BMC Cancer, 2005; 5: 139-139 (más artículos en esta revista)

La expresión de HSP60 y HSP10 en el intestino grueso carcinomas con metástasis ganglionar

BioMed Central
Francesco Cappello (francapp@hotmail.com) [1], Sabrina David (sagia75@hotmail.com) [1], Francesca Rappa (francyrappa@hotmail.com) [2], Fabio Bucchieri (fabiobuk@hotmail.com) [1 ], Lorenzo Marasà (francapp@hotmail.com) [2], Tommaso E Bartolotta (francapp@hotmail.com) [1], Felicia Farina (francapp@hotmail.com) [1], Giovanni Zummo (zgummo@unipa.it ) [1]
[1] Sezione di Anatomia Umana, Dipartimento di Medicina Sperimentale, Università degli Studi di Palermo, Italia
[2] Reparto di Anatomia Patologica, Ospedale "Civico", Palermo, Italia

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Resumen
Antecedentes

La participación de las proteínas de choque de calor (HSP) en el desarrollo y progresión del cáncer es un tema ampliamente debatido. El objetivo del presente estudio fue evaluar la presencia y expresión de HSP60 y HSP10 en una serie de carcinomas de intestino grueso y de los ganglios linfáticos locorregional con y sin metástasis.

Métodos

82 Astler y Coller la etapa C2 cánceres colorrectales, de los cuales 48 bien diferenciados y 34 pobremente diferenciado, se seleccionaron 661, junto con los ganglios linfáticos, incluyendo 372 con metástasis y 289 con sólo hiperplasia reactiva, de la misma tumores. Primitiva tumores y metástasis tanto reactivas y los ganglios linfáticos se estudiaron; concretamente, tres diferentes compartimentos de los ganglios linfáticos, secundaria folículo, y paracortex medular sinusal, también fueron analizados. Una investigación de inmunohistoquímica para HSP60 y HSP10 se realizó la semicuantitativo y análisis de resultados se realizó el análisis estadístico para determinar la correlación entre HSPs expresión y 1) la clasificación de tumores, 2) el grado de inflamación, 3) el número de ganglios linfáticos involucrados, 4) compartimento de los ganglios linfáticos Hiperplasia. Por otra parte, el Western Blot se realizó en un grupo más pequeño de las muestras para confirmar los resultados de inmunohistoquímica.

Resultados

Nuestros datos muestran que la expresión de HSP60, en tanto tumor primario y la metástasis a los ganglios linfáticos, se correlaciona con el grado tumoral, mientras que la expresión no es HSP10. No obstante, los niveles de HSP10 comúnmente son más altos que los niveles de HSP60. Además, los análisis estadísticos no muestran ninguna correlación entre el grado de inflamación y la immunopositivity para ambos HSP60 y HSP10. Por otra parte, encontramos una correlación significativa entre la presencia de metástasis en los ganglios linfáticos y la positividad para ambos HSP60 y HSP10. En particular, los ganglios linfáticos metastásicos presentan un mayor porcentaje de células positivas para ambos HSP60 y HSP10 en la secundaria folículos, y para HSP10 en la medular de senos, en comparación con hiperplasia de los ganglios linfáticos.

Conclusión

HSP60 y HSP10 puede tener significado diagnóstico y pronóstico en el manejo de este tumor y su sobreexpresión en células tumorales puede ser funcionalmente relacionadas con la progresión tumoral. Estamos hypothesise que su expresión en el folicular y medular de las células de los ganglios linfáticos puede ser inducida por la formación de metástasis. Nuevos estudios sobre la base de estas observaciones podrían conducir a una mejor comprensión de los HSPs participación en la progresión del cáncer colorrectal, así como de otras neoplasias.

