Acta Veterinaria Scandinavica, 2006; 48(1): 5-5 (más artículos en esta revista)

Factor de crecimiento tipo insulina I (IGF-I) y thioredoxin están expresadas diferencialmente a lo largo del tracto reproductivo de la oveja durante el ciclo de celo y después de ovariotomía

BioMed Central
Elize van Lier (vanlier@adinet.com.uy) [1], Ana Meikle (anamei@adinet.com.uy) [2], Håkan Eriksson (hakan.eriksson @ kbh.ki.se) [3], Lena Sahlin (Lena.Sahlin @ kbh.ki.se) [3]
[1] animal y de forraje Departamento de Ciencias, Facultad de Agronomía, Universidad de la República, Montevideo, Uruguay
[2] Departamento de Biología Molecular y Celular, Facultad de Veterinaria, Universidad de la República, Montevideo, Uruguay
[3] División de Endocrinología Reproductiva, Departamento de la Mujer y del Niño, Instituto Karolinska, Estocolmo, Suecia

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Resumen

Factor de crecimiento tipo insulina I (IGF-I) y están reguladas thioredoxin gonadal de esteroides en el tracto reproductivo femenino de muchas especies. Estradiol regula la IGF-I y thioredoxin niveles de mRNA en el tracto reproductivo de los corderos prepúberes. El estado fisiológico (diferentes endocrino medio ambiente) pueden afectar la sensibilidad del tracto reproductivo de estradiol y progesterona. Se estudiaron los efectos de diferentes entornos endocrinos (tarde-folicular y luteal fases del ciclo de celo, y ovariotomía antes o después de la pubertad) en la expresión de IGF-I, thioredoxin, α del receptor de estrógeno (ER α) y del receptor de progesterona (PR) en ovejas. Los niveles de mRNA fueron determinados por una solución técnica de hibridación. En el útero los niveles de ER α, PR y thioredoxin mRNA fueron mayores en la tarde-fase folicular grupo que en los otros tres grupos, y de IGF-I mRNA fue alta durante la tarde-folicular y las fases lútea. En el cuello del útero sólo PR mRNA fue significativamente mayor en las ovejas en la tarde-fase folicular que en los otros grupos. En el oviducts los niveles de thioredoxin y ER α mRNA fueron más altas en los adultos ovariectomised ovejas, y thioredoxin mRNA fue superior a los niveles encontrados en las ovejas en la tarde-fase folicular. El IGF-I en los niveles de mRNA del oviducto no difieren entre cada uno de los grupos. Las transcripciones de IGF-I, thioredoxin, ER α y PR, variaba según el estado fisiológico y también a lo largo del tracto reproductivo femenino, lo que sugiere que la regulación de los niveles de mRNA de estos factores por los esteroides medio ambiente es el tejido específico.

Koncentrationen av factor de crecimiento tipo insulina I (IGF-I) thioredoxin och regleras hos många arter i honores reproduktionsorgan av könssteroider. Sålunda reglerar östradiol IGF-I mRNA thioredoxin och i reproduktionsorganen hos prepubertala Lamm. Djurets fysiologiska estado (DVS den endokrina miljön) kan påverka känsligheten hos reproduktionsorganen för östradiol och progesteron. Vi studerade effekterna av olika endokrina miljöer (sen follikelfas och lutealfas i östruscykeln, SAMT ovariektomi före och efter puberteten) på uttrycket av IGF-I, thioredoxin, östrogenreceptor α (ER α) och progesteronreceptorn (PR) hos får. Lösningshybridisering användes för att bestämma mRNA nivåerna. I livmodern var mRNA koncentrationen för ER α, PR thioredoxin och högre i sen follikelfas än i de tre andra och grupperna IGF-I mRNA nivån var hög både en virtud de sen follikelfas och i lutealfas. PR mRNA cérvix var i signifikant högre hos tackorna en virtud de sen follikelfas än i de andra grupperna. I äggledarna var mRNA nivåerna av och thioredoxin ER α högst i de djur som ovariektomerats som vuxna, och var thioredoxin mRNA högre än hos tackorna en virtud de sen follikelfas. Det förelåg Ingen skillnad Vad gäller IGF-I mRNA nivåerna i äggledaren mellan någon av grupperna. IGF-I, thioredoxin, ER α och PR mRNA nivåerna varierade beroende på och fysiologisk estado morfologisk lokalisation i reproduktionsorganen. Detta tyder på att steroidhormonernas reglering av Dessa faktorers mRNA uttryck också är vävnadsspecifik.

