiones fueron consideradas como casos de los múltiples tipos de cáncer gástrico por los criterios de Moertel et al. [11].

El uso de todos los bloques de parafina con SMCa lesiones y 10 bloques de parafina sin neoplasia en cada estómago, y la mucosa adyacente a SMCa lesiones fueron examinados por inmunohistoquímica mucina coloraciones como se muestra en el cuadro 1 (MUC2 y CD-10: fenotipo intestinal, 45M1 y MUC6: Fenotipo gástrico). Estos 4 mucina coloraciones son más populares para la detección de fenotipos de la mucina diferenciadas adenocarcinoma gástrico [12].

Y hemos tratado de examinar una serie de exones para detectar el gen p53 anomalías, ya que todas las lesiones gástricas de la super minutos bien diferenciados adenocarcinomas muestran sobreexpresión de p53 immunohistochemically, que se describen a continuación (en "Resultados"). Sin embargo, es difícil de examinar, porque la meta fici eran demasiado pequeñas y en el posterior a la solución de formalina condición. Secundaria, hemos tratado de estimar la existencia o inexistencia de los genes p53 anomalías utilizando marcadores microsatélites en el cromosoma 17 relacionados con el gen p53 (RER-p53MS).

Inmunohistoquímica coloraciones

Mucina-coloraciones de inmunohistoquímica fueron realizados por la avidina-biotina-peroxidasa-complejo método con cada una de las condiciones, como se muestra en la Tabla 1. Recientemente, se ha señalado que los datos de la mucina fenotipos de las lesiones va a cambiar accroding a qué porcentaje de células positivas en cada coloraciones se juzga como positivo en cada coloraciones [13]. En este estudio, la mucina fenotipos de las lesiones se determinó a través de positivos (> 0% de los carcinomas de células) o negativa. Debido a que el objetivo de las lesiones en este estudio fueron muy pequeñas lesiones, y aunque sólo sea un carcinoma de células fue positivo, esta positividad debe ser considerada como la eficaz y valiosa de datos. Y oncogénica p53-tinción con anticuerpos microondas tratamiento se ha hecho en muchas secciones (p53: A-7, Novocastra Inc, Reino Unido).

Extracción de ADN y análisis de RER-p53MS utilizando marcadores microsatélites (TP53 y D17S786)

Los bloques de parafina con el objetivo de los focos antes mencionados se prepararon para la extracción de ADN. El objetivo de los focos se microdissected usando una aguja de calibre 20-, la comparación de la diapositiva con HE en la misma posición. El ADN extraído fue diluido con 500 μ l de Solución de aislamiento de ADN (ADN isolater Extracción de ADN de Parafina-embebido de tejido, Inc Wako, Osaka). En este estudio, se SMCa objetivo focos y otros gástrica no neoplásica, la mucosa y el ADN extraído de ellos fueron utilizados como plantilla de la DNA en la reacción en cadena de polimerasa (PCR). Sin embargo, en aproximadamente la mitad de la meta focos, el ADN no puede ser extraído, ya que estos focos pueden ser objetivo demasiado pequeño y, además, estos materiales fueron realizados por la solución de formalina. Y se ha descrito anteriormente, ya que la finalidad de los exámenes de biología molecular es conocer la existencia o inexistencia de anomalías gen p53 objetivo de los focos, TP53 y D17S786 fueron seleccionados como marcadores de microsatélites en el estudio actual, según la propuesta de Instituto Nacional del Cáncer de talleres [14 ].

RER-p53MS se investigó el uso de alta resolución fluorescenced etiquetados PCR primers en proporción al método de Tsuchida et al. [15]. El esquema de la misma: 1. PCR se realizó con 1 μ l de lisado ADN, de 100 μ M dNTP, 1,5 mM de MgCl 2, 1 μ M de cada cebador marcado con tinte fluorescente de tres colores como azul, verde y amarillo, 0,625 U Taq polimerasa de ADN y 1 × PCR buffer [con 10 MM Tris-HCl (pH 8,3 a 25 ° C), 50 mM KCl y 0,001% (w / v) gelatina] en un termociclador. 2. La electroforesis se realizó 2 horas en medio de un ABI-377-secuenciador automático de ADN (PE Bio-sistemas, Inc, Foster City, CA, EE.UU.). 3. Se hizo una comparación de los picos del mismo marcador derivados de gástrica no neoplásica, y la mucosa y metaplasia SMCa lesiones, usando la forma de onda Gene Scan TM softwave analizado, y por turnos fueron evaluados. El cambio (+) cuando se determinó un nuevo máximo no reconoce con no neoplásica, y de metaplasia del tejido se confirmó con el objetivo de la mucosa con metaplasia intestinal o SMCa lesiones, es decir, RER-p53MS fue positivo (Figura 3].

