Journal of Carcinogenesis, 2005; 4: 17-17 (más artículos en esta revista)

HTERT la expresión de la proteína es independiente de clinicopathological parámetros y c-Myc en humanos de la expresión de la proteína de cáncer de mama

BioMed Central
AE Elkak (aeraelkak@yahoo.co.uk) [1], G Meligonis (gmeligonis@blueyonder.co.uk) [2], M Salhab (msalhab1@excite.com) [1], B Mitchell (biddym @ propaganda. Co.za) [2], el JRS Blake (jrsb@jrsb.freeserve.co.uk) [3], RF Newbold (rnewbold@atlas.co.uk) [4], Mokbel K () [kefahmokbel@hotmail.com 1]
[1] La Unidad de Mama, St George's Hospital, Blackshaw Road, London, SW17 0QT, UK
[2] Departamento de Anatomía, King's Mill Hospital, Mansfield, Reino Unido
[3] Departamento de Cirugía, Hospital King's Mill, Mansfield, Reino Unido
[4] Instituto de Genética del Cáncer y Farmacogenómica, Universidad de Brunel, Uxbridge, Middlesex. UB8 3PH, UK

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Resumen
Antecedentes

Ribonucleoprotein telomerasa es una enzima que sintetiza los telómeros después de la división de las células y mantiene la duración y la estabilidad cromosómica lo que llevará a celulares immortalisation. El hTERT (humanos telomerasa transcriptasa inversa) subunidad parece ser el tipo de limitación determinante de la telomerasa y los conocimientos de hTERT control de los factores de transcripción pueden ser útiles en estrategias terapéuticas. El promotor hTERT contiene sitios de unión de c-Myc y hay algo de experimentación y pruebas in vitro que c-Myc puede aumentar hTERT expresión. Nos informó anteriormente ninguna correlación entre el mRNA de c-Myc y hTERT expresión mRNA o actividad de la telomerasa en cáncer de mama humano. Este estudio tiene por objeto examinar la correlación entre la expresión hTERT determinado por inmunohistoquímica y c-Myc, la condición de los ganglios linfáticos, y el tamaño y el grado del tumor en el cáncer de mama humano.

Materiales y métodos

La expresión inmunohistoquímica de hTERT y c-Myc se investigó en 38 tumores malignos de mama. La expresión de hTERT se correlaciona con el estado de los ganglios linfáticos, c-Myc y otros clinicopathological parámetros de los tumores.

Resultados

HTERT expresión fue positivo en 27 (71%) de los 38 tumores. 15 (79%), de 19 ganglios positivos hTERT tumores fueron positivos en comparación con 11 (63%) de 19 tumores de los ganglios negativos. La expresión fue mayor en los tumores de los ganglios positivos, pero esto no alcanzó significación estadística (p = 0,388). No se encontró asociación significativa con el tamaño del tumor, el grado del tumor o de c-Myc. Sin embargo, hTERT expresión correlacionó positivamente con los pacientes de edad (coeficiente de correlación = 0,415, p = 0,0097).

Conclusión

HTERT la expresión de la proteína es independiente de la condición de los ganglios linfáticos, el tamaño tumoral y el grado de c-Myc y la expresión de la proteína humana en el cáncer de mama

Introducción

Los telómeros son estructuras muy especializadas en el final de cada cromosoma, que contiene secuencias de ADN repetir tándem? En los seres humanos, esta secuencia es TTAGGG [1]. Según el telómero / telomerasa hipótesis, la telomérica extremos de los cromosomas de las células somáticas normales reproducir ineficiente y acortar progresivamente en cada división celular hasta la pérdida acumulativa afecta funciones celulares vitales de las células y la salida del ciclo celular y la apoptosis someterse [2].

