AIDS Research and Therapy, 2005; 2: 9-9 (más artículos en esta revista)

Virus de la inmunodeficiencia humana tipo-1 cDNA episomal en el semen

BioMed Central
Xu Chong (chong.xu @ bmc.org) [1], Joseph A Politch (joseph.politch @ bmc.org) [1], Kenneth H Mayer (kenneth_mayer@brown.edu) [2], Deborah J Anderson (Menganita . Anderson@bmc.org) [1]
[1] Division of Reproductive Biology, Department of Obstetrics and Gynecology, Boston University School of Medicine, Boston, MA 02118, USA
[2] Fenway Community Health Center, Boston, MA 02115, USA
[3] Department of Medicine, Brown University Medical School, Providence, RI 02912, USA

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Resumen
Antecedentes

2-episomal largo repetir terminal (LTR), el VIH-1 cDNA, un subproducto de la infección por VIH-1, se utiliza en los ensayos clínicos como marcador de la replicación viral en curso. Sería útil emplear 2-LTR cDNA críptico para controlar la infección por VIH-1 en el tracto genital de los hombres en terapia antirretroviral (TAR) para predecir la evolución de las drogas de transmisión sexual VIH-1 resistente, pero los estudios hasta ahora no han logrado Detección de este marcador en el semen. Los objetivos de este estudio fueron: 1) el uso de una técnica que maximiza la recuperación de ADN de infectados por VIH-1 en las células blancas de la sangre para determinar si el semen episomal 2-LTR cDNA se detecta en el semen de hombres ART-naïve con otras pruebas del tracto genital Infección por VIH-1, y 2) para comparar los niveles de VIH-1, 2-LTR ADNc, ARN y ADN proviral en el semen de VIH-1 + hombres sobre ART.

Resultados

Usando una célula somática técnica de extracción de ADN, 2-LTR cDNA fue detectada por PCR y ELISA en 4 de un total de 8 muestras de semen ART-naïve hombres seleccionados para seminal otros signos de infección por VIH-1 (controles positivos). Southern blot y secuenciación del ADN confirmó que la amplificación de secuencias eran VIH-1 2-LTR cDNA; copia números variaron de 55 a 504 copias / muestra. Dos muestras de semen de una cohorte de 22 infectadas por VIH-1 en hombres doble terapia con análogos de nucleósidos, una con y una sin seminal detectables de ARN del VIH-1, 2-LTR cDNA positivos (336 y 8560 copias / muestra). Tras adición de indinavir a la terapia, no hay muestras de esperma de 21 hombres con control de periféricos y seminal cargas virales fueron de 2-LTR cDNA positivos en 1 y 6 meses el tiempo de puntos, a pesar de la persistencia del VIH-1 + ADN proviral semen células seminales y citomegalovirus (CMV), en algunos casos, arrojar. Sin embargo, una persona que no indinavir terapia y posteriormente desarrollado distintas inhibidor de la proteasa (IP), la resistencia a los medicamentos mutaciones en el esperma, se mantienen niveles elevados de ARN del VIH-1 y 2-LTR cDNA en el semen.

Conclusión

2-LTR del VIH-1 cDNA se detecta en el semen de infectadas por VIH-1 hombres. Dos de los hombres habían ART 2-LTR del VIH-1 cDNA en el semen, lo que sugiere que este marcador puede resultar útil para controlar la infección por VIH-1 en el tracto genital de los hombres sobre ART para predecir la evolución de la resistencia a los medicamentos mutaciones en el esperma.