Antecedentes

Proteínas de choque térmico (HSP) son una familia de moléculas que son altamente conservadas durante la evolución y participa en muchas funciones celulares, como el plegado de proteínas. Por consiguiente, su alteración puede tener múltiples efectos fisiopatológicos y el número de documentos de estudio de su expresión en condiciones normales y patológicas está en constante aumento [1 - 3]. En particular, la función de un número de HSPs, como HSP27, -70, -72 y -90, durante la carcinogénesis ya ha sido ampliamente investigado, in vivo e in vitro, en muchas condiciones, como por ejemplo [4] de pulmón, de mama [5], [6] esofágico de ovario y el cáncer [7], así como de osteosarcoma [8], y la leucemia linfoblástica [9]. Los datos obtenidos en estos estudios parece sugerir que este grupo de HSPs pueden ser útiles como herramientas en la gestión de los tumores primitivos. Algunos de los artículos también han sugerido una posible relación entre la expresión de HSP y la formación de metástasis en los ganglios linfáticos [10 - 15].

HSP60 y HSP10 son dos chaperones que interactúan en un plegable de dos pasos en el mecanismo de las mitocondrias de las células eucariotas y procariótico [16]. Además, estas proteínas pueden intervenir en otras funciones celulares, como la mediación de señales específicas del tumor, pero estas funciones no están aún bien comprendidos [3]. En los últimos años, nuestro grupo de investigación ha evaluado la presencia y expresión de HSP60 y HSP10 en carcinogenetic una serie de modelos, como la "displasia-carcinoma" secuencias de exocervix uterino [17, 18], intestino grueso [18, 19] y [20] de próstata. Estos datos han puesto de relieve que estos acompañantes se sobreexpresa en el carcinogenetic medidas, en particular, que se acumulan en el citoplasma de las células displásicas y neoplásicas, y sus niveles de expresión aumenta en la secuencia que lleva de la displasia hacia el carcinoma. Tenemos como hipótesis que HSP60 y HSP10 podría considerarse como nuevas herramientas de diagnóstico y pronóstico para estos tipos de cáncer [21, 22], el haber participado en las etapas de la carcinogénesis molecular, análogamente a lo que ya se ha demostrado con otros tumores [23 - 28].

HSP10 fue recientemente demostrado ser selectivamente expresadas por myelocyte megacariocito y precursores en la médula ósea normal humanos [29]. Esta característica desaparece durante linaje de maduración, y es que como hipótesis HSP10 podría tener otro papel en la diferenciación y / o proliferación de los linajes celulares normales aparte de la co-chaperonin uno, aunque los resultados obtenidos no pueden explicar esta expresión selectiva.

En vista de estos factores, en el presente trabajo la presencia y expresión de HSP60 y HSP10 son estudiados en una serie de carcinomas avanzados intestino grueso (LBC) con metástasis ganglionares. En particular, hemos investigado si su expresión depende de el grado de diferenciación del tumor y la presencia de metástasis en los ganglios linfáticos regionales. Además, analizó la importancia de los datos para determinar la correlación entre ambos HSP expresión y grado de inflamación y el número de ganglios linfáticos involucrados. Por último, tres de cada uno de los compartimentos de los ganglios linfáticos reactivos, la secundaria folículos (SF), el paracortex (PC) y la medular de senos (MS), se examinaron; ganglios linfáticos con metástasis (MLN) se compararon con los ganglios linfáticos con hiperplasia reactiva ( HLN) solamente, para determinar las diferencias en HSP60 y HSP10 expresión.

Métodos
Inmunohistoquímica

LBC 82 de Astler y Coller la etapa C2, locorregional con metástasis en los ganglios, se recogieron. 48 bien diferenciados (G1) carcinomas se compararon con 34 pobremente diferenciados (G3). Las muestras fueron fijadas en formol y embebidos de parafina. De cada caso, el 5 de la sección micra tanto tumor infiltrante de la pared intestinal (Ti) y de los ganglios linfáticos con metástasis (Ni) se obtuvieron. 10 ejemplares normal de la mucosa colónica se seleccionaron, de las cuales 5 micra secciones se obtuvieron como controles.

De todos los tumores recogidos, 661 ganglios linfáticos fueron seleccionados y divididos en dos grupos: el primero compuesto de 372 ganglios linfáticos con metástasis (MLN) y el segundo de 289 ganglios linfáticos con hiperplasia reactiva (HLN). A 5 micra sección se ha obtenido de cada muestra.

