Journal of Autoimmune Diseases, 2006; 3: 4-4 (más artículos en esta revista)

Evaluación de anticuerpos contra la Hsp60 en pacientes con MPO-ANCA asociados glomerulonefritis: un estudio de cohortes

BioMed Central
Marjan C Slot (m.slot @ immuno.unimaas.nl) [1], Ruud Theunissen (r.theunissen @ immuno.unimaas.nl) [1], Pieter Van Paassen (p.vanpaassen @ immuno.unimaas.nl) [ 1], Jan GMC Damoiseaux (jdam@limm.azm.nl) [1], Jan Willem Cohen Tervaert (jw.cohentervaert @ immuno.unimaas.nl) [1]
[1] Departamento de Clínica y Experimental de Inmunología, Hospital Universitario de Maastricht, PO Box 5800, 6202 AZ Maastricht, Países Bajos

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Resumen
Fondo

Calor humano de proteínas de choque 60 (hHSP60) ha sido implicado en autoinmunidad a través de mimetismo molecular, sobre la base del alto grado de homología con HSP65 de los microorganismos conduce a auto-reconocimiento de la proteína humana. Además, una homología de secuencia entre hHSP60 y myeloperoxidase (MPO) se ha descrito. MPO es uno de los principales autoantígenos en vasculitis asociada con anticuerpos frente al citoplasma de los neutrófilos (ANCA). La hipótesis de que las infecciones pueden desencadenar la respuesta contra la ANCA MPO a través de hHSP60.

Métodos

En 86 pacientes consecutivos con ANCA vasculitis asociada (AAV), anti-hHSP60 y anti-micobacteriana HSP65 fueron medidos por ELISA. Los pacientes fueron comparados con 69 controles sanos (HC). Los datos continuos entre los grupos se compararon mediante los rangos con signos de Wilcoxon y el test de Kruskal-Wallis test con Dunn's después de la prueba cuando proceda. Correlaciones entre los datos se obtuvieron mediante correlación de Spearman. La odds ratio y el 95% intervalos de confianza fueron obtenidos mediante la prueba exacta de Fisher.

Resultados

En el diagnóstico, mediana anti-mHSP65 nivel fue mayor en AAV (media [rango]: 42,5 [0-500]), y posteriormente en MPO-ANCA (44 [7-500]), en comparación con HC (22 [0-430 ]). Anti-hHSP60 los niveles de AAV no eran más elevados en comparación con HC (18 [0-319] y 18,5 [0-98], respectivamente). Sin embargo, en MPO-ANCA anti-hHSP60 los niveles se incrementaron (32,5 [0-319]) en comparación con PR3-ANCA (13 [0-79]) y HC. No hemos podido detectar reactividad cruzada entre hHSP60 y MPO-ANCA. Existe una correlación entre la lucha contra la mHSP65 y anti-hHSP60 niveles (r = 0,32, P = 0,003) pero no entre anti-hHSP60 y MPO-ANCA (r = -0,064, p = 0,69).

Conclusión

Los anticuerpos contra mHSP65 son más altos en comparación con AAV HC, y la lucha contra la hHSP60 anticuerpos son más elevados en pacientes con MPO-ANCA que en pacientes con PR3-ANCA y HC. Aunque este hallazgo puede ser indicativo de reactividad cruzada entre MPO-ANCA y hHSP60, ensayos adicionales no apoya esta hipótesis.

Introducción

Vasculitides pequeña embarcación, tales como granulomatosis de Wegener (WG) y poliangeítis microscópica (PAM), están fuertemente asociadas con anticuerpos frente al citoplasma de los neutrófilos (ANCA), que están bien dirigidas a myeloperoxidase (MPO) o proteinasa 3 (PR3) [1 - 3]. Estas enfermedades pueden ocurrir en cualquier órgano del sistema, pero las vías respiratorias y los riñones son los más frecuentemente implicados. Si no se trata, WG resultados en la muerte dentro de semanas a meses. Desde la introducción de prednisolona y ciclofosfamida como tratamiento estándar, la supervivencia ha mejorado notablemente desde menos del 20% en 1 año en 1958 [4] para al menos el 60% a 5 años de supervivencia en los últimos diez años [5 - 8].

