Respiratory Research, 2006; 7(1): 115-115 (más artículos en esta revista)

Staphylococcus aureus enterotoxinas inducir IL-8 secreción nasal humano de células epiteliales

BioMed Central
Garrett J, O'Brien (obriengarrett@yahoo.ie) [1], Gareth Riddell (garethriddell@yahoo.com) [1], J Stuart Elborn (Stuart.Elborn @ bch.ni.nhs.uk) [1], Madeleine Ennis (m.ennis @ qub.ac.uk) [1], Grzegorz Skibinski (g.skibinski @ qub.ac.uk) [1]
[1] Grupo de Investigación Respiratoria, Facultad de Medicina y Odontología, Queen's University Belfast, Grosvenor Road, Belfast BT12 6BJ, Irlanda del Norte, Reino Unido

Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License (http://creativecommons.org/licenses/by/2.0], que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que la obra original es debidamente citados.

Resumen
Fondo

Staphylococcus aureus produce un conjunto de proteínas que actúan como superantígenos y toxinas. Aunque su modo de acción como superantígenos es bien conocido, se sabe poco sobre sus efectos en las células epiteliales de las vías respiratorias.

Métodos

Para investigar este problema, nasal primaria de las células epiteliales normales derivados de los asmáticos y los sujetos fueron estimulados con toxina enterotoxina AyB (SEA y SEB) y secretada (sobrenadantes) y células asociadas (lisados celulares), IL-8, TNF-α, RANTES y eotaxin se determinó por pruebas ELISA específico.

Resultados

No es tóxico concentraciones de SEA y SEB (0,01 μ g / ml y 1,0 μ g / ml) inducida por IL-8 secreción después de 24 h de la cultura. Pre-tratamiento de las células con IFN-γ (50 UI / ml) dio lugar a un nuevo aumento de IL-8 secretion. En células de donantes sanos pretratadas con IFN-γ, la evaluación ambiental estratégica a 1,0 μ g / ml inducida por la liberación de 1009 pg / ml IL-8 (733.0-1216 pg / ml, mediana (rango)), mientras que en las células de los asmáticos donantes mismo trato inducida significativamente más altos de IL-8 secreción - 1550 pg / ml (1168.0-2000.0 pg / ml, p = 0,04). Las células normales previamente tratados con IFN-γ y luego cultivadas con SEB a 1,0 μ g / ml liberados 904,6 pg / ml IL-8 (666.5-1169.0 pg / ml). Las células de los asmáticos tratados de la misma manera producido cantidades significativamente mayores de IL-8 - 1665,0 pg / ml (1168.0-2000.0 pg / ml, p = 0,01). El bloqueo de anticuerpos frente a MHC moléculas clase II añadido a las culturas estimulado con SEA y SEB, la reducción de IL-8 secreción de alrededor del 40% en IFN-γ unstimulated culturas y el 75% de IFN-γ estimulado culturas. No secreción de TNF-α, RANTES y eotaxin se señaló.

Conclusión

Enterotoxinas pueden tener un papel en la patogénesis del asma.

Fondo

Staphylococcus aureus (S. aureus) es un patógeno humano asociados con diversas entidades locales y las infecciones sistémicas, que se caracteriza por la inflamación dominado por los leucocitos polimorfonucleares. Produce una serie de toxinas incluyendo enterotoxinas y síndrome de choque tóxico-1 toxina que causa intoxicaciones alimentarias y síndrome de choque tóxico, respectivamente, en los seres humanos y otras especies. Estas toxinas son intermedios proteínas de peso molecular (22-20 kD) que también actúan como superantígenos (SAgs), debido a su capacidad para obligar a MHC moléculas clase II en células presentadoras de antígenos y estimular todas las células T con particular V β s en sus receptores de células T [1].

El epitelio actúa como una barrera fisiológica para la difusión [2] y después de física o química se haya producido un daño, alergenos inhalados, agonistas irritantes y pueden tener efectos perjudiciales sobre el músculo liso subyacente [3]. Tradicionalmente, el epitelio se consideraba una barrera inerte dividiendo el entorno exterior y el interior del tejido pulmonar. Sin embargo, hoy en día es aceptado que constituye la interfaz entre el medio interno y el entorno exterior y desempeña un papel fundamental en el control de muchas funciones, entre ellas las vías respiratorias y la barrera secretora funciones [4 - 6]. Las vías respiratorias hiper-respuesta y la célula epitelial daños son comúnmente asociados con el asma.