La inmunomarcación para HSP60 (monoclonal, SIGMA, H4149, 1:400), y HSP10 (policlonales, StressGen, SPA-110, 1:400) se realizó en la Ti, Ni, MLN y HLN secciones, la utilización de un complejo avidina-biotina Kit (LSAB2, DAKO, Cat. No K677). Un suero inmune no se ejecutan simultáneamente como control negativo. 3-3'-diaminobenzidine (DAB solución cromógeno, DAKO, Cat. N º K3467) se utilizó como cromógeno desarrollar. Counterstaining nuclear se obtuvo mediante hematoxilina (DAKO, Cat. N º S2020).

Tres observadores independientes (FC, FR y LM) examinó las muestras y llevó a cabo un análisis semicuantitativo para evaluar el porcentaje de células positivas en 10 HPF. La media de la triplicado los datos de observación se utilizó para los análisis estadísticos. Además, semiquantified el grado de inflamación (la infiltración de linfocitos) en cada espécimen tumoral en una escala de 0-3 + (de ausentes a muy positivo).

Analizamos la importancia de los datos mediante la prueba t de Student (P <0,05). A un solo sentido "análisis de la varianza (ANOVA) fue utilizada para determinar la correlación entre la expresión y el 1 de HSP) de clasificación de tumores, 2) el grado de inflamación, 3) el número de ganglios linfáticos involucrados, 4) hiperplasia de los ganglios linfáticos del compartimento.

Western Blot

Las biopsias de especímenes de Ti se congelaron en nitrógeno líquido para la biología molecular. Concretamente, el 10 de G1 y 10 G3 especímenes de ambos tumores y los ganglios linfáticos metastásicos se recolectaron al azar, junto con 4 biopsias de la mucosa colónica normal como controles.

20 μ g del total de los extractos de tejido en cada carril y una proteína marcadora (Calidoscopio prestained estándar, Bio-Rad, Cat. N º 1.610.324) se separaron por electroforesis en la desnaturalización del 15% losa de gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) y transferidas a una membrana de nitrocelulosa ( Nitrocell Papel, Bio-Rad, Cat. N º 1620115). Después de 1 hora a temperatura ambiente (RT) con un amortiguador de bloqueo (5% baja en grasa en la leche en polvo TBST: 50 mM Tris-HCl pH 7,5, 150 mM NaCl, 0,1% Tween-20) bajo agitación suave, La membrana se incubó con anti-HSP60 principal anticuerpo (monoclonal de ratón, SIGMA, H4149, 1:1000) durante la noche a 4 ° C. Después de lavados, la membrana se incubó con HRP-anticuerpo secundario conjugado (anti-ratón, Pierce, 1:10000, Cat. N º 31.432) por 1 hora a RT con las sacudidas y vinculante se detectó usando un sustrato quimioluminiscente (SuperSignal West Pico Substrato quimioluminiscente, Pierce, Cat. N º 34.080) por autorradiografía.

El mismo fue despojado de membrana con un stripping buffer (TM Restaurar Western Blot Stripping Buffer, Pierce, Cat. N º 21059) y se incuba con anti-HSP10 primaria de anticuerpos (policlonales de conejo, StressGen, SPA-110, 1:2000), siguiendo los procedimientos Se ha descrito anteriormente (secundaria de anticuerpos: anti-conejo, Pierce, 1:20000 Cat. N º 31.462).

Resultados
HSP60 y HSP10 positividad en el primitivo frente a los tumores metastásicos de las diferentes categorías

HSP60 estuvo presente en 40 de un total de 48 (83,3%) Ti G1 (fig. 1 bis, c] y en 32 de 34 (94,1%) Ti G3 LBC (fig. 1b, d], mientras que HSP10 estuvo presente en todos los especímenes examinados De Ti de ambos G1 (Fig. 1e, g] y G3 (fig. 1f, h] LBC. En esas muestras, ambas moléculas presentes en el citoplasma de las células neoplásicas, y también fueron raramente presente en algunos elementos dispersos inflamatorias en el estroma. En particular, los análisis estadísticos, no hemos encontrado ninguna correlación entre el grado de inflamación y la immunopositivity para HSP60 (p> 0,05) y HSP10 (p> 0,1).

