Immunity & ageing : I & A, 2005; 2: 13-13 (más artículos en esta revista)

Antígeno leucocitario humano de clase I, clase II, y el factor de necrosis tumoral-alfa polimorfismos en un anciano sano población mestiza mexicana

BioMed Central
Elena Soto-Vega (elenasoto_74@yahoo.com) [1], Yvonne Richaud-Patin (yrichaud@yahoo.com.mx) [1], Luis Llorente (lllyrp@quetzal.innsz.mx) [1]
[1] Departamento de Inmunología y Reumatología, Instituto Nacional de Ciencias Médicas y Nutrición Salvador Zubirán. Mexico City, Mexico

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Resumen
Antecedentes

Hay fuertes indicios de que una persona de antecedentes genéticos es un importante factor de predisposición de la longevidad. En el presente estudio se analizaron la frecuencia de HLA clase I, clase II, así como el TNF-α polimorfismo -308 que puede estar relacionado con una mayor vida útil en ancianos sanos mestiza mexicana.

Resultados

HLA tipificación se realizó por reacción en cadena de polimerasa específica secuencia de oligonucleótidos (PCR SSO) reversa dot blot. El TNF-α polimorfismo -308 se evaluó por PCR longitud de los fragmentos de restricción polimórficos. Un importante aumento de la frecuencia de HLA-DRB1 * 11 se encontró en las mujeres de edad que este alelo no estuvo presente en los varones de edad avanzada. El alelo TNF2 También se aumentó en el grupo de adultos mayores en comparación con los controles jóvenes. Las frecuencias de los alelos probado restantes no fueron estadísticamente diferentes entre los grupos.

Conclusión

Estos datos sugieren una tendencia de la etnia independiente HLA-DRB1 * 11 en el anciano las mujeres para aumentar la vida útil y un posible papel del alelo TNF2 con éxito la remodelación de senescentes sistema inmunológico.

Antecedentes

El envejecimiento se asocia con una compleja remodelación del sistema inmunológico a menudo en la dirección de aparentemente inmune disminuido. Sin embargo, se ha propuesto que la longevidad está relacionada con el óptimo funcionamiento del sistema inmunológico debido a que algunos determinantes genéticos para el éxito de envejecimiento podría residir en los polimorfismos de los genes que regulan la respuesta inmune por ejemplo, complejo principal de histocompatibilidad (MHC) [1, 2]. Los estudios de ciclo de vida en los seres humanos han dado lugar a diferentes, e incluso controvertidos, las asociaciones de HLA clase I, clase II y clase III genes con la vejez. Por ello, la longevidad se ha demostrado estar relacionada con la selección de los alelos HLA o haplotipos que se la asocia con más frecuencia la A1 B8 Cw7 DR3 en los caucásicos [3, 4], el aumento o disminución de la frecuencia de HLA-B40 [5 - 7], Aumentar la frecuencia de HLA-DR11 en las mujeres mayores en caucásicos, así como en las poblaciones japonés [8, 9] entre otras alelos. Inmunogenética estudios en ancianos, sanos población mestiza mexicana no se han realizado aún.

Mestizo mexicano individuos tienen una proporción de 56% de indios americanos nativos de los genes, los genes caucásicos 40%, y un 4% de los genes de África [10]. Población mestiza representa una compleja mezcla de europeos y americanos nativos habitantes, y constituyen el núcleo de la población mexicana. Este complejo proceso se inició genética en el siglo 16 y se ha ampliado en el curso del tiempo, y sigue siendo, un proceso dinámico, por ejemplo, la población de África habitadas las Américas casi 200 años más tarde. Por otra parte, personas de edad en la población mexicana pasó de tener una esperanza de vida de 63 años en la década de 1970 hasta hoy en día a 70 años.

Ancianos sanos muestran un fenotipo pro-inflamatorias con un aumento de los niveles de citocinas como el TNF-α [11]. El TNF-α gen está situado dentro de la región HLA de clase III. Esta citocina está involucrado en la remodelación tisular, la permeabilidad de la barrera epitelial de células, la activación de macrófagos, la contratación de infiltrado inflamatorio, y la regulación de las moléculas de adhesión, entre otras funciones. TNF-α también determina la fuerza, la eficacia y la duración de los entes locales y las respuestas inflamatoria sistémica [12].

