Journal of Negative Results in Biomedicine, 2006; 5: 10-10 (más artículos en esta revista)

Estudio del impacto de perilipin polimorfismos en una población francesa

BioMed Central
Aline Meirhaeghe (Aline.Meirhaeghe-Hurez @ pasteur-lille.fr) [1], Séverine Thomas (thomasseverine@wanadoo.fr) [1], Frédéric Ancot (frederic.ancot @ ibl.fr) [1], Dominique Cottel ( Dominique.Cottel @ pasteur-lille.fr) [1], Dominique Arveiler (monica@medecine.u-strasbg.fr) [2], Jean Ferrières (ferriere@mail.cict.fr) [3], Philippe Amouyel (Philippe . Amouyel@pasteur-lille.fr) [1]
[1] INSERM, U744, Lille; Institut Pasteur de Lille, Lille, Université de Lille 2, Lille, Francia
[2] Departamento de Epidemiología y Salud Pública, Facultad de Medicina de Estrasburgo, Francia
[3] INSERM, U558, Faculté de Médecine, Toulouse, Francia

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Resumen
Fondo

Perilipins son proteínas localizadas en la superficie de las gotas de lípidos en adipocitos, esteroides células productoras y ruptura de placas ateroscleróticas que desempeñan un papel en la regulación del depósito de triglicéridos y la movilización. Hemos investigado si perilipin gen polimorfismos se asociaron con obesidad, diabetes tipo 2, y de sus correspondientes variables (variables antropométricas, plasma la leptina, lípidos, glucosa y las concentraciones de insulina) en una sección transversal muestra aleatoria de 1120 francés hombres y mujeres con edades comprendidas entre 35 y 65 años, incluyendo 227 obesos (IMC ≥ 30 kg / m 2) y 275 de la diabetes tipo 2 temas.

Resultados

Entre 7 perilipin polimorfismos prueba, sólo 2 (rs4578621 y rs894160) de ellos fueron frecuentes suficiente como para ser plenamente investigados y que el genotipo muestra utilizando la PCR-RFLP método. No hay asociaciones significativas podrían encontrarse entre cualquiera de estos polimorfismos y los fenotipos estudiados.

Conclusión

El rs4578621 y rs894160 polimorfismos del gen perilipin no son los principales determinantes genéticos de la obesidad y la diabetes tipo 2 relacionada con fenotipos en una muestra aleatoria de francés hombres y mujeres.

Fondo

Perilipins proteínas son fosforilados en adipocitos localizados en la superficie de las gotas de lípidos en adipocitos, esteroides células productoras y ruptura de placas ateroscleróticas [1 - 4]. Estas proteínas son esenciales en la regulación de la deposición de triglicéridos y la movilización [5 - 7]. Cuando la proteína quinasa A es activado, se convierte en un perilipin fosforilados y translocates fuera de la gota de lípidos, lo que permite que la hormona sensible a la lipasa para hidrolizar el adipocito triglicéridos básico [8, 9]. Por lo tanto, perilipin un aumento de triglicéridos celulares de almacenamiento de la disminución de la tasa de hidrólisis de triglicéridos. Los ratones knockout para el gen se perilipin magra, han aumentado la lipólisis basal y son resistentes a la dieta inducida por la obesidad [10, 11]. Sin embargo, estos ratones también desarrollar intolerancia a la glucosa y resistencia a la insulina más fácilmente, probablemente debido a los elevados niveles de no-esterificados ácidos grasos.

En varios estudios se determinó el nivel de expresión perilipin de acuerdo con la obesidad. Dos estudios encontraron sujetos obesos muestran niveles más bajos de perilipin magra que las personas [7, 12] mientras que otro estudio mostró perilipin ARNm y proteínas fueron elevados en sujetos obesos [13]. Qi et al. anteriormente mostró que los polimorfismos en el locus perilipin se asociaron con obesidad relacionados con fenotipos en español de América y las mujeres blancas [14, 15]. Por otra parte, demostraron que un determinado haplotipo se asoció con un mayor riesgo de obesidad en los malayos e indios, pero no en chino [16]. En este estudio, se analizó la variabilidad genética del gen perilipin y posibles asociaciones con la obesidad, la diabetes tipo 2 y las formas conexas de fenotipos en un francés muestra aleatoria de población.

