Acta Veterinaria Scandinavica, 2006; 48(1): 12-12 (más artículos en esta revista)

Un estudio preliminar sobre la inducción de la ovulación dioestrous en la yegua - un posible método para inducir la prolongada fase lútea

BioMed Central
Ylva Hedberg (ylva.hedberg @ kv.slu.se) [1], Anne-Marie Dalin (marie.dalin-anne @ kv.slu.se) [1], Malin Santesson (msantesson@hotmail.com) [1] , Hans Kindahl (hans.kindahl @ kv.slu.se) [1]
[1] División comparativo de Reproducción, Obstetricia y Salud de la ubre, del Departamento de Ciencias Clínicas, PO Box 7054, Universidad Sueca de Ciencias Agrícolas, SE-750 07 Uppsala, Suecia

Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License (http://creativecommons.org/licenses/by/2.0], que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que la obra original es debidamente citados.

Resumen
Fondo

Fuerte síntomas de celo en la yegua puede causar problemas con las carreras, formación y manipulación. Desde de acción prolongada tratamiento de progesterona no está permitida en yeguas a la competencia (por ejemplo, de acuerdo con las normas FEI), hay una necesidad de métodos para reprimir no deseados ciclicidad. Dioestrous ovulations espontánea a finales de la fase lútea puede causar una prolongación de la fase lútea en yeguas.

Métodos

En este estudio preliminar, en un intento de inducir la ovulación durante la fase lútea, gonadotropina coriónica humana (hCG) (3000 UI) se inyectó por vía intramuscular en cuatro yeguas (grupo experimental) en la fase lútea dioestrous cuando un folículo ≥ 30 mm se detectó. Un quinto yegua se incluyen en este grupo no fue tratado debido a no detectables dioestrous folículos ≥ 30 mm. Cuatro yeguas de control se inyecta de manera similar con solución salina. Las yeguas fueron seguidas con ultrasonido durante 72 horas después de la inyección o hasta la ovulación. Las muestras de sangre para análisis de progesterona se obtuvieron dos veces por semana durante un mes y, posteriormente, una vez por semana durante otros dos a cuatro meses.

Resultados

Tres de los tratados con hCG yeguas ovularon un plazo de 72 horas después del tratamiento prolongado y desarrollado lútea fases de 58, 68 y 82 días respectivamente. Una yegua nunca tratados ovularon después de la inyección de hCG y progesterona, los niveles cayeron por debajo del 3 nmol / l, nueve días después del tratamiento. Los niveles de progesterona en el control yeguas fueron inferiores a 3 nmol / l en los nueve días después de inyección de solución salina, a excepción de una yegua, que desarrolló una forma espontánea prolongada fase lútea de 72 días.

Conclusión

HCG tratamiento puede ser un método para inducir fases lútea prolongada en la yegua siempre que haya un dioestrous folículo ≥ 30 mm que ovulates post-tratamiento. Sin embargo, el método tiene que ser probado en un mayor número de yeguas para poder sacar conclusiones en cuanto a su eficacia.