Antecedentes

La epidemia mundial de SIDA se atribuye principalmente a la transmisión sexual del virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1), un retrovirus que infecta a los linfocitos T CD4 + y macrófagos y las causas inmunosupresión grave en la mayoría de las personas infectadas sin tratamiento. En infectadas por VIH-1 hombres, la transmisión sexual son altas las tasas de infección aguda y durante la fase tardía de la enfermedad del VIH-1 cuando la carga viral se encuentra elevado en tanto el semen y la sangre periférica [1, 2]. Sin embargo, varios estudios han descrito también elevación de los niveles de VIH-1 en semen de los hombres con bajos o indetectables del VIH-1 en las concentraciones en sangre periférica [3 - 5], y otros han documentado diferencias genotípicas entre seminal y sangre periférica VIH-1 [ 6 - 8]. Estos datos indican que el aparato genital masculino es un compartimiento, como el sistema nervioso central, en el que la replicación del VIH-1 y la evolución divergente puede ocurrir bajo la influencia de factores locales. El tracto genital masculino tiene varias características distintivas que pueden afectar a locales de la infección por VIH-1 en los procesos: 1) la porción final del tracto genital masculino, en especial la uretra peneana, es capaz de montar una respuesta inmune mucosa incluida la producción de IgA secretora [9] Y de células epiteliales procedentes de mediadores de la inmunidad innata que puede reprimir la infección por VIH-1 [10], 2) la co-infección con otros patógenos de transmisión sexual pueden crear condiciones inflamatorias que llevan a un aumento de los niveles de infección por VIH-1 en el semen [11]; 3) la barrera sangre-testículo y de los factores de producción local inmunosupresores pueden proteger del VIH-1 de la respuesta inmune local en determinadas regiones del tracto genital masculino [12], y 4) algunos medicamentos antirretrovirales no podrán penetrar de manera adecuada las regiones del tracto genital masculino [ 13]. Es esencial para comprender mejor la infección por el VIH-1 y la persistencia en el tracto genital masculino, a fin de desarrollar mejores estrategias de intervención para prevenir la transmisión sexual del VIH-1.

Una circular episomal HIV-1 fragmento de ADN, de 2 de repetición terminal larga (LTR) ADN complementario (ADNc), ha sido utilizada como un marcador de infección por VIH-1 in vivo. 2-LTR cDNA es un subproducto de la infección por VIH-1, formado después de la transcripción reversa del ARN del VIH-1 y antes de la integración de la pandemia del VIH-1 cDNA genoma de ADN en células de acogida [14]. Nonintegrated ADN del VIH-1 ha adquirido importancia clínica, ya que su acumulación dentro de las células infectadas se cree que indican los últimos replicación del VIH-1 [14 - 16], y porque su presencia se ha asociado con efectos citopático [17, 18]. A pesar de que la estabilidad y la vida media de 2-LTR extracromosómicos de ADN del VIH-1 es una cuestión de debate [19, 20], un estudio clínico reciente, que muestra que los pacientes en terapia subóptima adquirir resistencia a los medicamentos mutaciones en episomal viral cDNA mientras sigue provirus Sin cambios, reafirma la importancia clínica de este marcador [21]. 2-LTR cDNA se ha detectado en la sangre y los tejidos de las personas de la terapia antirretroviral de gran actividad (TARGA), y puede ser una indicación de críptico de replicación del VIH-1 [16]. Este marcador se utiliza para controlar la replicación viral residual y potencial evolución de la resistencia a los medicamentos mutaciones en los sitios de depósito viral en individuos HAART [22].

Considerando que la efectiva terapia antirretroviral (TAR) suprime el VIH-1, carga viral en sangre y semen tanto, el VIH-1 DNA proviral a menudo persiste en células de esperma [23, 24]. 2-LTR cDNA podría proporcionar un marcador útil para la infección por VIH-1 en el tracto genital masculino, incluido el enigma de la replicación del VIH-1 en el tracto genital en los hombres en TARGA. En un estudio reciente se midió 2-LTR cDNA en la sangre y semen de los hombres en TARGA, pero no para detectar cualquier semen muestras positivas [25], posiblemente debido a un paso de selección de células que pueden reducir la sensibilidad del VIH-1 en la detección de ADN en el semen. Hemos aplicado un método de extracción que no requiere de la separación de células y de los resultados en la recuperación selectiva de ADN de las células somáticas semen incluidos todos los infectados por VIH-1 glóbulos blancos (WBC). El primer objetivo de nuestro estudio fue cuantificar 2-LTR cDNA en el semen de hombres ART-naïve con otros signos de infección por VIH-1 en el tracto genital (controles positivos). Nuestro segundo objetivo fue evaluar los niveles de 2-LTR cDNA en el semen de los hombres sobre ART.