Resultados

Tabla 1 se describen las condiciones genotipo y frecuencias de los 7 a prueba PLIN SNPs (expedidos a partir de la base de datos NCBI dbSNP). ADN de 90 individuos expedidos a partir de la población de estudio se utilizó para calcular el SNP frecuencias. El rs8179072 (A386V), rs8179070 (R274W), rs3743373 (E293K) SNPs no se detectaron a todos. Sólo el 1 heterocigotos para la rs6496589 (Pro194Ala) y rs8179071 (Ser348Leu) SNPs se puede encontrar (raro alelo frecuencia = 0,6%). Por lo tanto, no proseguirá el genotipo de estos SNPs. El alelo raras frecuencias de la rs4578621 (5'UTR -1234 C> G) y rs894160 (intrón 6) SNPs fueron 7,6 y 30% respectivamente. Por lo tanto, genotipo estos dos SNPs en el conjunto de la población de estudio (n = 1120). Hubo 958 (85,5%) GG, 153 (13,7%) GA, 9 (0,8%) y AA 556 (49,6%) GG, 470 (42,0%) y GA 94 (8,4%) para la AA rs4578621 y rs894160 SNPs, respectivamente, . Estas frecuencias no eran diferentes de los esperados bajo las frecuencias de Hardy-Weinberg.

Se comparó la distribución del genotipo de los dos SNPs de acuerdo a las categorías de IMC (peso normal: IMC <25 kg / m 2, con sobrepeso: 25 ≤ IMC <30 kg / m 2 y obesidad: IMC ≥ 30 kg / m 2) y la condición de diabetes en los hombres y mujeres por separado (cuadro 2]. No se observaron diferencias significativas en la frecuencia de SNPs puede ser detectado entre el IMC o la diabetes categorías.

Cuadro 3 y 4 muestran los efectos de la PLIN rs4578621 y rs894160 SNPs, respectivamente, en antropométricas y las variables biológicas en los hombres y mujeres por separado. Los medios de variables antropométricas (peso, IMC, cintura y cadera, o cintura-cadera), los lípidos plasmáticos (colesterol del plasma, HDL-colesterol, LDL-colesterol, triglicéridos) o las concentraciones de insulina no fueron estadísticamente diferentes entre los grupos genotipo ni en hombres ni en mujeres. Los hombres portadores del genotipo AA raras de la SNP ha rs894160 más bajos de glucosa en plasma en ayunas los niveles más temas GG (5,27 ± 0,64 vs 5,56 ± 0,90 mmol / L o 1,65 ± 0,12 vs 1,71 ± 0,15 log-transformado los valores de AA vs GG hombres, respectivamente, , P = 0,04 cuando ajustado para covariables).

Entre los dos SNPs, el desequilibrio en el ligamiento genético D 'fue 0,87 (p <0.0001), el alelo G del SNPS rs4578621 estar asociado con el alelo A del rs894160 SNP, y el r 2 fue de 0,15. Por lo tanto, tres haplotipos que abarca el 99% de los posibles haplotipos (haplotipo frecuencias, CG: 0,70, CA: 0,22, GA: 0,07). No existió asociación podría encontrarse entre los haplotipos y los fenotipos estudiados (datos no presentados).

Discusión

En el presente estudio, que evaluó el impacto de la variabilidad genética del gen PLIN a la obesidad, la diabetes tipo 2 y las formas conexas de fenotipos en una muestra de hombres y mujeres emitida desde un francés muestra aleatoria de población (n = 1120). El genotipo de dos SNPs comunes (rs4578621 y rs894160, frecuencia = 7,6 y 30% respectivamente) se realizaron. No hay asociaciones significativas podrían ser detectadas entre estos SNPs y las variables antropométricas, plasma la leptina, lípidos, glucosa y las concentraciones de insulina, incluso cuando se utilizan los análisis de haplotipos.