Fondo

Según muchos propietarios de yegua, el celo síntomas fuerte resultado en dificultades con la capacitación y el manejo de los animales [1, 2]. Un método fue utilizado anteriormente para tratar con esas yeguas de acción prolongada de progesterona [3, 4]. Sin embargo, este tratamiento no está permitida para su uso en las carreras de competencia o yeguas de acuerdo con muchas autoridades europeas de carreras, como el Jockey Club británico [5] y el sueco viajan Association (STC) [6], y también con arreglo a las normas de la Federación Ecuestre Internacional (FEI) [7]. Además, en Suecia, de acción corta de tratamiento de progesterona, como el altrenogest por vía oral, está prohibida para su uso en la competencia a caballo [8] y ha recomendado la retirada de drogas tiempo de 14 días en los caballos de carreras Standardbred (comunicación personal, Peter Kallings). Otro método, el aplastamiento de embriones para lograr una prolongada fase de la progesterona, ha sido recientemente presentado [9]; también, la inserción de vidrio o de plástico bolas en el útero se ha utilizado para prolongar la fase lútea en yeguas [10, 11]. Sin embargo, algunos consideran que estos métodos a ser inadecuada y el uso de dispositivo intrauterino bolas no está permitida en Suecia en las carreras de caballos [6]. Por lo tanto hay una necesidad de técnicas alternativas. Mares, en contraste con hembras de otras especies de mamíferos, tienen la capacidad de ovular durante dioestrus, cuando las concentraciones séricas de progesterona son elevados. La frecuencia de dioestrous ovulations varía en función de raza, pura sangre y en Barrio Caballos hasta el 20% de ovulations se producen durante la fase lútea [12], mientras que la frecuencia de dioestrous ovulations es muy baja en ponis [13]. Los folículos que crecen y ovular durante dioestrus no causan el celo signos, debido a los efectos de supresión de la progesterona sobre el comportamiento de celo [12]. Dioestrous ovulations espontánea que se producen entre uno a cuatro días antes de la luteólisis puede causar una fase lútea prolongada, debido a la inmadurez cuerpo lúteo que se refractaria a las prostaglandinas, como lo demuestra el tratamiento de prostaglandina exógena [14]. Un estado refractario a la prostaglandina endógena para hasta cuatro días después de la ovulación también fue demostrado por el uso de infusión de solución salina intrauterinos [15, 16]. La media normal dioestrous longitud, procedentes de diversos informes, es 14,9 días (rango de 12,1 a 16,3 días) [17] y en un estudio, las fases lútea prolongada duró una media de 63 días (rango 35-96 días) [18] . Daels et al. [19] demostró que la ovulación inducida por la gonadotropina coriónica humana (hCG) durante el altrenogest tratamiento podría dar lugar a una prolongada fase lútea (5 / 6 de las yeguas que ovularon). El presente estudio fue diseñado para evaluar si hCG ovulación inducida por la tarde durante la fase lútea en yeguas causará una prolongada fase lútea. Tanto el método de Daels et al. [19] y el método utilizado en el presente estudio se eliminaría el celo comportamiento durante un período de tiempo debido a los altos niveles de progesterona endógena. Sin embargo, una ventaja con el método presentado en este documento, en comparación con el método de Daels et al. [19], es que el altrenogest exógenos tratamiento no se utiliza.

Métodos
Los animales, la gestión y la vivienda

El experimento se realizó en abril y septiembre de 2004. Todos los procedimientos fueron aprobados por el Comité Ético de Experimentación con Animales, Suecia. Nueve yeguas un peso comprendido entre 450 y 550 kg y con una edad lapso de cuatro a 20 años fueron utilizados en el estudio. Ocho de las yeguas fueron Standardbred trotters y uno era un sueco warmblood mare (mare A). Las yeguas se mantuvieron a la División de Reproducción comparativo, Obstetricia y Salud de la ubre, del Departamento de Ciencias Clínicas y estaban todos de propiedad del departamento. Desde la primera semana de diciembre de 2003, las yeguas se pusieron en tratamiento con luz durante 16 horas por día. Antes de que el período experimental, las yeguas se habían teased diario con un semental, lo que demuestra que todas las yeguas habían ciclo normal de celo longitudes de al menos dos ciclos antes de comenzar el estudio (tres ciclos en todas las yeguas, pero uno). En abril y mayo, todas las yeguas fueron estacionados en el interior de paja en cajas individuales sueltos durante la noche y dejar salir a los pastos durante el día (alrededor de 08.00 a 15.00 h). Las yeguas fueron alimentados con heno de pasto (por la mañana, mediodía y noche) y una pequeña cantidad de avena, remolacha azucarera empapado y un suplemento mineral (por la tarde). Desde la primera semana de junio y después de al menos un mes de estudio experimental en el departamento, siete de las yeguas fueron transportados a los pastos a 30 km del departamento, donde se les mantuvo al aire libre las 24 horas del día hasta el final del estudio. Las yeguas siempre tuvieron libre acceso al agua. Una yegua (yegua T) se trasladó a los pastos después de tan sólo 15 días de estudio; había recibido hCG, pero no ovular y mostró síntomas de celo en el departamento antes de ser trasladado.

