Journal of Negative Results in Biomedicine, 2006; 5: 7-7 (más artículos en esta revista)

ELA esporádica no está asociado con VAPB mutaciones genéticas en el sur de Italia

BioMed Central
Francesca Luisa Conforti (fl.conforti @ isn.cnr.it) [1], Teresa Sprovieri (t.sprovieri @ isn.cnr.it) [1], Rosalucia Mazzei (r.mazzei @ isn.cnr.it) [1 ], Carmine Ungaro (c.ungaro @ isn.cnr.it) [1], Alessandro Tessitore (alessandro.tessitore @ unina2.it) [2], Gioacchino Tedeschi (gioacchino.tedeschi @ unina2.it) [2], Alessandra Patitucci (a.patitucci @ isn.cnr.it) [1], Angela Magariello (a.magariello @ isn.cnr.it) [1], AnnaLia Gabriele (a.gabriele @ isn.cnr.it) [1], Vincenzo Labella (vlabella@unipa.it) [3], Isabel Laura Simone (isasimone@neurol.uniba.it) [4], Giovanni Majorana (majov@tiscali.it) [5], Maria Rosaria Monsurrò (mariarosaria.monsurro @ Unina2.it) [2], Paola Valentino (p.valentino @ isn.cnr.it) [6], Maria Muglia (m.muglia @ isn.cnr.it) [1], Aldo Quattrone (a.quattrone @ isn . Cnr.it) [1]
[1] Instituto de Ciencias Neurológicas, el Consejo Nacional de Investigación, Mangone, Cosenza, Italia
[2] Segunda División de Neurología, la Segunda Universidad de Nápoles, Nápoles, Italia
[3] Departamento de Neurología y Psiquiatría de la Universidad de Palermo, Palermo, Italia
[4] Departamento de Ciencias Neurológicas y de Psiquiatría de la Universidad de Bari, Bari, Italia
[5] Departamento de Neurociencias, Psiquiatría y Anaesthesiological Ciencias de la Universidad de Messina, Messina, Italia
[6] Instituto de Neurología de la Universidad Magna Grecia, Catanzaro, Italia

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Resumen

Las mutaciones en la Cu / Zn superóxido dismutasa (Sod1) gen se ha informado de los adultos a causa de aparición autosómica dominante Amyotrophic Lateral Sclerosis (FALS). En casos esporádicos (SALS) novo mutaciones en el gen Sod1 Ocasionalmente se han observado. El reciente hallazgo de una mutación en el VAMP / synaptobrevin asociada a la membrana de proteína B (VAPB) gen como causa de la esclerosis lateral amiotrófica (ALS8), nos llevó a investigar a toda la región de codificación de este gen en pacientes SALS. Ciento veinte y cinco pacientes sin relación con el adulto-inicio ELA y 150 sanos sexo-sujetos emparejados por edad con los mismos antecedentes genéticos fueron analizados.

El análisis genético de todos los exones del gen VAPB por DHPLC reveló 5 perfiles de la variante en el 83 de los 125 pacientes SALS. Secuenciación directa de estos productos PCR reveló 3 sustituciones de nucleótidos. Dos de ellos fueron encontrados dentro de 3 intrón del gen, la acogida DHPLC perfiles de la variante 4. La tercera variación de nucleótidos (Asp130Glu) fue el único presente en la sustitución de la región de codificación del gen VAPB, y se produjo en el exón 4. Se encontró en tres pacientes de los 125. La frecuencia de la variación detectada en el exón VAPB gen no fue significativamente diferente entre los pacientes y los controles. En conclusión, nuestro estudio sugiere que VAPB mutaciones no son una causa común de los adultos-inicio SALS.

Apreciación

Amyotrophic Lateral Sclerosis (ELA) es una enfermedad progresiva letal de las motoneuronas de la médula espinal y el cerebro. Más del 90% de los pacientes con ELA son esporádicos (SALS), no se muestra ningún rasgo familiar. Aproximadamente el 10% de los casos son familiares (FALS), y dentro de estos se encuentran varias formas distintas de la enfermedad. La forma más común de FALS es autosómica dominante que a la fecha de 2 genes que se han identificado: ALS1, con la aparición de adultos causado por mutaciones en el gen que codifica la enzima citosólica antioxidante Cu, Zn-superóxido dismutasa (Sod1) [1, 2] , Y ALS4, un raro trastorno de aparición de menores, asociado con mutaciones en el gen senataxin (SETX) [3]. Autosómica recesiva, la forma de aparición de menores (ALS2), se ha asociado con mutaciones en el gen Alsin ubicado en 2q33 [4]. Hasta la fecha más de 100 diferentes missense mutaciones en el gen Sod1 [5] y hasta ocho descrito mutaciones en el gen Alsin se han reportado [6].