La única asociación significativa que encontramos en nuestro estudio fue que los hombres llevar el genotipo AA raras de la rs894160 SNP (también called11482 G> A) tenía una participación importante en plasma en ayunas más bajos los niveles de glucosa en que GG temas, pero esta diferencia fue estadísticamente límite (p = 0,04) y clínicamente marginal (alrededor del 5% por debajo) y, por consiguiente, esta asociación no es clínicamente de gran trascendencia y, probablemente, obtenidos por el peligro. Por otra parte, este polimorfismo no se asoció con diabetes tipo 2 ni en los hombres, ni a las mujeres en nuestro estudio. A pesar de que el 11482 G> A SNP parece tener un impacto funcional en la actividad de proteínas perilipin como Mottagui-Tabar et al. informó de que el alelo A se asoció con una mejora de basal y noradrenalina inducida por la lipólisis en humanos células de grasa subcutánea [7], no parece tener un impacto importante en las poblaciones humanas francés.

Otros estudios han descrito previamente asociaciones entre PLIN SNPs y la obesidad relacionada con fenotipos, especialmente la rs894160 (11482 G> A) SNP. Qi L et al. mostró que un haplotipo específico PLIN se asoció con un mayor riesgo de obesidad en los malayos, indios y blancos (odds-ratio en torno a 1,7) [14 - 16]. En los blancos, los PLIN 11482 G> A se asoció con riesgo de obesidad en las mujeres pero no en los hombres. No hemos podido reproducir esta asociación en nuestro estudio francés. Aunque nuestro estudio lleva a un gran número de sujetos (573 hombres, 547 mujeres), su poder estadístico, puede aún ser insuficientes para detectar las pequeñas asociaciones. Esta hipótesis está respaldada por un cálculo a posteriori lo que indica que, según observó el alelo distribución, el tamaño de la muestra tiene suficiente potencia estadística (1 - β ≥ 80%) para detectar un odds-ratio por encima de 2,4 y 2,1 para la obesidad y el 2,1 y el 1,8 por diabetes tipo 2 para la rs4578621 y rs894160 SNPs, respectivamente. Por lo tanto, las principales asociaciones sólo podrían ser detectadas. Por otra parte, no podemos excluir que otros PLIN SNPs que no estudiar, considerados individualmente o en combinaciones haplotipo, podrían estar asociadas con la obesidad fenotipos.

Conclusión

En conclusión, la PLIN rs4578621 y rs894160 polimorfismos no parecen ser los principales determinantes genéticos de la obesidad y la diabetes tipo 2 el riesgo en francés hombres y mujeres. Otros estudios más amplios y / o en otros PLIN SNPs posible que tenga que ser estudiado para concluir definitivamente sobre el impacto de la variabilidad genética PLIN sobre enfermedades metabólicas.

Métodos
A los sujetos de estudio

Los participantes fueron reclutados en el marco de la OMS-MONICA población encuesta realizada entre 1995 y 1997 en la Comunidad Urbana de Lille en el norte de Francia. La muestra incluyó sujetos de edad 35-65 años, seleccionados al azar de las listas electorales para obtener 200 participantes para cada género y 10 años de edad [17, 18]. Un total de 601 hombres y 594 mujeres fue reclutado. A nuestro entender, los individuos no estaban relacionados. El Comité Ético del Hospital Universitario de Lille (CHRU de Lille), aprobado el protocolo.

Después de firmar un consentimiento informado, los participantes se les administró un cuestionario estándar y las mediciones físicas fueron hechas por una enfermera. El nivel de actividad física se define como: caminar o andar 15 minutos o más por día, y / o levantamiento o llevar objetos pesados en el trabajo diario, y / o haciendo deporte o ejercicio físico más de 2 horas a la semana. Actualidad fumadores de cigarrillos se definen como sujetos de presentación de informes por lo menos un cigarrillo por día. Total consumo de alcohol se expresa como la suma de ml de alcohol por semana a partir de vino, cerveza, sidra y licores.

Las medidas antropométricas incluyen el peso corporal, cintura y cadera. IMC fue calculado con arreglo a la fórmula de Quetelet. La presión arterial se midió en el brazo derecho, con el objeto en una posición sentada y después de un mínimo de 5 minutos de descanso, utilizando un modelo normalizado esfigmomanómetro de mercurio. El valor medio de dos lecturas de presión arterial se tuvo en cuenta. De esta muestra, 232 sujetos fueron obesos (IMC ≥ 30 kg / m 2).