1. Introducción

Estrógenos y progestinas secretadas por los ovarios son los principales moduladores del tracto reproductivo femenino funciones. Sus acciones son principalmente mediada a través de unión a receptores intracelulares específicos en las células diana, y la posterior estimulación de la transcripción de genes [1]. La respuesta tisular está determinada por la concentración de los esteroides sexuales en la circulación y la concentración de su alta afinidad por los receptores de los tejidos [2]. Por otra parte, los esteroides regulan el receptor de esteroides sexuales a lo largo del contenido del tracto reproductivo de manera específica [3].

Factores de crecimiento (por ej. Factor de crecimiento tipo insulina-I, IGF-I) y otras moléculas bioactivas, como thioredoxin, mediar en muchos de los esteroides sexuales acciones en el tracto reproductivo [4 - 6]. IGF-I tiene múltiples efectos en el crecimiento celular y el metabolismo [7], y es el principal factor de crecimiento paracrinos secretada por uterino estroma [8]. IGF-I promueve la mitosis celular y la diferenciación en el endometrio [9]. Hay pruebas directas de que el IGF-I juega un papel importante en el desarrollo del tracto reproductivo [10]. En el útero, IGF-I expresión es regulada principalmente por los estrógenos [9, 11, 12]. Estradiol inducida por el tratamiento de IGF-I mRNA expresión en la oviducts, útero y el cuello del útero de las ovejas prepúberes [6], mientras que la progesterona tratamiento afectadas IGF-I mRNA expresión sólo en el útero [13].

Thioredoxin es una pequeña proteína multifuncional (12 kDa) que actúa como un donante de hidrógeno a la enzima reductasa ribonucleotide que reduce ribonucleótidos a desoxirribonucleótidos y, por tanto, es esencial para la síntesis de ADN [14]. Las funciones biológicas de thioredoxin en el útero es probable que sean los mismos que en otras células, y son probablemente junto a la actividad mitogénica en el útero y la posterior de ADN, ARN y la síntesis de proteínas [15, 16]. Estradiol incrementa los niveles de mRNA thioredoxin en el útero de rata, y el nivel de estradiol se observa una correlación positiva entre cervical thioredoxin los niveles de mRNA en las mujeres no embarazadas [17, 18]. Los estudios realizados en ovejas son escasos, pero el estradiol ha demostrado estimular la expresión thioredoxin también en la oviducts, útero y el cuello del útero de corderos prepúberes [6].

La regulación de IGF-I y thioredoxin expresión a lo largo del tracto reproductivo de los corderos intacta prepúberes se ha estudiado después de estradiol y progesterona tratamiento [6, 13]. La mayoría de los estudios sobre el estradiol y la progesterona uterino regulación de la expresión génica se han llevado a cabo utilizando ovariectomised ovejas o corderos, ovejas o anoestrous, con la sustitución de esteroides / tratamiento. Estos paradigmas experimentales no dan una idea clara acerca de la expresión génica bajo condiciones naturales. El endocrino medio ambiente difiere de acuerdo con el estado fisiológico del animal y que esto puede afectar la sensibilidad del tracto reproductivo de estradiol y progesterona (p. ej. Estrógenos y los receptores de progesterona) y, por tanto, la respuesta biológica de los tejidos a estas hormonas esteroides. Dado que el IGF-I y thioredoxin expresión se ve afectada por las hormonas esteroides, que piensan que los niveles relativos de la IGF-I y thioredoxin transcripciones va a cambiar bajo diferentes fisiológico o endocrino condiciones a lo largo del tracto reproductivo (oviducts, útero y el cuello del útero). Por lo tanto, nuestro objetivo principal fue determinar la expresión de IGF-I y thioredoxin en el tracto reproductivo bajo diferentes entornos endocrinos (tarde-folicular y luteal fases del ciclo de celo y ovariotomía antes y después de la pubertad), lo que a nuestro conocimiento es el primer informe en el ganado ovino. Receptor de estrógeno (ER) y del receptor de progesterona (PR) a lo largo de la expresión del tracto reproductivo se determinó también y fue utilizado como un índice de sensibilidad del tejido a hormonas esteroides [2].

