Journal of Experimental & Clinical Assisted Reproduction, 2005; 2: 13-13 (más artículos en esta revista)

Líquido folicular niveles de factor de crecimiento endotelial vascular y principios del cuerpo lúteo en función de la tecnología de los ciclos de reproducción asistida

BioMed Central
F Coppola (francesco.coppola @ unipr.it) [1], B Ferrari (bruno.ferrari @ unipr.it) [1], L Barusi (lobarusi@tin.it) [1], V Caccavari (vcaccavari @ yahoo. Es) [1], MC Salvarani (mariacristina.salvarani @ unipr.it) [1], Piantelli G (giovanni.piantelli @ unipr.it) [1]
[1] Centro de Medicina Reproductiva - Departamento de Obstetricia, Ginecología y Neonatología - Universidad de Parma - 43100 Parma - Italia

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Resumen
Antecedentes

La relación entre el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y la función lútea temprana rara vez ha sido probado en seres humanos. El propósito de este estudio fue definir la relación entre las concentraciones de líquido folicular VEGF (VEGF FF) y función lútea temprana en la fase de preimplantación en la tecnología de reproducción asistida (ART) ciclos.

Métodos

71 mujeres se dividieron en dos grupos, en base a resultados reproductivos: las mujeres que quedan embarazadas después de la transferencia de embriones (ET) (n = 18, Grupo A) y las mujeres no embarazadas (n = 53, Grupo B). Las concentraciones séricas de progesterona (Se P) y la inhibina A en ET día, FF y se midieron los niveles de VEGF en todas las mujeres. Los datos se expresaron como media ± desviación estándar. El análisis estadístico se realizó utilizando Excel 98 Oficina para la prueba t de Student, la prueba de regresión lineal y la prueba de ji al cuadrado. Un valor de p <0,05 fue considerado estadísticamente significativo.

Resultados

Los grupos fueron similares en cuanto a edad, la reserva ovárica, el número y la calidad de los ovocitos recuperados y de los embriones obtenidos y transferidos. FF se aumentaron los niveles de VEGF (4235 ± 1433 vs 3432 ± 1231 pg / ml), mientras que P Se inhibina A los niveles y se redujo significativamente (83,1 ± 34,1 vs 112,0 ± 58,8 ng / ml y de 397,4 ± 533,5 vs 223 ± 283 pg / ml , Respectivamente) en el grupo de no embarazadas y se correlacionaron negativamente con FF VEGF (r = -0,482, p <0,05, r = -0,468, p <0,05) sólo en mujeres embarazadas.

Conclusión

Mucho tiene que aprender acerca de la regulación y el papel de VEGF durante la primera fase lútea. Hemos adelantado la hipótesis de que la existencia de una correlación negativa entre VEGF FF / P Se VEGF y FF / inhibina A en mujeres embarazadas pueden indicar la existencia de una normal VEGF paracrina mediada por la respuesta y cuando P Se inhibina A nivel disminuido. El exceso de producción de VEGF FF, y la ausencia de una correlación entre VEGF FF / P Se VEGF y FF / inhibina A en mujeres no embarazadas puede ser una reacción a paracrina inmaduros lútea vasculatura, lo que resulta en disfunción lútea.

Antecedentes

Varios aspectos de la reproducción, desde folliculogenesis cuerpo lúteo a la función, desde la implantación del embrión a la función placentaria, están relacionados con la angiogénesis [1 - 3]. La relación entre el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y lútea vascularización se ha demostrado en un gran número de estudios en animales [1 - 3], pero muy pocas veces se ha demostrado en los seres humanos [4] y en la tecnología de reproducción asistida (ART) ciclos [5]. Este factor de crecimiento, que es producida por células granulosas y tecales en respuesta a la FSH, LH y hCG producción, y a la hipoxia, es un potente angiogénicos de citoquinas. Desempeña un papel destacado en el desarrollo de un amplio y maduro en torno a la red vascular dentro de los folículos y cuerpo lúteo [4]. En un grupo de 13 mujeres sometidas a ART y reproductiva, independientemente de los resultados, Lee A. et al. [5] encontraron que la concentración de VEGF en el líquido folicular (FF VEGF) en el momento de la recuperación de oocitos (día 0) se correlacionó positivamente con el suero (Se P) y el líquido folicular (FF P) progesterona. Esto a su vez indica una correlación entre VEGF FF y la luteinización folicular en una etapa muy temprana, en un proceso que puede ser descrito como la primera ola de la angiogénesis. En 11 a 14 días después de ET (día +11 a +13), los mismos autores [5] informó de que la embarazada destinatarios de la autotransfusión embriones frescos tuvieron mayor que los niveles séricos de VEGF tanto no embarazadas destinatarios de la autotransfusión embriones frescos y receptores de embarazadas Huevos de donantes. Estos datos sugieren que al inicio de la gestación, hCG endógena producida por el embrión de ovario estimula la producción de VEGF, un proceso conocido también como la segunda ola de la angiogénesis.

