BMC Biochemistry, 2006; 7: 19-19 (más artículos en esta revista)

Influencia de la microgravedad simulada en la activación de las Rho GTPase pequeños que participan en la formación de citoesqueleto - la clonación molecular y la secuencia de la leucemia bovina asociada a guanine nucleotide factor de cambio

BioMed Central
Akira Higashibata (higashibata.akira @ jaxa.jp) [1], Mari Imamizo-Sato (m_imamizo@aes.co.jp) [2], Masaya Seki (m_seki@aes.co.jp) [2], Takashi Yamazaki ( yamazaki.takashi2 @ jaxa.jp) [1], Noriaki Ishioka (ishioka.noriaki @ jaxa.jp) [1]
[1] Instituto de Ciencias Espaciales y Astronáuticas, Japón Agencia de Exploración Aeroespacial, el Centro Espacial de Tsukuba, 2-1-1 Sengen, Tsukuba, Ibaraki 305-8505, Japón
[2] Departamento de Medicina Medioambiental del Espacio, la Universidad de Kagoshima Escuela de Estudios Superiores de la medicina y la ciencia odontológica, 8-35-1, Sakuragaoka, Kagoshima, Kagoshima, 890-8544, Japón
[3] Estación Espacial Departamento de Ingeniería, Servicios de Ingeniería Avanzada Co, Ltd, Tsukuba Mitsui Building, 1-6-1, Takezono, Tsukuba, Ibaraki 305-0032, Japón

Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License (http://creativecommons.org/licenses/by/2.0], que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que la obra original es debidamente citados.

Resumen
Fondo

El irregular formación de fibras de citoesqueleto en células spaceflown experimentales se ha observado, pero el proceso de desorganización de las fibras aún es poco conocido. Es bien sabido que la activación de las Rho GTPase pequeño da lugar a fibras de actina estrés asamblea. Este estudio se realizó para evaluar el efecto de la microgravedad simulada en la activación de Rho que participa en la remodelación de fibra de actina en las células.

Resultados

Clinorotation influencias actina fibra remodelación y sus vías de señalización que involucran a los pequeños GTPase Rho. Actina destacar la remodelación de fibra fue significativamente inhibido en mayor medida en las células cultivadas en clinorotation estática que en células cultivadas. Desde la genética y análisis de expresión proteica, encontramos que el nivel de expresión de la leucemia asociada a Rho guanine nucleotide factor de cambio (mayor), que activa Rho, se downregulated bajo clinorotation. Por otra parte, hemos identificado la escuela para pedir una mayor cDNA. El importe de GTP-obligado RhoA, es decir, la forma activa de RhoA, disminuyó en virtud de esta condición.

Conclusión

La activación de las Rho GTPase pequeño fue influenciado por la microgravedad simulada generada por un período de tres dimensiones (3D) clinostat. Por otra parte, los de larga duración cDNA de las especies bovina mayor, un miembro de la Rho guanine nucleotide factor de cambio (FMAM), la familia, fue identificado, y su expresión génica se observó que se downregulated bajo clinorotation. Este downregulation posteriormente dio lugar a la represión de la activación de RhoA. Estos resultados indican que la desorganización de las fibras de actina fue causado por la inhibición de la activación de Rho 3D clinorotation.

Fondo

La gravedad es una fuerza universal y afecta a todo en la naturaleza. Gravitational efectos biológicos en los eventos y funciones, incluido el mecanismo de sensación de gravedad en las células, siguen sin estar claros. Anteriores experimentos de vuelos espaciales tripulados han informado de la irregular formación de fibras de citoesqueleto en células spaceflown experimental. Lewis et al. observó que los microtúbulos filamentos se extendía desde un centrosoma mal definidos en los linfocitos humanos (células Jurkat) [1]. Gruener y Hughes-Fulford informó de que actina reorganización respondió a la gravedad nivel y mostró anormal montaje de estrés fibras de actina [2, 3]. En el campo de la biología espacial, para examinar los efectos de la microgravedad en los eventos biológicos en el terreno a base de la investigación, clinostat se usa a menudo para simular las condiciones de microgravedad. A tres dimensiones (3D) clinostat es un aparato que anula el efecto de la gravedad, y se ha utilizado en la sustitución de los estudios sobre los efectos de microgravedad [2, 4 - 9]. En un estudio sobre Xenopus miocitos, 3D clinorotation causado desorganización, condensación e irregular disposición de los filamentos de actina [10].

