Journal of Nanobiotechnology, 2006; 4: 4-4 (más artículos en esta revista)

La permeabilidad de SPION artificial durante un período de tres capas de membrana externa se ve reforzada por el campo magnetico

BioMed Central
Fadee G Mondalek (fadee@ou.edu) [1], Zhang Yuan Yuan (Yuanyuan-Zhang@ouhsc.edu) [2], Bradley Kropp (brad-kropp@ouhsc.edu) [2], Richard D Kopke (rickkopke @ Swbell.net) [3], Xianxi Ge (xge@nmcsd.med.navy.mil) [4], Ronald L Jackson (rjackson@nmcsd.med.navy.mil) [4], Kenneth J Dormer (Kenneth - Dormer@ouhsc.edu) [5]
[1] Departamento de Química, Biológica y Ingeniería de los Materiales, de la Universidad de Oklahoma, Norman, Oklahoma, EE.UU.
[2] Departamento de Urología de la Universidad de Oklahoma Centro de Ciencias de la Salud, Oklahoma City, OK, EE.UU.
[3] Hough Ear Institute, Oklahoma City, OK, EE.UU.
[4] Naval Medical Center, San Diego, CA, EE.UU.
[5] Departamento de Fisiología de la Universidad de Oklahoma Centro de Ciencias de la Salud, Oklahoma City, OK, EE.UU.

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Resumen
Antecedentes

Pérdida auditiva neurosensorial, un subconjunto de todos los clínicos pérdida de la audición, se puede corregir mediante el uso de la terapia genética. Estamos probando un sistema de prestación de asistencia terapéutica por medio de un 3 capas de células redondas ventana de la membrana modelo (modelo RWM), que pueden proporcionar una entrada de las drogas o genes para el oído interno. Hemos diseñado un modelo in vitro RWM similar a la RWM (se refiere a todo el documento como RWM modelo) para determinar la viabilidad de utilizar superparamagnético óxido de hierro (Fe 3 O 4) nanopartículas (SPION) para la ejecución selectiva de la terapéutica en el interior Oreja.

La RWM modelo de 3 capas de células epiteliales modelo con células cultivadas a ambos lados de un pequeño intestinal submucosa (SIS) y la matriz de fibroblastos semilla en el medio. Dextran encapsulado nanopartículas agrupaciones 130 nm de diámetro fueron tirados a través de la RWM modelo utilizando imanes permanentes con la densidad de flujo 0,410 Tesla en el polo cara. El SIS membranas fueron cosechadas en el día 7 y, a continuación, fija en el 4% paraformaldehído. La microscopía electrónica de transmisión y de espectrofotometría de fluorescencia se utilizan para verificar transepithelial transporte de la SPION a través de la célula de la cultura modelo. Histológicos fueron examinados para SPION pruebas de toxicidad, así como para generar una línea de tiempo de la posición de la SPION en diferentes momentos. SPION también se añadieron a las células en cultivo in vitro para evaluar la toxicidad.

Resultados

Transepithelial mediciones de la resistencia eléctrica epitelial confirmado confluencia, como SPION atravesado una membrana que consta de tres compañeros de capas de células cultivadas, bajo la influencia de un campo magnético. Micrografías mostró SPION distribuidas a lo largo de la membrana modelo, de entre las capas de células, y, a veces, en la superficie de las células. TEM verificado que la SPION fueron tirados a través de la membrana en la cultura muy por debajo. Espectrofotometría de fluorescencia cuantificado el número de SPION que pasó por el SIS membrana. SPION no mostró toxicidad para las células en cultivo.

Conclusión

Una capa de células de tres modelo de la membrana de la ventana redonda humano se ha construido. SPION magnéticamente han sido transportados a través de este modelo, lo que permite la evaluación cuantitativa de los posibles orientadas drogas o genes a través de la entrega RWM. Putativo in vivo porteador superparamagnético nanopartículas pueden ser evaluados utilizando este modelo.

Antecedentes

Biocompatibles micro y nanopartículas magnéticas están siendo ampliamente estudiado por los investigadores de todo el mundo para su posible magnéticamente mejorar la ejecución selectiva de la terapéutica [1]. En estos sistemas, las terapias (por ejemplo, drogas o genes) se adjuntan a las partículas magnéticas y se inyecta cerca del sitio de destino. Un campo magnético se aplica luego al sitio externo con el fin de concentrar las partículas en el sitio de destino. En aplicaciones de la terapia genética, no magnéticos sistemas vectores virales han logrado resultados prometedores en las tasas de transfección y de expresión sin ningún tipo de complicaciones inmunogénicas [2]. En el caso de la entrega de drogas, las drogas terapéuticas se concentran en el lugar del organismo donde se las necesita, por lo tanto, reducir los efectos secundarios y reducir al mínimo las dosis requeridas [3 - 5].

