Journal of Experimental & Clinical Assisted Reproduction, 2006; 3: 5-5 (más artículos en esta revista)

No ventaja del láser con ayuda de más convencionales de inyección intracitoplasmática de espermatozoides: un ensayo controlado aleatorio [NCT00114725]

BioMed Central
S Kevin Richter (kevin.richter @ integramed.com) [1], Alana Davis (alanadavis100@hotmail.com) [1], Jennifer Carter (jennifer.carter @ integramed.com) [1], Stephen J Gases de Efecto Invernadero (stephen. greenhouse@integramed.com) [1], Gilbert L Mottla (gilbert.mottla @ integramed.com) [1], Michael Tucker J (michael.tucker @ integramed.com) [1]
[1] Shady Grove fecundidad reproductiva Centro de Ciencias, Rockville, MD, 20850, EE.UU.

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Resumen
Fondo

La inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI) es un componente del tratamiento de la infertilidad a menudo empleados convencionales cuando la fertilización in vitro tiene pocas posibilidades de prosperar. A pesar de buenos resultados clínicos con ICSI, el procedimiento es generalmente asociada con la degeneración de un porcentaje importante (aproximadamente un 10%) de los tratados ovocitos. La causa de esta degeneración sigue siendo poco clara. La especulación de que los daños causados por los ovocitos de compresión durante el procedimiento de inyección puede ser responsable ha conducido al desarrollo de una nueva técnica conocida como láser asistida por ICSI. Este procedimiento consiste en perforar un pequeño agujero a través de la zona pelúcida con un láser antes de la inyección de esperma. Los estudios preliminares han sugerido que por láser asistida ICSI Mayo reducir drásticamente las tasas de degeneración de los ovocitos. El objetivo de este estudio fue evaluar si las ventajas del láser con ayuda de ICSI puede ser verificada a mayor, menos-grupo seleccionado de pacientes.

Métodos

Los ovocitos recuperados de 59 pacientes programados para ICSI fueron divididos aleatoriamente en la igualdad de trato y los grupos de control. Los ovocitos en el grupo de tratamiento fueron inseminadas por láser asistida ICSI, mientras que los ovocitos en el grupo control fueron inseminadas por ICSI convencional. Las variables de resultado (ovocito y la degeneración de fertilización, el número de células de embriones y la fragmentación en los días 2 y 3, y la compactación y la formación de las tasas de blastocistos) se compararon entre los grupos de tratamiento y control de muestras apareadas-t-test. El análisis de subgrupos se realizó de acuerdo a la zona pelúcida y oolemma rotura patrones.

Resultados

No se observaron diferencias significativas entre el tratamiento y control de los grupos se observó a ninguna de las variables de resultado medido. Sin embargo, la fragilidad de zonae pellucidae se asociaron significativamente con la calidad del embrión más pobres, frágiles y oolemmas que rompió fácilmente a la inserción de la aguja de inyección se asociaron significativamente con una mayor tasa de degeneración de los ovocitos. Sin embargo, también hubo ninguna entre las diferencias de tratamiento en los resultados clínicos del paciente dentro de estas subpoblaciones.

Conclusión

Contrariamente a anteriores informes basados en pequeños tamaños de muestra, los resultados de este estudio sugieren que no existe un beneficio de láser asistida ICSI, ya sea para la población general de pacientes ICSI, o para los pacientes propensos a la zona pelúcida o oolemma fragilidad.

Fondo

La inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI), un método de la fecundación in vitro (FIV) en el que un solo esperma se introduce directamente al citoplasma de un ovocito maduro, ha revolucionado el tratamiento de la infertilidad masculina. Desde la primera notificación de embarazos y nacimientos en 1992 [1], ICSI se ha convertido en el tratamiento de elección para el factor de infertilidad masculina. Además de esta indicación original, el uso de ICSI desde entonces se ha expandido a una variedad de otras aplicaciones, tales como cuando la fertilización es escasa o inexistente siguientes convencional de inseminación in vitro, cuando se utilizan los espermatozoides criopreservados, y cuando diagnóstico genético preimplantacional para enfermedades monogenetic está previsto . Algunos autores incluso han defendido el uso generalizado de ICSI para todos los pacientes que se someten a fertilización in vitro [2]. La inyección intracitoplasmática de esperma se utilizan en más de la mitad de todos los procedimientos ART fresco utilizando los pacientes de los propios huevos realizado en los Estados Unidos durante el año 2002 [3]. Habida cuenta de este uso generalizado de la ICSI, las modificaciones que mejoran los resultados clínicos de este procedimiento podría beneficiar a un gran segmento de la población de pacientes.