El Rho GTPasas de la familia desempeña un papel importante en el control de la organización y remodelación de la actina a base de citoesqueleto, y estas GTPasas actúan como interruptores moleculares que actúan en el GTP determinado estado inactivo y no encuadernado en el estado [11 - 14]. La activación de Rho es catalizada por la familia Dbl de nucleótidos de guanina factores de cambio (GEFs) [15, 16], y activa las proteínas Rho posteriormente inducir la formación de fibras de actina estrés en células de mamífero [12]. Dbl La familia comprende una serie de proteínas con la variable modulares estructuras, los patrones de expresión, y funciones celulares [17, 18]. Leucemia asociada a RhoGEF (mayor) es uno de los RhoA selectivo RhoGEFs que son regulados directamente por activar las proteínas G α12/13 y desempeñar un papel clave en oncogénico transformación inducida por la proteína G-receptores acoplados [19 - 21].

En este estudio, hemos encontrado que la activación de las Rho GTPase pequeño fue influenciado por la microgravedad simulada generada por el 3D clinostat. Por otra parte, los de larga duración cDNA de las especies bovina mayor fue identificado, y su expresión génica se downregulated bajo clinorotation. Este downregulation posteriormente dio lugar a la represión de la activación de RhoA. Estos resultados indican que la desorganización de las fibras de actina fue causado por la inhibición de la activación de Rho 3D clinorotation.

Resultados
Formación de filamentos de actina bajo clinorotation

Desorganización del citoesqueleto de actina se ha demostrado en estudios previos sobre los vuelos espaciales y terrestres de simulación de microgravedad. A fin de determinar si la desorganización del citoesqueleto de actina se observa en el cerebro de bovino endoteliales microvasculares (BBME) las células cultivadas en las condiciones de microgravedad simulada. Hemos observado por primera vez la F-actina de filamentos de rodamina phalloidin-tinción. BBME células son células adheridas y normalmente muestran estrés fibras de actina (rojo), bajo la condición estacionaria, como se muestra en la Figura 1A. Después de la exposición a clinorotation durante 72 h, los núcleos de los filamentos de actina formado agrupaciones, que se indican mediante flechas en la Figura 1B, y el estrés fibras se observa claramente en las células control. Paxillins (verde), que son proteínas implicadas citoesqueleto de actina a la membrana embargo, también se observaron más claramente en el control de las células que en el clinorotated células. Estas observaciones indican claramente que clinorotation causado la desorganización del citoesqueleto de actina.

Transcripción reversa reacción de polimerasa en cadena a base de diferencial de visualización, la clonación y secuenciación de las especies bovina LarG

Con el fin de estudiar el efecto de gravedad alterada en la expresión génica en las células, la transcripción reversa reacción en cadena de polimerasa (RT-PCR) a base de diferencial de visualización, que es una técnica de mRNA de huellas dactilares, se llevó a cabo. RT-PCR se realizó utilizando el ARN total aislado de la clinorotated y control de células estacionarias como plantillas y todos los 60 primers establece que figuran en los archivos adicionales (ver archivos adicionales Cuadro 1]. Por lo tanto, un total de 60 informes de terminación de proyecto se ejecuta, y cada uno contiene una combinación diferente de 5 'y 3' primers. A partir de la electroforesis en gel de poliacrilamida imágenes, hemos identificado 62 segmentos de ADN mostraron que los niveles de expresión diferentes en virtud de clinorotation (datos no presentados). Las secuencias de ADN de algunos segmentos se podrá determinar, y homología de búsquedas se realizaron utilizando el ente local básico Herramienta de búsqueda de alineación (BLAST) el programa de Banco de Datos de ADN de Japón (DDBJ), Shizuoka. A pesar de que la función de los segmentos identificados era desconocido, mostró dos segmentos de alta homología a RhoGEF humanos o los leucocitos activados molécula de adhesión celular.

