Respiratory Research, 2005; 6(1): 119-119 (más artículos en esta revista)

Cromatografía líquida / espectrometría de masas análisis de los leucotrienos B 4 exhalado en niños asmáticos

BioMed Central
Paolo Montuschi (pmontuschi@rm.unicatt.it) [1], Simona Martello (simona.martello @ rm.unicatt.it) [2], Marialinda Felli (marialinda.felli @ rm.unicatt.it) [2], Chiara Mondino (chwind@libero.it) [3], Peter J Barnes (pjbarnes@ic.ac.uk) [4], Marcello Chiarotti (mchiarotti@rm.unicatt.it) [2]
[1] Departamento de Farmacología de la Facultad de Medicina de la Universidad Católica del Sagrado Corazón, Roma, Italia
[2] Departamento de Medicina Forense de la Facultad de Medicina de la Universidad Católica del Sagrado Corazón, Roma, Italia
[3] Departamento de Immunodermatology, Istituto Dermopatico dell'Immacolata, IDI, IRCCS, Roma, Italia
[4] Departamento de Medicina Torácica, Imperial College, la Escuela de Medicina de la National Heart and Lung Institute, Londres, Reino Unido

Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons License (http://creativecommons.org/licenses/by/2.0], que permite el uso irrestricto, la distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que la obra original sea debidamente citada.

Resumen
Antecedentes

El papel de los leucotrienos (LT) B 4, un potente mediador inflamatorio, en atópicos y asmáticos atópica nonasthmatic niños es en gran parte desconocido. La falta de un estándar de oro para la técnica de medición de LTB 4 en el aliento condensado exhalado (EBC) ha impedido su evaluación cuantitativa en este fluido biológico. Hemos tratado de medir LTB 4 en EBC atópica en niños asmáticos y niños nonasthmatic atópica. Exhalado óxido nítrico (NO) se midió como un marcador independiente de la inflamación de las vías respiratorias.

Métodos

Quince niños sanos, 20 niños nonasthmatic atópica, el 25 de esteroides ingenuo atópica en niños asmáticos, y 22 atópica niños asmáticos que recibieron corticosteroides inhalados se estudiaron. El diseño del estudio fue de tipo transversal,. Exhalado LTB 4 concentraciones se midieron mediante cromatografía líquida / espectrometría de masas-espectrometría de masas (LC / MS / MS) con un triple cuadripolares espectrómetro de masas. NO exhalado se midió por quimioluminiscencia con un solo aliento en línea método. LTB 4 valores se expresaron como la cantidad total (en pg), de eicosanoid vencido en los 15 minutos de prueba de aliento. Prueba de Kruskal-Wallis se utilizó para comparar los grupos.

Resultados

En comparación con niños sanos [87,5 (82,5-102,5) pg, mediana y rango intercuartil], exhalado LTB 4 es en el aumento de los esteroides ingenuo atópica asmáticos [255.1 (175.0-314.7) pg, p <0,001], pero no en atópica nonasthmatic Niños [96,5 (87,3-102,5) pg, p = 0,59)]. Niños asmáticos que estaban recibiendo corticosteroides inhalados ha exhalado menores concentraciones de LTB 4 ingenuo que los esteroides-los asmáticos [125,0 (25,0-245,0) pg vs 255,1 (175,0-314,7) pg, p <0,01, respectivamente]. NO exhalado fue mayor nonasthmatic atópica en niños [16,2 (13,5-22,4) ppb, p <0,05] y, en mayor medida, en atópica esteroides ingenuos niños asmáticos [37,0 (31,7-57,6) ppb, p <0,001] Que en niños sanos [8.3 ppb (6.1-9.9)]. En comparación con los esteroides ingenuos niños asmáticos, NO exhalado se redujeron los niveles de asma en los niños que estaban recibiendo corticosteroides inhalados [15,9 (11,5-31,7) ppb, p <0,01].