Debido a sus propiedades magnéticas únicas que no se encuentran en otros materiales, las nanopartículas magnéticas han mostrado resultados prometedores en aplicaciones biomédicas y [1]. Por ejemplo: almacenamiento de datos de nanoestructuras (magnéticos nanocrystal arrays) [6], aplicaciones biomédicas, optoelectrónica, de imágenes de las sondas inteligentes [7], biomédica nanostructure fluidos, microesferas biodegradables [8], de drogas y de los sistemas de suministro de genes [9, 10], biomagnetic separaciones [11], nanocompuestos magnéticos [12], el fluido magnético sellos [13], hipertermia el tratamiento del cáncer [14] y magnética síntesis [15].

Actualmente, varios tipos de SPION están disponibles en el comercio. Varían en tamaño, propiedades magnéticas y composición química (a pesar de la óptima ferrita es magnetita, Fe 3 O 4). Dependiendo de su tamaño, SPION Mayo exhiben un estado superparamagnético. En este caso, las partículas de exposición no remanencia en la ausencia de un campo magnético externo. Cualquier fuerza magnética externa ejercida sobre la partícula es una traducción dirigido a lo largo de la fuerza aplicada y el vector del campo depende de las propiedades magnéticas de la partícula y el medio circundante, el tamaño y la forma de las partículas y el producto de la inducción magnética y la Campo gradiente.

Sordera neurosensorial debido a la lesión podría ser corregibles en los pacientes con deficiencias auditivas. La terapia génica puede ser la pérdida de células de cabello en el futuro, pero no para todos la sordera. La verdadera restauración de la audiencia no ha ocurrido aún. Entrega de la terapéutica para el oído interno es un mínimo de éxito el día de hoy. La terapia génica para los problemas de audición usando vectores virales probable que presente complicaciones inmunológicas y posibles mutaciones. Recientemente, los científicos tuvieron éxito en la restauración de audiencia a través de un mamífero adenoviral Math1 la transfección de genes [16]. La RWM humanos es de aproximadamente 70 μ m de espesor y está compuesta de 3 capas [17 - 21]: un epitelio externo que enfrenta el oído medio, un núcleo de tejido conectivo, y una interior epitelio límites que el oído interno. Nuestro objetivo es diseñar un sistema de prestación de servicios mínimamente invasiva para moléculas biológicas al oído interno a través de la RWM, una entrada al sitio oído interno coclear fluidos. En consecuencia, hemos diseñado un modelo de RWM in vitro para determinar la viabilidad de la prueba SPION potencial para la ejecución selectiva de la terapéutica para el oído interno.

Resultados
Modelo de diseño

Hemos desarrollado una capa de células 3 RWM modelo similar a la humana RWM, que consta de dos capas epiteliales cultivadas en ambos lados de una matriz de colágeno de apoyo, similar a la interior y exterior en el epitelio capas humanos. El apoyo de la matriz en el modelo es el pequeño intestinal submucosa (SIS) que tiene una alta densidad de las fibras colágenas y se sembró con fibroblastos humanos, de nuevo similar a la capa de tejido conectivo en el RWM. El SIS es una membrana porcina xenogénica cosechado membrana del intestino delgado en el que la túnica mucosa, serosa y túnica muscularis fueron físicamente eliminados de las superficies interior y exterior. El resultado es una membrana ricas en colágeno, aproximadamente 80-100 μ m de espesor y se componía principalmente de la capa submucosa de la pared intestinal [22]. El SIS membrana tiene dos partes [23]: a serosal hacia el exterior de la mucosa intestinal y una hacia el lumen intestinal. La mucosa lado es más permeable que el lado serosal por siete veces. Riñón canino Madin Darby (MDCK), células epiteliales y células humanos urotelial vesical y se utilizaron fibroblastos. La figura 1 es un diagrama esquemático del modelo y sistema de prueba que muestra el SIS cultivadas en una membrana de plástico insertar.