Procedimiento experimental

Las yeguas fueron divididos aleatoriamente en un grupo experimental (n = 5) y un grupo control (n = 4). Cuando las yeguas se encuentran en el departamento, las burlas con un semental se realizó al día y el celo signos se anotó lo siguiente: + 1 para aumentar la cola, + 1 para clitorial guiño / micción y + 1 de pie en una postura straddled, con celo de comportamiento definidos como una puntuación de + 2 o superior. Cuando el comportamiento del celo fue detectado, examen de ultrasonido transrectal (seis sonda lineal MHz, 485 Anser, Pie Medical, Maastricht, Holanda), del útero y los ovarios se realizó cada dos días hasta que se confirmó la ovulación. De allí en adelante, de aproximadamente ocho días después de la ovulación en dioestrus, ecografía transrectal de nuevo examen se realiza cada dos días para determinar el tamaño de los folículos dioestrous. Tres yeguas (Ev yeguas, Ma y L) fueron por razones técnicas no se examinan en celo y seguido de sólo ocho días después del último celo se detectaron signos, sino que tenía un cuerpo lúteo y los niveles elevados de progesterona en el tratamiento. Cuando un folículo ≥ 30 mm de diámetro fue detectado, 3000 UI de hCG (Pregnyl ®, Organon AB, Gotemburgo, Suecia) o un volumen igual de solución salina (2 ml) se inyectó por vía intramuscular. Las yeguas fueron seguidos con ecografía durante un máximo de 72 horas o hasta que la ovulación. Posteriormente, las yeguas fueron examinadas con ultrasonidos una vez por semana durante tres semanas. Una yegua (yegua T) sólo fue examinado dos veces después del tratamiento; no había ovularon después de la inyección de hCG y el celo mostró signos burlas durante ocho días después del tratamiento. A partir del día el tratamiento (hCG o solución salina), las muestras para el análisis de progesterona se obtuvieron a partir de la vena yugular en un tubo heparinizado evacuados. Posteriormente, las muestras de sangre para análisis de progesterona se tomaron dos veces por semana durante al menos un mes y luego una vez por semana durante otros dos a cuatro meses. Una yegua (una yegua) fue la muestra sólo una vez por semana durante toda la duración del estudio. Esta yegua, sin embargo, fue teased diario y examinadas con ultrasonidos una vez o dos veces por semana durante todo el período de estudio. En dos yeguas (yeguas y Ex A) dos y una de las muestras, respectivamente, se tomaron ocho o nueve días (ver Fig. 1]. Todas las muestras de sangre fueron inmediatamente centrifugada y el plasma almacenado a -20 ° C. Mares se define como en la fase lútea si progesterona valores fueron superiores a 3 nmol / l [17] en las muestras tomadas dos veces por semana y por encima de 10 nmol / l en las muestras tomadas una vez por semana [20, 21]. Si no folículos con un tamaño de al menos 30 mm fueron detectados en un período dioestrous, las yeguas fueron seguidas como se indica más arriba, a lo sumo, un total de tres fases lútea.

Terapia hormonal de análisis

La concentración de progesterona en plasma de sangre periférica se determinó mediante una fase sólida radioinmunoensayo (Coat-a-Count progesterona, productos de diagnóstico Corporation, Los Ángeles, EE.UU.). El kit se utiliza de acuerdo con las instrucciones del fabricante. La relativa reacciones cruzadas de los anticuerpos fueron del 0,9% con corticosterona y el 0,1% con testosterona. La intra-ensayo coeficientes de variación de progesterona fueron los siguientes: el 1,4% a 3,4 nmol / l; 5,2% a 24,2 nmol / l; 4,1% a 56,1 nmol / l. La sensibilidad mínima de ensayo de progesterona fue de 0,1 nmol / l.