Conclusión

En contraste con las concentraciones de NO exhalado, exhalado LTB 4 valores son elevados en forma selectiva esteroides ingenuo atópica en niños asmáticos, pero no nonasthmatic atópica en niños. Aunque los estudios de control de placebo están garantizados, los corticosteroides inhalados parecen reducir exhalado LTB 4 en niños asmáticos. LC / MS / MS análisis de LTB 4 exhalado podría proporcionar un no invasivo, sensible, y el método cuantitativo para la evaluación de inflamación de las vías respiratorias en niños asmáticos.

Antecedentes

Inflamación de las vías respiratorias crónicas, la principal característica fisiopatológicos del asma, subyace en los síntomas del asma y puede tener un papel en la remodelación de la vía aérea y el pulmón [1]. Elevados de inflamación de las vías respiratorias a menudo precede a la aparición de los síntomas o la limitación de la vía aérea [1]. La cuantificación de la inflamación de las vías aéreas es difícil ya que requiere técnicas invasivas o de la medición de biomarcadores en el plasma o la orina que reflejan sistémica en lugar de la inflamación pulmonar. La broncoscopia con lavado broncoalveolar sigue siendo el estándar de oro para evaluar la inflamación de las vías respiratorias, pero la invasividad hace poco éticas como un método de rutina en particular en los niños [2]. Inducción de esputo es menos invasiva [3], aunque esta técnica es particularmente difícil de aplicar en los niños pequeños y sí induce inflamación de las vías respiratorias [4].

Esto ha llevado a una búsqueda de medios no invasivos para medir la inflamación de las vías respiratorias y los pulmones con el fin de las ayudas diagnóstico, para evaluar la respuesta a los tratamientos anti-inflamatorios, para predecir la pérdida de control de la enfermedad y evaluar la respuesta a tratamientos novedosos [5]. Cada vez hay más pruebas de que la medición de biomarcadores en la respiración puede reflejar enfermedad pulmonar [6]. Forma directa de la toma de muestras de pulmón tiene importantes ventajas en comparación con el formulario de la toma de muestras de sangre o de orina, cuando la dilución y el metabolismo de los marcadores de inflamación en los pulmones que surgen hace muy difícil la interpretación. Exhalado el óxido nítrico (NO), la medición es actualmente el único método no invasivo completamente para cuantificar inflamación de las vías respiratorias en pacientes con asma que no reciben tratamiento con corticosteroides [2, 7]. Sin embargo, como varios mediadores inflamatorios involucrados en el asma, la identificación de otros marcadores exhalado podría contribuir a una mejor comprensión de su compleja fisiopatología. Aliento condensado exhalado (EBC) es un método completamente no invasivo para la recogida de secreciones las vías respiratorias [8, 9]. Cysteynyl-leucotrienos juegan un papel importante en la fisiopatología del asma y su regulación es importante para el tratamiento de esta enfermedad [10]. Sin embargo, el papel de los leucotrienos (LT) B 4, un potente chemoattractant para neutrófilos, en el asma es en gran medida desconocido. El uso de inmunoensayos, LTB 4 ha sido detectado en EBC en sujetos sanos y encontraron en el aumento de asmáticos adultos [11, 12] y niños [13, 14]. Sin embargo, la presencia de LTB 4 en EBC no ha sido confirmada por técnicas de análisis más específicos. Además, una gran variación en las concentraciones exhalado LTB 4 en pacientes con similares características clínicas y funcionales ha reportado en diferentes estudios [13 - 15]. Esto puede explicarse en parte por la falta de validación de los kits disponibles comercialmente inmunoensayo que se utilizaron para medir exhalado LTB 4 en estos estudios [16]. Espectrometría de masa, la referencia técnica analítica, se requiere de una evaluación cuantitativa precisa de exhalado LTB 4. En el presente estudio, nuestro objetivo para medir las concentraciones de LTB 4 en EBC con cromatografía líquida / espectrometría de masas-espectrometría de masas (LC / MS / MS), utilizando deuterated (d 4) LTB 4 como patrón interno en niños sanos, los niños atópicos nonasthmatic, esteroides Naive atópica en niños asmáticos, y atópica niños asmáticos que fueron tratados con corticosteroides inhalados. También mide exhalado NO como un marcador independiente de la inflamación de las vías respiratorias.