Uno de los segmentos que mostraron los niveles de expresión diferencial en el ARNm de huellas dactilares de manifiesto la similitud sustancial a los 3 'de la región de mayor mRNA, que es uno de los RhoGEFs. Hemos realizado varios experimentos de clonación para obtener más largo cDNAs correspondientes a este segmento. De larga duración mayores de cDNA bovina, incluido el marco de lectura abierta (ORF), se obtuvo mediante la RT-PCR, 5 'rápida amplificación de cDNA extremos (RACE), y 3' RACE métodos. El resultado montado cDNA integrado por 8364 nucleótidos entre ellos un 4635-bp ORF correspondiente a unas previsiones de 1544 aminoácidos (aa) polipéptido similar a la del hombre mayor. La proteína predice mostraron la mayor similitud con humanos y de ratón LarG proteínas (92,3% y 89,4% aa identidad, respectivamente). El peso molecular de las proteínas se estimó como 172,7 kDa, lo que es el mismo que el del ser humano y el ratón LarG proteínas. Por lo tanto, llegamos a la conclusión de que esta proteína bovina fue mayor. Las alineaciones de las especies bovina, humano, ratón y secuencias de proteínas se muestran en la Figura 2 (la secuencia de nucleótidos de bovinos mayores de cDNA se publicará en el DDBJ / EMBL / GenBank base de datos [DDBJ / EMBL / GenBank: AB188499 ]). Ninguna otra secuencia de proteínas en GenBank, con excepción de las especies bovina y traducido mayor bovina mayor de secuencias expresadas etiquetas, mostró una mayor similitud con el humano y el ratón LarG proteínas. Estos hechos indican claramente que el clonado de bovinos mayores de cDNA corresponde a un bonafide bovina orthologue de los genes humanos. Motif análisis de las especies bovina mayor secuencia de proteínas revelaron la presencia de cuatro conservadas dominios funcionales, a saber, la estrecha homología Dbl yuxtapuestos (DH) y pleckstrin homología (PH) dominios, el dominio PDZ y el regulador de señalización de proteínas G (RGS) de dominio. Como era de esperar, el PDZ y PH dominios de las especies bovina, humana, y el ratón son proteínas altamente conservadas, y se mostró el más alto grado de conservación de secuencias. El PDZ dominios de estas proteínas son idénticas, mientras que el PH dominios difieren por un solo conservador sustitución de aminoácidos. Es importante señalar la notable alto grado de conservación de toda la N-terminal de parte de la mayor proteína que engloba el dominio PDZ. Dentro de los primeros 265 residuos de aminoácidos, las sustituciones se observaron en varios aminoácidos, lo que indica una identidad global de 98%. En comparación, las regiones entre el PDZ y RGS dominios y la RGS y DH dominios, así como todo el C-terminal de dominios son sustancialmente más variable. Por ejemplo, la región entre el PH y el dominio C terminal de las especies bovina tiene un mayor aa la identidad de 84,5% y 79,9% con las de humanos y de ratón mayor, respectivamente.

PCR cuantitativa en tiempo real

Desde el ARNm de huellas dactilares resultados, predijo que la mayor expresión de genes se downregulated bajo clinorotation. Para confirmar el cambio en la mayor expresión de genes en virtud de clinorotation, PCR cuantitativa en tiempo real se realizó. Como se muestra en la Figura 3, el mayor nivel de la expresión génica en las células clinorotated disminuyó a 62,7 ± 5,8% de que en el control de células estacionarias. Este resultado indica que, en virtud de clinorotation, la mayor expresión de genes downregulated fue en el ARNm, y sugirió que la activación Rho se vería influenciada por los cambios en el nivel de gravedad.

Western blot Rho y la activación de ensayo

Western blot se realizó para examinar la mayor cantidad de proteínas y RhoA. Como se muestra en la Figura 4, el nivel de expresión inmunorreactiva mayor densitometrically disminuyó a 87,8%; sin embargo, la expresión RhoA nivel aumentó a 138% en virtud de clinorotation. Por otra parte, el importe de RhoA activados se estima a través del G-LISA RhoA activación kit de ensayo (véase "Métodos"). Como se muestra en la Figura 5, el nivel de activos RhoA en la clinorotated células fue de 60,2% que en el control de células estacionarias. Estos resultados indican que las cantidades de las proteínas y mayor activo RhoA disminuido en virtud de la microgravedad simulada.