Además, el porcentaje de células positivas HSP60 fue mayor en el grupo G3 (media: 70%) en comparación con el G1 (media: 35%) (fig. 2 bis], mientras que un número similar de HSP10 elementos positivos estuvieron presentes en ambos grupos (Media: respectivamente el 74% y 75%) (figura 2b]. Epitelio normal por encima del resultado comúnmente infiltrarse en los tumores negativos o positivos con pocos elementos dispersos (fig. 1b], en forma similar a lo observado en las biopsias de la mucosa colónica normal (datos no presentados). Los análisis estadísticos mostraron que la diferencia entre el número de células positivas HSP60 en G1 y G3 LBC fue significativa (p <0,0005), mientras que la diferencia estadística no se ha encontrado positividad en HSP10 (p> 0,05).

Fig. 2c muestra que 28 de los 48 Ni de G1 LBC (58%) fueron positivos para HSP60 (fig. 3 bis], en comparación con 26 de 34 de G3 Ni CRC (76%) (fig. 3 B]. Fig. 2d muestra que todos Ni de los dos G1 (fig. 3c] y G3 (fig. 3d] LBC fueron positivos para HSP10. Los análisis estadísticos mostraron que la diferencia entre el número de positivos HSP60 Ni en el G1 y G3 LBC fue significativa (p <0,01), mientras que la diferencia estadística no se ha encontrado positividad para HSP10 (p> 0,05). Ambos HSP60 y HSP10 positividad era a menudo co-localizado dentro vascular (fig. 3e] y nervioso (fig. 3 septies] invadido por estructuras de tejido neoplásico en ambos Ti y Ni.

Los resultados de los análisis de inmunotransferencia son comparables a los datos de inmunohistoquímica (fig. 4]. La cantidad de HSP60 fue mayor en G3 especímenes de Ti y Ni tanto, en comparación con G1. HSP10 estuvo presente en una cantidad similar en todos los especímenes examinados. Las muestras de tejido normal de colon fueron comúnmente bajo el umbral de detectabilidad para ambos HSP60 y HSP10.

HSP60 y HSP10 positividad versus metástasis en los ganglios hiperplásicas lymo

Hemos seleccionado 661 ganglios linfáticos de todos los tumores (media: 8,1; rango: 5-12; SD 2.2) y divididos en dos grupos: el primero compuesto de 372 MLN y en el segundo 289 HLN. En primer lugar, hemos examinado la presencia de una correlación estadística entre el número de HSPs expresión y los ganglios linfáticos involucrados por la enfermedad. Se encontró la presencia de una correlación significativa entre la presencia de metástasis y la positividad para ambos HSP60 (p <0,005) y HSP10 (p <0,001) en los ganglios linfáticos.

Posteriormente, un análisis semicuantitativo observaciones sobre la inmunohistoquímica en el compartimentos de los ganglios linfáticos HLN se realizó. El cuadro 1 resume estos resultados. En SF células de la HLN grupo, sólo el 5% fueron positivos para HSP60 y 13% para HSP10. Por el contrario, hemos observado un aumento en el número de HSP60 (28%) y HSP10 (35%) en las células positivas de SF MLN (fig. 5 bis]. También se encontró un gran aumento en el número de células positivas HSP10 en MS células (38%) del MLN en comparación con el HLN grupo (3%). No hubo diferencias significativas en el número de células HSP60 positiva entre ambos HLN MLN y grupos de la MS (fig. 5b], de manera similar a la del número de células positivas a los dos acompañantes de ambos en el PC y HLN MLN grupos (fig. 5c]. Los análisis estadísticos mostraron una diferencia significativa entre el número de células positivas HSP60 en SF de la HLN MLN y grupos (p <0,0003).

Análogamente, el número de células positivas HSP10 en ambos SF (p <0,001) y MS (p <0,0001), presentó una diferencia significativa. La positividad para ambos HSP60 (fig. 6a] y HSP10 (fig. 6b] en las células de todos los compartimentos de los ganglios linfáticos reactivos comúnmente se localiza en el citoplasma.

