Acta Veterinaria Scandinavica, 2006; 48(1): 10-10 (más artículos en esta revista)

Persistencia de anticuerpos en la sangre y los fluidos corporales en zorro cadáveres en descomposición, como, por ejemplo, anticuerpos contra el Microsporum canis

BioMed Central
Morten Tryland (morten.tryland @ veths.no) [1], Kjell Handeland (kjell.handeland @ vetinst.no) [2], Anna-Marie Bratberg (anna-marie.bratberg @ vetinst.no) [2], Inge - Tom Solbakk (Inge-tom.solbakk @ alpharma.no) [2], Antti OKSANEN (antti.oksanen @ eela.fi) [3]
[1] La Escuela Noruega de Ciencias Veterinarias, Sección de Medicina Veterinaria del Ártico, PO Box 6204, N-9292 Tromsø, Noruega
[2] Instituto Nacional de Veterinaria, PO Box 8156 Dep., N-0033, Oslo, Noruega
[3] National Veterinary and Food Research Institute EELA, Oulu Unidad Regional, POBox 517, FIN-90101 Oulu, Finlandia

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Resumen

Para ayudar a evaluar los resultados de las pruebas serológicas de animales muertos, 10 de plata zorros (Vulpes vulpes) y 10 azules zorros (Alopex lagopus), 6 de cada especie que previamente vacunados contra todos y desafió con Microsporum canis, se tomaron muestras de sangre y euthanased. Fox cadáveres fueron almacenadas a +10 ° C, y la autopsia se realizó en los días 0, 2, 4, 7 y 11 post mortem durante el cual las muestras de sangre y / o fluidos corporales de la cavidad torácica se recogieron. Los anticuerpos contra M. canis se midieron en un inmunoensayo enzimático (ELISA) como valores de absorbancia (densidad óptica; OD). Para evaluar la degradación de los anticuerpos, la relación entre post mortem y ante mortem absorbancia se calculó. La media de absorbancia de las muestras recogidas durante la autopsia fue en general inferior al de las muestras procedentes de animales vivos. En muestras de sangre, esta diferencia aumentó significativamente con el tiempo (P = 0,04), mientras que en muestras de líquido corporal se redujo la diferencia (no significativa, p = 0.18). Sugerimos que un resultado serológico positivo de las pruebas de sangre o fluidos corporales de un animal muerto puede ser considerado como valioso, aunque las prevalencias específicas de detección obtenidos por las poblaciones sobre la base de este tipo de material puede representar una subestimación de la verdadera prevalencia de anticuerpos. Negativos los resultados de las pruebas serológicas basadas en material de canales pueden ser menos concluyentes, se tuvieron en cuenta las condiciones generales en los procesos de degradación de los cadáveres en descomposición, incluso con la participación de inmunoglobulina proteínas.

Fondo

Los cadáveres de animales silvestres obtenidos de la autopsia con frecuencia se encuentran en un avanzado estado de descomposición post mortem, lo que complica la evaluación morfológica y menoscaba la posibilidad de hacer un diagnóstico correcto [1]. Además de un examen morfológico, el patólogo de vida silvestre también puede utilizar varias pruebas, tales como el aislamiento del agente infeccioso, la detección de antígenos en los tejidos por inmunohistoquímica o reacción en cadena de polimerasa [2, 3]. También las pruebas serológicas basadas en la demostración de anticuerpos específicos contra varios agentes infecciosos se llevan a cabo en animales muertos [4 - 6]. Por lo tanto, un uso sistemático de las pruebas serológicas en material de autopsia pueden dar información muy valiosa sobre la presencia de determinadas infecciones en las poblaciones de vida silvestre. La velocidad de descomposición post mortem de las canales se ve afectada por la temperatura ambiente, mayor es la temperatura, más rápida será la avería. El destino de las inmunoglobulinas en los cadáveres en descomposición no es muy conocido, pero obviamente será sometida a la descomposición como otras proteínas y materia orgánica. Estudios sistemáticos sobre la disponibilidad de sangre y fluidos tisulares y su utilidad para las pruebas serológicas durante la descomposición post mortem están desaparecidos. El presente trabajo se llevó a cabo para estudiar la persistencia de anticuerpos específicos para el dermatofito Microsporum canis en los cadáveres examinados zorro en las diferentes etapas de descomposición post mortem.

