Behavioral and brain functions : BBF, 2005; 1: 17-17 (más artículos en esta revista)

Ramificación proyecciones de las neuronas ventrolaterales reticular medial preoptic a la zona lumbo-sacra y de la médula espinal

BioMed Central
Antonella Russo (antrusso@unict.it) [1], Rosalia Pellitteri (r.pellitteri @ isn.cnr.it) [2], Rosa Romeo (romeros@unict.it) [3], Stefania Stanzani (stanzani @ unict. Es) [1], Jean André (andre.jean @ univ.u-3mrs.fr) [4]
[1] Departamento de Ciencias Fisiológicas de la Universidad de Catania, Catania, Italia
[2] Instituto de Ciencias Neurológicas, el Consejo Nacional de Investigación, Catania, Italia
[3] Departamento de Anatomía, Patología de diagnóstico, Phorens Medicina, Higiene y Salud Pública, Universidad de Catania, Catania, Italia
[4] Laboratoire de Physiologie Neurovégétative, 6153-CNRS UMR 1147-INRA, Université Aix-Marseille III, Faculté des Sciences de St Jerôme, Marsella, Francia

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Resumen

Diferentes hallazgos indican que rostral ventrolaterales núcleo reticular (RVL) es el sustrato neuronal de la integración y la regulación de las funciones cardiovasculares. Algunas neuronas eferentes RVL proyecto a la thoraco-lumbar, la médula espinal y simpático preganglionic excitar las neuronas, a las neuronas motoras espinales frénico que participan en la función inspiratorio y aumentar la actividad de las fibras de la inervación del hombro vasoconstrictor en los vasos sanguíneos de la piel y el músculo esquelético. Nuestro estudio tiene por objeto revelar la presencia de neuronas en el suministro de ramificación RVL garantía de entrada a la zona medial preoptic (MPA) y lumbo-sacra de la médula espinal (SC-L) en la rata. Todos los experimentos con animales se llevaron a cabo de conformidad con las actuales directrices institucionales para el cuidado y uso de animales de experimentación. Hemos empleado el doble etiquetado fluorescente procedimiento: las proyecciones definidas por las inyecciones de dos marcadores atrás: Rhodamine Labelled de abalorios (RBL) y Fluoro Gold (FG) en el SM y SC-L, respectivamente. Nuestros resultados mostraron la presencia de algunas neuronas y solo FG único RBL neuronas en la RVL. El tamaño de las neuronas y FG-RBL-neuronas se medianas (25-30 μ m) y grandes (50 μ m).

Pocos doble proyección de las neuronas se distribuyen en el tercio medio de RVL núcleo, su tamaño era 30-40 μ m. Los resultados demuestran que los grupos de neuronas en la RVL han proyecciones colaterales a la SM y SC-L y estén implicadas en la vía ascendente y descendente. Estos datos sugieren que estas neuronas podrían desempeñar un papel en el mantenimiento de la actividad del centro y el flujo sanguíneo periférico.

Introducción

Varios hallazgos indican que la médula rostral ventrolaterales reticular (RVL) es el sustrato neuronal fundamentales de la regulación de la circulación y las funciones cardiovasculares, que media con reflejos vasomotores [1, 2]. Diferentes métodos permiten identificar aferente proyecciones a RVL, desde el núcleo paraventricular hipotalámico [3], el hipotálamo lateral zona [4], el núcleo dorsal del rafe [5] y de otras regiones [4]. Algunas neuronas eferentes RVL proyecto a la celda de la columna intermediolateral de la thoraco-lumbar, la médula espinal y excitar preganglionic simpático neuronas [6 - 8], la columna vertebral frénico neuronas motoras que participan en la función inspiratoria [9] y aumentar la actividad de las fibras de la inervación del hombro vasoconstrictor en los vasos sanguíneos De la piel y del músculo esquelético [10]. Ascendente RVL proyecciones eferentes RVL de transmitir información a los núcleos diencephalic [4, 11] y con garantía fibras se encuentran en RVL, después de las inyecciones en el cerebelo y el núcleo fastigial superior colliculus [12]. De hecho, la estimulación eléctrica de RVL en ratas suscita una respuesta excitatoria en la actividad del nervio simpático renal [7, 13]. El MPA también participa en el control de numerosas funciones: neuroendocrinos, sexual, el comportamiento de la madre y otras actividades [14 - 16]. El objetivo de este trabajo es demostrar la existencia de las proyecciones de RVL directo a la MPA y, a través de garantías, la existencia de proyecciones directas a SM y SC-L. Además, el trabajo previo ha demostrado que RVL adrenérgicos (C1) y la no-adrenérgicos neuronas se encontraron a participar en estas proyecciones [17 - 19]. El tronco cerebral neuronas podrían estar involucrados en la transmisión simultánea de señales relacionadas con la autonómica, de hecho catecolaminérgicos y no catecolaminérgicos neuronas se encontraron ramificación de proporcionar garantías para el núcleo central de la amígdala y el núcleo paraventricular hipotalámico [11].

En el presente estudio se han utilizado dos marcadores atrás para determinar la distribución de las neuronas que RVL proyecto a través de garantías a la SM y SC-L.