El mecanismo por el cual se induce ANCA es todavía poco clara. Ciertos fármacos se han relacionado con la inducción de la ANCA y la aparición de la asociada a ANCA vasculitis (AAV) [9]. Recientemente, se ha descrito que una respuesta autoinmune puede ser inducida por la presencia de un péptido que es antisentido o complementarios a los autoantígenos, por ejemplo, PR3 [10]. Esta respuesta inmune puede inducir anti-idiotípica anticuerpos (autoanticuerpos) que una reacción cruzada con los autoantígenos. Otra hipótesis es partidaria de que las infecciones pueden desencadenar una respuesta ANCA [11]. Los mecanismos propuestos por la que las infecciones de romper la libre tolerancia puede incluir daños espectador, el develado de "oculta" la libre epítopos, determinante molecular y la difusión de mimetismo molecular [11].

Proteína choque térmico (HSP) 65 es un antígeno immunodominant a los microorganismos, y ya ha sido implicado en la patogénesis de vasculitides tales como la enfermedad de Kawasaki [12] y Behcet enfermedad [13]. El equivalente humano, hHSP60, ha sido implicado en autoinmunidad a través de mimetismo molecular, sobre la base del alto grado de homología con HSP65 de los microorganismos conduce a auto-reconocimiento de la proteína humana [14]. A su vez, Hsp60 acciones de homología de secuencia con OPG [15]. De este modo, las infecciones pueden desencadenar la respuesta contra la ANCA MPO a través de hHSP60. Para probar esta hipótesis, se determinó la presencia de anticuerpos contra la micobacteria hHSP60 y HSP65 (mHSP65) en pacientes con ANCA-MPO y los comparó a pacientes con PR3-ANCA y controles sanos (HC). Los resultados mostraron que los anticuerpos contra mHSP65 son más altos en comparación con AAV HC, y la lucha contra la hHSP60 anticuerpos son más elevados en pacientes con MPO-ANCA que en pacientes con PR3-ANCA y HC. Sin embargo, los ensayos adicionales no apoyar nuestra hipótesis de reactividad cruzada entre MPO-ANCA y hHSP60.

Métodos
Los pacientes

Retrospectivo de todos los pacientes identificados en nuestro registro biopsia renal [16, 17] con diagnóstico de glomerulonefritis crescéntica entre enero de 1977 y julio de 2003 sin evidencia de lupus eritematoso sistémico, nefropatía IgA, Henoch Schönlein purpura, post-infecciosa glomerulonefritis o la crioglobulinemia. Las muestras de suero, tomadas en el momento de la biopsia, se realizarán las pruebas de la presencia de ANCA, con arreglo a un procedimiento en varios que combina la inmunofluorescencia indirecta y directa con la captura de la enzima ensayos de inmunoabsorción ligado (ELISA) [18]. Por lo tanto, identificados 109 pacientes con AAV con demostrada por biopsia renal participación: 46 pacientes con ANCA-PR3 sólo (42%), 49 pacientes con ANCA-MPO sólo (45%), 4 pacientes con ambos-PR3 y MPO-ANCA (4 %) Y 10 pacientes con ANCA-MPO con la presencia de anti-membrana basal glomerular anticuerpos (9%). Sólo los pacientes que fueron positivos solo para PR3-o MPO-ANCA, y había suficiente suero disponible para todas las pruebas, se incluyeron (n = 86). Además, 40 controles sanos (HC) (personal de laboratorio) fueron probados para determinar el valor umbral para la lucha contra la hHSP60 prueba y, 69 HC fueron probados para determinar el valor umbral para la lucha contra la mHSP65 prueba. Este estudio se realizó de conformidad con la Declaración de 1997 de Helsinki de la Asociación Médica Mundial. Los datos demográficos de los pacientes y controles se presentan en el cuadro 1.