2. Materiales y métodos
2,1. Animales y tratamientos

Este experimento se llevó a cabo en Uruguay en la temporada de cría (de mayo). Dieciocho intacta y ovariectomised (OVX) Corriedale las ovejas se utilizaron. Celo fue sincronizado en la intactas las ovejas (intra-esponjas vaginales impregnadas con medroxy-progesterona acetato de 12 días). Ciclo estral se verificó dos veces al día con un carnero de 24 hasta 72 h después de la retirada de esponjas. Cuatro diferentes grupos se formaron en función de la condición gonadal y la edad a ovariotomía: intacta ovejas a finales de la fase folicular (OVF, n = 4) y en la fase lútea (OVL, n = 4), ovariectomised ovejas adultas (OVXa, n = 5) ovariectomised y corderos (OVXy, n = 5). El retraso en la fase folicular-grupo fue seleccionado para estudiar los efectos de estradiol endógeno en la expresión de IGF-I y thioredoxin en el tracto reproductivo, mientras que el grupo de la fase lútea fue seleccionado para estudiar los efectos de la progesterona endógena. Folicular y luteal fases fueron seleccionados para investigar el contrario endógena perfiles endocrinos (alto-bajo estradiol progesterona vs baja-alta estradiol progesterona). El ovariectomised ovejas adultas fueron incluidos como los esteroides sexuales, libres de control de animales en contraste con los naturales se producen niveles de esteroides sexuales durante el folicular y luteal fases del ciclo de celo. El ovariectomized corderos no había pasado por la pubertad y, por tanto, pre-exposición expresión del ARNm del investigado. Las ovejas adultas fueron más de 3 años, y los corderos fueron 8,5 meses de edad, cuando se sacrificaron. Ovariotomía se hizo 5,5 meses (de noviembre) antes de su sacrificio, salvo en tres corderos en la que se hizo dos meses (de marzo) antes de su sacrificio. Todos los animales estaban acostumbrados a la manipulación frecuente. Todos los animales de experimentación se realizó en cumplimiento de los reglamentos establecidos por la Junta Nacional de Animales de Laboratorio (Universidad Sueca de Ciencias Agrícolas, Facultad de Medicina Veterinaria, Uppsala, Suecia).

Los animales se pesaron y se sacrificaron y los tractos reproductivos se obtuvieron. Los animales del mismo grupo fueron sacrificados en el mismo día. Se tomaron muestras de sangre antes de la masacre para registrar el estado hormonal de los animales. Las hormonas se analizaron previamente validado por radioimmunoassays (Coat-A-Count radioinmunoensayo kits, productos de diagnóstico Corporation, Los Angeles, CA, EE.UU.) (progesterona: [19]; estradiol: [20]]. La progesterona se analizó en las muestras antes del sacrificio de cada animal, y en el diario de las muestras intactas las ovejas a partir del día de retirada de esponjas en adelante. Todas las muestras fueron en el mismo ensayo, y la intra-ensayo coeficientes de variación para tres muestras de control (baja 3,1 nmol / L, media 28,1 nmol / L y alto 45,0 nmol / L) fueron 0,5%, 8,4% y el 0,7 %, Respectivamente. El análisis límite de detección del ensayo fue 0,35 nmol / L. Estradiol se determinó en las muestras antes del sacrificio de cada animal y en el diario de las muestras intactas las ovejas de su posterior retirada esponja. La intra-ensayo coeficientes de variación para tres muestras de control (baja 7,1 pmol / L, media 47,5 pmol / L y alta 128,8 pmol / L) fueron 11,9%, 7,3% y 7,2%, respectivamente. El correspondiente inter-ensayo coeficientes de variación fueron del 15,1%, 12,6% y 10,9%, respectivamente. El análisis límite de detección del ensayo fue de 2,7 pmol / L. Las ovejas de la OVF grupo se sacrificaron 72 h después de la retirada de esponjas (es decir. 24 h después de la primera observación del ciclo estral) y las ovejas de OVL grupo fueron sacrificados 12 días después de retirada la esponja. El tracto reproductivo fue disecada y oviducts, útero y el cuello del útero se separaron y pesado. Uno de cada oviducto de animales se utilizó para el análisis y el de cérvix, aproximadamente cada 2 a 3 g de tejido se toma del centro. Puesto que hemos demostrado anteriormente que ER y PR concentraciones son diferentes según la región del cuerno uterino estudiados [20], el útero se divide en zona superior (craneal parte de la cornua uterino comienza en el cruce uterotubal); zona inferior (caudal parte de la cornua uterino adyacente al cruce uterocervical) y zona media (medial para el Alto y el Bajo zonas en el útero cornua). El uterino muestras no fueron más disecados. Los tejidos fueron congelados en nitrógeno líquido y se almacenan a -80 ° C hasta el momento de preparación para la solución de hibridación análisis.