TNF-α promotor contiene numerosos sitios polimórficos, que son posibles objetivos de factores de transcripción. El polimorfismo -308 en la posición se define por la de la sustitución de una G por una A, en donde la presencia de G define el alelo TNF1 comunes y define el TNF2 Una variante, que es menos frecuente [13]. Algunos estudios han demostrado que los individuos que llevan la TNF2 son mayores polimorfismo TNF-α productores que aquellos que llevan la variante TNF1 [14].

El objetivo de este estudio fue evaluar la clase I, clase II HLA genotipos, así como el TNF-α polimorfismo -308 con éxito el envejecimiento en mestizos mexicanos.

Resultados y Discusión

De los 71 ancianos, 38 (53,5%) eran mujeres y 33 (46,5%) hombres. Resultados de la observada y la esperada antígeno genotipo y frecuencias para HLA-B, y-DRB1-DQB1 loci estaban en consonancia con lo predicho por el equilibrio de Hardy-Weinberg. Cabe mencionar que las frecuencias determinadas en nuestra población son similares a las reportadas en estudios anteriores realizados en la población mestiza mexicana [10].

Las frecuencias de genes en el locus HLA-DRB1 no fueron estadísticamente significativas entre los diferentes grupos. El alelo más frecuente en ambos, jóvenes y ancianos, fue el HLA-DRB1 * 04. La alta resolución de mecanografía reveló que los alelos más frecuentes en el grupo de edad fueron HLA-DRB1 * 0802, DRB1 * 0701, DRB1 * 0404 y DRB1 * 0407, mientras que HLA-DRB1 * 0802, DRB1 * 0701, DRB1 * 1101 y DRB1 * 0404 fueron las más frecuentes en el grupo de jóvenes, siendo estos alelos no estadísticamente significativa.

Cuando las diferencias entre hombres y mujeres con edades se analizaron, una disminución de la frecuencia de HLA-DRB1 * 11 en los hombres se encontró que en las mujeres, para nadie en el primer grupo fue HLA-DRB1 * 11 (p = 0,002, OR = 0,18 ; IC 95% = 0.06-0.53, p = 0,024 por la corrección de Bonferroni). Por otra parte, cuando los hombres eran de edad avanzada en comparación con los hombres jóvenes para HLA-DRB1 * 11, la disminución de la frecuencia se encontró, aunque no estadísticamente significativo cuando la corrección de Bonferroni se aplicó. La alta resolución de mecanografía mostró una disminución de la frecuencia de HLA-DRB1 * 1101 alelo en mujeres de edad avanzada en comparación con los otros HLA-DRB1 * 11 alelos de las mujeres jóvenes y, de nuevo, esta diferencia no fue significativa por la corrección de Bonferroni.

Nuestros datos deben equilibrarse con el pequeño número de sujetos estudiados. Sin embargo, encontramos que, curiosamente, no era viejo HLA-DRB1 * 11, lo que puede sugerir que la supervivencia de género dependen de los productos básicos [15, 16]. Este hallazgo de la mujer mestiza mexicana está de acuerdo con los informes anteriores, en diferentes poblaciones, lo que podría indicar que la contribución de este alelo a un aumento en el período de vida es independiente de su origen étnico [8].

En cuanto a la HLA-B, HLA-DQB1 y alelos, no se observaron diferencias entre los ancianos y los jóvenes ni los controles cuando se compara por género. La alta resolución de tipificación HLA-DQB1 mostró que en el grupo de las personas de edad más frecuente fueron los subtipos HLA-DQB1 * 0302, DQB1 * 0402 y DQB1 * 0501, mientras que en los jóvenes fueron el grupo HLA-DQB1 * 0302, DQB1 * 0301, DQB1 * 0402 y DQB1 * 0201. Por último, la tipificación genérica de la HLA-B locus mostró que los alelos más frecuentes en ambos grupos fueron HLA-B * 35 y HLA-B * 15. Una tendencia en la disminución de la HLA-B * 14 en la frecuencia en el grupo de adultos mayores se observó también en comparación con la del grupo de control, aunque esto no fue estadísticamente significativa.