Resultados

Sólo los casos (8 ratas), donde el análisis microscópico de los lugares de inyección reveló que el trazador depósitos se coloca correctamente se incluyeron en el estudio. Fig. 1 muestra los lugares de inyección retrógrada de los marcadores RLB en la MPA (A) y FG en la SC-L (B). Los resultados mostraron un gran número de neuronas retrogradely con etiqueta en el conjunto de ipsi y contralateral RVL (estereotáxica aviones: -11.60/-11.96). FG-etiquetados neuronas de la ipsilateral y contralateral RVL eran numerosos (39,42 ± 3,3) y, además, estas neuronas variaron en tamaño de mediano (20-30 μ m) a grandes (50 μ m) y eran más bien escasos dentro de RVL. RLB-etiquetados neuronas eran en su mayoría envasados dentro de los límites de la esfera examinada, constantemente de tamaño medio (20-35 μ m) y distribuido de manera uniforme en ipsi y contralateral RVL (38,2 ± 2,85). La microscopía de fluorescencia reveló un número considerable de RVL doble etiquetado neuronas (18,6 ± 3,13), que prueba la presencia de la colateralización de la SM y SC-L. Estas neuronas son generalmente de tamaño medio a grande (30-40 μ m) y se localiza en el tercio medio de RVL.

Fig. 2 muestra el esquema de la sección frontal del cerebro incluyendo RVL región con diferentes símbolo (círculo, triángulo y estrella), que indica la presencia de neuronas etiquetados.

Un número relativamente bajo de FG / RLB (4,6 ± 1,49 neuronas) de doble etiquetado neuronas (30-40 μ m) fueron esparcidas principalmente en el nivel RVL ipsilateral; un ejemplo es mostrado en la Fig. 3.

Discusión

El presente estudio proporciona evidencia directa, en base a la técnica de rastreo de retrógrada, que: 1) las neuronas directamente RVL único proyecto a la zona medial preoptic; 2) RVL único proyecto neuronas directamente a la médula espinal, lo que confirma los resultados anteriores [4], 3) RVL neuronas De suministro, a través de los colaterales, de sucursales de las aportaciones a la SM y SC-L. Sympatho-excitatorios neuronas de la RVL, como en la médula rostral ventromedial [20] y en el caudal ventrolaterales médula [21], son importantes para el mantenimiento de los niveles tónicos de la presión arterial que son intrínsecos marcapasos y descarga continuamente la actividad [2]. En conclusión, después de las inyecciones de FG y RLB, mostramos un conjunto de ramificación RVL neuronas en el cerebro de rata. El hecho de que RVL contiene neuronas con una garantía fibras a la médula espinal y el hipotálamo a la MPA, sugieren que estas neuronas podrían desempeñar un papel en el mantenimiento de la actividad de la central y periférico al mismo tiempo la circulación de la sangre.

Materiales y métodos

Todos los experimentos se llevaron a cabo de conformidad con las actuales directrices institucionales para el cuidado y uso de animales de experimentación. Los experimentos se realizó en 10 ratas Wistar macho adulto un peso de 250-300 g (Morini, Italia), mantienen bajo condiciones controladas de temperatura ambiente (23 ± 1 ° C) y la iluminación (luces de 07:00 - 19:00 h); laboratorio Chow dieta y se dispone de agua ad libitum; el procedimiento experimental in vivo se realizó durante el día (10:00 - 13:00 horas).

Los animales se anaesthetized con hidrato de cloral (400 mg / Kg, ip). Dos marcadores fluorescentes fueron inyectados a la misma rata: Fluoro Gold (FG) se inyecta en la lumbo-sacra de la médula espinal uno de los lados, Rhodamine etiquetada de abalorios (RLB) en la zona medial preoptic del mismo lado. Las ratas fueron colocadas en un marco Kopf Ubicado estereotáxica y se inyecta con 0,08 μ l de puro RLB en la MPA, en las siguientes coordenadas (0,30; L = 0,5 V = -8,5) [22]; recién disuelto FG (0,15 μ l en el 6% en Salina) se inyecta en la SC-l. Ambos marcadores fueron inyectados a presión-a una tasa de 50 nl / min. Por medio de 1 μ l Hamilton microsyringes.

Siete días después de la inyección, los animales fueron perfundidos y reanaesthetized a través de la aorta ascendente con solución salina (60 ml), seguido de helado paraformaldehido 4% de fosfato buffer (300 ml, pH 7,4). Los cerebros fueron removidos, inmersos en el mismo fijador por 3-4 h cryoprotected y de la noche a la mañana en el fosfato de búfer con un 20% de sacarosa solución.

Secciones coronales (40 μ m) se redujeron en un criostato (Reichert), montado en diapositivas y observado bajo microscopio de fluorescencia (Polyvar Reichert) para la identificación de las zonas de inyección. Las secciones fueron secadas al aire, montado y observó con un microscopio de fluorescencia Reichert equipado con filtro rojo revelar combinaciones (RLB), amarillo (FG). Para cada animal, tres secciones adyacentes no fueron evaluados y el etiquetado en células trazan dibujos esquemáticos de la región RVL nivel (aviones estereotáxica: -11,60 / -11,96) [5]. Así, el número de células se expresaron como el promedio / sección calcula a partir de estas tres secciones.

Conflicto de intereses

Los autores declaran que no tienen intereses en conflicto.

Contribuciones de los autores

AR, RP, RR, SS y AJ conjuntamente concebido y ejecutado este proyecto de estudio y ayudó el manuscrito. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

Agradecimientos

Damos las gracias al Señor S. Bentivegna para ayudar con el trabajo fotográfico. Este estudio fue apoyado por el MIUR.