Métodos
A los sujetos de estudio

Cuatro grupos de niños fueron estudiados: 15 niños sanos, 20 niños nonasthmatic atópica, el 25 de esteroides ingenuo atópica en niños asmáticos, y 22 atópica niños asmáticos que estaban recibiendo corticosteroides inhalados (Tabla 1]. Atópico nonasthmatic atópica en niños asmáticos y se contrató a partir de la Asma y Alergia ambulatorio, Istituto Dermopatico dell'Immacolata, Roma, Italia. El diagnóstico y la clasificación del asma se basa en la historia clínica y el examen y parámetros de la función pulmonar de acuerdo a la Guía para el Diagnóstico y Manejo del Asma emitido por el Instituto Nacional del Corazón, los Pulmones y la Sangre de los Institutos Nacionales de Salud [17]. Esteroides ingenuo atópica niños asmáticos tenían asma intermitente leve con síntomas menos, dos veces a la semana, el volumen espiratorio forzado en un segundo (FEV 1), de 80% o más del valor predicho y reversibilidad del 12% o mayor a salbutamol, o provocación positiva Methacholine con resultado de la prueba o ejercicio. No eran de tomar cualquier medicación regular, pero utiliza inhalados de acción corta β 2-agonistas como sea necesario para alivio de los síntomas. Fueron excluidos del estudio si habían utilizado los corticosteroides inhalados o antagonistas de los receptores de LT en el anterior 4 semanas. Atopia fue confirmado por las pruebas de punción cutánea. Tratados con esteroides atópica niños asmáticos persistentes había ligeros a moderados de asma y están recibiendo terapia de mantenimiento, ya sea con 100 μ g / día (10 niños) o 200 μ g / día (12 niños) de propionato de fluticasona inhalado, administrado por medio de diskus (GSK, Uxbridge, Reino Unido) en una dosis constante durante al menos 8 semanas. No habían venido tomando LT antagonistas de los receptores de al menos un mes. Atopia fue confirmado por las pruebas de punción cutánea.

Atópico nonasthmatic los niños tenía una historia clínica de atopia y los resultados de la prueba cutánea positiva. Todos tenían la rinitis alérgica y fueron sensibilizados a alergenos perennes o fueron recientemente expuestos a un alergeno.

Control de niños sanos no tenía antecedentes de asma y enfermedad atópica y negativos resultados de la prueba de punción cutánea. Ellos fueron contratados de los hijos del personal.

Grupo de estudio sobre los niños no tenían infecciones del tracto respiratorio superior en la anterior de 3 semanas. Los niños fueron excluidos del estudio que los corticosteroides orales utilizados en el anterior 4 semanas o no esteroides antiinflamatorios en las 2 últimas semanas.

Diseño del estudio

El estudio fue de diseño transversal,. Los niños asistieron al Departamento de Farmacología de la Universidad Católica del Sagrado Corazón, Roma, Italia, para el examen clínico, EBC colección, la espirometría y las pruebas de punción cutánea. Se obtuvo el consentimiento de los padres y el estudio fue aprobado por el Comité de Ética de la Universidad Católica del Sagrado Corazón, Roma, Italia.

Día a día la repetibilidad de las mediciones LTB 4 se evaluó en 20 niños con asma en un diseño al azar por tres EBC recogida de muestras dentro de los 7 días de la primera.

Función pulmonar

La espirometría se realizó por medio de una campana de 10 L espirómetro (Biomedin, Padova, Italia) y la mejor de tres maniobras, expresado como porcentaje de predicción, fue el elegido.