Resultados

Los principales resultados se resumen en la Tabla 1. Tres de nueve yeguas desarrollado folículos que estuviera por encima de 30 mm (y por lo tanto pueden ser tratados) en la primera fase lútea examinados. El resto de yeguas desarrollado suficientemente grandes folículos en el segundo (n = 4), tercero (n = 1) o en ninguno (n = 1) de la fase lútea estudiado. Dependiendo de si una yegua se trató en el primer, segundo o tercer período dioestrous después del inicio del experimento (debido al tamaño de folículo), yeguas fueron seguidos por entre 90 y 160 días después del tratamiento. Tres de los cuatro tratados con hCG ovularon yeguas, por lo que en las fases lútea, tal como se definen en los materiales y métodos, con una duración de 58, 68 y 82 días post-tratamiento, respectivamente (Cuadro 1]. La figura 1 muestra su post-tratamiento las concentraciones de progesterona. Estas yeguas fueron tratados entre ocho y diez días después de la ovulación fue confirmada por ultrasonido (en días) o después de la última detectado el celo signos (mare Ev), lo cual significa que su actual fase lútea se prolongó durante al menos 69, 77 y 90 días. Dos de los tratados con hCG yeguas (yeguas y un Ev) nunca se trasladaron a los pastos y, por consiguiente, teased diario la aparición de síntomas de celo y una yegua examinarse con ultrasonido. El celo yeguas mostraron signos en día 62 (mare Ev) y 88 (una yegua) después del tratamiento y sus niveles de progesterona fueron por debajo del 3 nmol / l. A Mare había otros dos fase lútea ovulations que se asociaron con dos picos en sus niveles de progesterona (ver Fig. 1]. El tercer mare (Ex yegua) no mostraron ningún síntoma de celo durante el tiempo que aún se conservan en el departamento (37 días). Una yegua adicional en el grupo experimental (mare O) nunca desarrolló una dioestrous folículo superior a 30 mm en cualquiera de las tres fases lútea estudiado y por lo tanto, nunca fue tratada. Otra yegua en este grupo (yegua T) inyectados con hCG en la tercera fase lútea estudiado no ovular como consecuencia de ello, aunque tenía un folículo superior a 30 mm en el tratamiento. Esta yegua mostró síntomas de celo ocho días después de la inyección se ha dado. El nivel de progesterona fue baja (<3 nmol / l).

Ninguna de las yeguas de control tratados con solución salina ovularon durante la fase lútea. En tres yeguas (yeguas Ma, J y L), progesterona valores se redujo por debajo del 3 nmol / l en los nueve días post-inyección. Dos de estas yeguas (yeguas y Ma L) mostró síntomas de celo en asociación con la caída de la progesterona lo que dioestrous longitudes de 18 y 23 días respectivamente. Mare J había silencio celo examen de ultrasonido y tres días después de los valores bajos de progesterona reveló un nuevo cuerpo lúteo (blando a la palpación) y el aumento de los niveles de progesterona a 28 nmol / l, cuatro días más tarde. Mare de mí nunca desarrolló un folículo ≥ 30 mm en la primera fase lútea estudió y obtuvo un espontáneo prolongación de esta fase lútea. Por lo tanto, ella fue inducida con la prostaglandina F 2 α (a día 22 de dioestrus) (1 ml Dinolytic ® vet., 5 mg, Orion, de sanidad animal, Sollentuna, Suecia). También desarrolló una forma espontánea prolongada fase lútea después del tratamiento de solución salina que se prolongó durante 72 días. La Figura 2 muestra la yegua de mí los niveles de progesterona durante el estudio y también los niveles de progesterona J yegua para la comparación con una yegua que a ciclos normalmente. Mare de mí no mostraron síntomas de celo después salina tratamiento durante el tiempo que se mantuvo en el departamento (28 días).

La progesterona análisis de todas las muestras puso de manifiesto que una de las yeguas de control (yegua Ma) que entró en celo después de la inyección de solución salina de entonces desarrolló una prolongada fase lútea durante 76 días.