El análisis de los TNF-α polimorfismo -308 promotor mostró una disminución de la frecuencia de alelo TNF1 acompañado de un aumento de uno en el alelo TNF2 en ancianos. El genotipo heterocigoto TNF1 / 2 es más frecuente en el grupo de personas mayores (9,02%) que en el grupo control (1,5%) (Cuadro 1]. Los niveles séricos de TNF-α mostró un ligero aumento en el grupo de edad aunque esta diferencia no fue estadísticamente significativa (datos no presentados). Curiosamente, se encontró que el 58% de los individuos TNF2 se HLA-DR3 y HLA-DR4. El-308A polimorfismo TNF-α se ha demostrado que varían entre las personas. Estas variantes se han asociado con ciertos alelos HLA-DR, por ejemplo, el HLA-DR2 temas son considerados bajos TNF - Mientras que los productores teniendo HLA-DR3 y HLA-DR4 alelos producir altos niveles de esta citocina [13, 14, 17 - 19]

El genotipo TNF2 se ha relacionado con una mayor tasa de transcripción de citoquinas [20]. Además, se ha propuesto que las personas que son heterocigotos para este polimorfismo poseen una óptima respuesta inflamatoria que los protege contra la demencia relacionada con la edad [21]. A pesar de que el proceso inflamatorio se ha relacionado con enfermedades crónicas, la incapacidad y la muerte, es interesante que en el anciano este pro-inflamatorias fenotipo puede estar involucrado en la remodelación de la red de citoquinas, que contribuye al proceso de envejecimiento con éxito [22]. No obstante, la falta de asociación de este tipo también ha sido reportado [23, 24].

Conclusión

Longevidad estudios debe incluir idealmente sano centenarios, ya que representan el extremo de la vejez humana. La mayoría de los estudios realizados sobre centenarios vienen de Europa o países asiáticos como Japón. Es precisamente en estas regiones que el mayor número de centenarios se pueden encontrar. Esto está estrechamente relacionado por un lado, con las características sociales, culturales, y las condiciones económicas de los países desarrollados y, por otra, con los factores biológicos incluyendo la larga historia de sus grupos étnicos, lo que ha permitido una selección natural de los genes que favorecen la longevidad [ 25]. Por el contrario, el grupo étnico conocido como mexicana es mestiza, en términos evolutivos, un reciente apenas 500 años. Este lapso es, sin duda, no lo suficiente como para establecer un alelo de selección o, incluso, modificar completamente la estructura de haplotipos anterior por el proceso de mezcla genética que podría cuenta para cambiar HLA determinados grupos de mexicanos nativos. Por otra parte, las enfermedades infecciosas importadas por los conquistadores de hecho, han influido en la selección del repertorio HLA en nuestra región. La cultural y las condiciones socioeconómicas de nuestra zona geográfica (Mexico y Centro América) han contribuido a un notable aumento de la esperanza de vida, especialmente durante los últimos 50 años, aunque esto todavía está muy alejada de la de los países desarrollados. Cabe mencionar que la edad media de nuestro grupo de estudio es por lo menos 10 años mayor que la actual esperanza de vida de Mexico y, por lo tanto, representan la más antigua de la población que han gozado de éxito de la cuestión del envejecimiento en nuestro país.

Sin duda, una gran diversidad de los genes y los factores que influyen en el envejecimiento exitoso. Polimorfismos de nucleótido único ubicado en los promotores de genes de citoquinas se ha demostrado que afecta a la unión de factores de transcripción y, por tanto, su expresión genética. Variantes genéticas que determinan un aumento en la producción de citocinas antiinflamatorias o una disminución de una de las citoquinas pro-inflamatorias se han asociado con el envejecimiento con éxito, lo que sugiere un papel en el control del estado inflamatorio en el logro de una mayor vida útil [12, 26, 27].

Además, el estudio de los genes polimórficos en el cromosoma X no tienen que ser para procrastinated hay algunos - aunque relativamente antigua - pruebas que son fundamentales en la regulación genética de la respuesta inmune y, por tanto, podría ser de suma importancia para la vida acondicionado Span esperanza [28 - 30].