Discusión

En informes anteriores se ha demostrado que los efectos de la microgravedad en los eventos biológicos en variar. El entorno de microgravedad se ha informado a causa reducción en la secreción de hormonas de crecimiento [22], embotamiento de la respuesta a mitogen activación en las células T [23 - 25], retardo de crecimiento osteoblástica, y la desorganización del citoesqueleto formación [26, 27] . Citoesqueleto formación es altamente sensible a la alteración de la gravedad. Se informó de que en las células, la actina Microfilamento sistema constituye la gravedad de células sensibles al componente [28] y la microgravedad que afecta a la formación de citoesqueleto [1, 27]. Esta desorganización es causada por diferencias en el nivel de gravedad entre el espacio (microgravedad) y terrestres (1G) de los ambientes. En el terreno basado en los estudios, un 3D clinostat es comúnmente utilizado para simular condiciones de microgravedad. Se ha informado de que los resultados obtenidos utilizando clinorotation fueron similares a los obtenidos en los experimentos de vuelos espaciales tripulados, lo que sugiere que clinorotation es eficaz para simular la microgravedad [2, 9, 29]. Sin embargo, el mecanismo por el cual la señal de la gravedad se convierte en una señal intercelular es poco clara.

Es bien sabido que las pequeñas proteínas G de la familia Rho regulan la remodelación de las fibras de actina [11, 12, 14]. Por lo tanto, la hipótesis de que la influencia de la microgravedad en la vía de señalización Rho provocado la desorganización de actina, y se analizaron las diferencias en la expresión de genes entre la estática y clinorotated células mediante el método de mRNA de huellas dactilares. Se encontró que varios fragmentos de genes respondió a la alteración de la gravedad. Posteriormente, se ha identificado una parte del mayor fragmento que se downregulated bajo clinorotation. La mayor gen ha sido identificado en algunos vertebrados [20, 30]; sin embargo, este es el primer estudio que ha identificado la totalidad de bovinos mayores de genes. Motif análisis de las especies bovina mayor secuencia de la proteína demostrado la presencia de cuatro conservadas dominios funcionales - la DH, PH, PDZ, y RGS dominios. Estos cuatro dominios muestra un alto grado de conservación de secuencias en las especies bovina y humana / proteínas de ratón.

Western Blot Nuestros resultados mostraron que la cantidad total de proteína Rho aumentó en las células clinorotated, aunque la desorganización de las fibras de actina se observó. Estos resultados indican que clinorotation afecta no sólo a Rho expresión, sino también Rho activación. La PCR cuantitativa en tiempo real y el Western Blot resultados demostraron que la mayor expresión disminuyó significativamente en las células clinorotated (Figuras 3 y 4]. En células de mamíferos, tres RhoGEFs, a saber, mayor, p115-RhoGEF, y PDZ-RhoGEF han sido identificados como RhoA selectivo RhoGEFs [31 - 33]. Estos tienen una estrecha RhoGEFs homólogos y contienen un regulador de la proteína G homología de dominios. En nuestros resultados, el nivel de las grandes proteínas mostraron una leve disminución (87,8% del nivel estacionario en el control) que el de RhoA activa (60,2% del nivel normal). Ya sospechábamos downregulated de expresión no sólo el mayor de proteínas, sino también los demás RhoGEFs. En consecuencia, la downregulation de estos RhoGEFs no induce la activación Rho y, posteriormente, los resultados en la desorganización de las fibras de actina en virtud de la microgravedad simulada.

Hemos demostrado que clinorotation induce la inactivación de Rho, sin embargo, la manera en que mayor es la transcripción downregulated bajo la microgravedad simulada aún no se ha dilucidado. Por otra parte, como se muestra en la Figura 6, se asumió que los cambios en el nivel de gravedad también afectan a la regulación aguas arriba de Rho, como que a través de la heterotrimeric las proteínas G [14], o el reglamento de Rho Rho a través de efectores, tales como p160ROCK ( Rho quinasa) [34, 35]. Recientemente, se ha señalado que numerosos citoesqueleto y moléculas de señalización mediar en la interacción entre actina y los coordinadores de moléculas de adhesión que participan en mechanosensitivity [36]. Con el fin de definir con precisión los molécula que convierte la señal de gravedad en la señal intercelular, es necesario que las aguas arriba y aguas abajo regulación de la señalización Rho, incluyendo la regulación a través de heterotrimeric las proteínas G, RhoGEFs, Rho y efectores, tales como Rho kinasa, ser el centro de las futuras investigaciones.

Conclusión

Llegamos a la conclusión de que la microgravedad simulada generada por clinorotation Rho activación afectados, en particular, la mayor expresión de genes, y este efecto se debió a la desorganización de las fibras de actina. Esta conclusión apoya las observaciones anteriores de vuelos espaciales tripulados y de tierra experimentos [2, 9, 29].

