CytoJournal, 2005; 2: 14-14 (más artículos en esta revista)

Es un aumento de células T CD4/CD8 ratio en los ganglios linfáticos aspiración con aguja fina de utilidad para el diagnóstico de linfoma de Hodgkin? Un estudio de 85 ganglios linfáticos FNAs con una mayor proporción CD4/CD8

BioMed Central
Osvaldo Hernández (hernao01@med.nyu.edu) [1], Thaira Oweity (thiara.oweity @ med.nyu.edu) [1], el Sheriff Ibrahim (ibrahs01@med.nyu.edu) [1]
[1] New York University Medical Center, Departamento de Patología, Nueva York, Nueva York, EE.UU.

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Resumen
Antecedentes

Un elevado de células T CD4/CD8 ratio de citometría de flujo (FCM), se han analizado en la literatura de estar asociado con el linfoma de Hodgkin (HL). El objetivo de nuestro estudio fue determinar la importancia del diagnóstico de un elevado coeficiente CD4/CD8 en los ganglios linfáticos aspiración con aguja fina (PAAF) especímenes.

Diseño

Entre 1996 y 2002, de un total de 837 ganglios linfáticos FNAs presentado para el análisis de citometría de flujo, 85 casos se observó una elevada proporción CD4/CD8, definida como mayor o igual a 4, sin pruebas definitivas de un trastorno linfoproliferativo. El diagnóstico citológico de estos 85 casos se agrupan en cuatro categorías: reactiva, atípica, linfoma de Hodgkin (HL), y linfoma no Hodgkin (NHL). Histológico de seguimiento está disponible en 17/85 (20%) de los casos.

Resultados

5 de los 64 casos en que la FCM y la citología no reveló pruebas de una enfermedad linfoproliferativa había tejido de seguimiento debido a la persistente linfadenopatía y alta sospecha clínica. 3 / 5 (60%) se confirmó el diagnóstico de la linfadenopatía reactiva. Los dos casos restantes (40%) fueron positivos para el linfoma (1HL, 1NHL). 8 / 15 casos de citología atípica había histológico de seguimiento. 7 / 8 (87,5%) casos fueron positivos para el linfoma (3HL, 4NHL). 3 / 4 casos llamado HL citología ha tejido sobre el seguimiento de todos y 3 (100%) se confirmó el diagnóstico de HL. Uno de los casos diagnosticados de LNH en la citología resultó ser un difuso de células B grandes linfoma. En resumen, de un total de 17 casos con seguimiento histológico 4 / 17 (24%) fueron reactivas con células T CD4/CD8 ratio de 4.1-29, 7 / 17 (41%) fueron HLs con células T CD4/CD8 Ratio de 5,3 - 11, y de 6 / 17 (35%) fueron con LNH de células T CD4/CD8 ratio de 4,2 - 14.

Conclusión

Una elevada proporción de CD4/CD8 FCM es un hallazgo inespecífico que puede ser visto en los dos reactivos y trastornos linfoproliferativos. El citomorfológico características de los frotis son más pertinentes que la citometría de flujo único de la búsqueda de un elevado cociente CD4/CD8.

Introducción

Realizar una biopsia excisional de la ampliación de los ganglios linfáticos se ha considerado la práctica estándar para la evaluación de las adenopatías, en especial en pacientes sin historia previa de linfoma [1]. Un extirpados los ganglios linfáticos proporciona suficiente material histológico y citológico para evaluar los detalles arquitectónicos. En muchos centros incluida la nuestra, ahora es cada vez más frecuente la renuncia a biopsia excisional y, en lugar de realizar-aspiración con aguja fina (PAAF) como los primeros trabajos en marcha para linfadenopatía [2 - 5]. Además de ser un procedimiento seguro y rápido, porque son eficaces FNAs actual de los sistemas de clasificación de linfoma de poner más énfasis en el inmunofenotipo y genotipo [6]. Una dotación suficiente de material puede ser aspirada para citomorfología, citometría de flujo (FCM), y estudios moleculares. Aunque FNAs han demostrado ser eficaces en la evaluación de los linfomas, especialmente cuando se utiliza en conjunción con FCM, algunos trastornos pueden ser difíciles de diagnosticar.