Desde su creación, ICSI se ha llevado a cabo por la penetración mecánica de la zona pelúcida y el oolemma de un vaso aguja a través del cual el esperma se inyecta en el citoplasma. Aunque la eficacia de este procedimiento ha quedado claramente demostrado [1, 4, 5], ICSI es típicamente asociado con los tipos de degeneración de los ovocitos que van del 5% al 19% [1, 4, 6 - 9]. Las razones de esta degeneración de los ovocitos no están claros. Observaciones de la zona pelúcida de ovocitos de microscopía electrónica de barrido no reveló zona fragmentación durante el procedimiento, y demostró que la inyección agujero se cierra inmediatamente después de que la aguja se retira, con el lugar de la inyección es casi indetectable 15 minutos más tarde [10]. De este modo, zona daño no parece ser la causa de ICSI inducida por la degeneración de oocitos. La mecánica de compresión y distorsión de los ovocitos que comúnmente ocurre, en diversos grados, durante la inyección es otra fuente potencial de daños conduce a la degeneración de oocitos. Algunos ovocitos pueden ser más propensas a daños causados por el procedimiento ICSI que otros. Por ejemplo, se ha informado de que después de la degeneración de los ovocitos ICSI tasas son significativamente más altos para los ovocitos con un oolemma frágil que se rompe fácilmente a la inserción de la aguja de inyección que para otros ovocitos [6, 7].

Un nuevo enfoque de pre-perforación de un agujero a través de la zona pelúcida con un láser antes de ICSI ha sido informado recientemente [11 - 14]. Este enfoque alternativo, llamado por láser asistida ICSI, permite la inserción de la aguja de inyección de esperma con menos distorsión de los ovocitos y por lo que puede ser menos traumática. Rienzi et al. [11] por primera vez un embarazo mediante láser asistida ICSI en una pareja con cuatro convencionales ICSI anteriores fracasos y pobres ovocito supervivencia. Tomaron nota mínima deformación ovocito con el uso del láser con ayuda de ICSI, y la supervivencia de 8 de los 13 ovocitos en metafase II recuperados y se inyecta. Dos pequeños estudios aleatorios de pacientes con una historia previa de las altas tasas de degeneración de los ovocitos (> 20%) tras la ICSI, o que producen ovocitos con oolemmas frágil, dado dramáticas reducciones estadísticamente significativas en las tasas de degeneración de los ovocitos [12, 15] (0,5% frente al 16% y 2% versus 14%, respectivamente) y la mejora de la calidad del embrión [12] con el uso del láser con ayuda de ICSI convencional en comparación con ICSI. Similares beneficios han sido reclamados por piezoeléctricos ICSI [16].

El objetivo de este estudio fue evaluar los beneficios del láser con ayuda de ICSI no seleccionados entre los pacientes sometidos a fecundación in vitro con ICSI. Se describen los resultados de la mayor ensayo aleatorio examinar por láser asistida ICSI comunicado todavía, incluidas las comparaciones de fertilización de ovocitos y las tasas de degeneración, número de células y la fragmentación en materia de cultura los días 2 y 3, y la compactación y la formación de las tasas de blastocisto.

Métodos

Los pacientes fueron tratados inscritos y tras el debate del estudio y consentimiento informado por escrito entre marzo y septiembre de 2004. El Occidental Junta de Revisión Institucional (WIRB) aprobó el protocolo de estudio (WIRB Pro. Nr. 20040267).

Indicaciones para ICSI se diagnóstico de moderada a grave factor de infertilidad masculina o una historia de inseminación pobres convencionales. Todos los pacientes que se someten a FIV con ICSI en Shady Grove fecundidad reproductiva Centro de Ciencias durante el periodo de estudio fueron elegibles para participar en el estudio, limitado a un ciclo por paciente. El único criterio de exclusión fue la recuperación de menos de seis ovocitos maduros. Pareja (metafase II, o MII) ovocitos de cada paciente se dividieron en dos grupos iguales. La mitad de los ovocitos de cada cohorte fue asignado a el grupo de tratamiento, mientras que la otra mitad se asignó al grupo control. Grupo de tareas se asignan de acuerdo a un ordenador de serie generados al azar, se mantuvieron en sobres cerrados y se desconoce a embryologists hasta después de la división de ovocitos cohortes. Tratamiento cesiones fueron codificados por la cultura del embrión platos, pero eficaz cegamiento de grabación embryologists resultados de fertilización y desarrollo del embrión no fue posible, debido a que el agujero en la zona producido por el láser es a veces visible.