Materiales y métodos
Semen de procesamiento

Las muestras de esperma utilizados en este estudio fueron archivadas de los estudios publicados previamente [1, 23]. Positivo muestras de control utilizado para la validación de 2-LTR cDNA detección y cuantificación fueron de ART-naïve hombres con pruebas de seminal viremia por VIH-1 (Grupo I). VIH-1 DNA proviral en la fracción celular ha sido evaluado por PCR cuantitativa; infecciosa del VIH-1 se detectó en el plasma seminal y las fracciones celulares de p24 ensayo seguimiento a los 21 días de coculture con un phytohaemagglutinin (PHA)-estimulado células mononucleares de sangre periférica (PBMC) [1]. Estas muestras fueron recolectadas antes de RT-PCR fue ampliamente disponible, de modo que el VIH-1 RNA copia números no se evaluaron. Las muestras utilizadas para poner a prueba seminal 2-LTR cDNA (críptico de replicación del VIH-1) en los hombres sobre la terapia antirretroviral fueron del 22 por VIH-1 positivos antes de los hombres y en el 1 y 6 meses después de la adición de indinavir a la terapia dual análogo nucleótido (Grupo II ). Información clínica para esta cohorte se ha presentado en un informe anterior (23). Seminal de glóbulos blancos se obtuvieron en el momento de recogida de esperma por análisis microscópico de la peroxidasa-manchado polimorfonucleares neutrófilos (PMN) y cuenta diferencial de linfocitos y macrófagos por immunohistology [26]. Semen de este grupo fue la prueba del VIH-1 proviral DNA y RNA por reacción en cadena de polimerasa cuantitativa (PCR) y la transcriptasa inversa (RT)-PCR en sangre y carga viral fueron controlados por el ADN ramificado Chiron ARN-1 ensayo [23]. Por 2-LTR cDNA evaluación, alícuotas de células que contienen gránulos de 250 μ l de semen que habían sido almacenados a -80 ° C fueron descongelados. Nonspermatozoal semen células fueron lisadas en una solución tampón que contiene 1% SDS y 100 μ g / ml de proteinasa K. ADN fue extraído con el estándar de fenol / cloroformo / etanol procedimiento, y almacenados en agua destilada a 4 ° C hasta su uso.

2-LTR cDNA detección y cuantificación

El 2-LTR cDNA secuencia fue amplificado por PCR en la presencia de 10 nM digoxigenina (DIG)-etiquetados dUTP (Roche Diagnostics, Indianapolis, IN), a la etiqueta de la PCR-amplificación de ADN con productos DIG ELISA para su posterior análisis. El ciclo de las condiciones de PCR fueron: 95 ° C durante 10 min, 40 ciclos a 95 ° C durante 30 segundos, 57 ° C durante 30 segundos y 72 ° C durante 30 segundos. El sentido y antisentido primers fueron: 5'-AACTA GGGAA CCCAC TGCTT AAG-3 'y 5'-TCCAC AGATC AAGGA TATCT TGTC-3' [27]. Controles positivos (PBMC de infectadas por VIH-1 hombres) y controles negativos (PBMC no infectadas y semen de los hombres) se incluyeron en cada experimento, y se les realizó el mismo procesamiento de las muestras de ensayo.

Para el ELISA y ensayos de Southern blot, un 29-biotina base de la sonda se construyó (5'-GGAAA ATCTC TAGCA GTACT GGAAG GGCT-3 ') que contiene, sucesivamente, los últimos 15 bases del genoma del VIH-1 (9705-9719 bases) , Más 4 bases, GTAC, específicamente encontrados en el VIH-1, 2-LTR círculo de la salida, y la primera de las 10 bases de VIH-1 en el genoma (bases 1-10). En ELISA, DIG-PCR productos etiquetados están obligados a la streptavidina recubierto microtiterplate (Roche Diagnostics, Indianapolis, IN) biotinated través de la sonda durante un recorrido de 3 horas de incubación a 56 ° C, y reaccionó con el anticuerpo anti-DIG-HRP conjugado. Densidad óptica (DO) se midió a 405 nm tras añadir el sustrato ABTS HRP. Las muestras se consideraron positivas si el OD 405 fue superior a la media de los controles negativos de PCR más 3 veces la desviación estándar (OD neg SD + 3). Copia de los números 2-LTR cDNA se determina a partir de una curva estándar obtenida por amplificación de la serie-2-LTR diluido cDNA control positivo amplicones. Al menos 10 ejemplares de 2-LTR c ADN podría ser detectado consistentemente en repetidas carreras. Para cada muestra, un gen de limpieza, glyceraldehyde-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH), también fue amplificada y cuantificados por ELISA para verificar la presencia de amplifiable DNA.