Exhalado aliento condensado de colección

Exhalado aliento condensado se recogió utilizando una cámara de condensación (Ecoscreen, Jaeger, Hoechberg, Alemania), como se describe anteriormente [11]. En pocas palabras, el aire exhalado entró y salió de la cámara a través de una vía válvulas en la entrada y salida, por lo tanto, el mantenimiento de la cámara cerrada. Los niños recibieron instrucciones de tidally aliento a través de una boquilla conectada al condensador durante 15 min. Un promedio de 1,5 ml EBC por niño fue recogido y almacenado un -80 ° C. LTB 4 mediciones se realizaron dentro de las 2 semanas siguientes a la recogida de las muestras. Α-Amylase EBC concentraciones en todas las muestras fueron determinadas por un método colorimétrico in vitro, para comprobar la posible contaminación salival (Roche Diagnostics, Basel, Suiza).

Medición de la exhalado LTB 4

Exhalado LTB 4 se midió con un Finnigan Surveyor ® LC Sistema bomba junto con un TSQ Quantum Ultra ™ triple cuadripolares espectrómetro de masas mediante ionización por electrospray con iones negativos polaridad modo con electrospray fuente (Thermo Electron Corporation, San José, EE.UU.). El LC / MS / MS condiciones experimentales fueron similares a las descritas anteriormente [18]. Sin embargo, el uso de un Finnigan Surveyor ® LC Sistema bomba junto con un TSQ Quantum Ultra ™ triple cuadripolares espectrómetro de masas ha permitido aumentar 10 veces la sensibilidad analítica (10 pg / ml frente a 100 pg / ml). El límite inferior de cuantificación (LDC) era de 50 pg / ml. La fuente optimizado parámetros fueron los siguientes: spray de tensión, 4500 V; vaina de la presión de gas, 40 unidades arbitrarias; aux presión de gas, 10 unidades arbitrarias; capilar de temperatura, a 300 ° C; capilar offset, 30 V; tubo lente compensar, 110 V. Cromatografía se realizó en un BetaBasic C18 columna (15 cm × 2, de 1 mm de diámetro interior, Thermo-Hypersil Keyston, Bellefonte, PA, EE.UU.) con un gradiente lineal con acetonitrilo-agua-ácido acético (30:70:0.05, v / V, a pH 5-6) que fue cambiado al 100% acetonitrilo más de 4 minutos. Caudal fue de 0,25 ml / min. LTB 4-d 4 (Caimán Co productos químicos, Ann Arbor, MI) se ha utilizado como patrón interno y se añadió a cada muestra para llegar a una concentración final de 1000 pg / ml. El área del pico coeficientes de LTB 4 / LTB 4-d 4 se dibujan frente a las concentraciones de LTB 4. La curva de calibración en el rango de 10-500 pg / ml tenía una buena linealidad con r 2 = 0,9965. 10 μ l de la muestra se inyecta directamente en el cromatógrafo de líquidos sin ningún tipo de tratamiento previo.

Todos los solventes fueron cromatografía líquida de alta eficacia grado obtenido de Merck (Darmstadt, Alemania) y ácido acético puro extra fue adquirido por Riedel-de Haen, Sigma-Aldrich, Seelze, Alemania. LTB 4 y LTB 4-d 4 fueron adquiridos de los productos químicos Caimán Co (Ann Arbor, MI, EE.UU.) y almacenados a -20 ° C hasta su uso. Las soluciones de trabajo se prepararon diariamente utilizando como fase móvil disolvente.

LTB 4 valores en EBC se expresaron como cantidad total (en picogramos), de los leucotrienos vencido en los 15 minutos de prueba de aliento (LT concentraciones × volumen de la EBC). Concentración de LTB 4 en indetectable muestras se consideró 25 pg / ml, que corresponde al 50% del límite inferior de cuantificación (50 pg / ml).