Sera

Las muestras de suero, tomadas en el momento de la biopsia, se utilizaron para determinar la presencia de anti-hHSP60 y anti-mHSP65 en pacientes con AAV. Estos sueros se habían almacenado a -80 ° C, en algunos pacientes durante más de 20 años. Sin embargo, cuando la prueba la respuesta de anticuerpos, no hubo diferencias en nivel de anticuerpos entre los pacientes incluidos en 2003 y los pacientes incluidos en años anteriores.

ELISA para la detección de anticuerpos contra la Hsp60 y micobacterias HSP65

HHSP60 recombinante (Stressgen, Victoria, Canadá) se ha diluido a 2 μ g / mL en el recubrimiento una solución tampón que contiene 0,1 M NaHCO 3 - (pH 9,6), y 50 μ l / así (es decir, 0,1 μ g / así) se incuban en los pocillos de microplacas ( Nunc MaxiSorp ™, Rochester, NY) la noche a 4 ° C. Control de los pozos fueron incubadas con recubrimiento de amortiguación por sí solo. Wells entonces se incubaron durante la noche a 4 ° C con 100 μ l / revestimiento así una solución tampón que contiene 1% de grado V de albúmina de suero bovino (BSA, Sigma, St Louis, MO) para bloquear la unión no específica. Las placas fueron lavadas luego 3 veces con PBS que contenía 0,05% de Tween 20 (PBS-T). Las placas fueron preincubated a temperatura ambiente con 200 μ l / pocillo de la preincubación de amortiguación, que contiene 0,05% de Tween 20 y el 1% de BSA en PBS, durante 1 hora. Después de lavar 2 veces con PBS-T, los pozos fueron incubadas por triplicado con el suero del paciente en un óptimo previamente establecidos dilución de 1:50, 50 μ l / así, en la incubación de amortiguación y de mantenerse la noche a 4 ° C. Al día siguiente, las placas se lavaron 5 veces con PBS-T e incubadas con cabra F (ab ') 2 anti-IgG humana (Fc)-peroxidasa de rábano conjugada (CAPPEL inmunobiológicos-ICN, Costa Mesa, CA), diluido 1:2000 incubación en buffer, por 2 horas a temperatura ambiente. Después de lavar 5 veces con PBS-T, 100 μ l de sustrato recién hechas (que contiene 0,5 mg / ml o-fenilendiamina (Sigma) y el 0,03% de H 2 O 2 en citrato / fosfato buffer, pH 4.9) se añadió a cada pocillo. Después de 10 minutos, la reacción fue detenido con 50 μ l 4N H 2 SO 4 y absorbencias se lee a 490 nm. Los resultados se expresan como anti-hHSP60 niveles en unidades arbitrarias (UA) / mL. Del presente, la media de la OD triplica fue corregido en función de la unión no específica por sustracción de la media de DO en los pozos sin revestir. A continuación, una curva estándar fue creado mediante la inclusión de ensayo en cada uno serial, 2-paso de dilución de 1:10 a 1:640 de una positiva muestra de suero con anticuerpos anti-hHSP60 reactividad. La muestra de suero sin diluir fue asignado arbitrariamente 100 AU / ml. Además, los resultados se expresan como positivos o negativos. Para establecer el valor umbral para esta prueba, la media UA / mL y la SD de 40 sueros de HC se determinó, y la de corte se fijó en la media + 2 SD.

Para la detección de anticuerpos contra mHSP65, esencialmente el mismo procedimiento se siguió. MHSP65 recombinante (Stressgen) fue diluido a 2 μ g / ml y recubierto en una concentración de 0,1 μ g /. El suero fue diluido 1:50 antes de la incubación. Para leer los resultados en la Unión Africana, una curva estándar fue creado tal y como se describe para la lucha contra el hHSP60 anticuerpos. Para establecer el valor umbral para esta prueba, la media UA / mL y SD de los sueros de 69 HC se determinó, y la de corte se fijó en la media + 2 SD.