2,2. TNA preparación y determinación de mRNA

Las muestras de tejidos fueron homogeneizados y el total de ácidos nucleicos (TNA), preparado por la digestión de homogenado con proteinasa K en un SDS-tampón que contiene, seguida por la extracción posterior tal como está descrita anteriormente [21]. El ADN contenido del TNA muestras se determinó mediante un ensayo fluorométricos a la longitud de onda 458 nm con Hoechst 33258 Dye [22]. Una solución de hibridación de ensayo para determinaciones específicas de ARNm se utilizó y se lleva a cabo como antes [21]. En resumen: TNA Se tomaron muestras de hibridación in vitro con 35 S-UTP etiquetados sondas de ARN (~ 20,000 cpm / incubación) a 70 ° C. Incubaciones se realizaron en los duplicados. Después de la noche a la mañana de incubación de cada muestra fue tratada con un tampón que contiene RNasa, para digerir no hibridación RNA. La siguiente modificación se hizo con el fin de cuantificar los mRNAs. El etiquetado de los híbridos protegidos RNasa digestión se precipitó por adición de ácido tricloroacético y recogidos en los filtros (Whatman GF / C, Whatman International Ltd, Maidstone, Inglaterra). La radiactividad en los filtros fue monitorizada en una scintillation counter y los resultados fueron comparados con una curva estándar de cantidades conocidas de in vitro sintetizan ARNm complementarios a la sonda utilizada. Cada conjunto de muestras de tejidos se ha ejecutado en un ensayo. Los resultados se expresan como amol (10 -18) mRNA / μ g de ADN en las muestras TNA. La validación de cuantificación de solución de hibridación se ha demostrado anteriormente [23].

2,3. Hibridación sondas

La sonda utilizada para IGF-I mRNA determinaciones se derivan de un 775 bp RsaI-EcoRI fragmento de cDNA humano factor de crecimiento tipo insulina I (IGF-I). El fragmento fue clonado en el HincII y sitios EcoRI de un vector Bluescript KS. La restricción de este vector con XhoI permite la síntesis de una sonda de cRNA. La sonda utilizada para la thioredoxin mRNA determinaciones se deriva de un clon de genómica humana thioredoxin cDNA [24]. Un fragmento de 315 pb que representan a los 105 aminoácidos en la apertura de marco de lectura de los genes humanos thioredoxin fue sub-clonados en un vector pGEM 3Z. Subclones con dos orientaciones opuestas fueron seleccionados y digerido con SmaI. Sentido y sentimiento anti-ARN se obtuvieron utilizando T7 ARN polimerasa. Un norte donde la mancha humana derivados thioredoxin anti-sentido sonda se hibridación de las especies ovina ARN exhibido una sola banda a aproximadamente 600 pares de bases [6]. Las sondas utilizadas para OER α y la OPR mRNA determinaciones se obtuvieron a partir de plásmidos que contienen 360 o 314 bp cDNAs de las especies ovina ER y PR, respectivamente, y fueron suministrados gentilmente por el Dr Ing N., Universidad de Texas, TX, EE.UU. [25]. La restricción del vector (pGEM4Z) que contiene un fragmento de la OER cDNA con EcoRI EcoRI permite la síntesis de un sentimiento anti-ARN sonda utilizando T7 ARN polimerasa. La restricción del vector (pCRII) que contiene un fragmento de la OPR cDNA con HindIII HindIII permite la síntesis de un sentimiento anti-ARN sonda utilizando T7 ARN polimerasa.

2,4. Estadísticas

Análisis de varianza de los datos se hizo con un paquete estadístico [26] utilizando la mezcla con el procedimiento de Tukey Kramer prueba. Los dos principales efectos fueron estudiados grupo y tejidos, y su interacción * grupo de tejidos, y los animales se encontraba en el término de error. Los grupos dentro de cada tejido se compararon mediante contrastes ortogonales. Las variables analizadas fueron ER α, PR, IGF-I mRNA y thioredoxin, y el peso del tejido del útero, oviducts y el cuello del útero. No se encontraron diferencias en las transcripciones entre las zonas uterino (P> 0,10), por lo tanto, los datos se agruparon y presentaron como muestras de todo el útero. El nivel de significación fue de P <0,05 y los resultados se expresan como media ± SEM.