Láser asistida ICSI se realizó en los ovocitos asignados a los grupos de tratamiento utilizando un 1,48 micrómetros de longitud de onda de láser infrarrojo (Zilos sistema láser, Hamilton Thorne Research, Beverly, MA). Hemos tratado de reproducir el procedimiento descrito en informes anteriores [11, 12] lo más cerca posible. Un pequeño diámetro (5-6 micrómetros) canal se perforó a través de la mayor parte del espesor de la zona pelúcida con 3 a 5 pulsos de baja energía en menos de dos microsegundos duración de pulso, la aguja de inyección de esperma fue entonces pasado a través de este canal. Convencionales ICSI se realizó de acuerdo a protocolos estándar [17] sin láser de pre-perforación. Dentro de cada paciente, una sola embryologist ICSI realizados en todos los ovocitos maduros en ambos grupos de tratamiento. Por ovocitos inseminadas por ICSI convencional, la zona pelúcida fue clasificado como normal, frágil, o difícil de acuerdo a las características de rotura cuando la aguja de inyección se añadió. Oolemma rotura patrones (normal, frágil, o difícil) se registraron para los ovocitos en ambos grupos de tratamiento. Los análisis de subgrupos se planificaron sobre la base de estas zona y oolemma características.

La medida de resultado primaria fue el porcentaje de ovocitos que degeneró después de la ICSI procedimiento, ya que esto fue considerado como el indicador más directo de ICSI inducida por daños. Degenerando ovocitos fueron distinguidos por necrótico citoplasma oscuro y vacuolización en el momento del examen para la fertilización, 16-18 horas después de ICSI, cuando el número de 2 pronucleus (2pn) ovocitos también fue registrada. El número de células por embrión y el grado de fragmentación (porcentaje del volumen total de embriones) se registraron en los días 2 y 3 de cultivo in vitro. Los embriones se transfirieron a los pacientes ya sea en el día 3 o 5 días dependiendo del número y la calidad de los embriones disponibles. No se transfieren los embriones a través de un seguimiento día 7 para la compactación y la formación de blastocisto.

Total número de ovocitos y embriones se presentan en las tablas junto con el ciclo por medio de los resultados clínicos. Sin embargo, hay que destacar que válido el análisis de los efectos del tratamiento para este diseño experimental se basa en el ciclo de por medio, no por los resultados de los ovocitos o embriones. Es bien sabido que los ovocitos y embriones características son mucho más variable entre los pacientes de las cohortes dentro de los ovocitos. Por lo tanto, la comparación de resultados por los ovocitos o embriones por viola el supuesto de observaciones independientes. En este sentido, las conclusiones del primer estudio aleatorizado [12] puede ser cuestionada porque los resultados fueron evaluados por análisis de X 2, utilizando los ovocitos, en lugar de pacientes, como unidad de análisis. La prueba estadística utilizada en el otro estudio aleatorizado previo [15] No se informó, pero p-valores son también compatibles con los ovocitos por X 2 análisis de los datos. Válido estimaciones, ya sea del tamaño de, o el p-valor, los efectos del tratamiento de estos dos estudios anteriores no están disponibles.