Medición de óxido nítrico exhalado

NO exhalado se midió con el sistema de NIOX (Aerocrine, Estocolmo, Suecia) con un solo aliento en línea método de acuerdo a directrices de la Sociedad Torácica Americana [7]. Los niños NO inhalado sin aire exhalado y dinámica a través de un restrictor de flujo. A los niños se les pidió a exhalar volumen residual, inserte la boquilla, a inhalar total de la capacidad pulmonar a través de un filtro NO, y luego a exhalar en el dispositivo a través de la misma boquilla durante 10 segundos en el flujo constante de 50 ml / seg con la ayuda de un Retroalimentación visual en la pantalla de un ordenador. Una presión negativa localización en la pantalla se utiliza para confirmar que los niños son la inhalación de aire libre de NO. Exhalaciones se repitieron después de 1 minutos a la relajación hasta que el período de ejecución de tres exhalado NO valores varían menos del 10%. NO exhalado mediciones se obtuvieron antes de la espirometría.

Análisis estadístico

Análisis de regresión lineal se utilizó para evaluar la relación entre el área del pico LC coeficientes de LTB 4 / LTB 4-d 4 y LTB 4 concentraciones. Exhalado LTB 4 y NO valores se expresaron como medianas en todo con rangos intercuartil (25 ª a 75 ª percentiles) figuran entre paréntesis. Prueba de Kruskal-Wallis seguida de pairwise Mann-Whitney U test fueron utilizados para comparar los grupos. Las correlaciones entre variables se evaluaron mediante la prueba de Spearman. Importancia se definió como un valor de p <0,05.

Resultados

No α-amilasa concentraciones (<22 mU / ml) fueron detectados en algún estudio muestra, sin incluir significativo en contacto con la saliva.

LTB 4 en EBC

Los espectros de masa de LTB 4 y LTB 4-d 4 reveló una base de pico a m / z 335 para endógeno LTB 4 y m / z 339 para el patrón interno LTB 4-d 4, que corresponde a los iones moleculares. Para aumentar la especificidad, el LTB 4 se detectó en MS / MS modo. Padres iones m / z 335 y m / z 339 fueron fragmentadas con una colisión de energía del 17% y 19%, respectivamente. La transición 335 → 195 m / z → 197 y 339 m / z de patrón interno fue supervisado (Figura 1]. Exhalado LTB 4 concentraciones se detectaron en todos los esteroides ingenuo atópica asmáticos, nonasthmatics atópica, y los niños sanos y fueron indetectables en 7 tratados con esteroides atópica en niños asmáticos (Figura 2]. En comparación con niños sanos [87,5 (82,5-102,5) pg], exhalado LTB 4 es el aumento de los esteroides en niños asmáticos ingenuo atópica [255.1 (175.0-314.7) pg, p <0,001], pero no nonasthmatic atópica en niños [96,5 ( 87.3-102.5) pg, p = 0,59) (Figura 2]. Esteroides ingenuos niños con asma atópica había exhalado mayores concentraciones de LTB 4 atópica nonasthmatic niños (p <0,001) y los niños sanos (p <0.001) (Figura 2].

Niños asmáticos que estaban recibiendo corticosteroides inhalados ha exhalado menores concentraciones de LTB 4 ingenuo que los esteroides-los asmáticos [125,0 (25,0-245,0) pg vs 255,1 (175,0-314,7) pg, p <0,01, respectivamente] y similares a los de atópica nonasthmatic Niños (p = 0,41) y controles sanos (p = 0,43) (Figura 2]. En esteroides atópica en niños asmáticos tratados, el análisis de subgrupos muestra que los niños que estaban recibiendo 100 μ g / día de fluticasona inhalado a una dosis de al menos 8 semanas había exhalado superior LTB 4 valores que los que estaban recibiendo con 200 μ g / día de inhalados Fluticasona a una dosis de por lo menos 8 semanas [245.0 (235.0-282.5) pg vs 25,0 (25,0-102,5) pg, p <0,002, respectivamente) (Figura 3]. En los niños que recibieron 200 μ g / día de fluticasona, la mediana exhalado LTB 4 valores fueron similares a los nonasthmatic atópica en niños (p = 0,15) y controles sanos (p = 0,10). En cambio, exhalado LTB 4 es elevado en los niños asmáticos que han estado recibiendo de 100 μ g / día de fluticasona inhalado (atópica nonasthmatic niños: p <0,005; niños sanos: p <0,001).