3. Resultados
3,1. De peso corporal y los niveles de esteroides sexuales en el sacrificio

El cuadro 1 muestra la media (± SEM) de peso corporal de los animales de cada grupo, así como el estradiol y la progesterona los niveles en el momento del sacrificio. Los corderos pesaba mucho menos que los adultos, las ovejas y las hormonas estaban en conformidad con el estado reproductivo de los animales (Fig. 1, Tabla 1]. Todas las ovejas intacto ha mostrado signos del celo con excepción de una oveja en el grupo de OVL, sin embargo, todos los OVL de ovejas tiene un cuerpo lúteo en el momento del sacrificio. Los ovarios de tres ovejas OVF presentó un folículo madura y una oveja OVF ha ovularon en el momento del sacrificio.

3,2. Tejidos pesos

El peso uterino fue mayor en las ovejas intactos que en el ovariectomised animales (P <0,0001). Las ponderaciones de cuello uterino se oviducts y más alta en las ovejas en la tarde-fase folicular, intermedio en las ovejas en la fase lútea y la ovariectomised ovejas, y las más bajas en el ovariectomised corderos (P <0.01) (Tabla 2].

3,3. Otros efectos de los tratamientos en mRNA

Los efectos de grupo y los tejidos son importantes, así como su interacción para α ER, PR y IGR-I mRNA (P <0,0001). Por thioredoxin ARNm los efectos también fueron significativos (grupo: P = 0.0482; tejido: P = 0.0002; grupo y tejidos *: P = 0,0028).

3,4. ER α mRNA

En el oviducto, la ovariectomised ovejas adultas mostraron los más altos niveles de mRNA ER α, que fueron significativamente diferentes de los de las ovejas en la fase lútea y la ovariectomised corderos (Figura 2A]. En el útero, sin embargo, los niveles de mRNA ER α fueron mayores en la tarde-fase folicular grupo que en los otros tres grupos (Figura 2B]. En el cuello uterino las ovejas en la tarde-fase folicular fueron significativamente más altos niveles de ER α mRNA de la ovariectomised ovejas (Fig. 2C].

3,5. PR mRNA

En el oviducts la PR niveles de mRNA de las ovejas en la tarde-fase folicular sólo significativamente más altos que los de la ovariectomised corderos (Fig. 2D]. En el útero (Fig. 2E], así como el cuello del útero (Fig. 2F] los niveles de mRNA PR fueron mayores en la tarde-fase folicular grupo en comparación con los otros tres grupos.

3,6. IGF-I mRNA

El IGF-I en los niveles de mRNA del oviducto no fueron diferentes entre cada uno de los grupos (Fig. 2G]. En el útero los niveles de IGF-I en el ARNm intacto ovejas (OVF y OVL) fueron más elevados que los de la ovariectomised ovejas y corderos (Fig. 2H]. El IGF-I mRNA nivel en el cuello del útero de la ovariectomised corderos fue inferior a la de la oveja adulta (tarde-folicular y la fase lútea, y ovariectomised) (Fig. 2I].

3,7. Thioredoxin mRNA

En el oviducts las ovejas adultas ovariectomised había los más altos niveles de mRNA thioredoxin, que fueron significativamente diferentes de las ovejas en la tarde-fase folicular y la ovariectomised corderos (Fig. 2J]. En el útero (Fig. 2K], así como el cuello del útero (Fig. 2L] los niveles de mRNA thioredoxin fueron mayores en la tarde-fase folicular grupo que en los otros tres grupos, aunque los niveles de mRNA thioredoxin en el cuello uterino las ovejas en la fase lútea no eran diferentes de los que en la tarde-fase folicular.

4. Discusión

Este es el primer informe sobre la IGF-I y thioredoxin expresión, estudió junto con transcripciones de los principales reguladores de la función uterina (ER α y PR), bajo diferentes entornos endocrino en el tracto reproductivo de las ovejas. La virtud de este estudio es que las hormonas exógenas no se utilizaron, y por lo tanto, las diferencias observadas reflejan el estado fisiológico de los animales. La regulación de la transcripción de IGF-I, thioredoxin, ER α y PR, es muy probable que dependen de la condición endógena endocrino de las ovejas, y para cada una transcripción del presente Reglamento variado en las diferentes regiones del tracto reproductivo.