Discusión

En el presente estudio, el hecho de que el cuerpo lúteo inmaduros no responden a las luteolytic efecto de la prostaglandina endógena fue utilizada en un intento de producir una prolongada fase lútea [15, 16, 22]. Las yeguas en el grupo de tratamiento con hCG que se desarrollaron las fases lútea prolongada ovularon entre los días diez y 13 en dioestrus. De este modo, el cuerpo lúteo fueron un máximo de cuatro días de edad, y presumiblemente refractaria, en el momento de la liberación de prostaglandina endógena que se produce en torno días 14 al 17 de dioestrus [22, 23]. El incumplimiento del endometrio para la liberación de prostaglandinas en el momento de la luteólisis (por ejemplo, debido a endometritis crónica, reconocimiento de maternidad o embarazo para idiopática razones) también pueden causar una prolongada fase lútea en la yegua [23 - 27]. Hubiera sido de interés para medir los niveles de prostaglandinas metabolito para descartar que la liberación de prostaglandinas afectada no era una causa de la prolongada fase lútea. Lamentablemente, esto fue por razones prácticas, no es posible en el presente estudio. A pesar de todas las yeguas ha demostrado longitudes ciclo normal antes del estudio, una yegua (yegua de mí) ha desarrollado una prolongada fase lútea en el primer ciclo de estudio y también, en los posteriores, solución salina tratados, ciclo.

Las yeguas que ovularon como resultado de la hCG tratamiento desarrollado las fases lútea prolongada que duró aproximadamente dos a tres meses. Otros estudios también han demostrado lútea prolongada actividad en la yegua a la última para similares períodos de tiempo [28, 29]. Se ha propuesto que para que el útero para la producción y liberación de prostaglandinas en respuesta a la oxitocina (como ocurre en luteólisis), un período de bajos niveles de progesterona (es decir, del celo), seguido de un período con altas concentraciones de progesterona (es decir, dioestrus), es necesario [27, 30, 31]. Una primera prolongación de la fase lútea, cuando una caída en los niveles de progesterona no se produce en el momento previsto, parece que haga que el útero menos sensibles a la oxitocina [27]. Esto, a su vez se traduce en problemas de la síntesis de prostaglandinas, liberación y una prolongada fase lútea duradera para un máximo de tres meses. Por razones que se desconocen, el útero recupera finalmente su capacidad de respuesta inducida por la oxitocina y la producción de prostaglandinas es de nuevo posible, finalmente resulta en luteólisis y celo [27, 29].

Se ha sugerido que la prolongación de la actividad lútea puede ser causada por más de un cuerpo lúteo en desarrollo en la sucesión en lugar de por la persistencia de un solo cuerpo lúteo [32]. En el presente estudio, la longitud de la fase lútea fue determinada por el análisis de progesterona sola, y, por tanto, no se sabe si el cuerpo lúteo desarrollado como resultado de la hCG tratamiento fue activa durante toda la fase lútea prolongada o si posteriores cuerpo lúteo. Una yegua (una yegua), sin embargo, fue examinado con ultrasonido a lo largo del estudio. En ese mare, dos picos en la curva de progesterona se encontraron asociados a dos ovulations durante la fase lútea (además de la hCG induce la ovulación), lo que podría haber contribuido a aumentar los niveles de progesterona (ver Fig. 1].

De las yeguas que ovularon como resultado de la inyección de hCG, 100% (3 / 3) desarrollado las fases lútea prolongada, es decir, el 75% del número total de hCG tratada con yeguas. Entre las yeguas de control, el 25% (1 / 4) ha desarrollado una forma espontánea prolongada fase lútea en el ciclo de tratamiento de solución salina (esta yegua mostró lútea prolongada actividad en dos ocasiones durante el estudio; ver resultados). En el ciclo de celo tras la salina ciclo de tratamiento, otra yegua desarrollado espontáneamente una prolongada fase lútea. Así, en total, 2 / 4 yeguas control mostró lútea prolongada actividad. La incidencia de los llamados espontáneos prolongación de la actividad luteal en la yegua se ha informado a ser común en algunas razas. Un estudio siguientes siete yeguas (pura sangre y los cuartos de Caballos) a lo largo de un período de dos años informó de 12 casos de la fase lútea prolongada [29]. Otro estudio ha reportado una incidencia de la prolongada fase lútea de sólo el 3,6% en trotter yeguas [33].