Siete niños asmáticos que fueron tratados con la dosis más alta de fluticasona había exhalado niveles indetectables de LTB 4 (Figura 3]. MS / MS espectros de esteroides ingenuos niños asmáticos (Figura 1A], niños sanos (Figura 1C], y atópica nonasthmatic niños (no se muestra) mostraron un gran desconocido máximo en todas las muestras. Este pico no está siempre presente en asmáticos tratados con esteroides en niños (no se muestra) y merece más estudios. No hubo correlación entre exhalado LTB 4 y NO exhalado en cualquier grupo de estudio. No hubo correlación entre exhalado LTB 4 o NO exhalado y de la edad, sexo, la función pulmonar o en cualquier grupo de estudio. El coeficiente de correlación intraclase fue de 0,89 LTB 4.

NO exhalado

NO exhalado fue mayor nonasthmatic atópica en niños [16,2 (13,5-22,4) ppb, p <0,05] y, en mayor medida, a esteroides en niños asmáticos ingenuo atópica [37,0 (31,7-57,6) ppb, p <0,001] Que en niños sanos [8.3 ppb (6,1-9,9)] (Figura 4]. En comparación con los esteroides ingenuos niños asmáticos, NO exhalado se redujeron los niveles de asma en los niños que estaban recibiendo corticosteroides inhalados [15,9 (11,5-31,7) ppb, p <0,01] (Figura 4]. En estos niños, las concentraciones de NO exhalado fueron superiores a los de los controles (p <0,01), pero no que los nonasthmatic atópica en niños (p = 0,98) (Figura 4]. No hubo diferencias en los niveles de NO exhalado entre los niños asmáticos que reciben 200 μ g / día de fluticasona inhalado y de los niños que recibieron una dosis diaria de 100 μ g [14,1 ppb (11,3-22,9) vs 19,8 (13,5-44,5) ppb, p = 0,27, respectivamente )] (Figura 5]. Ambos subgrupos de esteroides en niños asmáticos tratados habían exhalado NO niveles más altos que los niños sanos (los niños tratados con fluticasona a dosis de 100 μ g / día: p <0,001; niños tratados con fluticasona a dosis de 200 μ g / día: p < ; 0,001), pero no que atópica nonasthmatic los niños (los niños tratados con fluticasona en dosis de 100 μ g / día: p = 0,42; niños tratados con fluticasona a dosis de 200 μ g / día: p = 0,46).