Los productos de PCR se analizaron por electroforesis en gel de agarosa, Southern blot y secuenciación del ADN. Quince microlitros producto de PCR se separaron en un gel de agarosa al 1% y transferidos a una membrana Hybond N + (Schleicher y Schuell, Keene, NH); Southern blot se realizó a través de 29-biotina base de la sonda. Después de un lavado de alto rigor, el conjugado HRP-streptavidina y su sustrato en el Luminol / potenciador solución (Pierce, Rockford, IL) se añadieron a la membrana. La imagen fue adquirida con Fluorchem SP (Alpha Innotech, San Leandro, CA). Secuenciación directa del producto de PCR fue realizado por el Centro del Cáncer de Dana-Farber/Harvard servicio básico.

Citomegalovirus (CMV) la detección

Debido a la infección por CMV es común en infectados por VIH-1 hombres, y seminal derramamiento de CMV se ha asociado con niveles elevados de VIH-1 en el semen [28], se ensayaron los extractos de células de esperma CMV ADN por PCR y ELISA. El sentido y antisentido primers para CMV fueron: AGGCG TGTAC GGTGG GAGGT CT y CCGCG TTCCA ATGCA CCGTT CC [29]. La biotina-etiquetados sonda fue CCATA GAAGA CACCG GGACC GATCC AGCCT. Los parámetros PCR fueron 95 ° C, 30 segundos y 60 ° C, 1 min a 40 ciclos.

Resultados

2-LTR cDNA fue detectado en el semen de 4 / 8 hombres en el grupo I (controles positivos). Copiar números variaron de 55 a 504 copias / muestra (Cuadro 1]. Semen de 2 / 22 hombres en el grupo II de doble nucleósido análogo ART fueron positivos para 2-LTR cDNA (336 y 8560 copias / muestra); uno de los 2-LTR cDNA muestras positivas han indetectables de ARN del VIH-1, el otro ha elevado ARN del VIH (4 × 10 5 copias, en el cuadro 1]. A raíz de la adición de los inhibidores de la proteasa (PI), indinavir, al régimen de ART, 0 / 40 muestras de esperma de 21 hombres con periféricos y seminal ARN del VIH-1 represión fueron positivos para 2-LTR cDNA (las 21 en la prueba de un mes , Y el 19 volvió a someter a prueba a los 6 meses). El resto de sujetos en el grupo II, un paciente, era intolerante del régimen de indinavir (náuseas) y pérdida de varias dosis. Por un mes, la sangre ARN del VIH-1 sigue siendo indetectable para este individuo, pero seminal ARN del VIH-1 copia número aumentó de 4 × 10 5 (línea de base) a 2 × 10 6. Fue positivo para seminales 2-LTR cDNA mientras que en la doble terapia con análogos de nucleósidos antes de la terapia indinavir (8560 copias / muestra), y en el aumento de los niveles de 1 mes después indinavir tiempo de tratamiento a punto 20944/sample (Tabla 1]. A los 5 meses después de iniciar el indinavir, su régimen de tratamiento ha sido modificada (stavudine, sequinavir y continuó lamivudina), por el tiempo de 6 meses se mantuvo punto viremia indetectable en sangre, el semen ARN del VIH-1 se redujo a 3 × 10 5, y 2 -- LTR cDNA fue indetectable. De interés, que ya se ha informado de que distintas mutaciones de resistencia IP se detecta en el semen y la sangre de un paciente 18 meses después de la terapia no indinavir (23).

2-LTR cDNA de las cuatro muestras positivas con las señales más fuertes en el PCR / ELISA también fueron detectados como bandas de 190 bp en geles de agarosa, lo que confirma el tamaño correcto de los productos amplificados (Figura 1]. La unión de la sonda con biotina a la PCR producto en Southern blot ensayo verificado la correcta orientación de la amplificación de PCR. (Figura 2]. Para confirmar que el VIH-1, 2-LTR cDNA se ha amplificado, los productos PCR de cuatro 2-LTR cDNA positivas las muestras de semen y de los controles positivos PBMC fueron purificados y secuenciados directamente. La secuencia resultados mostraron que la PCR son los productos que contienen los fragmentos de la secuencia exacta que abarcan el genoma del VIH-1 en base de los números de 9585 a 9719 y del 1 al 51.