Discusión

Aunque HSPs se definió por primera vez como las proteínas inducidas por el estrés ambiental y fisiopatológicos, también están implicados en las interacciones proteína-proteína, como plegables, translocación, y la prevención de la agregación de proteínas es inadecuado. Recientemente, otras funciones relativas a sus funciones esenciales en el desarrollo y progresión del cáncer se han sugerido (30).

En un estudio realizado en una serie de carcinomas de células escamosas de esófago, la sobreexpresión de HSP70 se correlaciona con metástasis a los ganglios linfáticos, los vasos linfáticos y la invasión, y sugiere que los autores HSP70 expresión puede ser utilizada para evaluar los resultados clínicos después de la cirugía [12]. Una reducción de la expresión de HSP70 y HSP40 también se ha asociado a una menor diferenciación histopatológica en una serie de carcinomas gástricos [31]. Además, Hwang et al. [13] han demostrado que la expresión de HSP70 y HSP110 se aumentó en gran cáncer colorrectal metastásico líneas celulares, pero no en la debilidad de las células metastásicas, lo que sugiere que la expresión de estas HSPs está altamente correlacionado con la clínica etapas avanzadas de los ganglios linfáticos positivos y la participación. En análisis multivariado sobre el tipo, grado, estadio del tumor, invasión de los linfáticos, los vasos sanguíneos y los nervios, así como los ganglios linfáticos, en 36 adenocarcinomas de páncreas, HSP70 inmunoexpresiones resultó ser un factor pronóstico independiente [32]. Por último, en un estudio inmunohistoquímico en 102 esofágica carcinoma de células escamosas especímenes Kawanishi et al. [33] sugiere que la expresión de HSP27 y HSP70 frecuencia se reduce y, por lo tanto, debe considerarse un factor pronóstico independiente en esta enfermedad.

En su estudio sobre invasivo ductal carcinomas primarios de la mama con metástasis en los ganglios linfáticos, Storm et al. [11] encontró que HSP27 podría conferir cytoprotection metastásico de las células, y que postula que la sobreexpresión de HSP27 se asocia con la reducción de la supervivencia libre de enfermedad en los carcinomas de mama. Contrastingly, Tetu et al. [34] no encontró ningún papel predictivo de HSP27 en los resultados positivos-en el nodo de carcinomas de mama.

Piselli et al. [35] Recientemente cytofluorimetric realizó un análisis sobre las células de adenocarcinoma pancreático humano, tanto cultivadas in vitro y ex vivo recogidos de tumores primarios de pulmón o metástasis de tumores de los ratones SCID-arraigado, que fueron los primeros en demostrar un HSP60 superficie expresión en las células metastásicas, pero Esta expresión no se correlaciona con metastasization. En un análisis multivariado, sobre un conjunto de los cánceres de mama metastásico, Schneider et al. [36] demostraron que ni HSP27 ni HSP60 expresión fue capaz de excluir la invasión de los ganglios axilares completamente. Por último, Ito et al. [37] estudiaron la expresión de HSP27, -60, -70 y -90 en 24 carcinomas de células escamosas de la lengua mediante inmunohistoquímica, que la búsqueda de HSP inmunoexpresiones podría cambiar durante la tumorigénesis, pero no hay correlación entre la tinción de HSP y la supervivencia período, la clínica Etapa, la metástasis ganglionar, el grado histológico o p53 inmunoticción.

En la medida de lo que somos conscientes, en el presente trabajo es el primer estudio de la expresión de la presentación de informes HSP60 y HSP10 en una serie de LBC con metástasis ganglionares, y la immunolocalisation de estas moléculas en los diferentes compartimentos de los ganglios linfáticos reactivos.

La presencia y la expresión de HSP60 y HSP10 en algunos modelos cancerígenos, en particular, las dos pre-tumoral (displasia), y lesiones neoplásicas del intestino grueso, así como exocervix uterino y próstata se ha investigado anteriormente [17 - 20]. Estos experimentos mostraron que el nivel de estos dos mitocondrial chaperonins estrictamente relacionados con el aumento de las normales a través de displasia hacia los tejidos neoplásicos. Estas proteínas se debió difusa localizada en la citoplasmas de las células displásicas y neoplásicas. Por otra parte, unos elementos dispersos inflamatoria ocasionalmente fueron positivos en el nivel del estroma. Teniendo en cuenta esta sobreexpresión, es como hipótesis que estas moléculas podrían tener diferentes funciones durante el desarrollo del cáncer, además de la regeneración mitocondrial durante la proliferación de las células normales. Sin embargo, la naturaleza exacta de esta función aún no es comprendido.