Discusión

EBC es un completo método no invasivo para la toma de muestras de secreciones de las vías respiratorias que es adecuado para medidas repetidas de la inflamación pulmonar, incluso en niños pequeños [19]. Uso de LTB 4-d 4 como patrón interno, hemos demostrado que definitivamente LTB 4 está presente en la EBC, proporcionando una evaluación cuantitativa precisa de su concentración en este fluido biológico. En nuestro estudio, los valores absolutos LTB 4 en EBC son significativamente más altos que los publicados en la literatura en los estudios que utilizan inmunoensayos enzimáticos [14, 15], pero similares a los encontrados en los estudios en los que exhalado LTB 4 es medido por análisis de espectrometría de masas [18, 20] . Las razones de esta discrepancia se desconocen, pero podrían estar parcialmente relacionados con la matriz de efectos como las diferencias en la composición de proteínas de la inmunoensayo de amortiguación utilizados para LTB 4 dilución estándar versus EBC muestras pueden influir en la medición LTB 4. Hemos evitado posibles efectos matriz como EBC muestras fueron inyectados directamente en el cromatógrafo sin ningún tipo de tratamiento previo. Nuestro estudio de la población de niños asmáticos atópica ha mantenido así la función pulmonar a lo indicado por el FEV 1 valores superiores a 80% de los valores previstos, pero las pruebas para la pequeña obstrucción de la vía aérea dado que los valores de FEV 1 / CVF y el índice de FEF 25-75%, que son Más sensible para la detección de la reducción de la función pulmonar en niños [1], se redujeron. Comparado con el control de niños sanos, exhalado LTB 4 fueron selectivamente concentraciones elevadas de esteroides en niños con naive asma atópica, pero no en nonasthmatic atópica y en niños tratados con esteroides atópica en niños asmáticos. Aumento de inflamación de las vías aéreas en los esteroides ingenuos niños con asma fue confirmada por los niveles elevados de NO exhalado en estos niños. Estos resultados indican que exhalado LTB 4 puede ser utilizado como una nueva e in vivo no invasiva marcador de la inflamación de esteroides en niños asmáticos-ingenuo.

No hemos estudio de los efectos de los alérgenos desafío en exhalado LTB 4 atópica en niños y nonasthmatic atópica en niños asmáticos. Similar exhalado LTB 4 valores en niños sanos y atópica nonasthmatic niños que habían rinitis perenne o fueron recientemente expuestos a un alergeno de alergenos indican que la exposición tiene poco, en su caso, en efecto exhalado LTB 4 en atópica nonasthmatic niños. Sin embargo, los estudios de alérgenos reto formalmente a abordar esta cuestión están garantizados. El efecto de un alergeno en desafío exhalado LTB 4 niveles atópica en niños asmáticos se desconoce, y debe aclararse.

En contraste con exhalado LTB 4, NO exhalado se encontraron elevados niveles nonasthmatic atópica en niños, aunque este aumento es menos pronunciado que en los esteroides ingenuo atópica en niños asmáticos. Estos resultados y la falta de correlación entre exhalado LTB 4 y NO exhalado niveles sugieren una diferente importancia biológica de estos dos biomarcadores como LTB 4 exhalado podría ser considerado como un marcador de asma, mientras que NO exhalado podría reflejar el distinto grado de inflamación en el aparato respiratorio Tracto atópica en niños con y sin asma. Esto puede tener importantes implicaciones para el diagnóstico y tratamiento de los niños con enfermedad alérgica.

Medición de la LTB 4 exhalado podría ayudar a identificar a los niños que no tienen síntomas respiratorios actual, bien mantenida de la función pulmonar y la elevación de NO exhalado que no sólo tienen en marcha atópica, pero asmáticos inflamación que puede requerir terapia farmacológica anterior. Por otra parte, los niveles elevados de NO exhalado nonasthmatic atópica en niños con rinitis reflejar la presencia de inflamación en las vías respiratorias como la exhalación Restringido método garantiza velum cierre exclusión de la contaminación del aire exhalado con el NO nasal [7]. Esto es coherente con un origen común de la rinitis alérgica y el asma [1]. Sin embargo, se necesitan estudios más amplios para evaluar la importancia biológica de estos hallazgos y sus implicaciones.