En vista de la creciente evidencia de los efectos de la toxina superantígenos en inmuno-modulador y pro-células inflamatorias, es probable que exista una asociación entre la infección y toxina la patogénesis de las enfermedades atópicas como dermatitis, rinitis y el asma [7, 8]. Enterotoxinas producidas por S. aureus y de sus anticuerpos IgE específicos se consideran importantes en empeoramiento de la dermatitis atópica [7].

Los estudios han demostrado una mayor S. aureus colonización en la piel de los pacientes con eccema atópico o dermatitis, síndrome de (FAE) (80-100%) que en la piel normal de sujetos sanos (5-30%). De hecho S. aureus constituye hasta el 80% de la flora normal en individuos atópicos y S. aureus aisladas de la piel de al menos el 65% de los antiepilépticos pacientes segrega el Sags, S. aureus enterotoxina A (SEA), S. aureus enterotoxina B (SEB), S. aureus enterotoxina C (SEC), S. aureus enterotoxina D (SED) y síndrome de choque tóxico toxina-1 (TSST-1) [9].

En el ser humano es el pasaje nasal que es el sitio más común para S. aureus colonización [10]. Considerando que más del 50% patógenos aislados de S. aureus producir una o más exotoxinas SAgs, incluso las cepas aisladas de portadores asintomáticos pueden producir SAgs [11]. Dada su localización anatómica y la capacidad de producir exotoxinas, es probable que el pasaje nasal está expuesta a bacterias SAgs [1].

En comparación con los antiepilépticos, algunos estudios han documentado el papel de S. aureus o en su SAgs alérgica o no alérgica vías respiratorias enfermedad. Investigaciones anteriores sugiere una alergia a ciertas bacterias como una importante causa de la exacerbación de la enfermedad en los pacientes que sufren de enfermedad alérgica de la vía aérea [12, 13]. Sin embargo, las pruebas utilizadas en su conjunto lisados bacterianos, son muy inespecíficos y no se encontraron correlaciones entre estos resultados.

El interferón-gamma (IFN-γ) es conocido para inducir complejo mayor de histocompatibilidad clase II expresión en células epiteliales bronquiales in vitro [14, 15]. In vivo la expresión de MHC moléculas clase II es mayor en el asma y las enfermedades neoplásicas de pulmón, lo que permite bronquial las células epiteliales para funcionar como células presentadoras de antígenos y de interactuar con las células T [15, 16]. Aunque el importante papel de MHC clase II es presentar antígenos a los linfocitos T, la contratación de MHC clase II por superantígenos y otros productos bacterianos tiene consecuencias también para la clase II de células que expresan incluido el aumento de la secreción de citoquinas y la apoptosis [16 - 18].

A pesar de que la CMH clase II molécula que parece ser el principal receptor de enterotoxinas, se ha demostrado que los anticuerpos frente a complejo mayor de histocompatibilidad I (MHC clase I) puede inhibir la unión de la SEA y SEB a MHC clase II negativa macrófagos [19 ]. Estudios realizados con MHC clase II negativas línea de células epiteliales de manifiesto la modulación intracelular de Ca 2 + señal vía en respuesta a la evaluación ambiental estratégica [20]. Estos hallazgos sugieren que la CMH clase II molécula puede no ser el único receptor de toxina exotoxinas.

Se ha demostrado recientemente que la interacción de vivir S. aureus con traqueales humanas línea de células epiteliales MM-39 estimula la liberación de IL-8, RANTES y eotaxin [21]. Nuestro estudio investiga el efecto de S. aureus productos, SEA y SEB, en humanos células epiteliales nasales y pone a prueba la hipótesis de que la SEA y SEB puede inducir la liberación de citoquinas proinflamatorias humanos de las células epiteliales nasales.