El diagnóstico de linfoma de Hodgkin por FNA biopsia es difícil [7 - 9]. Se requiere la presencia de diagnóstico de Reed-Sternberg (RS), las células o sus variantes (clásica, lacunares, palomitas de maíz (linfocítica histiocítico, L & H) y momificados) en un fondo mixto compuesto celular de los pequeños linfocitos, eosinófilos, células plasmáticas y neutrófilos. La dificultad surge del hecho de que el número de células de diagnóstico puede ser limitada a unas pocas células RS o variantes. Además, las células RS no puede ser visto porque la aspiración ganglionar es sólo parcialmente implicados por el proceso neoplásico, lo que disminuye la posibilidad de obtener el diagnóstico de las células, o porque las células neoplásicas son ocultados por la fibrosis, granulomas o necrosis, en la que también cambia el Composición celular de antecedentes, y complica aún más el diagnóstico. Además, los neutrófilos son los casos destacados se puede confundir con linfadenitis supurativa [10]. Además, este carácter mixto de antecedentes celular no se da en los casos de Hodgkin predominante nodular de linfocitos y el linfoma de linfocitos ricos linfoma de Hodgkin clásico, que en estas condiciones hace que el diagnóstico depende de la detección de L & H o células RS. Por otra parte, en el clásico HL mientras que el fondo mixto infiltrarse es casi siempre visto, que no es específica y puede ser vista en una variedad de otras condiciones de reacción.

Algunos estudios han examinado la linfocítica componente del fondo mixto se infiltra para ayudar en el diagnóstico de linfoma de Hodgkin y la comprensión de la biología de esta enfermedad. Utilizando técnicas inmunohistoquímicas la mayoría de los linfocitos en el fondo se mostraron como las células T, con un aumento en el ayudante / supresor (CD4/CD8) ratio [11, 12]. Estudios más recientes demostraron que la mezcla de infiltrado celular característico de HL contiene una abundante cantidad de linfocitos CD4 positiveTh2-[13]. Varias citoquinas son liberadas por las células RS conduce a la estimulación de la entrada de linfocitos CD4 +. Poppema et al. Han demostrado que las quimiocinas CC TARC y MDC atraer a los linfocitos T CD4 + por su unión a un receptor de quimioquinas CC-(CCR4) que se encuentran específicamente en las células Th2 [14]. HL en fibroblastos también se han demostrado para producir un CC-quimioquinas, eotaxinas, que se ha demostrado que aumenta la afluencia de eosinófilos y linfocitos Th2 [15]. Este Th2 ambiente genera un ambiente cómodo para el RS células neoplásicas para sobrevivir y crecer.

En este estudio se investigó el valor de una mayor proporción CD4/CD8 (≥ 4), en otra cosa no citometría de flujo conclusiones de diagnóstico, como un marcador de diagnóstico de linfoma de Hodgkin en FNA biopsias. En 85 casos con un aumento de células T CD4/CD8 ratio, sólo 7 casos fueron probados, utilizando secciones de tejido, que se linfoma de Hodgkin con un caso adicional por llamada citología (9%). 6 casos fueron resultado ser linfoma no-Hodgkin (7%). Las células T CD4/CD8 ratio no fue significativamente diferente en estas poblaciones 5.27-13 vs 4.2-14 con promedio de 7,7 vs 7,3.

Materiales y métodos

Un examen de los registros de la citología en la Universidad de Nueva York y el Centro Médico Bellevue Hospital reveló que entre 1996 y 2002, 837 ganglios linfáticos FNAs se han realizado en un material que se presentó para FCM. En 119 casos (14%), el material presentado no era suficiente para la evaluación citometría de flujo. Nuestro único criterio de selección de los casos incluidos en nuestro estudio fue un elevado coeficiente CD4/CD8 por citometría de flujo, definida como mayor o igual a 4. 85/718 (12%) casos se ajustan a nuestros criterios. En todos los casos, el componente de linfocitos B policlonales y los linfocitos T no mostró inmunofenotipo aberrante.