En el presente trabajo, la expresión de HSP60 en Ti y Ni resultó ser dependiente de la grado tumoral, mientras que la expresión de HSP10 no. El número de células tumorales positivas HSP60 en Ti de G3 LBC fue mayor que en G1, y el número de positivos HSP60 Ni en G3 LBC fue mayor que en el G1. Inmunohistoquímica resultados fueron confirmados por análisis de inmunotransferencia. Por lo tanto, postular un pronóstico significativo de estos datos. HSP10 fue muy positivo en todos los especímenes examinados, y que estos resultados pueden tener una utilidad diagnóstica. Curiosamente, un mayor positividad para HSP60, pero no para HSP10, se correlacionó con la presencia de metástasis en los ganglios linfáticos y estos datos pueden tener un valor histopatológico.

Aunque normal epitelios periódicamente regenerar los elementos celulares por mitosis de las células basales, el presente trabajo muestra que HSP60 y HSP10, en el epitelio normal, se encuentran bajo el umbral de detección de anticuerpos para el análisis inmunohistoquímico, en tanto que elementos neoplásicos citoplásmica muestran una fuerte expresión de estas proteínas. Muchos documentos han demostrado ya la implicación de la HSP60/HSP10 complejo en la prevención de la activación de la maquinaria apoptótica. Samali et al [38] fueron los primeros en demostrar que la pro-caspasa-3 está presente en la fracción mitocondrial de las células Jurkat T en un complejo con la chaperona proteínas HSP60 y HSP10 y que la liberación de HSP mitocondrial puede también acelerar la activación de la caspasa en El citoplasma de las células intactas. Estos datos son de acuerdo con las conclusiones de Xanthoudakis et al. [39], que mostró que la ATP-dependientes' foldase 'de la actividad HSP60 puede inducir a favor de la caspasa-3 maduración en células Jurkat estimuladas a someterse a la apoptosis Fas-por una vía independiente y que esto representa un importante regulador en el caso de la muerte de las células apoptóticas. Lin et al. [40] sugiere que la combinación de sobreexpresión de HSP60 y HSP10 y HSP60 de HSP10 individualmente o puede proteger contra la apoptosis de los miocitos en un modelo in vitro de la isquemia / reperfusión lesión. Más recientemente han demostrado que la sobreexpresión de HSP10 pueden inactivar Raf, ERK, y p90Ribosomal quinasa (p90RSK), lo que sugiere que sólo HSP10 participa en los complejos mecanismos que protegen contra los miocitos simulada reoxygenation inducida por isquemia y la muerte.

Se podría postular que tanto HSP60 y HSP10 están reguladas en el cáncer de extramitochondrial funciones, es decir, en el bloque de los mecanismos apoptóticos que usualmente se lleva a cabo durante el desarrollo y progresión del cáncer. Aunque HSP60 y HSP10 debe ser funcionalmente correlacionados, HSP10 está presente en un mayor número de ejemplares y con una mayor expresión de HSP60. Este resultado puede indicar una función diferente de HSP10 en el interior del citoplasma de las células tumorales. En un estudio reciente, en donde la expresión de HSP10 y HSP60 se investigó en una serie de hueso humano normal marrows, datos similares se encontraron [29]. Curiosamente, una preferencia selectiva de HSP10 para megakaryocytic precursores mieloides y se descubrió [29]. Por lo tanto, otras funciones de HSP10 aparte de la co-chaperonin durante una proliferación de las células de médula ósea y la diferenciación de las células normales se podría suponerse. Esto es respaldado por otros estudios sobre esta co-chaperonin [41, 42].