Magnética gradiente de transporte de SPION forzados en todo el modelo de RWM

El sistema de prueba de entrega en la Figura 1 consistía en un 24 cyliner tierras raras magnética gama de NdFeB que fue incluida en un régimen de 24 y placa de cultivo donde los insertos (Cook Biotech, West Lafayette-IN) en forma. Las líneas de flujo magnético creado por los imanes cambio de la dirección de la magnetización SPION vector de la fuerza y de la persona dipolo momentos de la SPION a alinear a lo largo de las líneas de flujo. La fuerza magnética a lo largo de la dirección del eje z fuerzas de la SPION para mover hacia abajo. Esta fuerza causó la SPION a pasar por el RWM modelo en la cultura muy por debajo. Este gradiente magnético-forzado de transporte (GFT) de SPION depende de la densidad de flujo magnético, el gradiente magnético, y la susceptibilidad de las nanopartículas. La RWM modelos fueron expuestos a la misma densidad de flujo magnético de 0,229 Tesla a una distancia de 30 mm del polo magnético de superficie como gradiente calculado a partir de la trama que hemos realizado. Según nuestros cálculos, 10 7 SPION cruzó la RWM modelo después de 60 minutos de exposición magnética.

Figura 2A muestra una sección histológica de la membrana SIS sembrados con dos capas de células MDCK en ambos lados y una capa de fibroblastos insertada en el medio. Figura 2B histológico muestra una sección de una rata RWM exhibiendo la capa normal de tres morfología celular.

Histología

Histológicos bajo microscopio de luz mostró los diferentes lugares de los agregados de SPION todo el RWM modelo en el tiempo. La Figura 3 muestra SPION agregados dispersos en el RWM modelo. Histológicos fueron utilizados para verificar que el SPION son no tóxicos. Aunque los agregados de SPION puede verse en el SIS y dentro de la membrana en algunos puntos, las muestras que se recogieron en la parte inferior de los pozos de cultura más fueron analizados mediante el TEM como se muestra en la Figura 4 y confirmó que el único SPION (invisible al microscopio de luz) Fueron capaces de pasar a través de la membrana.

Efecto de la SPION sobre el crecimiento y la proliferación celular

MDCK células epiteliales se cultivaron en el 2, 24 y placas: una placa de células MDCK sola figura, mientras que la otra placa había células MDCK cultivadas con nanopartículas magnéticas etiquetados Nanomag D-NH 2. Las células fueron contados los días 1, 2, 3, 5, 7, 9, 11, y 14. Similares experimentos se realizaron a 3T3 fibroblastos y células humanos urotelial vesical. La figura 5 se muestra la densidad de siembra en días diferentes de las células MDCK A., B. urotelial células, y C. fibroblastos.

Transepithelial resistencia eléctrica

Célula de confluencia es un importante crítico y caracterización de la RWM modelo. Tight cruces debe existir entre todas las células epiteliales, a fin de constituir un obstáculo o un sellado hermético magnética SPION a fin de que, una vez que se retiraron a través de la otra parte de la co-cultivadas SIS membrana, debe viajar a través de la co-cultivos celulares y no a través de brechas entre Las células debido a la insuficiencia de confluencia. La permeabilidad de la RWM modelo con diferentes capas de células que SPION se calculó como se muestra en la Figura 6. Figura 7 da a la resistencia de las células MDCK en un período de 7 días.

Discusión

Todas las etapas de los experimentos mostraron que la RWM sirve como un modelo in vitro humanos membrana de la ventana redonda, penetrable a SPION mediante el uso de fuerzas magnéticas externas. Hemos demostrado el uso de las nanopartículas magnéticas como posibles moléculas de los genes o de administración de fármacos por su capacidad de cruzar la RWM modelo. Este estudio sugiere que el grupo de tipo de agregados, de 10 de nanopartículas magnéticas nm, 130 nm de diámetro, pueden ser considerados como posibles alternativas a los vectores virales para la terapia génica. Los experimentos han mostrado también que son biocompatibles. Los estudios de toxicidad realizados confirmaron que no hubo efectos significativos sobre el crecimiento y la proliferación de células en cultivo. SPION cruzado membranas y tejidos más rápido que la difusión periódica por el efecto del campo magnético externo.

RWM Nuestro modelo de cultivo celular es similar a la real RWM como se muestra en la histología comparación de las dos imágenes. A pesar de que la capa media en el RWM modelo carece de los vasos sanguíneos y linfáticos que se encuentran en un verdadero RWM, las 3 capas de células son similares en su tipo y función. Los estudios de toxicidad de la SPION sobre las células cultivadas en platos mostraron que no hubo diferencias significativas en la densidad de siembra entre las células de crecimiento con y sin SPION, verificando que el SPION son biocompatibles. TEER confirmado que las células estaban en o cerca de la confluencia de células en el día 4 y desde todos los magnética forzado transporte los experimentos se realizaron en el día 5 de cultivo de células, se realizaron experimentos sobre células confluentes en la cultura.