Los siete de la 2-LTR cDNA semen muestras positivas mostraron otros indicios de la infección por VIH-1. Cuatro de los 2-LTR cDNA + muestras de semen Grupo I se PI-ingenuo de los hombres con leukocytospermia (LCS, es decir, 1000000 ≥ WBC / mL semen) y alta seminal VIH-1 número de copias de ADN proviral. Dos de cada tres del Grupo I 2-LTR cDNA + muestras también contenía células libres infecciosa del VIH-1; el cuarto 2-LTR + cDNA fue indeterminado en la cultura de ensayo debido a la contaminación bacteriana. Seminal ARN del VIH-1 no se disponía de los niveles para el Grupo I. Los tres de la 2-LTR cDNA positivas las muestras de semen Grupo II que figuran hombres de ADN proviral; uno fue leukocytospermic, y las dos muestras de un paciente en la línea de base y también de un mes Contenían concentraciones elevadas de ARN del VIH-1. Cinco de las siete de la 2-LTR cDNA + muestras de semen (Grupos Iy II) también fueron positivos para CMV ADN (Tabla 1].

Por otra parte, muchas muestras de semen con indicadores de la infección por VIH-1 fue negativo en el 2-LTR cDNA ensayo. De las cuatro muestras negativas Grupo I, todos eran de ART-naïve seminal los hombres con VIH-1 proviral DNA (criterios de inclusión para el grupo I), un cultivo positivo fue para el VIH-1, y 2 fueron CMV + ADN. De los 20 2-LTR cDNA-negativos Grupo II muestras de referencia, uno se leukocytospermic, 4> 100 copias de VIH-1 proviral DNA, 5 figura> 1000 copias de la célula libre de ARN del VIH-1 y 6 fueron CMV ADN - Positivos. De los 40 2-LTR cDNA-negativos después de los indinavir muestras de semen, cuatro fueron leukocytospermic, 12 habían proviral del ADN del VIH-1, y 5 eran de los hombres con seminal CMV ADN.

Discusión

Este estudio demuestra por primera vez que el VIH-1, 2-LTR cDNA, marcador clínico de la infección por VIH-1, puede ser detectado en el semen de infectadas por VIH-1 hombres. Porque seminal ARN del VIH-1 pueden proceder de fuera del tracto genital, y seminal HIV-1 DNA proviral puede representar infección latente, 2-LTR cDNA puede ser un marcador útil para la vigilancia de la infección por VIH-1 dentro de los tejidos del tracto genital. El mayor número de copias de cDNA 2-LTR en este estudio se han detectado en el semen de un hombre que no indinavir terapia, que más tarde desarrollaron mutaciones de resistencia IP única en el semen. Los datos de este estudio sugieren que seminales 2-LTR cDNA puede proporcionar un marcador útil para predecir la evolución de la transmisión sexual del VIH-1 en la resistencia a los medicamentos mutaciones en el hombre sobre ART.

Dado que el número de infectadas por VIH-1 en células de esperma se ve limitado por el tamaño pequeño de la muestra, se deberán tomar medidas para aumentar al máximo el VIH-1, la extracción de ADN. En el único estudio publicado de investigar 2-LTR cDNA en el semen, Nunnari et al. [25] WBC aislados seminal sobre Ficoll antes de la extracción de ADN y 2 LTR-c-ADN de ensayo. Este procedimiento elimina infectadas por VIH-1 macrófagos, que son una importante fuente de virus infeccioso, y también reduce la producción de células T [30]. Por lo tanto, la sensibilidad de 2-LTR cDNA de detección en su estudio puede haber sido comprometida. En nuestro estudio, se utilizó una técnica de lisis directa para extraer ADN de las células de esperma nonspermatozoal célula "pellets". Sperm DNA está estrechamente vinculada por lazos disulfuro en las histonas, y su extracción requiere de la adición de un agente reductor, como dithiothreitol (TDT) [31]. Nuestra técnica de lisis esperma sale de la cabeza intacta y ofrece extractos de ADN enriquecido para WBC. En este estudio, la cantidad de semen WBC varió de 1,8 × 10 5 a 2,7 × 10 6 / mL de 2-LTR-cDNA muestras positivas, y 2-LTR cDNA copia números fueron relativamente bajos (rango 10-630 por 10 6 células) . La sensibilidad de 2-LTR cDNA detección en el semen podrían aumentar aún más mediante el uso de una mayor fracción de la muestra de semen, en lugar de una pequeña alícuota que se utilizó en este estudio, y por centrifugación procedimientos que enriquecen episomal DNA VIH-1 antes de la PCR. Fraccionamiento de células de los procedimientos pueden aplicarse a las muestras con un alto número de copias de cDNA 2-LTR celulares para identificar objetivos de la infección por VIH-1 en el tracto genital masculino.