En el presente estudio, la presencia y localización de HSP60 y HSP10 en una serie de ganglios linfáticos humanos fueron evaluados. Los ganglios linfáticos funcionamiento es crucial para la supervivencia de un individuo. Normal de los ganglios linfáticos son estructuras muy pequeñas, no siempre clínicamente detectables en el cuerpo humano. Ellos reaccionan a los antígenos por uptaking y procesamiento de ellos, eventualmente destruirlos. Reaccionando agrandar los ganglios linfáticos, debido a la estimulación inmunológica que impulsa su hiperplasia. Examinar una sección histológico de hiperplasia de los ganglios linfáticos, los diferentes compartimentos se pueden distinguir: 1) los folículos, donde los precursores de las células plasmáticas y células B de memoria se forman; 2) paracortex, en el que tiene lugar la respuesta celular, la generación de antígenos específicos de células T; 3) senos medular, en donde la linfa aferente a cargo de los vasos linfáticos eferentes a que se elimina por los macrófagos [43 - 45]. Comúnmente, la hiperplasia involucra a todos las estructuras de los ganglios linfáticos, como ya se ha demostrado, en un estudio sobre una amplia serie de HLN MLN y de axila, el patrón más común es la hiperplasia de tipo mixto (66,5% de 996 HLN y el 68,6% de 4711 MLN) . En particular, tanto la hiperplasia de folículos principalmente involucrados y paracortex zona (22,2% del MLN y el 19,2% de HLN), aunque a menudo también se encuentran senos ampliada [46]. Un paso fundamental en el examen de la ampliación de los ganglios linfáticos es la distinción entre una hiperplasia reactiva y una neoplasia. Esta última puede ser de primaria (linfoma) o secundarios (metástasis) tipo. En una investigación sobre una serie de ganglios linfáticos 1159 de cáncer de mama, micrometástasis (que implican menos que el 25% de la linfa nodal volumen) se han mostrado a menudo a estar presente también en nódulos muy pequeños (menos de 2 mm de diámetro) [47] . Desafortunadamente, la detección de metástasis en un ganglio linfático es difícil si son pequeños en dimensión. Varios estudios han mostrado que un número de ganglios linfáticos negativos histológicamente pueden presentar, en un análisis retrospectivo, una micrometástasis immunohistochemically o revelado sólo con técnicas de inmunofluorescencia, la presencia de micrometástasis en el ganglio linfático tiene grandes implicaciones pronósticas y terapéuticas [48 - 53].

En este estudio, el número de células SF positiva en la HSP60 y HSP10 aumentado significativamente en MLN, en comparación con HLN. Postulamos que este aumento puede estar relacionado con la formación de metástasis. Como consecuencia de ello, aunque la tinción de citoqueratina es una manera mucho más fácil de detectar micrometástasis, el incremento estadísticamente significativo en el grupo de MLN el número de HSP60 y HSP10 elementos positivos en folículos secundarios también pueden ser considerados de diagnóstico para predecir la presencia de metástasis en los ganglios linfáticos. Por lo tanto, un ganglio linfático con centro germinal presentando una fuerte tinción para HSP60 y / o de cualquier aparente HSP10 sin metástasis deben ser examinados en detalle, ya que esta observación puede reflejar una mayor probabilidad de encontrar una micrometástasis.

Desde el MLN de MS mostró una cantidad significativamente más alta de HSP10, HSP60, pero no, las células positivas, en comparación con el de MS HLN, podríamos suponer que HSP10 en este sitio está en la estimulación desconocido inducir su sobreexpresión, de las funciones orgánicas, es decir, la proliferación de las células . El papel de HSP60 durante la proliferación y diferenciación de células eucarióticas ya se ha demostrado [54 - 56]. Además, HSP60 y HSP10, trabajando juntos, podrían proteger a la función mitocondrial y evitar la muerte de las células apoptóticas [37, 39] a pesar de que algunos estudios han demostrado que estas moléculas no siempre actúan como una sola unidad funcional in vivo [41, 57].