Myeloperoxidase ensayos de inhibición

Para la prueba de reactividad cruzada entre MPO y hHSP60, el suero de un paciente ser positivo para ambos MPO-ANCA y anti-anticuerpos hHSP60 se incubó durante 30 minutos a 37 ° C con MPO hHSP60 o en concentraciones de 1, 3, 10 y 20 μ g / mL. El suero fue probado en el campo anti-hHSP60 ELISA, tal como se describe más arriba, o en el MPO-ANCA ELISA utilizando comercialmente disponibles kits de ELISA directo (Euro-Diagnóstica, Malmö, Suecia). Además, la absorción se realizaron pruebas en placas de ELISA que fueron recubiertas con hHSP60 o MPO y se incuban con el suero. Al día siguiente, o el segundo día, anti-hHSP60 reactividad en este pre-absorbe el suero se puso a prueba como se ha descrito anteriormente para la lucha contra la hHSP60 ELISA. Lamentablemente, este fue el único paciente de los cuales suficiente suero estuvo presente para realizar las pruebas descritas.

Los análisis estadísticos

Todos los datos se presentan como media [rango] a menos que se indique lo contrario. Los datos continuos entre los grupos se compararon mediante los rangos con signos de Wilcoxon y el test de Kruskal-Wallis test con Dunn's después de la prueba cuando proceda. Debido a la percepción de la pertinencia de los resultados, no sólo realizar Dunn's post-test para el análisis de subgrupos, sino también en comparación subgrupos utilizando los rangos con signos de Wilcoxon test. Correlaciones entre los datos se obtuvieron mediante correlación de Spearman. La odds ratio (OR) y el 95% intervalos de confianza (IC) fueron obtenidos mediante la prueba exacta de Fisher. Los análisis se realizaron con GraphPad Prism versión 3,00 y GraphPad INSTAT paquete de software de la versión 2.04a (GraphPad Software Inc, San Diego, CA). A dos caras valor de p <0,05 fue considerado para indicar la significación estadística.

Resultados

Ochenta y seis pacientes consecutivos con AAV (44 PR3-42 y MPO-ANCA) fueron incluidos en el estudio. La edad media fue 62,2 ± desviación estándar de 13,5 (65,9 ± 10,9 a MPO-ANCA y 59,7 ± 15,2 a PR3-ANCA, P = 0,07). Cincuenta y nueve pacientes (69%) eran hombres (27 pacientes (64%) en MPO-ANCA y 32 pacientes (73%) en PR3-ANCA, P = 0,49).

Anti-micobacteriana HSP65 anticuerpos son elevados en MPO-ANCA en comparación a controles sanos

En pacientes con AAV, de lucha contra la mediana mHSP65 nivel fue 42,5 UA / ml [0-500], en comparación con 22 AU / ml [0-430] en controles sanos (P = 0,008, figura 1]. En MPO-ANCA, anticuerpos fueron significativamente mayores (44 UA [7-500]) en comparación con HC (P = 0,006, figura 1]. En los pacientes con ANCA-PR3, hubo una tendencia a un mayor nivel de anticuerpos (42,5 UA [0-500] en comparación con HC (P = 0,10). Con una línea de corte valor de 88,5 UA / mL, 13 de 69 HC ( 19%) fueron positivos para anti-mHSP65 en comparación con 23 de 86 (27%) pacientes con AAV (P = NS). Once de 44 (25%) pacientes con PR3-ANCA fueron positivos para anti-mHSP65 en comparación con 12 de 42 pacientes con MPO-ANCA (29%) (P = NS). A continuación, confirma la especificidad de la anti-anticuerpos mHSP65 por inmunotransferencia. Con este fin se seleccionaron 5 sueros que fueron positivos por ELISA. Todos los sueros reaccionaron con un 65 kD en una banda de inmunoblot recombinante con mHSP65 (datos no presentados).