En el presente estudio, la mediana de las concentraciones exhalado LTB 4 en niños que estaban recibiendo de fluticasona inhalado fueron inferiores a los de los esteroides ingenuos niños asmáticos. Una reducción significativa en exhalado LTB 4 niveles sólo se observó en el grupo de niños que estaban recibiendo 200 μ g / día de fluticasona inhalado, mientras que en los niños que recibían una dosis diaria de fluticasona inhalado de 100 μ g mediana exhalado LTB 4 niveles fueron similares a Los de los esteroides ingenuos niños asmáticos. Estos resultados pueden indicar que la dosis más baja de fluticasona no es capaz de reducir exhalado LTB 4 niveles en niños asmáticos. Sin embargo, hubo una alta variabilidad en las concentraciones exhalado LTB 4 en ambos subgrupos tratados con esteroides de niños asmáticos, así como de esteroides en niños asmáticos ingenuo-que debe ser abordado en futuros estudios. En un anterior abierto incontrolada estudio, el tratamiento con fluticasona inhalada (100 μ g dos veces al día durante 4 semanas) no tuvo ningún efecto sobre las concentraciones exhalado LTB 4 atópica en niños asmáticos con características similares [14]. Esto podría ser debido a diferencias en el diseño del estudio (abierto vs observacional), la duración del tratamiento (4 semanas frente a por lo menos 8 semanas), y de la técnica analítica utilizada para medir el LTB 4 en EBC (inmunoensayo enzimático vs LC / MS / EM) como las concentraciones de LTB 4 exhalado medido por MS son 10 veces más altos que los medidos por inmunoensayo. Sin embargo, el diseño transversal de este estudio se opone a conclusiones definitivas sobre el efecto de los corticosteroides inhalados sobre exhalado LTB 4 en niños asmáticos para que grandes estudios controlados son obligatorios.

Una limitación de la EBC análisis es que el celular de la fuente dentro de los mediadores de la inflamación de las vías respiratorias no puede determinarse. Con este objetivo, técnicas invasivas como la biopsia bronquial son obligatorios.

Para el ajuste de las posibles variaciones en el volumen de muestra EBC, LTB 4 valores en EBC se expresaron total de la eicosanoid caducado durante un período normal de recogida. Sin embargo, como señaló Effros y compañeros de trabajo, parte de la variación de los no volátiles EBC en la concentración de estos compuestos puede estar relacionado con las diferencias en la dilución de las gotitas respiratorias por el vapor de agua [21]. La falta de correlación entre compuestos estructuralmente relacionados como el LTB 4 y LTE 4 informado en estudios anteriores [13, 14] no parece apoyar esta prueba. Sin embargo, los indicadores de referencia, tales como la medición de la conductividad en la forma propuesta por Effros y compañeros de trabajo [22] se debe utilizar en futuros estudios encaminados a cuantificar exhalado eicosanoids.

Conclusión

Exhalado LTB 4 es elevada a esteroides en niños asmáticos ingenuo atópica, pero no en los niños que recibieron corticosteroides inhalados y nonasthmatic atópica en niños. LC / MS / MS análisis de LTB 4 exhalado podría proporcionar un completamente no invasivo, sensible, y el método cuantitativo para la evaluación de inflamación de las vías respiratorias en niños asmáticos. Esta técnica es potencialmente aplicable a los pacientes con otras enfermedades pulmonares y adecuado para la realización de estudios longitudinales y de la evaluación de la terapia farmacológica. El alto costo es en la actualidad una importante limitación. Se justifica la investigación adicional para la completa caracterización de las sustancias incluidas exhalado-cysteinyl leucotrienos y para establecer el efecto de las drogas anti-asmáticos en exhalado LTB 4.

Conflicto de intereses

Los autores declaran que no tienen intereses en conflicto.

Contribuciones de los autores

PM concibió la idea para el estudio, recogido muestras de condensado exhalado aliento y mide el óxido nítrico exhalado. PM PJB previsto y la investigación. CM contratado a los niños y no la investigación clínica y las pruebas de función pulmonar. SM, MF y MC realizó LC / MS análisis de los leucotrienos B 4 en el aliento condensado exhalado. PM, PJB y MC participó en el análisis y la interpretación de los datos. PM escribió el informe, que fue revisado por PJB y MC. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

Agradecimientos

Este trabajo recibió el apoyo de la Universidad Católica del Sagrado Corazón, Roma, Italia, fondos académico 2004-2005. Las fuentes de financiación no tiene función alguna en la redacción del informe y no participó en la decisión de publicar los resultados.