Un monocapas de células MDCK formas apretados nudos que no permiten aún que pasar por el agua [24]. De hecho, la permeabilidad de la monocapa de células MDCK es tan bajo que se ha estudiado como una barrera modelo [25]. Esto confirma que magnéticamente potenciado el transporte de la SPION no ocurrió MDCK a través de los poros, sino más bien transepithelially a través de las células.

La eficiencia de este sistema de prestación de servicios magnética RWM utilizando el modelo descrito hasta ahora está decidido a ser el 0,02%. De los 200 μ l de SPION entregados, sólo 40 cruzaron la realidad nL RWM modelo bajo la influencia del campo magnético externo. Aunque esta parece ser una muy pequeña eficiencia, en especial en el contexto de la transfección de genes usando este sistema de prestación de servicios, el número absoluto de personas SPION tirados a través de las células es prometedor. Uso de la relación de SPION a la Alexa Fluor 647 conjugado con la SPION, y de la curva de calibración para que el tinte que se obtiene utilizando un fotón SLM 8100-spectrofluorometer contar con un doble monocromador de excitación luz en el camino, se calcula que alrededor de 10 7 SPION cruzó la RWM modelo después de 60 minutos de exposición magnética.

Debido a los límites de detección para el SPION, el momento en el que la primera SPION cruza el RWM modelo todavía no se ha determinado. El gradiente de transporte forzoso de la RWM modelo con una, dos o tres compañeros de capas de células cultivadas para magnética SPION etiquetados Nanomag D-NH 2 se puso a prueba en el día 5 de la célula de la cultura durante 2 horas a 20 minutos, utilizando un externos Campo magnético. Concentraciones relativas de SPION para cruzar el RWM modelo aumentado de manera exponencial con el tiempo, en consonancia con pura cinética de primer orden. Los datos experimentales fueron analizados por un no-lineal de mínimos cuadrados ajuste a la ecuación [26].

C = (1 - e - kt) Ecuación 1

En caso de que Cy C son las concentraciones relativas de la SPION en tiempo y t = ∞, respectivamente, y k es la tasa de primer orden constante. Los parámetros C y k se utilizaron para construir una curva de ajuste óptimo. El acuerdo entre los resultados teóricos y experimentales de los puntos apoya el hecho de que el transporte fue el primero - orden, donde p <0,001. La inicial de cada curva de pendiente (1, 2 o 3 capas) es igual a la permeabilidad factor (Pe). En otras palabras:

La Figura 6 muestra los diferentes factores de permeabilidad de la RWM modelo cultivadas con una capa, dos capas, y tres capas de células. El gradiente de transporte forzoso de la RWM modelo disminuye con el aumento de capas de células cultivadas.

El cero-capa de células modelo en la figura 6 actuó como control, y consistió en el SIS membrana en ausencia de nuevas celdas. El 1 y 2 capas de células que participan modelos de cultivo de células MDCK en un lado o en ambos lados de la SIS, respectivamente. 3 El modelo de la capa de células-células MDCK había a ambos lados de la membrana SIS y una capa de fibroblastos insertada entre las dos capas de células. Es evidente que la adición de una capa de células de la membrana SIS disminuyó significativamente la permeabilidad de los modelos a la SPION. Creemos que la permeabilidad a SPION no cambiaron mucho entre la primera y segunda capa de modelos, porque el mismo tipo de células se utilizaron para cada capa y estamos estudiando la permeabilidad bajo la influencia de una fuerza magnética, no fuerza gravitacional. Sin embargo, para desarrollar una comprensión más completa de la permeabilidad, que sería conveniente utilizar diferentes tipos de células con 2 capas de células en el futuro modelo de estudios. Para el 3 de células de la capa modelo, los fibroblastos son cultivados en la parte superior del SIS y que se les permita penetrar en la membrana durante 2 días antes se MDCK células fueron cultivadas en la parte superior de ellas. "Creemos que la migración de los fibroblastos SWISS 3T3 en el SIS membrana cambiado de algún modo la localización de los poros en el SIS, posiblemente conectando algunos de los poros, lo que resulta en el fuerte descenso de la permeabilidad a SPION como se muestra en la Figura 6.