El oviducts pesó más en la tarde-fase folicular (Tabla 2], pero esto no se asoció con el objetivo mRNAs ya que son bien similares (α ER, PR y el IGF-I) o inferior (thioredoxin) que los de los adultos ovariectomised ovejas y no difieren de las ovejas en la fase lútea en cualquiera de los casos (Figura 2]. Del mismo modo, el tratamiento de corderos prepúberes con estradiol también dio lugar a un aumento de peso de la oviducts [20], que no fue acompañado con un aumento de α ER, PR y el IGF-I mRNA [13]. Si los estrógenos son responsables de la mayor oviducto peso, el efecto sobre las transcripciones era probablemente de corta duración y, por tanto, no visto en este estudio. Esto también es apoyada por otro estudio [6], donde el IGF-I mRNA y se thioredoxin mRNA máxima de 12 horas después de estradiol tratamiento, pero no se detectaron diferencias después de 24 h. El mejor de IGF-I de expresión (por hibridación in situ) en las especies ovina oviducts se ha observado 48-60 h después de una inyección de prostaglandina analógico coincidiendo con celo permanente [27].

El peso uterino de las ovejas a finales de la fase folicular y el alto de IGF-I en los niveles de mRNA del útero confirmó la observaciones anteriores sobre los efectos del estradiol en el peso uterino y de IGF-I mRNA en ewe corderos [6, 20]. Stevenson et al. [4] han encontrado más altos de IGF-I en el ganado ovino expresión útero durante el estro mediante hibridación in situ, en comparación con otras fases del ciclo de celo. IGF-I de expresión y el posterior crecimiento uterino son inducidos por estradiol [12], que se refleja en nuestro estudio en el alto uterino IGF-I los niveles de mRNA de las ovejas en la tarde-fase folicular. No clásica elemento sensible estrógenos (ERE) se ha encontrado en el promotor de la IGF-I gene [28], pero todavía estrógeno regula su expresión [6]. De acuerdo con el papel de thioredoxin como factor de crecimiento del útero, sus niveles de mRNA fueron más altas en las ovejas en la tarde-fase folicular. Thioredoxin expresión se incrementó durante el celo también en los tejidos reproductivos del ratón [29]. Los niveles de mRNA de α ER y PR en el útero como se espera, mayor en la tarde-fase folicular que en la fase lútea [30].

En contraste con el útero, los niveles de IGF-I mRNA no se asociaron con el mayor peso del cuello del útero en las finales de la fase folicular en comparación con los otros grupos (Figura 2]. Los niveles de estradiol llegó a su máximo durante los dos días antes de la recogida de tejidos (Figura 1], y esto podría explicar la falta de diferencias en las cervicales IGF-I mRNA niveles entre las ovejas en la tarde-folicular y la fase lútea y la ovariectomised ovejas. En un estudio anterior Sahlin et al. [6] reportaron un prominente aunque transitoria de inducción (sólo las primeras 24 h de un período de tres días de tratamiento) de IGF-I mRNA en el cuello del útero de estradiol tratados corderos prepúberes. En el presente estudio, las ovejas en la tarde-fase folicular (asociado con niveles elevados de estrógeno) ha elevado el estado de equilibrio los niveles de ER α, PR y thioredoxin mRNAs en el cuello del útero.