Muestras pareadas de dos colas t-tests fueron utilizados para comparar los ovocitos de fertilización y las tasas de degeneración, el número de células y el grado de fragmentación en los días 2 y 3, la compactación y la formación de las tasas de blastocisto, y el número de embriones transferidos entre convencionales y láser asistida ICSI tratamientos. El objetivo de inscripción se fijó en 60 pacientes, aproximadamente el doble del tamaño de la anterior sólo al azar estudio publicado en el momento [12]. Potencia análisis se realizó de acuerdo a Bausell y Li [18]. Examen anterior degeneración de los ovocitos en los pacientes sometidos a ICSI en nuestro centro [19], siempre que las estimaciones de la espera media (10%) y desviación estándar (14%) para los tipos de degeneración de los ovocitos. Sobre la base de estos parámetros y en el supuesto de no correlación entre el tratamiento y control de resultados en los pacientes (es decir, r = 0), este tamaño de la muestra proporcionará un mínimo de 80% para poder distinguir una reducción de la degeneración de los ovocitos con láser asistida ICSI del 7,3% (es decir, 2,7% versus 10%), menos de la mitad de la diferencia informó de Abdelmassih et al. [12]. Ninguna correlación entre los grupos de tratamiento y control en los pacientes aumentaría el poder estadístico. Por ejemplo, una moderada correlación de r = 0,4 se traduciría en 95% para poder distinguir la diferencia por encima, y el 80% de potencia para distinguir una reducción de la degeneración de los ovocitos de 5,6%.

Resultados

Un total de 80 candidatos se inscribieron después de consentimiento informado por escrito. Veintiuno de estos pacientes fueron excluidos del estudio porque menos de seis ovocitos maduros se recuperaron. De los 59 pacientes restantes, 775 ovocitos maduros recuperados fueron inseminadas y de conformidad con el diseño experimental.

La edad osciló entre 22 a 43 años (media = 34,3 ± 4,0 DS). La mayoría de las parejas fueron diagnosticados con factor de infertilidad masculina por sí sola (34/59, 58%). Otros diagnósticos incluyen la endometriosis (n = 4), factor tubárico (n = 3), PCO (n = 3), la disminución de la reserva ovárica (n = 2), trastorno de la ovulación (n = 2), y la infertilidad inexplicada (n = 7) . Los otros cuatro mayores fueron diagnosticadas con una combinación de ambos, hombres y mujeres factor de infertilidad. La media general tasa de fertilización es de 71,1%, con una media de ovocitos degeneración tasa de 12,0%. La media de número de células de embriones fue de 3,0 el día 2 y 5,6 en el día 3. La media de embriones grado de fragmentación fue de 7,6% el día 2 y el 9,8% en el día 3. Los embriones se transfirieron a 44 pacientes en la fase de división en el día 3 (media = 2,5 embriones por transferencia), y 14 pacientes en la etapa de blastocisto el día 5 o 6 (media = 1,9 embriones por transferencia). Sólo en un ciclo de transferencia no se realizó debido a la mala calidad del embrión. Hubo 26 embarazos (44,8% por transferencia) con 34 implantaciones (24,5% de embriones), basada en ultrasonidos de detección de actividad cardiaca fetal cinco a seis semanas después de la transferencia de embriones, dando lugar a 20 nacidos vivos y 3 abortos espontáneos, con tres embarazos en curso en el último informe.

Los resultados clínicos se comparan entre láser asistida ICSI convencional y en la Tabla 1. No se observaron diferencias significativas para ninguna de las variables de resultado medido. La diferencia en las tasas de formación de blastocisto entre los 14 ciclos fase de blastocisto con transferencia de embriones fue casi estadísticamente significativa a un alfa de 0,05. Sin embargo, dada la probabilidad de que esta estimación no incluye un ajuste para comparaciones múltiples (con lo que aumenta las posibilidades de error de tipo I), y ninguna de las muchas otras comparaciones que se hicieron se acercó significación estadística, creemos que esta diferencia es más probable debido a la azar oportunidad.

Zona pelúcida y oolemma rotura características se registraron el 50 de los ciclos de tratamiento. Normal zona de rotura se observó en todos los ovocitos inseminadas por ICSI convencionales en 19 de estos ciclos. La zona es difícil de punción en algunos (11-80% por ciclo, con una media = 37%) de los ovocitos inseminadas en 23 ciclos de tratamiento. La zona fue inusualmente frágil en algunos (14-50% por ciclo, con una media de 24%) de los ovocitos inseminadas en 6 ciclos. Los resultados clínicos se compararon entre láser asistida ICSI y convencionales dentro de cada uno de estos tres subgrupos de pacientes (Tabla 2]. No se observaron diferencias entre los dos tratamientos de ICSI se acercó significación estadística. En un plazo adicional de dos ciclos (no incluido en el cuadro) que exhiben los ovocitos difícil zona y la rotura frágil ovocitos con zonae fueron observados.