En cambio, ELA esporádica se cree que es una enfermedad multifactorial, en la que la modificación de los genes y del medio ambiente afectan a los agentes de su manifestación clínica, pero pocos genes asociados hasta el momento han sido identificadas [7 - 13]. De nuevo Sod1 mutaciones en el gen sólo ocasionalmente se han observado en casos esporádicos de ELA lo que sugiere que las mutaciones en este gen son una rara causa de la no formas familiares de ELA [14, 15].

El pronunciamiento de Nishimura et al. [16] de una mutación missense en el VAMP / synaptobrevin asociada a la membrana de proteína B (VAPB) en el gen autosómico dominante motoneuron enfermedades (ALS8), nos llevó a investigar a toda la región de codificación de este gen en 125 SALS pacientes.

Tras consentimiento informado, se tomó la sangre de 125 pacientes caucásicos no vinculado desde el sur de Italia, que cumplieron con los criterios de El Escorial [17] para el ELA. También se tomaron muestras de 150 controles, acompañado de edad, sexo y región geográfica. Información clínica se presenta en la Tabla 1. Linfocitos Se extrajo el ADN de muestras de sangre mediante procedimiento normal. Sod1 mutación negativo pacientes fueron examinados utilizando la cartilla de acompañamiento exón-intrón regiones del gen VAPB. Los productos de PCR fueron analizados por desnaturalización cromatografía líquida de alto rendimiento (DHPLC) en una WAVE de Ácido Nucleico Fragmento de Análisis del Sistema (Transgenomic Inc, Mountain View, CA). Representante con muestras anormales en el perfil DHPLC fueron secuenciados por el ABI Prism BigDye Terminator ciclo de la secuencia de reacción pronta kit (Perkin-Elmer Applied Biosystems Inc, Foster City, CA).

DHPLC análisis de los genes VAPB [GenBank adhesión no. AL035455 ] Detectado cinco perfiles de la variante en el 83 de los 125 pacientes SALS. Secuenciación directa de productos de PCR reveló 3 sustituciones de nucleótidos. Dos sustituciones de nucleótidos, g.134585C> T y g.134688A> G se encontraron dentro de 3 intrón del gen, la acogida DHPLC perfiles de la variante 4, debido a su combinación en homocigotos o heterocigotos estados. Estos polimorfismos ya estaban presentes en la base de datos de SNP como rs rs 2234487 y 2234488, respectivamente [18]. Las frecuencias SALS en nuestros pacientes y en el control de la población fue del 65% frente a 64% para el rs 2234487 y 42% vs 45% para el rs 2234488, respectivamente.

La tercera sustitución de nucleótidos era el único presente en la sustitución de la región de codificación del gen VAPB y que se produjo dentro de exón 4 en nucleótidos g.138864T> G (Asp130Glu).

El Asp130Glu variación se encuentra entre MSP y en espiral-bobina dominios, y supone una de aminoácidos de residuos de ácido aspártico no conservadas entre las distintas especies. Se identificaron en esta variación heterocigotos estado en tres de los 125 SALS pacientes (2,0%) y en tres de 150 (2,4%) de sexo emparejados por edad sujetos sanos de la misma zona geográfica, lo que sugiere que este aminoacidic sustitución no es causal de la Enfermedad.

Los datos presentados en este documento sugieren que VAPB mutaciones no son una causa común de los adultos-en el inicio SALS población italiana. Además, la novela de nucleótidos variación identificadas en el exón 4 del gen VAPB representa un polimorfismo, probablemente asociado a un área geográfica restringir.

Contribuciones de los autores

FLC concibe el estudio molecular y participó de su diseño y la coordinación y escribió el manuscrito. RM y MM participó en el diseño del estudio y ayudó a redactar el manuscrito. AT, GT, GRM, VL, ILS, GM, PV, a condición de las muestras y realiza el diagnóstico clínico de la paciente grupo de Nápoles, Palermo, Bari, Messina y Catanzaro, respectivamente. TS CU y llevaron a cabo el estudio genético molecular y análisis realizados DHPLC. AP, AM, y ALG participaron en la realización de la secuencia. AQ concibe el estudio y participó su diseño y la coordinación y la ayudó a redactar el manuscrito. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.