Las personas con diabetes tipo 2 (n = 275) fueron identificadas sobre la base de un diagnóstico médico y / o glucemia en ayunas ≥ 7 mmol / L (1,26 g / L) y / o sobre la existencia de un tratamiento específico o la dieta [19] Lille en la muestra y en otras dos muestras representante francés (Estrasburgo, Toulouse) que participan a las encuestas de factores de riesgo de la OMS-MONICA proyecto. Control de temas para la diabetes tipo 2 había glucemia en ayunas inferior a 6,1 mmol / L (1,10 g / L) y no tiene tratamiento específico o la dieta para la diabetes tipo 2.

Métodos de laboratorio

Una muestra de sangre de 20 mL se preparó en EDTA disódico después de los sujetos tenían en ayunas durante al menos 10 horas. Lipídico y los niveles de lipoproteínas fueron medidos en un laboratorio central del Hospital Purpan Laboratorio de Bioquímica (Toulouse). La calidad biológica de las medidas se evaluó en el marco del proyecto MONICA. La glucosa se midió un nivel de glucosa hexokinase método (DuPont Dimensión, Bruselas, Bélgica). Concentraciones plasmáticas de insulina se midió por radio-inmunoensayo (Medgenix Diagnóstico, Bruselas, Bélgica). Plasmáticas de colesterol total y triglicéridos fueron determinados por método enzimático (DuPont Dimensión Bruselas, Bélgica). Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) se midió el colesterol después de sodio phosphotungstate / cloruro de magnesio precipitación (Boehringer Mannheim, Mannheim, Alemania). Lipoproteínas de baja densidad (LDL) se calculó con la ecuación de Friedewald. Plasma los niveles de leptina se midieron por radio-inmunoensayo (RIA Humanos leptina kit, Wak-Chemie, médico GmbH, Alemania).

De aislamiento del ADN y genotipado

ADN genómico fue extraído a partir de glóbulos blancos aislados de 20 ml de sangre mediante una venta en el comercio de aislamiento del ADN kit (kit de extracción de ADN, Stratagene, La Jolla, CA, EE.UU.). ADN genómico estaba disponible para 1155 temas. El PCR y genotipificación condiciones de SNPs (polimorfismos de nucleótido único) se describen en el cuadro 1. Un total de 1120 sujetos fueron genotipo para la PLIN rs4578621 y rs894160 SNPs.

Los análisis estadísticos

Chi-cuadrado análisis o pruebas exacta de Fisher se utilizaron para comparar el genotipo y el alelo distribuciones entre los grupos. Comparación de las diferencias entre el genotipo grupos se pusieron a prueba utilizando un modelo lineal general (proc GLM). Variables de ajuste fueron: edad, el alcohol, el tabaquismo, y la actividad física para la variables antropométricas y la edad, IMC, el alcohol y el tabaco para las variables biológicas. Un modelo dominante se puso a prueba para el SNP rs4578621 debido al bajo número de homocigosis para el alelo raro. Un dominante y un recesivo modelo se probaron para la rs894160 SNP. Los análisis se realizaron con el software estadístico SAS liberación 8 (SAS Institute Inc, Cary, NC). Haplotipo análisis se basa en la máxima verosimilitud descrito en el modelo y vinculada a la SEM algoritmo [20, 21] y se lleva a cabo utilizando el software desarrollado por el INSERM U525, Paris, Francia (disponible en http://genecanvas.ecgene.net/downloads . PHP]. Significación estadística se definió en el 5%. Potencia de cálculo se hizo con el Epi Info 6,04 software disponible en http://www.cdc.gov/epiinfo/. La potencia estadística (1 - β) se fijó por encima del 80%.

Conflicto de intereses

Los autores declaran que no tienen intereses en conflicto.

Autores de las contribuciones

FA, ST genotipo muestras de la población. AM analizados los datos y escribió el documento. DC, DA, JF y PA inscritos los participantes y contribuyó a escribir el documento.

Agradecimientos

Estas encuestas de población con el apoyo irrestricto de las subvenciones del Conseil Régional du Nord-Pas de Calais, ONIVINS, Parke-Davies Laboratory, la Mutualidad Générale de l'Education Nationale (Mgen), Groupe Fournier, el Réseau National de Santé Publique, la Dirección Générale de la Santé, el Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM), el Instituto Pasteur de Lille, la Unité d'Evaluación du Centre Hospitalier Universitaire et de Lille, el Centre d'Examen de Santé de Estrasburgo, el CPAM de Sélestat y la Federación de Cardiologie Régionale d'Alsace. La Fundación de Francia es también reconocido por su apoyo financiero.