BMC Pregnancy and Childbirth, 2006; 6: 28-28 (más artículos en esta revista)

Virus del papiloma humano en el líquido amniótico

BioMed Central
T Mack Ruffin (mruffin@umich.edu) [1], Joanne M Bailey (jabailey@umich.edu) [2], Diane Roulston (droulstn@umich.edu) [3], Daisy R Lee (del5@cdc.gov ) [4], Ruth Ann Tucker (rat1@cdc.gov) [4], David C Swan (dswan@cdc.gov) [4], Elizabeth R Unger (eru0@cdc.gov) [4]
[1] Departamento de Medicina Familiar, University of Michigan, 1018 Fuller St, Ann Arbor, MI 48109-0708, EE.UU.
[2] Departamento de Obstetricia y Ginecología de la Universidad de Michigan, Enfermera matronas, F4835 Mott 0264, Ann Arbor, MI 48109-0264, EE.UU.
[3] Departamento de Patología, Universidad de Michigan, 1301 Catherine Road, Ann Arbor, MI 48109-0602, EE.UU.
[4] División de Enfermedades Víricas y Rickettsiales, los Centros para el Control y Prevención de Enfermedades, 1600 Clifton Rd. B6109 NE, Atlanta, GA 30329, EE.UU.

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Resumen
Fondo

Hay pruebas que sugieren que el virus del papiloma humano (VPH) puede atravesar la placenta resultando en in-utero transmisión. El objetivo de este estudio fue determinar si el VPH se puede detectar en el líquido amniótico de mujeres con membranas intactas amniótico.

Métodos

Residual líquido amniótico y las células cultivadas "pellets" de realizarse la amniocentesis para el diagnóstico prenatal se utiliza. PGMY09/11 L1 primers consenso y GP5 + / GP6 + cebadores se utilizaron en un anidados reacción de polimerasa en cadena de ensayo para el VPH.

Resultados

Hubo 146 pares de muestras de 142 mujeres que representan a 139 embarazos simples, 2 embarazos gemelares, y el 1 de embarazo de trillizos. Las mujeres fueron el 78% caucásicos, el 5% African American, 14% asiáticos y el 2% hispanos. La edad media fue 35,2 años con un rango de 23-55 años. Todas las muestras fueron β-globina positiva. El VPH no se detectó en ninguno de los pares de muestras.

Conclusión

Dado el rango de edad, la raza y la etnicidad de la población de estudio, sería anticipar algunas pruebas de VPH si podría fácilmente atravesar la placenta, pero no había ninguno.

Fondo

Infección por virus del papiloma humano (VPH) es causal en el desarrollo de genitales y orales de cáncer [1, 2]. Infección por VPH se considera una infección de transmisión sexual entre los adolescentes y los adultos [3]. Las tasas de detección de infección por VPH de reacción en cadena de polimerasa (PCR) han oscilado en general entre 1% y el 20% en los recién nacidos de mujeres embarazadas sin aparente infección en su cérvix [4 - 7] y entre el 5% y 72% en mujeres con VPH relacionados con cervical enfermedades diagnosticadas durante el embarazo [8]. Muchos investigadores creen que los bebés están expuestos al VPH e infectadas durante el parto vaginal [9, 10]. En contraste, algunos investigadores han sugerido que la transmisión vertical es posible sin evidencia de relaciones sexuales vaginales o cervicales en contacto con la secreción del feto [11 - 16]. Sin embargo, el número de mujeres estudiadas para confirmar la transmisión placentaria de VPH ha sido limitado.

El objetivo de este estudio fue determinar si el VPH podría ser detectado en el líquido amniótico de mujeres con membranas intactas.

Métodos

Sujeto humano aprobación de la Universidad de Michigan se obtuvo para el uso residual de las muestras de amniocentesis que iban a ser descartados. Para ser elegible para el estudio, las mujeres embarazadas tuvieron que ser sometidos a clínicamente indicada la amniocentesis y membranas intactas. La única información sobre la mujer a disposición de los investigadores fue la edad, raza / etnia, y el número de fetos presente en el momento del muestreo. Todos los ensayos clínicos relacionados con la evaluación cromosómica del feto se había completado, y el líquido amniótico residual amniótico y cultivo celular "pellets" se recuperaron de la citogenética de laboratorio.

Muestras de líquido amniótico (8-12 ml) fueron hilar a 4500 rpm durante 30 minutos. Después de decantación el líquido sobrenadante, el precipitado se suspendió en 150 μ l de buffer TrisEDTA. Los pellets de células cultivadas fueron resuspendido en 200 μ l de PBS. A 150 μ l volumen de cada muestra fue extraído por medio de la Roche Magna Pure LC instrumento y el kit de aislamiento del ADN I resultando en un volumen final de 150 μ l.

Se utilizó un método de PCR directa seguida de una PCR anidada método para detectar el VPH. La Roche línea mancha de ensayo, sobre la base de consenso L1 PCR con biotina PGMY09/11 primer conjuntos y β-globina como control interno de amplificación de la muestra en [17, 18] se utilizó como anteriormente se ha descrito, con 10 μ l de cada extracto de 50 μ l de reacción. Todas las muestras fueron VPH-gel de banda negativa y Roche Prototipo de ensayo Strip-negativos después de 40 ciclos (reactivos siempre como un regalo de Roche Molecular Systems, Inc, Pleasanton, CA).