Materiales y métodos

Los sujetos fueron reclutados de personal y los estudiantes de la Queen's University de Belfast o el Belfast City Hospital. El estudio fue aprobado por el Comité de Ética de Investigación de la Queen's University Belfast y todos los participantes por escrito el consentimiento informado. Todos los sujetos fueron los no fumadores y tenían entre 22-39 años de edad. Ellos se encontraban en buen estado general de salud y no tenía historia de cardiaca o enfermedad renal.

Temas de control no tenía historia de síntomas respiratorios y algunos fueron atópica. Asmáticas tenía una historia clínica de diagnóstico médico de asma, con intermitentes dificultad para respirar o sibilancias en los últimos 12 meses. Todos los sujetos tenían un FEV 1 de al menos el 60% previsto. No se les toma regular de terapia anti-inflamatoria y sólo se mantuvieron en acción corta β 2 agonistas. No tema había sido previamente prescrito una acción prolongada β 2 agonista. No habían tenido, ya sea por inhalación o los esteroides orales en los seis meses anteriores al comienzo del estudio. Han sido libres de infecciones del tracto respiratorio superior durante un mínimo de cuatro semanas anteriores al inicio del estudio. Atopia fue definida por punción cutánea positiva a las pruebas 1 o más de 4 alérgenos ambientales comunes, incluidos los ácaros del polvo doméstico (Dermatophagoides pterynonisinus (HDM), polen de hierba mixta, gato y perro de pelo. Estándar alergeno preparados (Dome-Hollister-Stier, Epernon Cedex , Francia), de los ácaros del polvo doméstico (Dermatophagoides pterynonisinus) (HDM), polen de hierba mixta, gato y perro pelo se aplicaron a volar el aspecto del antebrazo, utilizando una norma técnica de punción, tal como se describe por la Academia Europea de Alergología e Inmunología Clínica [ 22]. Soluciones estándar de histamina (1% w / v) y salina se utilizaron como controles positivos y negativos, respectivamente. Atopia se define como tener uno o más positiva punción cutánea pruebas para poner a prueba soluciones alergeno.

La espirometría

La espirometría se realizó en todas las materias. La espirometría se realizó de acuerdo a la American Thoracic Society directrices mediante un espirómetro Vitalograph [23]. Antes de asistir a la espirometría para, los sujetos se les pidió que retener de acción corta β 2 agonistas de actuar durante un mínimo de ocho horas. Los registros fueron tomados de los temas' altura, peso y edad. Predecirse los valores de la espirometría se calcula a partir de entonces validado las ecuaciones [24].

El aislamiento de los primeros humanos células epiteliales nasales

Brushings nasales se realizaron en todas las asignaturas utilizando un protocolo estandarizado y anestésicos locales no fueron utilizados durante el procedimiento. Un cepillo bronquial citología (TeleMed Systems Inc, MA, EE.UU.) se utilizó para obtener dos brushings de la turbinate externa de cada fosa nasal. Cada fosa nasal se cepilla una vez y el proceso se repitió el suministro de materia toleran el proceso.

Las células fueron cultivadas en medio BEGM (Clonetics) hasta el paso. Las células de paso 1 se congelaron en nitrógeno líquido y se almacenan hasta utilizados en experimentos en el paso 2-3. Todas las células utilizadas en este trabajo positivo manchadas con pan-cytokeratine, cytokeratine 5 +8, citoqueratina 8, citoqueratina 18 y negativas con anti-vimentina y anti-citoqueratina 13 (no se muestra). Las células fueron cultivadas en sumersión culturas. Para los experimentos humanos, las células epiteliales nasales (HNECs) fueron sembradas en placas de 24 y utilizando una densidad de siembra de 2 × 10 5 células / ml y un volumen de 300 μ l. Las células fueron incubadas a 37 ° C, 5% de CO 2 durante 6 h. Después de 6 horas el período de incubación las células fueron lavadas con PBS (37 ° C, pH 7,4) y fresco BEGM con o sin 50 UI / ml IFN-γ fue agregado a los pozos. Las células fueron dejados a incubar a 37 ° C durante otras 24 h. Después de 24 h (células confluentes 80-90%), los medios de comunicación fue removido y las células fueron lavadas con PBS (37 ° C, pH 7,4) y frescos que contienen los medios de comunicación añadido, ya sea SEA o SEB (0,01 y 1 μ g / ml) o nada ( control). Sobrenadantes se recogieron 6 y 24 h después de estimulación y almacenados a -80 ° C hasta el momento analizadas por ELISA. En determinados experimentos de estimulación antes de enterotoxina de bloqueo anti-MHC clase II de anticuerpos (IgG2a, clon L243, BioLegend, San Diego, CA) se añadió a 50 μ g / ml durante 1 hora a los cultivos celulares. Después de la incubación enterotoxinas se añadieron como se ha descrito anteriormente. La concentración de anticuerpos utilizados inhibe la detección de MHC clase II en humanos Monocytic THP-1 línea celular de 95%. Purificada ratón IgG2a (MOPC-173, BioLegend) se utilizó como control.