El propósito de este estudio fue definir la relación entre los niveles de VEGF FF y principios de la función lútea en la fase de preimplantación - 3 días después de la recuperación de oocitos (día 3), antes de hCG endógena producida por el embrión de ovario VEGF estimula la producción - y para verificar si Disfunción en la producción de VEGF pueden interferir con la función lútea durante ART.

Métodos
Los pacientes

El estudio se realizó en líquido folicular y muestras de sangre recolectadas en forma rutinaria ovocito pick-up día y 3 días después de la recuperación de oocitos, respectivamente, en 71 mujeres infértiles que se hace referencia para la FIV-ET para el Centro de Medicina Reproductiva de la Universidad de Parma Departamento de Obstetricia , Ginecología y Neonatología, entre septiembre de 2002 y marzo de 2003. Los criterios de inclusión fueron: normogonadotropic mujeres menstruando regularmente con función ovulatoria normal y normal de los procesos de cuerpo lúteo, edad menor de 40 años, y los niveles de FSH basal inferior a 10 UI / L. Los criterios de exclusión fueron: genital de las condiciones que podrían interferir con la implantación, por ejemplo, fibroma, hidrosálpinx, las malformaciones uterinas, de ovario poliquístico (PCO), la endometriosis, y las complicaciones tales como el síndrome de hiperestimulación ovárica (SHO), la química clínica o el aborto. Los pacientes fueron divididos en dos grupos, en base a resultados reproductivos ART siguientes: embarazo en curso después de ET (Grupo A, n = 18) y no el embarazo (Grupo B, n = 53). La autorización para el uso de líquido folicular y muestras de sangre para este estudio estuvo a cargo de la Universidad de Parma el Comité de Ética. Todos los pacientes dieron su consentimiento informado a la FIV-ET.

Estimulación de protocolo

Todas las pacientes fueron sometidas a hiperestimulación ovárica controlada (COH) después de la desensibilización hipofisaria con un agonista de GnRH (leuprolide 0,5 mg / día sc por Takeda Italia Farmaceutici, Roma, Italia) administrados en el día 21 del ciclo. Las mujeres fueron supervisados por la inhibición de la actividad ovárica todos y luego estimulada con una dosis estándar de 225 UI de FSH recombinante (FSHr) (Gonal F 75 por Serono, Roma, Italia). La dosis más tarde fue ajustado de acuerdo a la respuesta de cada paciente. Respuesta ovárica fue supervisado por el estradiol en suero (Se E 2) ensayo de la ecografía transvaginal y cada dos días. Por último, los pacientes recibieron una dosis de 10000 UI de hCG (Profasi HP por Serono, Roma, Italia), cuando al menos dos folículos fueron> 16 mm y Se niveles de E 2 se> 1000 pg / ml. El grosor del endometrio se determinó por ecografía transvaginal en el día de administración de hCG.