Cuando los ocho ciclos con al menos un ovocito con un frágil zona se agruparon, el grado de fragmentación del embrión durante los dos días 2 y 3 fue significativamente mayor que en los ciclos sin ningún tipo de ovocitos con una frágil zona (14,2% versus 6,8%, P = 0,018 y el 17,0% frente al 8,8%, P = 0,029, respectivamente, t-test). Estos ciclos incluidos los ovocitos con frágiles zonae también mostraron tasas significativamente más bajos de compactación (23,8% versus 51,5%, P = 0,036), con una reducción de tasa de formación de blastocistos que también se acercó significación estadística (15,3% versus 31,8%, P = 0,084). No hay otras variables de resultado fueron significativamente diferentes entre los ciclos con y sin ovocitos con frágiles zonae.

Las tasas de fecundación de oocitos y degeneración, y el número de células y el grado de fragmentación en los días 2 y 3, no difirió significativamente entre las cohortes incluidas ovocitos con dificultades para penetrar en zonae pellucidae y cohortes en el que todos los ovocitos habían normal zonae.

Entre todos los ovocitos para que oolemma rotura patrones se registraron, el 25,9% había oolemmas frágil, mientras que el 22,7% había oolemmas que son difíciles de penetrar. Ambos tipos de oolemma patrones con frecuencia la rotura se produjo en la misma cohorte de ovocitos. El porcentaje de oolemmas difícil dentro de una cohorte no fue significativamente relacionados con la observada el resultado clínico. Sin embargo, análisis de regresión lineal indicó una significativa relación positiva entre el porcentaje de oolemmas frágil en una cohorte y degeneración de los ovocitos por ciento (P = 0.0026), y una significativa relación negativa entre el porcentaje de oolemmas frágil y el porcentaje de fertilización (P = 0,0033). La degeneración de los ovocitos entre los ciclos (n = 24) con más del 30% oolemmas frágil dentro de la cohorte de ovocitos dos veces más alta que la de ciclos (n = 26) con menos del 30% frágil oolemmas (17,0% frente al 8,1%, P = 0,024, t-test). El porcentaje de frágil oolemmas no fue significativamente relacionada con cualquier otro resultado clínico. Degeneración de los ovocitos de los tipos de láser con ayuda de convencionales en relación con ICSI no guardaban relación con la proporción de frágil oolemmas en un ovocito de cohortes (P = 0,14, regresión lineal).

Inseminaciones fueron realizadas por uno de los dos embryologists (AD o JC) para la mayoría de los ciclos de tratamiento (n = 29 y 23, respectivamente). La evidencia de una curva de aprendizaje fue buscado por análisis de regresión lineal de la diferencia entre el láser asistida ICSI convencional y los resultados de acuerdo con el número de caso para cada una de estas dos embryologists. No hubo evidencia de un cambio significativo en los resultados en relación con el tiempo, ya sea para embryologist (tasa de fertilización P = 0,74 y 0,30, la tasa de degeneración P = 0,25 y 0,88, día 3 número de células P = 0,36 y 0,59, y el día 3 fragmentación P = 0,97 y 0,68, respectivamente).

Los embriones fueron transferidos a partir exclusivamente de los láser asistida ICSI grupo de tratamiento en 12 ciclos, por lo que en seis embarazos con cuatro nacidos vivos y dos embarazos en curso en el último informe. Embriones transferidos eran exclusivamente convencionales de la ICSI grupo de tratamiento en ocho ciclos, por lo que en seis embarazos con cuatro nacidos vivos y 2 abortos espontáneos. Los restantes 38 transferencias de embriones incluidos ambos grupos de tratamiento, por lo que en 14 embarazos con 12 nacidos vivos y un aborto espontáneo, con un embarazo en curso en el último informe. Entre los 26 ciclos resultantes en el embarazo, el 31 de los 60 embriones transferidos (52%) se obtuvieron a partir de láser asistida por ICSI. Entre los 32 ciclos sin embarazo, el 46 de los 79 embriones transferidos (58%) se obtuvieron a partir de láser asistida por ICSI. AX 2 comparación indicó que los embriones resultantes de láser asistida ICSI fueron igualmente representados en las embarazadas y no embarazadas ciclos (P = 0.44).