Ribonucleoprotein telomerasa es una enzima que contiene un ARN complementario a la plantilla (TTAGGG) n repite y, por tanto, la síntesis de los telómeros después de la división de las células y mantiene la duración y la estabilidad cromosómica que conduzca a immortalisation [3 - 6]. En consecuencia, la actividad telomerasa se ha investigado y detectado en una amplia gama de tumores malignos humanos, las células germinales y las células inmortales, pero no en las células somáticas normales [3 - 8]. Telomerasa humana consiste en una subunidad de ARN - RNA de la telomerasa humana (hTR) [9], un componente de proteína (proteína asociada a la telomerasa humana 1 - hTEP1) [10] y de la subunidad catalítica hTERT (transcriptasa reversa telomerasa humana) [11 - 13]. De esas subunidades telomerasa actividad requiere la presencia de hTR, que es el ARN plantilla para la repetición telomérica, y hTERT, que es la transcriptasa inversa. El gen que codifica para hTERT ha sido clonado y mapeado en el 5p15.33 [14]. HTERT es una proteína de 127-kDa cuya función se correlaciona estrechamente con la actividad telomerasa [10, 15, 16].

La investigación de los mecanismos de control de hTERT es importante en la aclaración de las vías que pueden ser susceptibles de manipulación terapéutica y una de ellas consiste en la vía factor de transcripción Myc.

Un mayor nivel de c-Myc se repite con frecuencia en una amplia gama de tumores [17 - 23] debido a la de-myc regula la expresión de genes a través de la amplificación, inserción retroviral o translocación cromosómica. Análisis de la secuencia promotor del gen hTERT ha demostrado la presencia de al menos 2 y tal vez tantos como 29 E casillas [24], los posibles sitios de unión para la Myc oncogénica, y la posibilidad de un papel regulador para Myc se ha explorado en un número De los estudios. Se ha encontrado que purificada Myc E interactúa con el cuadro de secuencias y cotransfection que induce la actividad de Myc en el promotor hTERT aislado [25]. Se ha demostrado que los retrovirales expresión de c-myc aumenta la cantidad de mRNA hTERT humanos en células epiteliales mamarias y fibroblastos y actividad telomerasa puede ser detectado posteriormente [26]. También se ha informado de que la expresión de c-Myc conduce a un aumento de hTERT expresión y actividad de la telomerasa en las células B humanos [27]. Además, dado que este no requiere de la síntesis de proteínas este parece ser debido a un efecto directo de Myc en el hTERT promotor, y no secundaria a un aumento de la proliferación celular por Myc [27]. Además, la introducción de anti-Myc sentido ARN se ha demostrado que conducir a una reducción de hTERT promotor de la actividad [25]. Latil et al [28] demostraron una relación entre hTERT y expresiones de c-Myc en el cáncer de próstata, mientras que otros investigadores [29] han encontrado que Mad1, otro miembro de Myc vía, es un supresor de hTERT a nivel de transcripción.

El uso de RT-PCR, encontramos que hTERT mRNA expresión fue significativamente mayor en el cáncer de mama en comparación con los tejidos no tejidos cancerosos de mama [30]. Sin embargo, no observamos ninguna relación entre hTERT expresión y etapa del tumor, los pacientes de edad o de c-Myc. Debido a las limitaciones potenciales de mRNA estudios que se destaca en nuestro informe anterior, previsto para determinar la expresión de la proteína de ambos hTERT y c-Myc mediante inmunohistoquímica (IHC) e investigar los posibles asociaciones.

El objetivo de este estudio fue determinar la expresión (IHC) de hTERT humanos en el cáncer de mama y para examinar la asociación entre hTERT expresión y clinicopathological parámetros de los tumores (tamaño, grado y estado nodal) y c-Myc.

Métodos

Institucional directrices, y en particular la aprobación ética fueron seguidos. Los pacientes fueron tratados con extirpación local amplia o mastectomía y disección de los ganglios axilares. Los pacientes con estrógeno y / o progesterona positivo tumores recibieron tamoxifeno. La radioterapia se administró a todos los pacientes que habían conservación de la cirugía de mama y la quimioterapia a los pacientes con ganglios linfáticos positivos o tumores de alto grado. El uso de IHC, las expresiones de hTERT y c-Myc se determinó en 38 especímenes de cáncer de mama (19 especímenes fueron tumores de los ganglios linfáticos positivos y 19 fueron negativos tumores de los ganglios linfáticos los especímenes).