Por la reacción anidados, cinco microlitros de cada amplicón L1 se añadió a una mezcla de reacción PCR que contengan GP5 + / GP6 + [19] primers (1 μ M cada uno) y correr por un período adicional de 40 ciclos bajo las siguientes condiciones: 40 ciclos de 94 ° C durante 45 s, 48 ° C durante 4 s, 38 ° C durante 30 s, 42 ° C durante 5 s, 66 ° C durante 5 s, y 71 ° C durante 1,5 min. Esto fue seguido por una última prórroga de 10 minutos a 72 ° C. Quince μ l de cada muestra fue analizada en un 2% en gel de agarosa.

El VPH ensayos se repitieron utilizando distintas extracciones, el aumento de los volúmenes de extractos en los ensayos de PCR y re-amplificación de PCR L1 consenso con los productos PGMY primers.

Los datos fueron analizados mediante el SPSS 11 con distribuciones de frecuencias de los participantes en el estudio por edad, raza, origen étnico y por el VPH.

Resultados

El residual líquido amniótico y "pellets" de células se obtuvieron de 142 mujeres. Hubo 146 pares de muestras que representan a 138 embarazos simples, 2 embarazos gemelares, 1 embarazo triple, y 1 singleton embarazo con un óvulo donante. Las mujeres de edad media fue de 35,2 años con un rango de 23-55 años. La raza y el origen étnico fue del 78% caucásicos, el 5% African American, 14% asiáticos y el 2% hispanos. Ningún otro se disponía de datos sobre las mujeres. No se detectó VPH en cualquiera de líquido amniótico o pellet de células muestras. Todas las muestras fueron β-globina positiva. No hubo evidencia de los obstáculos técnicos para la detección de VPH en muestras si estuvo presente.

Discusión

En este estudio, no se detectó VPH en el líquido amniótico o de la cultura de células "pellets" de 142 mujeres embarazadas con membranas intactas amniótico. Otros investigadores han reportado la parte superior del 95% intervalo de confianza para la detección de la transmisión perinatal de las mujeres con cualquier tipo de prueba de VPH genital es sólo un 2,8% [7]. Worda y compañeros de trabajo no encontró VPH en el líquido amniótico tomado justo antes de una cesárea en 153 mujeres de Austria con membranas intactas [10]. Con 142 muestras amniótico, hemos 80-85% de potencia para detectar la prevalencia de VPH del 1% al 10%. Por lo tanto, la falta de detección de VPH en las muestras amniótico no es debido a la falta de número de muestras.

Este estudio no pudo determinar realmente el estado de VPH de los participantes en el estudio o su riesgo de tener el VPH. Es posible que ninguna de las mujeres nunca habían sido infectados o no actualmente infectadas con el VPH. Otros estudios de abordar la cuestión de la transmisión vertical del VPH han informado de que 12-36% de las mujeres embarazadas asintomáticas para el VPH fueron positivas para VPH [8, 10, 16, 20]. Las características de la población de estos estudios fueron similares a este estudio con un rango de edad informó de 18-45 años y sobre todo las mujeres caucásicas, excepto los estudios realizados en países de Asia [8, 10, 16]. Las similitudes entre nuestra población de estudio y otros sugieren que 12-36% de las mujeres embarazadas deberían haber sido infectados con el VPH [6, 8, 10, 11, 16, 20, 21]. Sin embargo, no se detectó VPH en el líquido amniótico.

Conclusión

La transmisión perinatal del VPH se produce claramente; aparición de menores papilomatosis respiratoria recurrente es una rara resultados documentados de infección con el VPH. Esto es lo que ocurre en 7 de cada 1000 niños nacidos de una madre con verrugas genitales [22]. Algunos investigadores han sugerido que los bebés están expuestos e infectados por el VPH durante un parto vaginal [9]. Los estudios han documentado que existe concordancia entre los pobres padres' del VPH genital y los recién nacidos' oral / genital del VPH [20]. En contraste, algunos investigadores han sugerido que la transmisión vertical es posible sin evidencia de relaciones sexuales vaginales o cervicales en contacto con la secreción del feto [11 - 15]. Sin embargo, este estudio y otros sugieren que la transmisión vertical sin riesgo de exposición a relaciones sexuales vaginales o secreciones del cuello del útero es muy poco probable [8, 10].

Conflicto de intereses

Los autores declaran que no tienen intereses en conflicto.

Autores de las contribuciones

MR JB y participó en la elaboración de conceptos, estudio de diseño, implementación y coordinación de datos, análisis y redacción del manuscrito. DR recogida de datos y coordinó la muestra números con los datos demográficos. LCD, RAT, DCS, URE y participó en las pruebas del VPH y redacción del manuscrito.

Pre-publicación de la historia

La pre-publicación de la historia de este documento puede accederse en:

Agradecimientos

Los autores se agradecen a Kathleen Crawford de asistencia en la recuperación de materiales anónimos de la citogenética y de laboratorio Miriam Lawson, Sonya Patel, y Juanita Onyekwuluje de asistencia con pruebas de laboratorio.

Drs. Ruffin Bailey y el apoyo de NCI Grant CA080846. El organismo de financiación no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida de datos, análisis, la interpretación de los datos, la escritura del manuscrito o la decisión de enviar el manuscrito para su publicación.