Aunque hemos tratado de examinar la existencia de Helicobacter pylori SMCa lesiones en la mucosa y las adyacentes a ellas, la superficie de la capa mucosa espécimen estómagos, en la que a menudo Helicobacter pylori puede existir, fue arrastrada a tomar fotografía de cada ejemplar, y la SMCa relación entre Helicobacter pylori y no puede ser examinado.

Los datos fueron analizados estadísticamente con la prueba t de Student (t-test) y la prueba de ji al cuadrado, un valor de p inferior a 0,05 se consideró significativo.

Resultados
1. Mucina fenotipos de SMCa (Tabla 2]

El carcinoma de células en todos los SMCa lesiones fueron positivas para 45M1 (Figura 4]. Por otro lado, no en todas las células de carcinoma de SMCa lesiones fueron positivas para MUC6, aunque el pyloric glándulas y el remanente pyloric glándulas en SMCa lesiones, que se observaron en el mismo diapositivas, fueron positivos para MUC6. Diez lesiones (83%) había fenotípica mucina intestinal (10 lesiones: MUC2 (+), el 4 de lesiones: CD10 (+)) (Figura 5]. Dos lesiones (17%) fueron positivos para sólo 45M1. Es decir, entre SMCa lesiones, 10 lesiones (83%) tenían tanto gástrica e intestinal fenotípica mucina y 2 lesiones (17%) tenían sólo fenotípica mucina gástrica.

2. La mucosa adyacente a SMCa lesiones

Todos los de la mucosa adyacente a SMCa mostró metaplasia intestinal (tipo completo: 7 regiones, incompleta tipo: 5 regiones, por los criterios de Filipe et al. [16]].

3. Sobreexpresión de p53 y la frecuencia de RER-p53MS en SMCa y de la mucosa cerca de los mismos,

Aunque la mayoría de las células de carcinoma en cada SMCa fue positiva para p53 (Figura 6], no era positiva para p53 en células de la mucosa adyacente a SMCa y otros metaplasia intestinal.

RER-p53MS se confirmó en el 42% (5 / 12 regiones), de SMCa, en el 42% (5 / 12) de la mucosa adyacente a SMCa y el 14% (6 / 42) de los otros metaplasia intestinal mucosa (tipo completo: 17 %, 4 / 23, incompleta tipo: 11%, 2 / 19), como se muestra en la Tabla 3.

Discusión

Si bien diferenciadas adenocarcinoma gástrico se cree que se desarrollan a partir de metaplasia intestinal [1 - 4], hay la refutación informes utilizando un nuevo examen de los métodos de mucina [5 - 7]. Por lo tanto, la histogénesis de la diferenciadas adenocarcinoma gástrico puede ser todavía poco clara.

El pequeño carcinoma lesión se piensa que es un buen modelo para la investigación de la histogénesis del carcinoma del tracto digestivo, ya que casi todas las lesiones del tracto digestivo desarrollar carcinoma de epitelio de la mucosa y en el minuto de tamaño carcinoma y las lesiones de la mucosa cerca de los mismos, pueden expresar la Condición inicial cuando cada desarrollar carcinoma. Por lo tanto, las lesiones de carcinoma debe ser lo más pequeño posible para examinar las conclusiones originales en la mucina fenotipos o anomalías en el gen, y por otra parte la expresión de mucinas esencial en la pequeña lesiones deben ser determinados como "positiva" incluso si un carcinoma de células fue positivo.

Así, la expresión de mucinas y anomalías en el gen super minutos de tamaño gástrico adenocarcinoma bien diferenciado, que se han demostrado en las etapas iniciales del mismo tipo de carcinoma, se cree que todavía poco clara y el actual estudio se realizó centrándose en el presente, Y algunas interesantes conclusiones fueron reveladas en el estudio actual.

SMCa en el actual estudio se define como la proliferación tubular con atipia celular y estructural, diagnosticados como de alto grado de acuerdo a neoplasia intraepitelial de Viena, [8] y la clasificación de la OMS [9], y como adenocarcinoma bien diferenciado de acuerdo a la clasificación de la Sociedad Japonesa para la Investigación del Cáncer gástrico [10]. Así, SMCa lesiones se cree que la fase inicial de desarrollo de la gástrico adenocarcinoma bien diferenciado.