La recuperación de oocitos y ET

Los ovocitos fueron recuperados para FIV 35 horas después de la administración de hCG por ultrasonido transvaginal guiada por aspiración. Los ovocitos así obtenidos fueron probados en el laboratorio y clasificados en cuatro etapas de maduración en función de la madurez del ovocito-cumulus-corona complejo. A los efectos de este estudio, se examinaron los ovocitos maduros cuando mostró una amplia dispersión de la inversión células de la granulosa y la ampliación de cumulus y corona, mientras que la zona pelúcida es distinta y la ooplasm clara (tipo 1). Los ovocitos de madurez intermedia manifiesta un poco denso y una corona dispersa cumulus, y carece de una membrana nuclear (tipo 2). Ovocitos inmaduros fueron rodeados por una corona compacta y pocas capas de células del cumulus en el (tipo 3). Atretic o postmature ovocitos muestran una oscura, irregular ooplasm (Tipo 4). Los embriones fueron clasificados de acuerdo a los criterios propuestos en 1994 por Staessen C. et al. [6]: Tipo 1, o excelente embriones (blastomers de igual tamaño o, si no de igual tamaño, sin anucleate fragmentos), de tipo 2, o la buena embriones (blastomers de igual tamaño o, si no de igual tamaño, con un máximo de 20% el volumen del embrión anucleate llena de fragmentos), y, Tipo 3, justo o embriones (anucleate fragmentos presente en el 20-50% del volumen del embrión). ET se realizó 3 días después de la recuperación de oocitos (110 horas después de la administración de hCG). ET se consideró difícil cuando hay sangre en el catéter después de la transferencia. La fase lútea fue apoyada con 200 mg de progesterona micronizado (Esolut por Angelini SpA, de Roma, Italia), administrado diariamente (100 mg por la mañana y 100 mg por la noche) por vía vaginal, a partir del día de los ovocitos pick-up y la continuación de Hasta el día de la prueba de embarazo.

Embarazo en curso, si se considera los niveles séricos de beta hCG (Se β hCG) en el día 16 después de ovocitos pick-up fueron superiores a 112 mUI / ml (10 º percentil de la curva de nuestra tendencia) y confirmado por la ecografía en el día 35 después de ovocitos pick-up.

Líquido folicular y toma de muestras de sangre y ensayos

De los pacientes muestras de sangre fueron examinadas: i) en el día 3 del ciclo, de 3 a 6 meses antes de la estimulación ovárica (base FSH), ii) el día 6 de la estimulación ovárica (Se LH), iii) el día de hCG (Se E 2), y, iv) en la ET día (Se Py inhibina A).

Se E 2 (pg / ml) y Se P (ng / ml), se determinaron los niveles por duplicado utilizando un kit chemoluminescence (Sistema Médico, Génova, Italia). Se FSH (UI / L) y Se LH

(UI / L) fueron determinados por duplicado chemoluminescence utilizando Coat-A-Count FSH y LH IRMA kits (fabricados por Euro / Diagnostic Products Corporation, Witney, Oxfordshire, Reino Unido).

Inhibina A medida (pg / ml) se realizó por fase sólida sándwich inmunoadsorbentes ligados a enzimas (ELISA) utilizando un kit fabricado por DSL Webster, Texas, EE.UU., y distribuido por Pantec, Turín, Italia.

Inhibina A refleja la función ovárica y es un producto no sólo de la unidad fetoplacentaria, sino también del cuerpo lúteo en el embarazo temprano [7 - 11]. A continuación, representan un índice más fiable del cuerpo lúteo función de las mujeres en P Se reciben concomitantemente micronizado progesterona vaginal [7].

La piscina de líquido folicular de cada paciente se centrifuga a 900 g / min durante 15 minutos para eliminar la contaminación celular y la sangre y luego mantenerse a -70 ° C para la posterior determinación por duplicado de FF VEGF. El ensayo de la técnica utilizada en este estudio fue: ELISA para el total de FF VEGF (pg / ml) (Sistema de I + D, Minneapolis, Minnesota, EE.UU.).

Intra-y interassay parámetro variaciones fueron del 4% y el 4,2% para el E 2, el 2,2% y el 4% para la FSH, el 1% y el 2,2% para la LH, 6,2% y 6,7% para los de progesterona, 6,0% y 7,4% para la inhibina A, respectivamente , Y <8% para el VEGF.

Análisis estadístico

Los datos se expresaron como media (M) ± desviación estándar (DE). El análisis estadístico se realizó utilizando Excel 98 Oficina para la prueba t de Student, la prueba de regresión lineal y la prueba de ji al cuadrado. Un valor de p <0,05 fue considerado estadísticamente significativo.