Anti-Hsp60 anticuerpos humanos son elevados en MPO-ANCA en comparación con PR3-ANCA y controles sanos

En pacientes con AAV, de lucha contra la mediana hHSP60 nivel es de 18 UA / ml [0-319], frente a un 18,5 UA / ml [0-98] en controles sanos (P = NS, figura 2]. En MPO-ANCA, anticuerpos fueron significativamente mayores (32,5 UA [0-319]) en comparación con HC (P = 0,02) y PR3-ANCA (13 UA [0-79]) (P <0.0001, figura 2]. Los pacientes con ANCA-PR3 no tienen mayores niveles de anticuerpos que HC. Con un valor umbral de 80 UA / ml, 2 de 40 HC (5%) fueron positivos para anti-hHSP60 en comparación con 12 de 86 (14%) pacientes con AAV (P = NS). Uno de 44 (2,3%) pacientes con PR3-ANCA fue positivo para anti-hHSP60 en comparación con 11 de 42 pacientes con ANCA-MPO (26%) (P = 0,001, OR 15,3, IC del 95%: 1,9 - 124). A continuación, nos confirmó la especificidad de la anti-anticuerpos hHSP60 por inmunotransferencia. Con este fin se seleccionaron 5 sueros que fueron positivos por ELISA. Todos los sueros reaccionaron con una banda de 60 kD en un inmunoblot recombinante con hHSP60 así como con las especies bovina Hsp60. Este último indica que el antígeno recombinante y de nativos Hsp60 compara así (datos no presentados).

Myeloperoxidase no inhibe de lucha contra la reactividad de anticuerpos hHSP60

Para probar si hHSP60 anti-anticuerpos en realidad una reacción cruzada con MPO, hemos realizado ensayos de inhibición incubando el suero de pacientes con el mayor anti-hHSP60 respuesta con MPO o hHSP60 y pruebas para hHSP60 MPO y reactividad. Incubación con el aumento de las concentraciones de OPG inhibe la MPO-ANCA en una respuesta dependiente de la dosis de forma (Figura 3a). Sin embargo, la incubación de suero con hHSP60 no inhibió la MPO-ANCA reactividad (Figura 3a). Además, MPO fue incapaz de inhibir la lucha contra la hHSP60 reactividad de anticuerpos (figura 3B]. Sin embargo, la incubación con hHSP60 no inhibió la lucha contra la hHSP60 respuesta (figura 3B]. Para poner a prueba la capacidad de inhibir hHSP60 anti-hHSP60 reactividad, la absorción de las pruebas fueron ejecutadas. Resultados ahora mostró inhibición de la lucha contra la hHSP60 respuesta de hHSP60 pero no por MPO (figura 4].

Seguimiento de anti-hHSP60 niveles

A fin de excluir de reactividad cruzada entre hHSP60 y MPO-ANCA, si hemos probado anti-hHSP60 niveles de anticuerpos se presente sólo si hay presencia de MPO-ANCA. En el paciente con MPO-ANCA y la más alta de lucha contra la hHSP60 nivel, el seguimiento de muestras de suero se disponía a realizar pruebas de la presencia de anti-hHSP60. Como se muestra en el gráfico 5, anti-hHSP60 redujo los niveles análogos a MPO-ANCA los niveles de una vez ha comenzado el tratamiento, pero aumentó ligeramente con la reducción del tratamiento, mientras que MPO-ANCA niveles sigue siendo indetectable.

Correlación entre la lucha contra la mHSP65 y anti-hHSP60 pero no entre MPO-ANCA y anti-anticuerpos hHSP60

Por último, hemos comprobado si existe correlación entre niveles de anticuerpos contra mHSP65, hHSP60, y MPO. Existe una correlación entre la altura de los niveles de anticuerpos contra mHSP65 y hHSP60 (Spearman r = 0,32, P = 0,003), pero no existe correlación entre MPO-ANCA y anti-hHSP60 (Spearman r = -0,064, p = 0,69). Por otra parte, no hubo correlación entre la lucha contra la mHSP65 y MPO-ANCA (Spearman r = 0,074, P = 0,65).