Los resultados obtenidos en el presente estudio mostró que 1. Entre SMCa lesiones, todas las lesiones de carcinoma fueron positivos para 45M1 y p53, y no carcinoma de las células fueron positivas para MUC6. Diez SMCa lesiones (83%) había fenotípica mucina intestinal (10 lesiones: MUC2 (+), el 4 de lesiones: CD10 (+)). Dos SMCa lesiones (17%) fueron positivos para sólo 45M1. Es decir, entre SMCa lesiones, 10 lesiones (83%) tenían tanto gástrica e intestinal fenotípica mucina y 2 lesiones (17%) tenían sólo fenotípica mucina gástrica. 2. Todos los de la mucosa adyacente a SMCa mostró metaplasia intestinal (tipo completo: 7 regiones, incompleta tipo: 5 regiones). 3. RER-p53MS se confirmó en el 42% (5 / 12 regiones), de SMCa, en el 42% (5 / 12 regiones) de la mucosa adyacente a SMCa y el 14% (6 / 42 regiones) de los otros metaplasia intestinal mucosa.

Aunque la mucina de fenotipos SMCa lesiones difieren de los datos de otros informes utilizando el adenocarcinoma gástrico minutos diferenciadas [6, 7], la razón de las diferencias que pueda provenir de las diferencias de la definición de la positividad en cada coloraciones se ha descrito anteriormente. En el estudio actual, las lesiones fueron juzgados como "positiva" incluso si un carcinoma de células fue positivo en cada tinción. Los datos en el RER-p53MS de SMCa se almostly igual a la de datos de MS inestabilidad o la pérdida de heterozigosidad en el adenocarcinoma gástrico diferenciadas y metaplasia intestinal en otros informes [17 - 19].

Centrándose en la histogénesis de la diffrentiated adenocarcinoma gástrico, los resultados de las expresiones de mucina SMCa gástrico reveló que el adenocarcinoma bien diferenciado no debería derivar de la metaplasia intestinal sin remanente gástrico original túbulos (los túbulos intercambiado perfectamente por metaplasia intestinal), porque todos SMCa lesiones gástricas fenotípica tenido la mucina. Sin embargo, la mayoría de SMCa pueden desarrollar con una relación a la metaplasia intestinal, ya que también había la mucina intestinal fenotípica. A saber, la mayoría de las lesiones SMCa debe derivar de los nativos túbulo gástrica con una parte de metaplasia intestinal y el gen p53 anormalidad.

Por otra parte, una minoría de SMCa sólo había fenotípica mucina gástrica, se considera que se desarrollan a partir de los túbulos nativos gástrico sin metaplasia intestinal y con el gen p53 anormalidad.

Así, cuando las sentencias de la mucina gástrica expresiones en el super minutos adenocarcinoma bien diferenciado se realiza como estrictamente como el estudio actual, aunque la principal vía de la histogénesis de la diferenciadas adenocarcinoma gástrico se piensa que es la metaplasia intestinal-carcinoma secuencia Como antes, es muy importante que algunos de adenocarcinoma bien diferenciado pueden derivar de los túbulos gástrico nativos sin relación a la metaplasia intestinal. Esa es decir, la metaplasia intestinal no debe ser el factor indispensable en el desarrollo de la ifferentiated adenocarcinoma bien en el estómago distal.

En el estudio actual, la meta se limitaron a lesiones las lesiones en el estómago distal, ya que el carcinoma de las lesiones como lesiones SMCa no se encuentra en el estómago proximal incluyendo el cardias gástrico. Por lo tanto, no podía señalar la histogénesis de la gástrico adenocarcinoma bien diferenciado en el conjunto de estómago. El nuevo estudio entre la histogénesis de adenocarcinoma gástrico diferenciadas y la metaplasia intestinal se espera.

Abreviaturas

SMCa, super minutos de lesiones (menos de 1 mm de diámetro máximo) de adenocarcinoma bien diferenciado en el estómago distal; RER, la repetición de errores; MS, microsatélite

Agradecimientos

Los autores gracias Sr Mrozek D manuscrito con la asistencia, y muchas personas, a partir Dr Noriyuki Kuwabara (Universidad Juntendo) y el doctor Koichi Suda (Universidad Juntendo) para apoyo en la recogida de los objetivos de lesiones, y el doctor Michio Matsumoto (Juntendo Universidad de Shizuoka Hospital) para el apoyo en la gestión de este estudio.