Al final de una tiña (Microsporum canis) la vacuna desafío juicio en zorros [7], 10 aparentemente sanos de granja plata zorros (Vulpes vulpes) y 10 azules zorros (Alopex lagopus) se pusieron a disposición para este estudio. Seis animales de cada especie que han sido vacunados contra la M. canis (cepas atenuadas R 1 / 96 y R 2 / 96, Instituto Nacional de Veterinaria, Noruega, cepa de recogida, no adjuvance) a las 4 y 6 semanas de edad, y a la edad de 11 semanas, todos los animales habían sido impugnados por un roce suspensión que contiene microconidia de una cepa virulenta de M. canis (cepa R 14/96, Instituto Nacional de Veterinaria cepa colección) tópica en la espalda. Seis semanas más tarde, todos los zorros se anesthetised con xylazin (Rompun ® Bayer AG, Leverkusen, Alemania), la muestra de sangre, y euthanased. La autopsia se realizó utilizando procedimientos normalizados. Cuatro animales fueron autopsiados 4 horas post mortem (Día 0), el resto después de almacenamiento para 2, 4, 7, 9, y 11 días (Cuadro 1] a +10 ° C, que es aproximadamente la temperatura media de verano en el norte, sub-ártico de Noruega. En la autopsia, el grado de descomposición fue evaluada, y la sangre se recogió después de incisión de la base del corazón, hilus del hígado, y la arteria femoral y vena. Además, el líquido de la cavidad torácica (fluidos corporales) fue recogido al presente. La sangre y fluidos corporales muestras fueron centrifugadas a 2800 g durante 10 minutos, y el sobrenadante fue recogido y almacenado a -40 ° C hasta su análisis.

La sangre y los fluidos corporales fueron analizadas por inmunoensayo enzimático (ELISA) utilizado en el M. canis vacunación juicio [7]. Immunoplates fueron recubiertos con un antígeno soluble (100 μ l, 1 μ g / ml) de microconidia de la M. canis cepas utilizadas para la vacunación. Las muestras de suero fueron prediluted 1:4000 antes de la prueba. Conejo-anti-IgG zorro plateado se utilizó como secundaria de anticuerpos, mientras que el rábano picante y conjugado con peroxidasa burro anti-Ig de conejo fue utilizado como terciario anticuerpos. Absorbancia a 450 nm (OD 450) se midió a expresar la concentración de anticuerpos. Para evaluar el desarrollo post mortem de absorbancia a partir del día los zorros fueron asesinados al día en que fueron autopsiados, la relación entre la absorbancia post mortem y ante mortem absorbancia se calculó. La absorbancia, con el tiempo, se utilizó en un modelo de regresión lineal (STATISTIX 7 para Windows paquete de software; Analítica Software, Tallahassee, FL, EE.UU.). La absorbancia ratios (post mortem de sangre / sangre ante mortem, post mortem líquido corporal / sangre ante mortem) de las muestras de cada animal se dan en la Tabla 1. El ante mortem, los valores fueron significativamente mayores en plata (media de 0,35, desviación estándar (DE) 0,17) que en azul zorros (0,21, sd 0,06) (P = 0,02). La absorbancia de las muestras recogidas durante la autopsia (sangre y fluidos corporales) fue en general inferior al de las muestras procedentes de animales vivos. En muestras de sangre, esta diferencia aumentó significativamente con el tiempo (P = 0,04), mientras que en muestras de líquido corporal, la diferencia se redujo, pero la disminución no fue significativa (P = 0.18). Parcelas para los modelos de regresión se muestran en la Figura 1 y 2.