Enriquecidas experimentos

Células epiteliales nasales fueron sembradas en 24 placas y utilizando una densidad de 2,5 × 10 5 células / ml y un volumen de 300 μ l. Las células fueron estimuladas con cualquiera de 1 μ g / ml SEA o SEB. El sobrenadante se recogió a las 24 h de la cultura. Enriquecidas se llevó a cabo dividiendo el sobrenadante en dos alícuotas. La primera parte alícuota se enriquece con 500 pg / ml de cualquiera de TNF-α, RANTES o eotaxin. Concentraciones de citoquinas fueron medidos por ELISA en dos partes.

Lisado de células de experimentos

Una vez sobrenadantes fueron recolectados, frescos BEGM (300 μ l) se añadió a cada pocillo. Para lyse las celdas de 24 y placa fue congelación-descongelación del producto tres veces. El lisado se centrifugó a 300 g durante 5 min y posteriormente aliquoted. Las concentraciones de citocinas en lisados fueron medidos por ELISA.

ELISA ensayo

Citoquinas análisis se llevaron a cabo utilizando sandwich ELISA según las instrucciones del fabricante (R & D Systems).

Reactivos

Recombinant IFN-γ fue adquirido de PeproTech CE (Londres, Reino Unido). SEA y SEB se adquirieron de Sigma-Aldrich (Poole, Reino Unido). SEA y SEB se utilizaron en las concentraciones de 0,01 y 1 μ g / ml que en experimentos preliminares han demostrado ser no tóxico para las células epiteliales de MTT y trypan azul exclusión pruebas.

Análisis de citometría de flujo

Células epiteliales nasales fueron separados de la cultura platos por medio de la disociación celular nonenzymatic solución (Sigma) y luego se tiñen con anticuerpos anti-HLA-DR, P, Q anticuerpo monoclonal conjugado con FITC (Dako). MHC clase II expresión células epiteliales se evaluó por citometría de flujo (EPICS II; Coulter, Hialeah, FL). Los resultados se expresaron como% de células positivas y como media intensidad de fluorescencia.

El análisis estadístico

Los resultados se presentan como mediana (rango). Las comparaciones estadísticas se realizaron mediante Mann-Whitney U test, Friedman (Dunn's post-hoc test) y Wilcoxon par de pruebas. Todos los análisis estadísticos se realizaron utilizando SPSS (versión 11.5) para Windows ® y GraphPadPrism. GraphPadPrism ® fue utilizado para representar los gráficos.

Resultados
Asunto características

Un total de 20 sujetos fueron incluidos en el estudio (edad media de 26,95 ± 4,19 y 10 de mujeres). Asunto características se resumen en el cuadro 1.

Efecto de la enterotoxina A (SEA) y la enterotoxina B (SEB) de los productos básicos humanos células epiteliales nasales
Enriquecidas experimentos

Con el fin de cerciorarse de que la incapacidad para detectar RANTES, TNF-α y eotaxin no se debió a la rápida degradación de citoquinas en el sobrenadante cultura, enriquecidas experimentos se realizaron como se describe en Materiales y Métodos. Los resultados obtenidos de estos experimentos mostraron que el TNF-α es plenamente recuperable de todos los sobrenadantes medido, mientras que 90,8 ± 7,6% de IL-8, 74 ± 8,1% de RANTES y 86,5 ± 7,7% de Eotaxin recuperables como fue medido por ELISA.