Discusión

No se encontraron pruebas de que la pre-perforación a través de la zona pelúcida antes de la inserción de la aguja ICSI mejora la supervivencia de los ovocitos o embriones de calidad, contrariamente a las conclusiones de dos estudios previos más pequeños [12, 15]. Las tasas de degeneración de los ovocitos y fertilización, el número de células y tipos de fragmentación en los días 2 y 3, y las tasas de compactación y formación de blastocistos fueron similares independientemente del tipo de tratamiento ICSI. El 95% intervalo de confianza para un efecto del tratamiento sobre las tasas de degeneración de los ovocitos sugiere que incluso si las tasas de degeneración son más bajos con láser asistida en comparación con ICSI convencional, la reducción es poco probable que sea superior al 50%, mucho menor que la sugerida por los estudios anteriores .

Sin embargo, a pesar de estar bien diseñado, la evaluación de los resultados de estos dos estudios aleatorios anteriores es problemática debido a que ambos utilizan ovocitos individuales en lugar de los pacientes como unidad de análisis. Estos "unidad de análisis de los errores son comunes - una reciente revisión sistemática [20] identificado" unidad de análisis de los errores en el 82% de los ensayos clínicos examinados. El uso de múltiples observaciones por paciente en los resultados impredecibles sesgo en las estimaciones los efectos del tratamiento, y una aparente exagerado tamaño de la muestra líder a spuriously baja p-valores y reducir los intervalos de confianza [20].

La selección de los pacientes pueden haber desempeñado un papel en la diferencia entre nuestros resultados y los de los informes anteriores. Los informes anteriores incluyeron a pacientes seleccionados sobre la base de una historia de ICSI con altas tasas de degeneración de los ovocitos [12] o frágiles oolemmas [15], mientras que la nuestra se basaba en pacientes no seleccionados sometidos a ICSI. Por lo tanto, es posible que un subconjunto de pacientes pueden beneficiarse de micromanipulación láser, incluso si no hay beneficios significativos para la población general de pacientes. Sin embargo, observó la tasa de ovocitos degeneración en nuestro grupo control fue sólo ligeramente inferior a la reportada tipos de degeneración de los ovocitos en los grupos de control de estos estudios anteriores.

Características de la zona pelúcida, o posiblemente el oolemma, puede indicar los pacientes más susceptibles de beneficiarse de láser asistida por ICSI. Es bien sabido que la rotura de los patrones de la zona y oolemma pueden diferir mucho entre los ovocitos. Ovocito de compresión durante el procedimiento ICSI es mayor en los huevos con zonae o oolemmas que son particularmente difíciles de penetrar. Láser de perforación a través de una difícil zona pelúcida elimina la compresión dramática de los ovocitos que de otro modo el resultado de ICSI de esos huevos. Frágil oolemmas se ha informado de que se asocia con mayores tasas de degeneración de los ovocitos [6, 7]. Sin embargo, es más difícil de imaginar un beneficio de láser asistida ICSI para una frágil oolemma porque la oolemma no se estableció contacto o manipulados por el láser durante el procedimiento.

Hemos intentado evaluar la posibilidad de un beneficio, dentro de dichos subgrupos de subdividir nuestra población de pacientes de acuerdo a la zona o oolemma la rotura de sus patrones de ovocitos. A pesar de que muchos pacientes que se incluyeron en este estudio expuesto con zonae difícil rotura, por lo dramático de compresión durante la inyección láser sin pre-perforación, no se encontraron pruebas de un aumento de las tasas de degeneración o más pobre de embriones de calidad entre estos ovocitos, y no hay pruebas de que se benefició de el uso del láser. Los embriones resultantes de los ciclos con ovocitos con frágiles zonae exhibieron un mayor porcentaje de fragmentación y un tipo reducido de compactación en comparación con los ciclos sin zonae frágil, pero por láser asistida ICSI no mejorar estos resultados.

La formación de blastocisto tasas parece ser mayor cuando los ovocitos con dificultades para penetrar en zonae pellucidae Estuvieron presentes en la cohorte en comparación con las cohortes en el que todos los zonae fueron normales. Sin embargo, creemos que esta aparente relación es un artefacto estadístico derivado del hecho de que una proporción mucho mayor de ovocitos fueron trasladados el día 3 en la zona normal de grupo, frente a la difícil zona del grupo (31% versus 14%). Por lo tanto, los cálculos de la compactación y la formación de blastocisto tasas de embriones no transferidos en día 3 (como se informa en los cuadros) son proporcionalmente menos de los embriones de mayor calidad en la zona normal de grupo, frente a la difícil zona. Además, es biológicamente plausible que la presencia de ovocitos con resultados anormales zonae pellucidae se asocia con el desarrollo embrionario mejor que cuando todos los ovocitos en una cohorte han normal zonae.