Conclusión

Muchos documentos se han centrado en el papel de algunas HSPs para predecir la progresión del cáncer [11 - 13, 58]. Hemos encontrado especialmente interesante el papel de Tormenta [11], que primero mostró la expresión de HSP27 en los ganglios linfáticos metastásicos cytoprotection para conferir a las células metastásicas de carcinoma de mama y su asociación con la disminución de la supervivencia libre de enfermedad. Además, un selectivo de la expresión de la HSP70 en centros germinales de HLN se ha demostrado, aunque el significado de esta sobreexpresión no se entiende [59].

Nuestras investigaciones mostraron una sobreexpresión de HSP60 y HSP10 en LBC con metástasis ganglionares. Ambas moléculas podrían ser útiles para el diagnóstico histopatológico de este tumor, así como para evaluar mejor el pronóstico. También podríamos suponer que ambas proteínas están involucradas en la progresión de LBC, es decir, que ejerza una antiapoptótico efecto. Estamos hypothesise que el incremento en la expresión de HSP60 y HSP10 en células de los ganglios linfáticos reactivos se debe a su papel en la proliferación de las células normales. Recientemente se ha demostrado que la HSP60 activa macrófagos y células T, y esto podría ser también una posible explicación de su sobreexpresión en los ganglios linfáticos con cáncer metastásico upregulation [60]. Sobre la base de estas consideraciones, podría ser postulado que factores paracrinos, como las citocinas, puede inducir a una regulación de estas moléculas, pero el papel exacto de la sobreexpresión sigue pendiente de confirmación.

La sección de serie podría ser usada para un estudio más a fondo si alguno de los HLN población que presente HSP60 y HSP10 manchas en la gama de MLN contener metástasis ocultas, sino que también podría ser interesante comparar HLN de LBC especímenes no neoplásica con el establecimiento, es decir, de las resecciones Activa de la enfermedad inflamatoria intestinal, para confirmar si los primeros pueden ser utilizados como controles adecuados. Finalmente, el selectivo sobreexpresión de HSP10 en MS del MLN podría apoyar la hipótesis de que esta molécula, a raíz de estímulos biológicos desconocidos, actúa independientemente de HSP60.

En conclusión, nuestro estudio podría añadir nuevos datos a la clasificación clásica de G1 o el G3, ya que ambos HSP60 y HSP10 positividad puede ayudar a detectar tumores más agresivos. Por otra parte, la comparación de los niveles de expresión de estos chaperones con otros predictores de la supervivencia, como la clasificación, el número de metástasis de los ganglios linfáticos y el grado de tumor infiltrante de linfocitos puede ser útil en el cáncer de colon.

Abreviaturas

HSP: proteínas de choque térmico

LBC: intestino grueso carcinomas

SF: folículos secundarios

PC: Paracortex

MS: medular de senos

MLN: Los nodos linfáticos con metástasis

HLN: Hiperplasia reactiva

G1: tumores bien diferenciados

G3: mal diferenciado tumores

Ti: Las muestras de tumor infiltrante el muro intestinal

Ni: especímenes de Nódulo Linfático con Metástasis

Conflicto de intereses

Los autores declaran que no tienen intereses en conflicto.

Contribuciones de los autores

FC diseñó el estudio, se examinaron los resultados de inmunohistoquímica, realizó un análisis semicuantitativo y redactó el manuscrito;

SD de los especímenes recogidos, llevan a cabo la inmunohistoquímica y llevó a cabo el análisis Western Blot;

FR de los especímenes recogidos, examinó los resultados de inmunohistoquímica y realizó un análisis semicuantitativo;

FB participado en el diseño del estudio y en el proyecto del manuscrito, realizó el análisis estadístico y examinó los resultados de Western Blot;

LM participó en la recolección de especímenes, se examinó la immunohistochemcal resultados y realizó un análisis semicuantitativo;

FF y participó en el examen de Western Blot resultados y en el proyecto del manuscrito;

GZ coordinado el diseño y la ejecución del estudio.

Todos los autores rojo y aprobado el manuscrito final.

Historia previa a la publicación

La historia previa a la publicación de este documento puede accederse en:

Agradecimientos

Este estudio fue financiado por el MIUR ex-60% de los fondos Profesor G. Zummo, el Profesor F. Farina y el doctor F. Cappello.