Las 85 aspirados se obtuvieron en los ganglios linfáticos palpables por cytopathologists utilizando calibre 25 a 27 agujas. Material aspirado inmediatamente fue untado sobre diapositivas, secado al aire, y teñidos con Diff-Quik y ultra-rápido Papanicolaou manchas. Material adicional obtenido de FCM se colocó en RPMI solución. El diagnóstico citológico se agruparon en cuatro categorías: reactiva, atípico, HL, y NHL. Histológico de seguimiento está disponible en 17/85 (20%) de los casos.

Citometría de flujo se han realizado estudios utilizando FACscan flujo cytometer (Becton Dickinson, San Jose, CA). Los especímenes, suspendido en RPMI solución, se centrifuga a 1500 rpm durante 5 minutos, el sobrenadante fue descartado, y los glóbulos rojos se utilizan lisadas Becton Dickinson FACS Lysing Solución. Las células fueron "pellets", luego lavados y resuspendido en buffer fosfato salino. Alícuotas de la suspensión celular fueron incubadas con diferentes combinaciones de anticuerpos monoclonales (tres o cuatro en cada tubo), incluyendo CD2, CD3, CD4, CD5, CD7, CD8, CD10, CD19, CD20, CD23, HLA-DR, y Kappa / Lambda cadenas ligeras (todos los anticuerpos de Becton Dickinson, San Jose, CA). Un promedio de 10000 linfocitos se recogió en la puerta de linfocitos utilizando adelante y lado de dispersión.

Resultados

Como se muestra en el cuadro 1, los 85 aspirado de los ganglios linfáticos se obtuvieron de 85 pacientes de edades comprendidas entre los 19 a 87 años. 29 pacientes eran hombres y 56 eran mujeres. Once pacientes tenían un diagnóstico previo de un trastorno linfoproliferativo (1 HL, el 6 de la micosis fungoide, 2 NHL, el 1 de leucemia linfoblástica aguda, enfermedad de Castleman 1). Los ganglios linfáticos lugares fueron los siguientes: 14 inguinal, 43 cervical, el 15 de la axila, 2 epitrochlear, 5 submentonianos, 2 subauricular, 2 dentro de la parótida, 1 occipital, y el 1 de mediastínicos. Los ganglios linfáticos de diámetro osciló de 0,5 a 5 cm. De células T CD4/CD8 ratios oscilaron de 4 a 29. Una de células T CD4/CD8 ratio de 4 fue elegido como el punto de corte, ya que representa dos veces el valor normal (2), y un punto de corte de 3,9 era la que representan el límite inferior de la relación CD4/CD8 es Casos de HL en un informe recientemente publicado [13].

En general, 64/85 (75%) aspirado de los ganglios linfáticos se diga lo reactiva en citomorfología (Tabla 2]. El citológico conclusiones en estos casos consistía en una población heterogénea de pequeños y grandes linfocitos sin citológico atypicality mezclado con cuerpo tingible macrófagos sin definitivas RS células o variantes (Figura 1]. 5 de los 64 casos en los que reactiva citomorfología y FCM no reveló pruebas de un trastorno linfoproliferativo había tejido de seguimiento debido a la persistente linfadenopatía y alta sospecha clínica. 3 / 5 casos (60%) se confirmó el diagnóstico de la linfadenopatía reactiva.

Los dos casos restantes (40%) fueron positivos para el linfoma. La primera se diagnosticó como predominante nodular de linfocitos linfoma de Hodgkin. Evaluación histológica reveló focal effacement de la arquitectura nodal vaga por pequeños nódulos de linfocitos admixed con ocasionales células atípicas. Inmunohistoquímico realizado sobre las manchas snap-tejidos congelados mostraron que los pequeños fueron la mayoría de las células B-linfocitos. Las células atípicas fueron positivos para LCA, CD20 y EMA, y negativo para CD15 y CD30. Linfocitos CD57 positivas forman rosetas alrededor de las grandes células. El segundo caso fue diagnosticado como linfoma de células T periféricas. El paciente tenía un historial de cáncer de mama tratados con quimioterapia y radioterapia. Los ganglios linfáticos se amplió debido a la ampliación de la zona por interfollicular de tamaño mediano y el aumento de los linfocitos atípicos vascularización sin aumento significativo de células grandes. La inmunohistoquímica confirmó que las células atípicas se CD3 y CD4 positivos. Células T CD8 positivos representan una minoría de las células. No citometría de flujo para diagnosticar este caso, ya que un reducido grupo de anticuerpos contra las células T de superficie se utilizó. El aumento de CD4/CD8 ratio (4.20) fue pensado para ser un cambio reactiva secundaria a la quimioterapia para el cáncer de mama.