Hubo también muchos pacientes cuyos ovocitos ha oolemmas frágil, y muchos pacientes cuyos ovocitos habían difícil de penetrar oolemmas. Degeneración de los ovocitos tasas aumentaron significativamente con el aumento de la proporción de oolemmas frágiles, lo cual es consistente con informes anteriores [6, 7]. Sin embargo, las tasas de degeneración de los ovocitos por láser asistida convencional en relación con ICSI no disminuirá a medida que la proporción de esos ovocitos en un aumento de cohorte, lo que indica que por láser asistida ICSI no reducir las elevadas tasas de degeneración asociado con oolemmas frágil. Los resultados clínicos fueron ajenos a la proporción de ovocitos con oolemma difícil la penetración dentro de una cohorte.

No creemos que el operador experiencia fue un factor en nuestra incapacidad para distinguir un efecto beneficioso de láser micromanipulación. La falta de cualquier curva de aprendizaje detectables apoya esta afirmación. Todos los embryologists la realización de ICSI en este estudio son altamente calificados y había años de experiencia en la realización de ICSI y de trabajo con éxito con el láser para procedimientos de manipulación de embriones, como la incubación asistida y la biopsia del embrión. Embryologists realizar el procedimiento consideraron que era relativamente simple y puede ser realizada rápidamente, aunque con la práctica todo el proceso de inseminación es todavía más tiempo con la adición del láser micromanipulación. También convinieron en que la compresión de los oocitos durante el procedimiento ICSI fue reducido drásticamente en los láser con ayuda de grupo, como se informó anteriormente [11].

Lo que cuestionamos es la razón de ser reducido hypothesizing degeneración de los ovocitos con láser asistida ICSI convencional versus ICSI. Si bien por láser asistida ICSI hace reducir drásticamente el número de ovocitos de compresión, somos conscientes de ninguna evidencia que sugiere una mayor degeneración de los ovocitos en asociación con los ovocitos de compresión, ya sea como resultado de zonae pellucidae o oolemmas que son difíciles de penetrar, y nuestros resultados no sugieren dicha relación. La única característica que ha sido claramente asociado con los tipos de ovocitos degeneración, un frágil oolemma, parece poco probable que se responda a láser de pre-perforación de la zona pelúcida, porque el oolemma no es manipulado por este procedimiento.

A pesar de que no encontró beneficio clínico de perforación a través de la zona con un láser antes de la inyección de esperma, también no encontró pruebas de un daño como consecuencia del láser micromanipulación de ovocitos. Los ovocitos inseminadas por láser asistida ICSI son las probabilidades de ser fertilizados con éxito como, y similares de preimplantación potencial de desarrollo, los ovocitos inseminadas por ICSI convencional. Este estudio proporciona pruebas, por lo tanto, para la seguridad de láser micromanipulación de ovocitos humanos a través del desarrollo comparable de preimplantación de embriones derivados de ambos el estudio y grupos de control.

Conclusión

En conclusión, los resultados de este estudio sugieren que no existe un beneficio de láser antes de la perforación de la zona pelúcida más convencional ICSI con respecto a la fertilización y el desarrollo del embrión. Por otra parte, el examen de los resultados de acuerdo a las pautas de la rotura de la zona o la oolemma no revelaron ningún subgrupos de pacientes que parecen beneficiarse de láser asistida por ICSI. Dado el incremento del tiempo necesario para añadir láser antes de la perforación para el procedimiento ICSI, parece haber ninguna justificación para su uso. Sin embargo, el potencial de beneficios dentro de los subgrupos de pacientes particular merece un estudio más a fondo. Tampoco hay pruebas de que el láser causado daños que la reducción potencial de desarrollo de preimplantación.

Conflicto de intereses

Los autores declaran que no tienen intereses en conflicto.

Autores de las contribuciones

AD y MT concibe el estudio. AD, MT, KR, SG y diseñó el protocolo de estudio. AD y JC realizado tratamientos de ICSI y los datos recopilados. KR realizó el análisis estadístico. KR, SG y MM redactado el manuscrito. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

Agradecimientos

Damos las gracias a James Graham y Taer Han de asistencia para la realización de tratamientos de ICSI.