Métodos
Cultivo celular

BBME células y cultivos celulares reactivos, incluidos el CS-C medio kit, se compraron de Cell Systems Corporation (Kirkland, WA). El BBME células se han mantenido, tal y como se describe en las instrucciones del fabricante, a 37 ° C con 5% de CO 2 / 95% del aire y del 100% de humedad relativa en el CS-C medio.

3D clinorotation

El día antes de clinorotation, 1 × 10 5 BBME células fueron chapados en OptiCells (BioCrystal, Westerville, OH). Después de 24 h, el medio fue reemplazado con un nuevo medio y los chapados en células fueron sometidas a 3D clinorotation en un aparato. Ellos se rotaron a 37 ° C en el 3D clinostat aparato en un 5% de CO 2 incubadora. Los ciclos de rotación fueron controlados por la computadora en un marco externo de rotación de 10 rpm y un marco de rotación interna de 13 rpm para cancelar la simulación dinámica de gravedad en cualquier dirección. El OptiCells se rotaron continuamente durante 72 h sin cambiar el medio. El control de las células fueron incubadas en paralelo en las mismas condiciones, sin embargo, no fueron sometidos a clinorotation. Para la observación de las imágenes de fluorescencia de las células, un Lab-Tek II diapositiva sistema de cámara (Nalge Nunc International, Napperville, IL) fue utilizado en lugar de la OptiCells para el cultivo de células.

Microscopía de inmunofluorescencia

Después de rotación de 72 h en el clinostat aparato 3D, las células chapada en un Lab-Tek cámara de diapositivas una vez que se lavaron con buffer fosfato-salino (PBS) y fijada con formaldehído 4% en PBS durante 10 min. El fijo células se lavaron dos veces con PBS y permeabilized con 0,5% Triton X-100 en PBS durante 5 min. Posteriormente, las células fueron incubadas con PBS que contenía 4% rodamina-phalloidin (Invitrogen, Carlsbad, CA) y 20 ng / μ l paxillin anti-anticuerpo (Upstate, Lake Placid, NY) en combinación con Alexa Fluor 488 (Molecular Probes, Eugene, O). Las celdas eran suficientemente lavarse con agua y luego se lavan tres veces con PBS. Las imágenes se generaron mediante un Leica Q550FW sistema de procesamiento de imágenes de fluorescencia (Leica Microsystems, Wetzlar, Alemania).

Aislamiento total de RNA, RT-PCR diferencial basado en pantalla, y el aislamiento de genes expresados diferencialmente segmentos

Total RNA se aisló de la clinorotated estacionaria y control mediante el uso de células Isogen, y el primer capítulo de síntesis de cDNA seguido por PCR se realizó utilizando un kit de mRNA de huellas dactilares (Gene Nippon, Tokio, Japón). Los conjuntos de cebadores utilizados para esta reacción se muestran en los archivos adicionales (véase la disposición Tabla 1]. El cDNA a partir de muestras obtenidas y los clinorotated estacionario control se electrophoresed células en un 4% en gel de poliacrilamida y teñidos con SYBR Green I (Invitrogen). Una forma diferente expresó banda fue eliminado de la acrilamida en gel, AND y se extrajeron de la rebanada de gel usando SUPREC-01 (Takara Bio Inc, Shiga, Japón). El cDNA fragmentos extraídos fueron más reamplified cinco veces, y la significativa fragmentos amplificados fueron clonados en un vector de clonación de asistencia técnica mediante el uso de pGEM-T Easy Vector System (Promega, Madison, WI). Las secuencias de ADN clonado se determinaron por un ABI Prism 310 analizador genético (Applied Biosystems, Foster City, CA). Los kits se utilizan de acuerdo a las instrucciones del fabricante.

Identificación de bovinos mayores de cDNA

RT-PCR se llevó a cabo utilizando un Luisiana PCR in vitro clonación kit (Takara Bio). 5 'y 3' RACE procedimientos se realizaron con el 5'-y 3'-RACE completo conjuntos básicos, respectivamente (Takara Bio). El primer conjunto de cada procedimiento se ha mencionado anteriormente se utilizaron como se muestra en los archivos adicionales (véase la disposición Tabla 2]. Todos los procedimientos se realizaron de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Los primers fueron diseñados utilizando GENETYX software de la versión 6 (Genetyx Corporation, Tokio, Japón).