Cell Asociado citoquinas

Con el fin de establecer si las citoquinas en estudio se almacena intracelularmente y no ser secretadas, que mide su concentración en lisados celulares obtenidas a partir de unstimulated células y células estimuladas con enterotoxinas. IL-8 estuvo presente en lisados celulares de células estimuladas y no se detectó en lisados de unstimulated culturas. TNF-α, RANTES y eotaxin no se detectaron en ninguna de las pacientes lisados celulares (datos no presentados).

HLA de clase II expresión en las células epiteliales nasales

Análisis de citometría de flujo de moléculas de clase II expresión reveló que sólo una pequeña proporción de células tanto normales de asmáticos y los sujetos fueron positivos clase II (saludable 2,5% ± 0,63, con una media de fluorescencia (mf) 205 ± 40, los asmáticos 2,03% ± 0,47, mf 193,8 ± 37.2). Después de la estimulación con IFN-γ se produjo un pequeño aumento en el porcentaje de HLA de clase II células positivas (10,2% saludable ± 2,96, MF 1145 ± 301; asmáticos 11,76 ± 1,87%, MF 1013 ± 189). No se encontraron diferencias significativas entre las células normales y de pacientes asmáticas se observó tanto en virtud basales y estimulados condiciones (p <0,01). (Tabla 2]

La participación de MHC moléculas clase II en la estimulación de HNEC de SEA y SEB.

HNEC normal (n = 5) fueron premeditados, durante 24 h con 50 UI de IFN-γ / ml (o se deja sin tratamiento para el control HNEC) y luego fueron incubadas con SEA o SEB (1 μ g / ml) en presencia o ausencia de anti MHC-clase II bloqueo de anticuerpos (50 μ g / ml), tal como se describe en Material y Métodos. Determinación de IL-8 en la concentración de la cultura sobrenadantes reveló que la IL-8 inducida por la secreción de Mar fue inhibido de 40,5 ± 3,2% en IFN-γ unstimulated culturas y de 70,2 ± 5,1% IFN-γ tratados culturas. Por SEB estimulado las culturas valores obtenidos mostraron 42,5 ± 3,2% y 68,9 ± 4,5%. Estos resultados indican, al menos parcial de la participación de MHC moléculas clase II en la evaluación ambiental inducida por SEB y la secreción de IL-8 de HNEC.

Discusión

El principal hallazgo de este estudio es que de mar y no en concentraciones tóxicas directamente estimular las células del epitelio nasal para producir IL-8, si bien no tienen efecto sobre TNF-α, RANTES y eotaxin producción. Estos cuatro citoquinas tienen papeles clave en la respuesta inflamatoria en el pulmón. IL-8 y eotaxin actuar como chemoattractants de neutrófilos [25 - 27] y eosinófilos [28], mientras que RANTES es un chemoattractant para muchas células inflamatorias incluyendo eosinófilos [29] y los linfocitos T [30]. TNF-α es una citoquina multifuncional que es conocida no sólo para estimular la mayoría de tipos de células para liberar otras citoquinas incluyendo GM-CSF [31] pero se sabe también para estimular la producción de metabolitos de oxígeno citotóxico de eosinófilos [32].

Dado que el incremento de las concentraciones de IFN-γ están presentes en las vías respiratorias inflamadas, el efecto de preincubating células con IFN-γ (50 UI / ml) antes de la estimulación SAG también fue investigado. IFN-γ tiene muchos efectos proinflamatorias y se ha demostrado que desempeñan un papel importante en la primera infancia el asma a través de la upregulation de ICAM-1 [33] y el receptor celular para TNF-α [34]. Otros estudios han demostrado el aumento de IFN-γ en BAL y la sangre de los asmáticos incluidos atópica aguda grave asmáticos [35 - 37]. Es concebible entonces que el aumento de los niveles de IFN-γ en las vías respiratorias asmáticas resultado en upregulation de MHC clase II expresión visto en las vías respiratorias asmáticas epitelio [38]. En este estudio, las células de ambos grupos de sujetos fueron incubadas con IFN-γ antes de la toxina del estímulo a investigar qué efecto, si hubo alguna sobre la liberación de IL-8.