El TEER fue medida por una capa de células MDCK de las células durante un periodo de 7 días. Desde el interior y exterior capas epiteliales son confluyentes y exposición muy apretado cruces en el RWM humanos, probamos confluencia de células para asegurarse de que el SPION no sería capaz de ir a través de brechas entre las células no confluente. No estábamos interesados en la confluencia de los fibroblastos porque no son confluyentes en el RWM.

Es necesario diferenciar entre la difusión de una mayor permeabilidad magnética y una mayor permeabilidad, como es el caso en este estudio. Dado que esta es la primera vez que la permeabilidad magnética inducida se ha analizado utilizando una membrana modelo, Es necesario realizar más estudios en el futuro para comparar la permeabilidad de la RWM con un modelo real RWM. Esto facilitaría el estudio de ambos magnético-y la difusión de una mayor permeabilidad de una conocida molécula terapéutica. Usando el espesor de los imanes (6,35 mm) y la remanance magnetización (1,4 T), es posible calcular la fuerza y el gradiente del campo magnético generado. Tenemos datos preliminares (Cartwright et al, datos no publicados) para calcular la fuerza magnética en el individuo SPION.

Cabe señalar aquí que, aunque los animales explantes de la RWM se han utilizado para establecer un modelo in vitro muy similar a la real RWM [18, 27, 28], la RWM de conejillos de indias y ratas son sólo 1 mm de diámetro, lo que hace SPION detección y cuantificación una tarea difícil. La ventaja de nuestro modelo de cultivo celular RWM más de explantes modelos animales para evaluar la magnético-mayor transporte de SPION es la facilidad de detección y cuantificación de los resultados.

Conclusión

Un modelo tripartito RWM similar a la ventana de la membrana redonda humanos ha sido desarrollado para estudiar la viabilidad de transporte en todo el magnética SPION RWM. SPION han sido transportados magnéticamente y el modelo se utiliza para calcular la eficiencia del sistema de prestación de servicios magnética. Este sistema puede ser utilizado para la evaluación cuantitativa de la capacidad de drogas y la entrega de genes a través de la RWM y es adecuado para la investigación de los supuestos agentes terapéuticos en los posibles tratamientos de las enfermedades de oído interno.

La RWM modelo, compuesto por una membrana tricellular sobre una matriz de colágeno es un novedoso sistema in vitro para probar la magnéticos de transporte de las diversas moléculas biológicas humanas a través de la membrana de la ventana redonda. Magnéticos orientados a la entrega oído interno mínimamente invasiva puede facilitar la ejecución selectiva de los agentes terapéuticos.

Métodos
Materiales

Cultura de los medios de comunicación se compraron reactivos de Gibco-Invitrogen e incluye a: Dulbecco's Modificado Medio Eagle (MEDM) [# 11965-092 catálogo], Suero Fetal Bovino (FBS) [# 16141-079 catálogo], Keratinocyte Suero Free Media (KSFM) [catálogo # 10724-011], Extracto de hipófisis bovina (BPE) [Catálogo # 13028-14], y el factor de crecimiento epidérmico (EGF) recombinante Humanos [# 10450-013 catálogo].

Cultivo de células

MDCK células fueron generosamente proporcionados por el doctor Leo Tsiokas, Departamento de Biología Celular en la Universidad de Oklahoma Centro de Ciencias de la Salud [OUHSC]. MDCK se utilizaron células de los pasajes entre 16 y 37, urotelial células pasajes entre 3 y 12 células 3T3 y pasajes entre 7 y 32. Las células se cultivaron en 100 mm 2 platos de la cultura en MEDM suplementado con 10% de SFB y MDCK para células 3T3 y en KSFM complementada con 25 mg de BPE y 2,5 μ g EGF humano recombinante de células del urotelio. Las células fueron mantenidas a 37 ° C por debajo del 5% de CO 2. El medio fue cambiado cada dos días hasta que llegó a la confluencia de las células. Las células fueron lavadas con PBS y separados utilizando tripsina-EDTA y luego cultivadas en el SIS en la membrana de plástico que se ajustan a las inserciones en los 24 y placas de cultivo. Los medios de comunicación se cambió en la insertos cada 2 días. Las células que no fueron utilizados para la experimentación se cultivaron en 100 mm 2 platos de la cultura y reincubated a 37 ° C por debajo del 5% de CO 2.