Inmunohistoquímica
Evaluación de la tinción inmunohistoquímica

Dos observadores evaluaron las secciones con los siguientes criterios:

Análisis estadístico

Chi Square test fue utilizado para el estudio de la relación entre hTERT expresión en los ganglios linfáticos positivos y negativos tumores de los ganglios linfáticos. La expresión de hTERT en los tumores se correlaciona con la expresión de c-Myc, clinicopathological parámetros de los tumores (tamaño y grado) y de los pacientes de edad. Un valor de p <0,05 fue considerado estadísticamente significativo.

Resultados

HTERT expresión fue positivo en 27 (71%) de 38 tumores. 15 (79%) de los 19 ganglios positivos hTERT tumores fueron positivos en comparación con 11 (63%) de los tumores de los ganglios negativos. Aunque hTERT expresión fue mayor en los tumores de los ganglios positivos (1,0 Vs puntuación mediana 0), sin embargo esto no alcanzó significación estadística (p = 0,388). No hubo correlación significativa con el tamaño del tumor, el grado del tumor, estado de receptores hormonales o de c-Myc. Curiosamente, hTERT expresión correlacionó positivamente con los pacientes de edad (coeficiente de correlación = 0,415, p = 0,0097). El cuadro 1 muestra hTERT y c-Myc y la clinicopathological características de los tumores estudiados.

Discusión

Nuestra observación de que hTERT proteína se expresa en la mayoría de los tumores de mama se espera, y en consonancia con nuestros informes anteriores utilizando la enzima ARNm y mediciones [30 - 32]. La falta de correlación entre hTERT es la expresión de la proteína y el tamaño del tumor, grado o estado nodal es también coherente con nuestro estudio anterior utilizando mRNA y de la tecnología RT-PCR [30]. Sin embargo, ya se ha informado de que la actividad telomerasa clinicopathological correlación con estos parámetros [31, 32]. Aunque hTERT expresión se asocia con malignidad, que no parecían estar en correlación con tumor etapa. Esta es, probablemente, una verdadera observación, como se ha demostrado con ambas RT-PCR e inmunohistoquímica y se explica sobre la base de la modificación post-transcripcional.

Bieche et al [33] reportaron una correlación positiva entre hTERT y c-Myc la expresión de los genes. Por otra parte, otros investigadores [34 - 36] gen hTERT demostrado que es un blanco directo de c-Myc. Aunque el promotor hTERT contiene E-cajas, en consonancia con las conclusiones del presente estudio, hemos observado anteriormente ninguna correlación entre c-Myc mRNA y los niveles de actividad telomerasa [37] y ninguna asociación entre hTERT y c-Myc en el nivel de ARNm [30 ]. El control de hTERT es, sin duda, de una tarea compleja y es probable que un número de otros factores de transcripción que influyen en su expresión de c-Myc. Estos podrían actuar junto con c-Myc, como se ha demostrado para Sp1 [38] o de forma independiente. En este sentido, se ha demostrado que la transferencia de un cromosoma normal 3 en células de carcinoma de mama humano se traduce en la abolición de hTERT transcripciones sin ningún cambio en los niveles de c-Myc [39]. Además, se sabe que otro miembro de la familia Myc, Mad1 forma un complejo con Max y actúa como un represor transcripcional en los mismos sitios de unión como Myc-Max. Se ha demostrado que, la proporción de Mad1 vinculante para el promotor hTERT sube y que cae de Myc, en la diferenciación de las células HL60 [37, 40]. Esto se asocia con una reducción de acetilación de la hTERT promotor y medición de la Mad / Myc relación es probable que sea importante para establecer el nivel general de activación transcripcional de hTERT.

Abreviaturas

Int: c-Myc intensidad

%: C-Myc porcentaje positivo

Multip: c-Myc multiplicación

Final: Final de c-Myc Resultado

Hist: Histología

D: ductal

L: lobular

DL: ductal y lobular

P: Papillary

M: Mucoid

A: Apocrine

T: Tubular

LN: estado ganglionar, P: positivo, N: negativo

ER: estado de los receptores de estrógenos, P: positivo, N: negativo