Discusión

El mecanismo por el cual se induce ANCA son todavía poco claras. Una hipótesis es partidaria de que las infecciones pueden desencadenar una respuesta ANCA [11]. La hipótesis de que las infecciones pueden desencadenar la respuesta contra la ANCA MPO a través de hHSP60. Se encontró que el anti-hHSP60 se encuentran casi exclusivamente en los pacientes con ANCA-MPO en comparación con PR3-ANCA, el apoyo a nuestra hipótesis. Sin embargo, no hubo correlación entre MPO-ANCA y anti-hHSP60 niveles de anticuerpos, y la inhibición de la absorción y ensayos no mostraron reactividad cruzada entre hHSP60 y MPO-ANCA. Por otra parte, cuando se determinó la lucha contra la mHSP65 respuesta a AAV y HC, no se encontraron diferencias entre los pacientes con ANCA-MPO y los pacientes con ANCA-PR3, y sólo una débil correlación entre el anti-hHSP60 y los niveles de anticuerpos anti-mHSP65 los niveles. Sin embargo, no todos los pacientes que fue positivo para anti-hHSP60 presentaron anticuerpos contra mHSP65, lo que sugiere que la lucha contra la hHSP60 y anti-mHSP65 no son los mismos anticuerpos, y que la lucha contra el hHSP60 respuesta no puede ser activado al mismo tiempo con un anti-mHSP65 respuesta .

El aumento de anti-HSP niveles de anticuerpos, como se observa en el presente estudio, podría ser artificial debido a dos razones. En primer lugar, los pacientes con varias enfermedades autoinmunes sistémicas se sabe que han aumentado los niveles de IgG circulantes y esto podría dar lugar a un aumento simultáneo de anticuerpos frente a, por ejemplo, HSP65 y Hsp60. Aunque el análisis de los niveles de IgG no es un procedimiento estándar para el diagnóstico de trabajo de un paciente AAV, IgG se dispone de datos para un subconjunto de pacientes incluidos y todos estaban dentro del rango normal (datos no presentados). Por otra parte, a nuestro conocimiento, tales hipergammaglobulinemia no se ha descrito para AAV. En segundo lugar, desde controles sanos en el presente estudio fueron de menor que la edad de los pacientes AAV, el aumento de los niveles de anticuerpos frente a Hsp60 y HSP65 podría ser debido al envejecimiento. Una vez más, esto no es muy probable, ya que no había correlación alguna (R 2 <0,1) entre los títulos de anticuerpos y la edad (datos no presentados). Por lo tanto, concluir que los niveles de anticuerpos a Hsp60 y HSP65 son realmente AAV aumentado en los pacientes en comparación con los controles sanos.

El compartida de homología de secuencia descrita entre hHSP60 MPO y es un punto de vista teórico, basado en la secuencia de aminoácidos. Esta secuencia similitud tiene una longitud de 17 aminoácidos y está presente en la pesada cadena de myeloperoxidase [15]. La secuencia está presente en una región de myeloperoxidase que se reconoce como un epítopo de MPO-ANCA en algunos pacientes [19]. Sin embargo, se desconoce si hHSP60 anti-anticuerpos se unen a la correspondiente secuencia de aminoácidos de hHSP60. Para probar si hHSP60 anti-anticuerpos en realidad una reacción cruzada con MPO, hemos realizado ensayos de inhibición incubando el suero de pacientes con el mayor anti-hHSP60 respuesta con MPO o hHSP60 y pruebas para hHSP60 MPO y reactividad. No hemos podido detectar una disminución de la reactividad hHSP60 cuando el suero se incubaron con OPG, lo que sugiere que, si bien existe una homología de secuencia, epítopos reconocidos por MPO-ANCA son distintos de los reconocidos por hHSP60 anti-anticuerpos. Obviamente, esta prueba no puede excluir completamente que la reactividad cruzada que existe en otros pacientes, aunque la falta de correlación entre MPO-ANCA y anti-hHSP60 también no admite este tipo de reactividad cruzada.