De acuerdo con Fortune [34], sólo alrededor de un tercio de yeguas tienen una secundaria onda folicular. Otros estudios, sin embargo, muestran que la mayoría de las yeguas tienen una onda folicular secundario que se produce durante dioestrus, que va acompañado de un aumento de FSH y puede conducir a la ovulación [18, 35]. Raza diferencias pueden explicar estos resultados divergentes. Los estudios han demostrado que la pura sangre tienen una mayor incidencia de dos grandes olas en comparación con Standardbreds, Barrio caballos y ponis [17, 36]. El presente estudio indica que el máximo tamaño folicular durante dioestrus puede variar dentro de un mismo animal y algunas yeguas que nunca podrá desarrollar folículos grandes (> 30 mm) en la fase lútea. Tal vez usando pura sangre, frente a Standardbreds se han mostrado resultados diferentes.

Una hCG tratados con una yegua dioestrous folículo superior a 30 mm no ovular, como resultado del tratamiento. Pocos estudios se han realizado en lo que el tamaño óptimo folículo es cuando la inducción de la ovulación con hCG, aunque la mayoría de los estudios el uso de 35 mm como tamaño mínimo cuando yeguas están en celo, que también es seguido en la práctica [27, 37, 38]. Que el folículo en fase de crecimiento activo, y no en regresión, es probablemente crucial [17]. La razón para seleccionar un tamaño de folículo de 30 mm o superior fue porque se sospecha que algunas yeguas se desarrollaría muy grandes folículos en dioestrus, que también ha sido confirmado. El folículo de una yegua no ovulan después de hCG tratos, tal vez debido a la inmadurez del folículo. Se ha demostrado que sólo los folículos con nueve a diez capas de células de la granulosa responder a la FSH y continuar su crecimiento y que sólo unos pocos de estos folículos son capaces de ovular [34]. Los estrógenos y andrógenos por la producción folículo parece ser importante en su maduración final y se ha demostrado que el desarrollo de folículos durante la fase lútea producen menos estrógenos, que pueden dar lugar a dioestrous folículos ser menos sensible a hCG [34].

Por lo tanto, hay limitaciones a la utilidad del método actual en la práctica. Mares pueden tener que deben seguirse para más de una fase lútea antes de que un folículo, de tamaño adecuado, se detecta y algunas yeguas nunca podrá ser lo suficientemente grandes como desarrollar folículos. Por otra parte, aun cuando el folículo es más grande que 30 mm, no es seguro que la ovulación se va a producir. Sin embargo, modificar el método mediante el uso de inyecciones repetidas de hCG en pequeñas dosis puede dar mejores resultados. La ovulación de folículos tan pequeño como 20 mm ha logrado gracias a 200 UI de hCG dado al día (siete de cada ocho yeguas pony ovularon en una media de nueve días) [39].

Conclusión

Como un método de inducción prolongada fase lútea en la yegua, los resultados de este estudio preliminar puede sugerir el uso de hCG en las finales de la fase lútea, proporcionando un folículo mayor de 30 mm está presente y ovulates como resultado del tratamiento. El método no involucra el uso de sustancias prohibidas con fines de competencia y por lo tanto, potencialmente podría ser utilizada para la competencia yeguas cuyo rendimiento se ve afectado por el ciclo de celo. Sin embargo, a la conclusión de que el método es eficaz y aplicable a la práctica, es necesario repetir el estudio utilizando un mayor número de yeguas.

Conflicto de intereses

Los autores declaran que no tienen intereses en conflicto.

Autores de las contribuciones

Todos los autores participaron en el diseño del estudio. YH, MS y AMD examinó las yeguas y participó en la recogida de muestras. MS analizaron las muestras de sangre. YH y MS redactado el manuscrito. AMD y HK concebido del estudio, han participado en su coordinación y ayudó a redactar el manuscrito. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

Agradecimientos

Los autores desean expresar su agradecimiento a Mari Wallbring, Carola Jansson y Ulrika Mattsson para el manejo de las yeguas y con la asistencia a la toma de sangre.