Transepithelial resistencia eléctrica

Transepithelial resistencia eléctrica (TEER) fue medida para confirmar la confluencia de las células epiteliales. La resistencia de la membrana cultivadas SIS se mide a través de una epiteliales voltios-ohmiómetro (EVOM, World Precision Instruments, New Haven, CT). TEER se determinó mediante la aplicación de una corriente alterna de onda cuadrada de ± 20 μ A a 12,5 Hz con un electrodo de plata y la medición de la diferencia de potencial con una de plata / cloruro de plata EVOM utilizando electrodos a 37 ° C en medios de cultivo de tejido (MEDM con 10% de SFB y 1% PS). La densidad de siembra fue 4,75 × 10 5 células / cm 2.

Gradiente magnético-obligó al transporte a través de la RWM modelo

Debido al hecho de que el campo magnético externo aplicado a la RWM modelo para tirar de la SPION es lo suficientemente grande como para superar las otras fuerzas que actúan sobre el SPION (al igual que la fuerza gravitatoria y la fuerza de arrastre), el gradiente magnético forzados-transporte (GFT) Fue la única fuerza de tenerse en cuenta.

MDCK células fueron sembradas en el lado serosal del SIS membrana en una densidad de siembra de 4,4 × 10 5 células / cm 2. Swiss 3T3 fibroblastos Se sembró en la mucosa lado de la membrana SIS en una densidad de siembra de 1,8 × 10 3 células / cm 2. Los fibroblastos se permitió 2 días al penetrar en la membrana SIS. Luego MDCK células fueron cultivadas en la mucosa lado de la membrana SIS en una densidad de siembra de 4,4 × 10 5 células / cm 2. SPION etiquetados Nanomag D-NH 2 fueron utilizados en los experimentos. Todos los experimentos se realizaron en el día cinco de cultivo de células de la última capa de células cultivadas en el RWM modelo. Los cilindros magnéticos utilizados (MagStar Tecnologías) fueron 6,35 × 6,35 mm y de los centros de imanes adyacentes fueron de 2 cm de separación. Una de moldeo de plástico (12,8 × 8,6 × 3,1 cm) que se celebró los imanes directamente de las 24 y placa de cultivo. La densidad de flujo magnético se midió utilizando un Modelo de 5.080 metros Gauss (SYPRIS, Orlando-Fl). Sigma parcela se utilizó para todos los cálculos estadísticos

Histología

Después de 60 minutos de exposición magnética, las células fueron fijadas con frescos realizados paraformaldehido 4% para 24 horas. Después de que las células fueron fijadas, que se pusieron en el 3% de agar y almacenados en formalina al 10%, donde fueron seccionadas en un micrótomo para el examen microscópico. Membrana de las secciones 4-5 μ m de espesor fueron teñidos con tricrómico de Masson. Para la rata RWM tejido, hemos utilizado con glutaraldehido al 2,5% para la fijación y posterior fijado en el 1% OSO 4 y teñidos con acetato de uranilo y bismuto oxynitrate para TEM.

Cuantificación de GFT

SPION se conjuga con Alexa Fluor 647 (Molecular Probes, Carlsbad-CA). La proporción de SPION a la Alexa Fluor 647 conjugado con la SPION se calculó durante el proceso de conjugación y llegó a ser 1:617 (SPION: Alexa Fluor 647). Una curva de calibración para diferentes concentraciones de la tintura se dibujan (datos no presentados), la intensidad de la tintura se midió utilizando un fotón SLM 8100-spectrofluorometer contar con un doble monocromador de excitación luz en el camino.

Conflicto de intereses

Los autores declaran que no tienen intereses en conflicto.

Contribuciones de los autores

MGF: la mayoría de los experimentos y análisis de datos. YZ y XG coordinado algunos experimentos. BK, RDK, XG, DLR y KJD ayudó en la redacción del manuscrito. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

Agradecimientos

Un agradecimiento especial al Dr Leo Tsiokas, Departamento de Biología Celular en la Universidad de Oklahoma Centro de Ciencias de la Salud de la prestación de los MDCK células para los experimentos, la Hough Ear Institute, que en parte apoyó este proyecto y Wanda Ray de asistencia con la histología. Agradecemos mucho Nili doctor Lin Jin y Liu (Departamento de Ciencias Fisiológicas de la Facultad de Medicina Veterinaria, Universidad del Estado de Oklahoma) para ayudar en la medición de la resistencia eléctrica y transepithelial Allison Cartwright (Ingeniero eléctrico y estudiante de segundo año de Medicina en la OUHSC por su ayuda Con la fuerza magnética en el cálculo SPION. Este proyecto fue financiado por la Fundación Schulsky, NYC, NSF EPSCoR y ONR organismos.