En las ovejas en la fase lútea (bajo la influencia de la progesterona) el crecimiento del útero fue inducido, pero no del cuello del útero o la oviducts. Al igual que el estradiol, progesterona induce IGF-I de expresión y crecimiento uterino [12], y, de hecho, altos de IGF-I mRNA niveles se encontraron en el útero de las ovejas en la fase lútea. El aumento de endometrio expresión de IGF-I mRNA también se ha observado en los días 6 y 8 de embarazo en la especie ovina, cuando los estrógenos son bajos y la progesterona es elevada [31]. Sin embargo, los niveles de mRNA uterino de ER α, PR y thioredoxin de las ovejas en la fase lútea no eran diferentes de los de la ovariectomised ovejas y corderos. El cuello del útero y oviducto pesos de las ovejas en la fase lútea fueron similares a la de la ovariectomised ovejas y más bajo que el de las ovejas en la tarde-fase folicular, lo que sugiere que la progesterona no induce la proliferación de estos tejidos. El IGF-I en los niveles de mRNA cuello del útero y oviducts de las ovejas en la fase lútea no eran diferentes de los de la ovariectomised ovejas. Meikle et al. [20] observó un efecto similar diferencial de progesterona en el tracto reproductivo de las ovejas inmaduros. En ese estudio uterino aumento de peso tras el tratamiento de progesterona mientras que el del cuello del útero y oviducto pesos se mantuvo sin cambios, y esto está en consonancia con el aumento de IGF-I mRNA sólo en el útero [13]. Sin embargo, Stevenson et al. [4] No se observó este aumento uterino IGF-I en alta expresión los niveles de progesterona en la oveja.

La supresión ovárica de la fuente de esteroides sexuales por ovariotomía dado lugar a una reducción de las vértebras cervicales, útero y oviducto pesos, en comparación con las ovejas por la tarde-fase folicular. El peso del cuello del útero de la ovariectomised corderos fue inferior a ovariectomised ovejas, los corderos, pero no habían llegado a adulto de peso corporal a ovariotomía, por lo que su tracto reproductivo fue probablemente no completamente desarrollados. Ovariotomía a la edad (jóvenes frente a adultos) las transcripciones afectados: los niveles relativos de ER α y thioredoxin mRNAs fueron inferiores en oviducts, y de IGF-I mRNA en el cuello del útero de los animales jóvenes.

Nuestros resultados muestran que el calendario y los niveles relativos de la expresión de cada una transcripción en diferentes entornos endocrino dependerá de los órganos del tracto reproductivo, con el útero es el más dramáticos y profundos cambios. Los receptores de progesterona, IGF-I, y thioredoxin son todos los marcadores de acción de los estrógenos en el útero. En virtud de la igualdad de la exposición de distribuir esteroides durante la tarde-fase folicular (por ejemplo. Estrógeno dominante), las transcripciones se estimuló la mayoría en el útero. La regulación de la transcripción no es sólo de tejidos específicos, sino también la transcripción específicos. Aunque uterino y cervical PR mRNA parece seguir el patrón de ER α mRNA muy bien, la regulación de IGF-I y thioredoxin mRNAs parecía ser menos estrechamente asociados a este patrón, lo que sugiere la participación de otros factores en su regulación. La expresión diferencial de IGF-I y thioredoxin encontrado en este estudio podría deberse a diferentes mecanismos intracelulares dentro de los diferentes tipos de células, lo que permite las funciones específicas de cada órgano a pesar de estar expuestos a los mismos niveles de hormonas periféricas. Aunque no se abordan en este estudio, se sabe que el IGF-I, ER α y PR se expresan en un tipo de células específicas de esta manera y deben tenerse en cuenta desde la sensibilidad de la hormona al tejido diana depende de la expresión de receptores específicos y la cruz - hablar entre los diferentes tipos de células.

En resumen, nuestros resultados muestran que el IGF-I y thioredoxin expresión está regulada en un pañuelo de papel de forma específica a lo largo del tracto reproductivo, así como ER α PR y expresión. La expresión diferencial de transcripción se encuentran en el tracto reproductivo de las ovejas endocrinos en diferentes entornos en los que no eran las hormonas exógenas utilizadas, sugiere que las respuestas diferentes en la literatura en la hormona de animales tratados OVX puede depender de la expresión inicial de las transcripciones.

Agradecimientos

El cDNA humano para IGF-I es un generoso regalo de Peter Rotwein, Washington University School of Medicine, St Louis, Missouri, EE.UU., y el cDNA humano para thioredoxin fue proporcionado amablemente por el profesor Arne Holmgren, El Nobel de Medicina Instituto de Bioquímica, Karolinska Institutet, Stockholm, Suecia. Los ovinos ER y PR cDNAs fueron un generoso regalo de Nancy Ing, Texas A & M University, Texas, EE.UU.. El radioimmunoassays fueron realizados por el Departamento de Química Clínica, Universidad Sueca de Ciencias Agrícolas, Uppsala, Suecia. Este estudio fue apoyado por becas del Organismo Sueco de Investigación (subvención 03972), Instituto Karolinska y la Facultad de Agronomía, Universidad de la República, Montevideo, Uruguay.