Todos los de la 2-LTR cDNA + muestras de semen contenía VIH-1 proviral DNA, y todos menos dos fueron positivos para el ARN del VIH-1 o viriones infecciosos. Cinco de 7 de la 2-LTR cDNA + semen muestras también fueron positivos para CMV seminal de ADN, pero esta asociación no fue estadísticamente significativa debido a la infección por CMV es común global (4 / 8 hombres en el Grupo I y 9 / 22 hombres en el grupo II se Seminal positiva para CMV).

Dos hombres de doble nucleósido análogo tratamiento había 2-LTR cDNA en el semen; uno de estos individuos no posterior indinavir terapia y sigue teniendo altos niveles de ARN del VIH-1 y 2-LTR cDNA en el semen, aunque periférica carga viral indetectable fue. Estos datos proporcionan nuevas pruebas de que la replicación del VIH-1 puede ocurrir en el tracto genital de los hombres sobre ART, que puede conducir a la evolución de la resistencia a los medicamentos mutaciones en el semen que no puede ser controlada en la sangre periférica. Por otra parte, ninguno de indinavir después de los 40 muestras de semen de los hombres el control de ARN del VIH-1 en sangre y semen fue positiva para 2-LTR cDNA, lo que sugiere que críptica la replicación del VIH-1 en el tracto genital (sin la aparición del VIH -1 ARN en la sangre o el semen) puede ser poco frecuente en los hombres en efectivo ART.

El origen del VIH-1 y células infectadas en el semen es poco conocido. Algunas células infectadas y viriones de VIH-1 en el semen pueden proceder de fuera de la infección del tracto genital, pero las pruebas genéticas indica que al menos algunos de los VIH-1 detectado en el semen es distinto del VIH-1 en sangre periférica [6 - 8]. Aunque las células germinales y de otros tipos de células se han estudiado como posibles reservorios de VIH-1 en el tracto genital masculino, en los últimos atención se ha centrado en el tracto genital WBC. El semen contiene un número variable de células T CD4 + y macrófagos [32], y estudios recientes utilizando inmunoperlas o gradiente / lavado de esperma métodos han demostrado que estos tipos de células llevan el semen HIV-1 proviral DNA y son altamente infecciosas [30, 33]. Infectadas por VIH-1 macrófagos y las células T se han detectado en todo el tracto genital masculino [34]. Condiciones inflamatorias, como los ocurridos durante la infección con otros patógenos de transmisión sexual, atraer a un gran número de linfocitos y macrófagos en el compartimiento seminal, y se asocian con un mayor número de células infectadas y virus infeccioso en el semen [1, 11, 35]. Se desconoce en qué medida infectados por VIH-1 WBC migrar en el aparato genital de la sangre periférica o de otros tejidos, o in situ están infectados por el VIH-1 en el tracto genital. Un reciente estudio que implique el análisis filogenético de las secuencias de nucleótidos de la región C2-V5 del VIH-1 gp120 del VIH-1 ARN aislado de las células de esperma y plasma seminal del 5 infectadas por VIH-1 presentó pruebas de que los hombres de células libres de VIH-1 en Semen ha secuencias distintas y no pueden ser derivados de células representadas en el semen [36]. Los futuros estudios sobre la presencia del VIH 2-LTR cDNA en el tracto genital y el semen poblaciones de células deberían proporcionar una idea de la mejora de las fuentes de infección por VIH-1 en el tracto genital masculino.

Conclusión

Este estudio, que muestra que el VIH-1, 2-LTR c-ADN es detectable en células de esperma, la prueba de la infección por VIH-1 se produce en el aparato genital. Este marcador molecular de la infección por el VIH puede proporcionar una importante herramienta de investigación para comprender mejor los sitios de infección por VIH-1 en el tracto genital masculino, y como una herramienta para la vigilancia clínica tracto genital infección por VIH-1 en hombres en supresivo ART.

Conflicto de intereses

Los autores declaran que no tienen intereses en conflicto.

Contribuciones de los autores

CX cumplido todas las técnicas moleculares. JAP muestras procesadas, realizó los análisis de semen y WBC y mantenido bases de datos. KHM coordinado la adquisición de semen y la información clínica. DJA fue responsable de la elaboración y la aplicación experimental del proyecto. Todos los autores contribuyeron a la redacción del manuscrito.

Agradecimientos

La investigación para este estudio fue apoyado por el NIH AI035564 y subvenciones concedidas a DK072933 DJA.