Rigor mortis estuvo presente en todos los canales autopsia en el día 0, y abundantes cantidades de fluido de sangre estaban disponibles en los grandes vasos. Amarillento líquido corporal (<1 ml) fue obtenido de la cavidad pericárdica de un animal. En los días 2, el rigor mortis había pasado fuera. Una considerable cantidad de fluido de sangre se puede obtener de los grandes vasos, y un color amarillo a rojo líquido corporal (hasta 1,5 ml) está disponible en la cavidad torácica de todos los canales. Los cadáveres examinados en el día 4 post mortem mostró que los cambios incluyen la reducción intraocular tono grisáceo y descoloridos córnea, incipiente amarillo-verde decoloración de la pared abdominal, y el tejido imbibición. Cantidades moderadas de sangre espesa se puede obtener de los grandes vasos, y amarillo-rojo líquido corporal (hasta 2 ml) estuvo presente en la cavidad torácica. Un cadáver también había una pequeña cantidad de líquido en la cavidad pericárdica. En los cadáveres examinados en días 7 a 11, los cambios post mortem habían seguido avanzando. Hubo un gris-marrón a verde decoloración de toda la pared corporal. Los pulmones son marrón-verde descolorida, y el hígado y los riñones se ha convertido grisáceo y suave. En los días 7-9 cadáveres tenía un olor náuseas, convirtiendo a degradado al día 11. Pequeñas cantidades de sangre espesa se obtuvieron a partir de los grandes buques de las canales en 7-9 días. Al día 11, sólo pequeñas cantidades de semi-líquido de la sangre estaban disponibles. Varios ml de líquido corporal rojo estuvieron presentes en la cavidad torácica en el día 7. En 9-11 días, la cantidad de líquido en la cavidad torácica ha aumentado (hasta 15 ml) y se convirtió de color marrón oscuro en color.

Hemos encontrado en general más altos valores de absorbancia de plata para los zorros en comparación con los zorros azules. Esto puede indicar una especie depende de afinidad, ya que de conejo anti-IgG zorro plateado se utilizó como anticuerpo secundario en la prueba ELISA. Sin embargo, ya que estaban interesados en la diferencia en la absorbancia a partir del día de la eutanasia para el día de la autopsia para cada individuo, la especie detectada diferencia en los valores de DO no debería representar un sesgo en este estudio. En los canales almacenados zorro, el fluido de sangre podrían ser obtenidos a partir de grandes buques de alrededor de 1 semana post mortem. El general y la inmediata disminución de la absorbancia, ante mortem de muestras de sangre post mortem de muestras de sangre en el Día 0, obtuvo sólo 4 horas después de la muerte, no se esperaba, y no tenemos explicación para esto. Como cabía esperar, debido a post mortem desglose de los anticuerpos, la relación entre los anticuerpos detectables en sangre post mortem los días siguientes ante mortem y sangre fue disminuyendo con el tiempo, lo que indica que la cantidad de anticuerpos contra el M. canis disminuido en la sangre de los cadáveres con el tiempo de almacenamiento. Nueve días post mortem, cuando algunos sangre todavía era de colección, el promedio de absorbancia se ha reducido en más del 50% en el actual ELISA.

La cantidad de líquido corporal en la cavidad torácica, aumento de hasta 11 días post mortem (el punto final del estudio). Es interesante y tal vez inesperado para ver que la relación entre los anticuerpos detectables en post mortem líquido corporal ante mortem y sangre aumentado con el tiempo, es decir, la cantidad de anti-M. canis anticuerpos en los fluidos corporales aumentó ligeramente con el tiempo de almacenamiento de los zorros. Esto puede indicar que el compartimento de líquido corporal se hizo más concentrada en el tiempo a pesar del aumento en el volumen, posiblemente debido a una deshidratación general de las canales. En la práctica, parece que cuando la disponibilidad de sangre líquido disminuye, muestreo y análisis líquidos corporales puede ser una alternativa razonable. También es posible que otros tipos de tejidos fluidos sería tan bien o mejor adaptadas para demostrar anticuerpos de la sangre o fluidos corporales libre utilizadas en el presente juicio [8]. A modo de ejemplo, los músculos líquido ha demostrado ser adecuado en los estudios sobre la serología de Trichinella sp. en la especie porcina [9].

En conclusión, sugerimos que un resultado positivo serológicas de la sangre o fluidos corporales de un animal muerto puede ser considerado como valioso, lo que indica la exposición a determinados agentes infecciosos, incluso muchos días post mortem. Un resultado negativo, sin embargo, puede ser menos concluyentes. Por lo tanto, específicos seroprevalencias obtenidas a partir de una proyección de una población, basada en la sangre o fluidos corporales de los cadáveres puede representar una subestimación de la verdadera prevalencia en la población. Órgano de líquido de la cavidad torácica parece constituir un material de ensayo alternativos cuando la sangre ya no es adecuado o se encuentren disponibles en la carcasa.