Resultados

Las características de los pacientes en estudio - número, la edad, la reserva ovárica, así como los niveles de LH Se en el día 6 de la estimulación ovárica (6), y Se E 2 niveles de hCG día - se presentan en la Tabla 1.

Como no surgieron diferencias significativas entre las mujeres que quedan embarazadas después de ET (Grupo A) y las mujeres no embarazadas (grupo B), los dos grupos podrían considerarse comparables a la vista de los parámetros examinados. Una comparación de los datos para el procedimiento de la FIV-ET en los dos grupos (Cuadro 2] no mostró diferencias en el número y la calidad de los ovocitos recuperados, en la obtención y traslado de los embriones en el útero y en la difícil ET. Medición de grosor endometrial no fueron diferentes en los dos grupos, (Tabla 2].

FF niveles de VEGF - una expresión de la folicular paracrina entorno - fueron significativamente elevados (p = 0,039) en mujeres no embarazadas (4235 pg / ml ± 1.443) en comparación con las mujeres que quedan embarazadas después de ET (3432 pg / ml ± 1.231) ( Cuadro 3].

Se P y medido los niveles de inhibina A en la primera fase lútea fueron significativamente (p = 0,013 y p = 0,04) más elevados en el Grupo A (112,0 ng / ml y de 533,5 ± 58,8 pg / ml ± 283) versus el grupo B (83,1 ng / ml Y 397,4 ± 34,1 pg / ml ± 223) (Tabla 3] y se correlacionaron negativamente con FF VEGF (r = -0,482, p <0,05, r = -0,468, p <0,05) sólo en el grupo A; ninguna correlación ( R = -0,179, p ns, r = -0,09, p ns) se encontró en el Grupo B (Tabla 3]. A pesar de la administración concomitante de progesterona vaginal micronizado, Se P se correlacionó (r = 0,646, p <0,001) con inhibina A (Fig 1]. Esto redujo el grado de inexactitud que pudiera exhibir Se P versus inhibina A en función lútea expresión.

Discusión

En nuestro estudio, los dos grupos de pacientes eran comparables, no sólo para las características clínicas, sino también para el número y la calidad de los ovocitos recuperados y de los embriones obtenidos y transferidos en cada grupo. Se Py inhibina A los niveles fueron significativamente (p = 0,013 yp = 0,042) más elevada en las mujeres embarazadas frente a las mujeres que no pudieron concebir, mientras que el angiogénicos reacción fue más marcada (p = 0,03) en el segundo. La causa de este exceso de angiogénicos reacción todavía no está clara. En condiciones normales, hCG administra para desencadenar la ovulación induce la formación de una red vascular (primera oleada de la angiogénesis), que ayuda a garantizar el correcto desarrollo y funcionamiento del cuerpo lúteo como una fuente primaria de la progesterona circulante [12] y la inhibina A. En nuestra Estudio, la existencia de una correlación negativa (r = -0,482, r = -0,468, p <0,05) entre VEGF FF / P Se VEGF y FF / inhibina A en mujeres embarazadas nos permitió demostrar la existencia de una normal VEGF - Paracrina mediada reacción cuando Se Py inhibina A los niveles se redujeron.

Más allá de un determinado límite, como es el caso de pacientes no embarazadas en los cuales no existe tal correlación (r = -0,178, r = -0,092, p ns), el exceso de producción de VEGF ya no es suficiente para inducir la formación de un maduro Red vascular en el cuerpo lúteo a través de un mecanismo paracrinos y, en consecuencia, suficientes para mantener la producción de progesterona y la inhibina A. Esto también es confirmada por los estudios en animales [13, 1, 14], revelando que lútea función puede verse afectada por los tratamientos anti-VEGF Hasta un 50% de reducción en las concentraciones de P Se [2]. Una gran parte de las células endoteliales vasculares en la red del cuerpo lúteo depende de VEGF apoyo. Diversas variables, tales como la tensión de oxígeno [15, 16], el factor de crecimiento tipo insulina [3], [15] el envejecimiento, y la mala respuesta a la estimulación ovárica [17], modulan la expresión de este factor angiogénicos. El pre-folículo ovulatorio es un relativamente grande avascular multicelulares estructura [18]. El uso de fórmulas matemáticas, se ha calculado que el contenido de O 2 es potencialmente por debajo del umbral de rango normal (underoxygenation) [19], ya que la cantidad de O 2 en folículos maduros se ha documentado que van desde menos del 1% a alrededor del 5,5% [20]. Lútea expresión de VEGF se produce principalmente en las células perivasculares específicos, incluyendo el músculo liso arteriolar y capilar de los pericitos, y se rige principalmente por los niveles de oxígeno [12].