15 de los 85 casos se lee como atípicos. Estos casos consistía principalmente de una población heterogénea de los pequeños linfocitos admixed con una población de células intermedias o grandes, algunos de los cuales presentaban una angulación núcleos con nucleolos prominentes y no definitiva RS células o variantes. 8 / 15 casos de citología atípica había histológico de seguimiento. 7 / 8 (87,5%) casos fueron positivos para el linfoma (3 HL, 4 NHL). El caso restante se mostró como un reactivo en los ganglios linfáticos del tejido seguimiento. Tres de los casos de linfoma se clásica HL, esclerosis nodular tipo I. Estos ganglios linfáticos fueron borrados por una mezcla de pequeños linfocitos, células plasmáticas, histiocitos y la formación de nódulos separados por bandas colagenosa. Dentro de la mezcla de muchas clásico infiltrado celular de células RS y variantes, que fuertemente teñidas de CD15 y CD30, se encontraron.

Dos de los linfoma no Hodgkin casos fueron diagnosticados como difuso de células B grandes linfomas (Figura 2]. Estos casos muestran nódulos linfáticos con hojas de los grandes núcleos de los linfocitos haber vesicular y nucleolos prominentes. El gran células fueron LCA y CD79a positivos. En un caso, fueron los grandes células CD30, CD15, pero no, positivo. En estos dos casos citometría de flujo informes observó la presencia de una pequeña población de células grandes B, sin expresión de inmunoglobulinas de superficie. Una biopsia del ganglio se sugirió. Los dos casos restantes fueron linfoma folicular linfoma (Figura 3]. Muestras de tejido mostró mal definidos coalescente ampliada con folículos perdido polaridad, compuesto de hojas de linfocitos grandes con ningún cuerpo tingible macrófagos. El folicular de células fueron positivas para marcadores de células B y bcl-2. En estos casos citometría de flujo resultados sugieren la presencia de una pequeña población de células B grandes con muy poco clara expresión de CD10 y de superficie de inmunoglobulina, atípica y biopsia del ganglio se sugirió.

Tres de los 4 casos llamado HL citología ha tejido en el seguimiento y en todos los 3 (100%) el diagnóstico de la HL fue confirmada. Dos fueron clásico HL, tipo esclerosis nodular con abundantes células lacunares RS (Figura 4]. El tercer caso es una variante del sincicial HL, tipo esclerosis nodular. Este caso figura sólida cohesión de los grupos de células atípicas que manchados de CD30 y CD15. Citometría de flujo para estos tres casos se observó un aumento de la proporción de células T CD4/CD8 con células B policlonales.

Dos de los 85 casos fueron diagnosticados como LNH en la citología. El primer caso mostró una población de linfocitos grandes pleomórfico con atipia citológica significativa. No tejido de seguimiento se dispone para este caso. El segundo caso mostró una gran población de linfocitos atípicos en un fondo de la necrosis. Tejido de seguimiento reveló una difusa de linfoma de células B grandes. Citometría de flujo para el estudio de estos dos casos no detectar cualquier componente de células grandes y se llamó negativo.

En resumen, de un total de 17 casos con seguimiento histológico 4 / 17 (24%) fueron reactivas con CD4/CD8 ratio de 4.1-29, 7 / 17 (41%) fueron HLs con CD4/CD8 ratio de 5,3 - 11, Y 6 / 17 (35%) fueron con LNH de células T CD4/CD8 ratio de 4,2 - 14.