PCR cuantitativa en tiempo real

La expresión de mayor nivel y β-actina mRNA fueron medidos por medio de la PCR cuantitativa en tiempo real método. Los siguientes pares de primers fueron utilizados para el mayor y β-actina, respectivamente: 5'-TGCTCACACCAGCTCCAGAAG-3 'y 5'-CCTAGAGCAGGCAGTTACCAACAC-3' y 5'-GATGTGGATCAGCAAGCAGGAGTA-3 'y 5'-AAGCATTTGCGGTGGACGA-3'. La mezcla de reacción se preparó utilizando un SYBR RT-PCR kit (Takara Bio). La reacción de amplificación se realizó de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Reacción de fluorescencia y la supervisión se llevaron a cabo utilizando un Smart termociclador PCR en tiempo real del sistema con el software Smart termociclador versión 2.0C (Cefeidas, Sunnyvale, CA).

El análisis por inmunotransferencia

Después de clinorotation durante 72 h, las células fueron lavadas dos veces con PBS. El conjunto de células lisado de las células se preparó utilizando un buffer de lisis que contiene 25 mM Tris-HCl, pH 7,5, 150 mM NaCl, 5 mM MgCl 2, 1% NP-40, 1 mM dithiothreitol, y 5% de glicerol a 4 ° C . El extracto de células enteras fue objeto de sulfato de sodio dodecyl electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE; 5-10% en gel de gradiente de mayor detección y el 15% de gel de RhoA y la detección de GAPDH) y trasladado a un polivinilideno difluoride membrana (Hybond-P; Amersham Biosciences, Piscataway, NJ) a 15 V por 60 min a temperatura ambiente. La membrana fue bloqueada con 5% de materia grasa de leche seca y posteriormente incubadas con Tris-buffer salina que contiene 0,05% de Tween 20 con una dilución de 1:100 mouse monoclonal anti-anticuerpos RhoA (26C4; Santa Cruz Biotechnology, Inc, Santa Cruz, CA ), Una dilución 1:100 de conejo policlonal anti-anticuerpos mayor (H70, Santa Cruz), y un mouse monoclonal anti-glyceraldehyde-3-fosfato (GAPDH) de anticuerpos (Imgenex, San Diego, CA). Immunocomplexes se visualizaron mediante un quimioluminiscencia ECL Plus kit (Amersham). Señales densitometrically se cuantificarán mediante un software Cantidad (Bio-Rad Laboratories Inc, Hercules, CA).

Rho GTPase actividad ensayo

Active RhoA se midió utilizando un G-LISA RhoA activación Biochem kit de ensayo (ensayo luminnometric; citoesqueleto, Inc, Denver, CO) de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Las señales de quimioluminiscencia se detectaron mediante un Powerscan HT multidetection Lector de microplacas (Dainippon farmacéuticos, Osaka, Japón).

Estadísticas

El análisis estadístico se realizó mediante la t de Student, prueba de software PRISM (GraphPad Software Inc, San Diego, CA). Importancia fue aceptada en p <0,05. Todos los experimentos se repitieron al menos tres veces. Los valores se expresan como media ± SE.

Abreviaturas

AA: aminoácidos residuos

ALCAM: célula humana factor de adherencia

BBME: cerebro de bovino endoteliales microvasculares

BP: pares de bases

DH: homología Dbl

EST: etiqueta de secuencia expresada

GAPDH: glyceraldehyde-3-fosfato deshidrogenasa

FMAM: guanine nucleotide factor de cambio

LarG: leucemia asociada a Rho factor FMAM

MLL: sociedad mixta de linaje leucemia

ORF: marco de lectura abierta

PCR: reacción en cadena de polimerasa

PDZ: dominio presentes en la División del Sector Privado-95, DLG y ZO-1 / 2;

PH: pleckstrin homología

CARRERA: rápida amplificación de cDNA termina

RGS: regulador de la proteína G de señalización

RT-PCR: transcripción inversa-reacción en cadena de polimerasa

Autores de las contribuciones

AH redactó el manuscrito, realizó el Western Blot estudios, y participó en el diseño del estudio. MI TY y participó en la secuencia de la adaptación de las especies bovina mayor. MS participaron en la actividad Rho GTPase ensayo y cuantitativa en tiempo real, análisis de PCR. NI supervisó el estudio. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

Material complementario
Archivo Adicional 1
Cuadro 1. Secuencias de los cebadores para mRNA de huellas dactilares diferencial pantalla
Agradecimientos

Una parte de este estudio fue apoyado por la JAXA Estación Espacial Internacional Oficina de Proyectos de Investigación.