El reducido efecto de la hCG exógena dado para desencadenar la ovulación en la luteinización folicular en la mujer que no pudieron concebir y la consiguiente imposibilidad de lograr el embarazo a pesar del suplemento de la administración de progesterona en la fase lútea plantea la cuestión de si hCG exógena es capaz de mantener un adecuado Vascularización cuerpo lúteo y la progesterona si efectivamente puede sustituir a la función lútea. Nuestros datos parecen indicar que función lútea antes de ET se mejora sólo en las mujeres que quedan embarazadas. Esto puede ser debido no sólo a mejorar la vascularización cuerpo lúteo, sino también a una adecuada consiguiente, la producción de otros factores locales [21] de origen lútea (inhibina, oxitocin, factor de crecimiento, citocinas, prostaglandinas y leucotrienes), que actúan de forma autocrina o Paracrina manera de modular y tal vez mediar en el desarrollo y la función del cuerpo lúteo. Se necesitan más estudios para investigar este aspecto y dar lugar a una comprensión más profunda de los mecanismos de regulación cuerpo lúteo. El logro de embarazo después de ART depende de una variedad de factores (inmunológicos, genéticos y endocrinos, paracrinos y vascular). En particular, de conocer con certeza por qué una mujer no puede concebir es una parte crucial del proceso. Sobre la base de nuestro estudio en el que se evaluó sólo el lado materno antes de su implantación en una muestra seleccionada de pacientes, podemos postula que el subóptima función lútea temprana - una condición relacionada con inmaduros vasculatura - pueden desempeñar un papel importante en el fracaso ART.

Conclusión

Mucho tiene que aprender acerca de la regulación y el papel de VEGF durante la etapa final del desarrollo folicular y la fase lútea temprana. Hemos adelantado la hipótesis de que la correlación negativa entre FF VEGF y principios de la fase lútea en las mujeres embarazadas y los elevados niveles de VEGF FF en mujeres no embarazadas podrían atribuirse a una respuesta paracrina perifoliculares compensación de la hipoxia y que el mal funcionamiento lútea de mujeres que no logran concebir Puede ser la expresión de un inmaduro lútea vasculatura. Este mecanismo es probable que se produzcan cuando no hay suficiente indemnización angiogénicos y representa una aplicación clínica de lo que ya se ha encontrado en pruebas con primates no humanos. Sin embargo, se necesitan estudios adicionales para determinar el papel desempeñado por factores angiogénicos o de otras sustancias, como la hCG recombinante, en el control del crecimiento y la maduración de perifoliculares y lútea vasculatura, con el fin de encontrar nuevas estrategias terapéuticas que pueden ayudar a tratar la esterilidad mediante la manipulación de la angiogénesis .

Conflicto de intereses

Los autores declaran que no tienen intereses en conflicto.

Contribuciones de los autores

FC han hecho contribuciones sustanciales a la concepción, el diseño y la interpretación de los datos. BF han hecho contribuciones sustanciales a la interpretación de los datos. LB realizó el análisis estadístico. VC han hecho contribuciones sustanciales a la adquisición de datos.

MCS han hecho contribuciones sustanciales a la adquisición de datos. GP han participado en la revisión del artículo de gravedad.

Agradecimientos

Los autores desean dar las gracias a Mario Rossi, LT, LT Rinaldo Spallanzani, Maria Grazia Ziveri Licenciatura, y estudiante de medicina Manuela Calabrese por su preciosa ayuda en la recopilación de datos.