Discusión

Citomorfología y FCM son complementarios y eficaz en la diferenciación de los reactivos y los procesos linfoproliferativos, concretamente linfomas no Hodgkin (LNH) [3 - 5, 16 - 18]. La precisión y la fiabilidad de estas técnicas permite un diagnóstico sin necesidad de realizar una biopsia excisional. Sin embargo, hay casos en que los resultados son nondiagnostic FCM, pero pueden en cambio implica un cierto desorden. Un aumento del coeficiente CD4/CD8 en la presencia de una población policlonal de los linfocitos B es una de esas condiciones. Este hallazgo ha sido reportado en la literatura que se asocian con, pero no de diagnóstico, linfoma de Hodgkin (HL) [11 - 13, 19, 20]. El uso de citometría de flujo, un estudio reciente muestra un aumento de células T CD4/CD8 ratio (rango de 3,9 a 28, con promedio de 11,2) en los ganglios linfáticos de los pacientes con linfoma de Hodgkin clásica [11].

En este estudio, de los 85 casos dicen lo reactiva / atípico por citometría de flujo, 13 fueron resultado ser linfoma mediante biopsia confirmatoria (7 HD y 6 NHL). Casos de HL no se diagnostica con precisión por FCM debido a la escasez de células neoplásicas en relación con las células reactivas. De células T CD4/CD8 ratio no era útil en el diagnóstico de HL. El valor medio de células T CD4/CD8 ratio es básicamente el mismo para la reactiva, HL, y los casos de NHL. En general, el uso de anticuerpos disponibles en la actualidad, HL no es un diagnóstico que se hizo por FCM. En los casos de sospecha de HL, es mejor realizar inmuno manchas sobre cytospin preparados o patio usando las secciones apropiadas, tales como los marcadores CD15 y CD30.

NHL seis casos no se precisa interpretado por FCM. Uno de los casos fue linfoma de células T y 5 casos de células B grandes linfoma. El linfoma de células T es caso perdido, porque FCM por una insuficiente panel de anticuerpos monoclonales, se utilizó el diagnóstico de linfoma no fue clínicamente sospechosos. Cuatro de los cinco casos de linfoma de células grandes fueron mal interpretadas porque FCM no pudo confirmar de células B monoclonalidad. En estos cuatro casos la presencia de una pequeña población de células grandes con superficie de la inmunoglobulina de restricción no se mencionó de confirmación y una biopsia del ganglio se sugirió. La ausencia de inmunoglobulina en estos grandes células anormales y es en sí mismo es una prueba de la malignidad [22]. Varios estudios recientes destacan la dificultad en el diagnóstico DLBL por citometría de flujo debido a la falta de expresión o la inmunoglobulina de superficie limitada de células recuperación [5, 12, 21, 22]. Estos estudios llegó a la conclusión de que, en estos casos el diagnóstico de linfoma puede ser la confianza en si la citología y características de los entornos clínicos fueron revisados.

El quinto caso fue NHL perdido por citometría de flujo, debido a la cantidad limitada de células FNA recuperado de la muestra, que fue en gran medida necrótico. La presencia de células necróticas en FN aspiración es a menudo un indicio de malignidad. En estos casos FCM puede ser útil en la detección de pequeñas población clonal de células viables. Sin embargo, la falta de clonalidad no excluye un proceso neoplásico y de la limitación del estudio que se ha mencionado claramente en el informe de diagnóstico FC.

En resumen, la utilización de un aumento de células T CD4/CD8 ratio de diagnóstico como la única anormalidad no ayudaban a diferenciar HL de los casos reactiva o NHL. Citología diagnóstico y la confirmación por estudios inmunohistoquímicos realizados en los preparativos cytospin o patio es probablemente más pertinente que en los casos de FCM HL. En el trabajo hasta los casos de linfoma de células grandes o aquellos con necrosis importante, la comunicación entre cytologist y hematopathologist, la coordinación de la citomorfología con inmunofenotípicos datos, y el conocimiento de la relación clínica son esenciales para llegar a diagnósticos precisos.

Nota

Artículo correspondiente: Beaty MW, Geisinger KR: linfoma de Hodgkin flujo mí? Cytojournal 2005, 2:13 [23]

Agradecimientos

"Co-7701 Burholme Avenue Room C427, Filadelfia , PA 19111 (Correo electrónico: Na_young@fccc.edu ) Para organizar y llevar a término el proceso de examen por homólogos de este manuscrito. "