Las células procedentes de sujetos normales en libertad IL-8 a 6 y 24 h en respuesta a ambos SEA y SEB, con un aumento de las respuestas en las células de pacientes asmáticos. Pretratamiento de las células normales con IFN-γ seguido por la toxina estimulación produjo un aumento de IL-8 en libertad. Una tendencia similar se observó en IL-8 liberación de células procedentes de donantes asmáticos. IFN-γ pretratados células derivadas de pacientes asmáticas en libertad aumento de los niveles de IL-8 en respuesta a SEA (0,01 μ g / ml) y SEB (1 μ g / ml) a las 6 h, mientras que a las 24 h hubo aumento significativo de IL-8 en respuesta a las dos concentraciones de la evaluación ambiental y de 1 μ g / ml SEB.

El mecanismo de enterotoxinas cómo activar las células se ha vinculado a su capacidad para cruzado el MHC moléculas clase II. La presencia de HLA-DR antígenos se demostró en IFN-γ tratadas las células epiteliales de las vías respiratorias, pero muy poco sobre las células unstimulated [39]. También demuestran que MHC clase II de expresión en HNEC puede upregulated de incubación con IFN-γ. El aumento inducido es, sin embargo, de moderada magnitud que no exceda el 15% de las células cultivadas. No se observaron diferencias significativas entre normales y asmáticos HNEC se indique lo contrario. A pesar de modesta expresión de MHC clase II moléculas en la célula epitelial de membrana, además de bloqueo anti-HLA-DR anticuerpos disminuyó IL-8 en la secreción de las culturas de HNEC (40% de reducción en las células unstimulated y 70,2% de reducción de IFN-γ estimula las células). Estos resultados indican que enterotoxina vinculante a MHC clase II receptores es, al menos parcialmente, responsable de la observó aumento de IL-8 secretion.

Estudio similar utilizando HNEC ha sido recientemente publicado muestra que SEB induce la secreción de citoquinas proinflamatorias in vitro [40]. Sin embargo este estudio no investigó MHC clase II expresión y no trató de caracterizar el receptor responsable de la SEB vinculante.

Algunos de los estudios recientes han demostrado que no todos los efectos ejercidos por SAgs puede atribuirse a la clase II y vinculante crosslinking. Arad et al. mostró que todos los superantígenos tienen la capacidad de estimular la inmunidad cruzada entre sí a través de la interacción de una región dodecapeptide de las moléculas con una gran cantidad de células del receptor que no impliquen MHC clase II o del receptor de células T [41]. Más tarde Shupp y colegas sugiere que este receptor es importante para superantigen transcytosis a través de las mucosas [42] La enterotoxinas que son miembros de la familia SAgs tienen receptores en las células intestinales que conducen a la emesis y diarrea asociados con la intoxicación alimentaria; estos efectos biológicos son independientes de superantigenicity [43, 44]. Si bien estos resultados no descartan un efecto directo de estas toxinas en el epitelio intestinal se ponga de manifiesto que las toxinas pueden obtener rápido acceso al sistema inmunitario. Otros estudios en esta esfera polarizada utilizando células epiteliales nasales están claramente justificadas. Por último, Paterson et al. puso de manifiesto que TSST-1 estimula humanos vaginal células epiteliales a través de la producción de quimioquinas no MHC clase II receptor [45]. Por lo tanto, es concebible que la interacción de SEA y SEB con las células epiteliales nasales para IL-8 secreción descrito aquí puede no sólo mediada por MHC clase II moléculas, sino también por otros aún no definido de receptores y los efectos descritos en este documento se deben a enterotoxina vinculantes para ambas MHC MHC y no receptores. También es difícil de explicar mayor secreción de IL-8 de HNEC asmáticos en comparación con las células epiteliales de las células normales, ya que ambos grupos expresó nivel similar de MHC moléculas clase II. Sólo podemos especular que otros, aún no definido receptor es responsable de este efecto. Evidentemente, esto requiere una investigación más a fondo.