Los anticuerpos contra hHSP60 se asocian con la presencia y severidad de la aterosclerosis [20 - 22], aunque esto ha sido impugnada por otros [23]. Curiosamente, hemos encontrado niveles elevados de anti-anticuerpos hHSP60 sólo en pacientes con MPO-ANCA. Una explicación para este hallazgo podría ser que el diagnóstico de MPU-AAV se ve a menudo demorada, y esto puede dar lugar a la inflamación prolongada y, finalmente, a niveles elevados de anti-MPO hHSP60 en-ANCA pacientes en comparación con PR3-ANCA pacientes. Nuestros datos podrían indicar que la enfermedad cardiovascular es más frecuente en pacientes con MPO-ANCA. Sin embargo, datos de seguimiento en nuestro estudio pequeño no lo confirman.

Curiosamente, la lucha contra la reactividad hHSP60 no puede ser inhibida por nuestro primer ensayo de inhibición. Esto puede deberse a la naturaleza del ensayo de inhibición. En el primer ensayo, hHSP60 se añadió a la del suero anti-hHSP60 positiva del paciente, mientras que en el segundo ensayo, hHSP60 fue revestido a la placa ELISA. Este segundo ensayo demostró claramente la inhibición de la lucha contra la hHSP60 respuesta. Una explicación para este fenómeno puede ser que la lucha contra la hHSP60 anticuerpos no están en condiciones de obligar a que el líquido hHSP60 fase, pero puede obligar a hHSP60 fase sólida, como lo demuestra el segundo ensayo de inhibición, y la positiva respuesta de anticuerpos demostrado en la lucha contra la hHSP60 ELISA.

Conclusión

Hemos demostrado que los anticuerpos contra hHSP60 se encuentra elevado en los pacientes con ANCA-MPO en comparación con PR3-ANCA. Estos hallazgos sugieren un papel de las infecciones en la patogénesis de MPO AAV-a través de mimetismo molecular entre bacterias HSP65, Hsp60 humana y MPO. Ensayos adicionales de absorción, sin embargo, no apoyan esta hipótesis. Si existe una relación entre la lucha contra la hHSP60 y las enfermedades cardiovasculares en pacientes con MPO-ANCA aún no se ha estudiado.

Conflicto de intereses

Los autores declaran que no tienen intereses en conflicto.

Autores de las contribuciones

MCS participado en el diseño y coordinación del estudio, realizó el análisis estadístico y redactó el manuscrito. RT llevó a cabo los distintos ensayos y ayudó a redactar el manuscrito. PvP participó en la coordinación del estudio y revisó el manuscrito de gravedad. JGMCD participado en el diseño del estudio y ayudó a redactar el manuscrito. JWCT concebido del estudio, participaron en su diseño y ayudó a redactar el manuscrito.

Agradecimientos

Nos gustaría dar las gracias al Prof Dr PJC van Breda Vriesman, H. van Rie y P. Heerings, Clínica y Experimental de Inmunología, Hospital Universitario de Maastricht, por la excelente colección de material de estudio y todos los que participan médicos y pacientes por sus generosas contribuciones al este documento (incluidas las siguientes médicos Dr F. de Heer y el doctor GH Verseput, Maasland Ziekenhuis, Sittard, Dr W. Grave, el Dr J. Wirtz, y el Dr S. Boorsma, San Laurentius Ziekenhuis, Roermond; Dr J. Wolters y el doctor Frenken LAM, Atrium Medisch Centrum, Heerlen; Dr E. Zeppenfelt, Landgraaf; Prof Dr Leunissen KML, Hospital Universitario de Maastricht, Maastricht).

Sra Marjan Slot cuenta con el apoyo de una subvención de ZonMW.