Métodos
Temas

Un total de 71 ancianos sanos fueron estudiados, la edad osciló entre 80 y 96 años (media 86,2 años). El control de las muestras se obtuvieron a partir de 99 jóvenes (de 21 - 54 años, con una media 35,2 años) individuos sanos no relacionados con los ancianos. Todos los sujetos fueron mexicanos mestizos, que se define como una persona que nació en Mexico y es descendiente de ascendencia mixta racial de los nativos americanos de esa región con las personas procedentes de Europa (principalmente España), o en África, todos ellos viven en la Ciudad de Mexico. Una historia social y médica y el examen físico se realizó. Las pruebas de laboratorio incluyen hemático completo, velocidad de sedimentación (Westergreen), los niveles de inmunoglobulina (IgG, IgA, IgM), los electrolitos séricos, glucosa, creatinina, urea, la fosfatasa alcalina, aspartato transaminasas, la bilirrubina total, y el colesterol total. Todos los sujetos fueron informados de los objetivos y los métodos del estudio. Se ha trabajado de acuerdo a la ley actual.

Aislamiento de ADN

ADN genómico fue extraído a partir de 5 ml de sangre periférica en su conjunto emplean a la asistente de un kit de purificación de ADN genómico (Promega, Madison, WI), de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Aislado ADN se cuantificó por espectrofotometría y ajustado a una concentración de 100 ng / μ l, y se almacena a -70 ° C hasta su uso.

HLA Typing

Generic HLA-DRB1, DQB1, HLA-B, y escribiendo se realizó por reacción en cadena de polimerasa oligonucleótidos específicos de secuencia (PCR-SSO) reversa dot blot utilizando el sistema de Dynal RELI SSO (Hoffman-La Roche Ltd y Roche Molecular Systems, Inc, Alameda, CA), como se describe anteriormente [31]. Alta resolución a escribir de HLA-DRB1 y DQB1 loci fue hecho por secuencia basada en el método de mecanografía (SBT). Los primers "secuencias y condiciones de PCR para la amplificación de los exones polimórficos fueron obtenidos de los protocolos de los 13 º Taller Internacional de Histocompatibilidad (Seattle, 2002).

TNF-α polimorfismo -308

Genotipificación para el TNF-α polimorfismo -308 se realizó con un fragmento amplificado mediante PCR con interés el primer 5'-AGG TTG GTT CAA TAG AGG CCG AT-3 'y revertir el primer 5'-TCC TCC CGA CTG CTC TTC CG-3 'Para crear un sitio de restricción para la endonucleasa NcoI (Fermentas, Hanover, MD), de acuerdo con informes anteriores [32]. Productos de la digestión se analizaron por foto a escribir en geles de agarosa al 2% y teñidos con bromuro de etidio. Sólo 55 jóvenes sanos temas se analizaron para este polimorfismo.

TNF-α niveles séricos

Suero de cada uno de los temas se obtuvo de 5 mL de sangre y se almacena a -70 ° C hasta el momento de la prueba. Un kit ELISA se utilizó para la medición de los niveles de TNF-α según las instrucciones del fabricante (R & D Systems, Minneapolis, MN).

Estadísticas

Frecuencias de los alelos de genes fueron evaluados por contar y 2 × 2 tablas de contingencia. Diferencias estadísticas entre frecuencias de los alelos de los ancianos y los controles fueron realizados el empleo de chi cuadrado y la prueba de la corrección de Yate. P valores obtenidos fueron sometidos a la corrección de Bonferroni. Se calculó el odds ratio para la salud de los ancianos "portadores de alelos específicos. Los datos se realizarán las pruebas de la bondad del ajuste entre la observada y la esperada genotipo valores y sus condiciones de equilibrio de Hardy-Weinberg.

Lista de las abreviaturas

HLA antígeno leucocitario humano

Factor de necrosis tumoral TNF

PCR reacción en cadena de polimerasa

PCR SSO reacción de polimerasa en cadena de secuencias específicas de oligonucleótidos

Agradecimientos

E. Soto-Vega recibió el apoyo de una beca del Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACYT), Mexico. Este trabajo fue parte de la tesis de doctorado de E. Soto-Vega, la Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM).

Autores gracias Dr G. Vargas-Alarcón de la amabilidad de proporcionar los datos genotípicos de jóvenes sanos controles y el Departamento de Geriatría de nuestro Instituto de ancianos de la 'evaluación clínica.