IgE específica a S. SAgs aureus está presente en el tejido pólipos nasales, y se correlacionan con los niveles de marcadores de activación de eosinófilos y la contratación [46]. SEB selectivamente estimula la producción de interleuquina-5 (IL-5) en pacientes con eccema atópico o dermatitis, síndrome de (DEA) los asmáticos o alérgicos, pero no en asintomáticos atópica o no atópica personas [6]. Dado el papel central de IL-5 en eosinofilia proporciona más pruebas de que SEB Mayo al menos, desempeñar algún papel en las enfermedades alérgicas como el asma y los antiepilépticos. Una prueba más de que SAgs pueden desempeñar un papel importante en las enfermedades alérgicas, como dermatitis, rinitis y el asma proviene de estudios que informan la prevalencia de anticuerpos séricos de IgE a S. aureus enterotoxinas. La sensibilización a S. aureus enterotoxinas parece ser un factor en el aumento de suero de proteína catiónica de eosinófilos (ECP) que se piensa que es un marcador fiable de la severidad clínica de las enfermedades alérgicas como el asma y la rinitis [47].

Como parte de este estudio sobrenadantes de cultivo celular recogidos 6 y 24 h después SAG estimulación se analizaron para TNF-α, RANTES y eotaxin. Sin embargo, en las 20 muestras de materia estos mediadores no eran detectables. In vivo administración de SEB a ratones se ha demostrado que desencadenan una respuesta inflamatoria caracterizada por la mucosa y vías respiratorias contratación de linfocitos, eosinófilos y neutrófilos, junto con niveles elevados de IL-4 en BAL líquido [48]. El mismo estudio también demostró que SEB aumenta notablemente la frecuencia de detección de TNF-α en el fluido BAL [49]. Sin embargo la extrapolación de los resultados de los estudios en animales y en relación a los estudios humanos debe ser hecho con cautela. Se ha documentado que las células murinas son hasta 1000 veces menos sensible a S. aureus enterotoxinas que las células humanas [50].

La liberación de RANTES en respuesta a SEB se ha demostrado en el colon humano T84 línea de células epiteliales [51]. En un modelo de fibroblastos humanos-como synoviocytes, el compromiso de MHC clase II moléculas de SEA dado lugar a un aumento en el nivel de ARNm y la síntesis de la proteína RANTES y de IL-8 [52], mientras que la estimulación de PBMCs humanos para liberar RANTES en respuesta a SEB También se ha demostrado [53].

En el sistema humano polarizado de células epiteliales bronquiales una marcada alteración en el perfil transcripcional de expresión de células epiteliales en respuesta a vivir S. aureus y soluble factores de virulencia se observó. Entre ellas pro-liberación de citoquinas inflamatorias tales como IL-1 β, IL-8, RANTES eotaxin y [21, 54]. Es posible que una mezcla de factores de virulencia soluble induce proiflammatory vigorosa respuesta de citoquinas como resultado de la acción sinérgica de muchos productos bacterianos incluidos exotoxinas. Otros estudios utilizando polarizado HNEC debería aclarar la cuestión.

En conclusión este estudio indica que la SEA y SEB puede inducir una respuesta inflamatoria en humanos de células epiteliales nasales. Las respuestas a SEA y SEB son más elevados en sujetos asmáticos y puede ser aún más elevada de preincubaion con IFN-γ. Esto sugiere que las toxinas bacterianas como la SEA y SEB pueden desempeñar un papel en la patogénesis del asma posiblemente a través del reclutamiento de neutrófilos en las vías respiratorias asmáticas.

Conflicto de intereses

Los autores declaran que no tienen intereses en conflicto.

Autores de las contribuciones

GJOB llevó a cabo el cultivo de células de experimentos, análisis de cultivo de células y sobrenadantes y lisados escribió el manuscrito. GS introducido técnicas utilizadas en el presente estudio y llevó a cabo experimentos relacionados con MHC clase II. GR pacientes reclutados y se lleva a cabo nasal brushings, JSE ME y GS estuvieron involucrados en el diseño, supervisión y redacción del manuscrito. Todos los autores han participado en el diseño del estudio y evaluación, y han leído, han contribuido y aprobó el manuscrito.

Agradecimientos

Este trabajo fue financiado por Irlanda del Norte HPSS I + D Oficina