Journal of Translational Medicine, 2006; 4: 40-40 (más artículos en esta revista)

La comparación de perfiles proteómicos de suero, plasma, y modificado los medios de comunicación suplementos utilizados para cultivo celular y la expansión

BioMed Central
Saleh Ayache (Saleh.Ayache @ mail.tju.edu) [1], Monica C Panelli (MPanelli@cc.nih.gov) [1], Karen M Byrne (kbyrne@cc.nih.gov) [1], Stefanie Slezak (sslezak@cc.nih.gov) [1], Susan F Leitman (sleitman@cc.nih.gov) [1], Francesco M Marincola (fmarincola@cc.nih.gov) [1], David F, Stroncek ( dstroncek@cc.nih.gov) [1]
[1] Departamento de Medicina de Transfusión, Warren G. Magnuson Clinical Center National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, EE.UU.

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Resumen
Fondo

La cultura y la expansión de las células humanas para uso clínico requiere la presencia de suero humano o plasma en medios de cultivo. A pesar de que estos suplementos han sido ampliamente caracterizado en su composición química, sólo recientemente ha sido posible proporcionar alto rendimiento de análisis de proteínas, un amplio perfil de los factores solubles que contribuyen a la supervivencia celular. Este estudio analiza y compara la presencia de 100 proteínas incluidas las quimiocinas, citocinas y factores solubles en seis diferentes tipos de suplementos de los medios de comunicación: suero, plasma, recalcified plasma, el calor inactiva suero, plasma inactivado calor y el calor inactiva recalcified plasma.

Métodos

Suero, plasma, recalcified plasma, y el calor inactiva suplementos fueron preparados de diez sujetos sanos. Los niveles de 100 factores solubles se midieron en cada una de las muestras mediante un ensayo ELISA multiplexada y comparación de Eisen análisis de agrupación jerárquica.

Resultados

Una comparación de suero y los niveles plasmáticos de factores solubles encontró que 2 fueron mayores en el plasma pero 18 fueron mayores factores en el suero de las cuales 11 quimiocinas. Los niveles de sólo cuatro factores difieren entre recalcified plasma y plasma. Calor inactivación tuvo el mayor efecto sobre los factores solubles. Supervisó Eisen agrupación jerárquica indica que las diferencias entre el calor inactiva suplementos y los que no se fueron mayores que las diferencias dentro de estos dos grupos. Los niveles de 36 factores que difieren entre el calor inactiva plasma y plasma. Treinta y uno de estos factores tuvo una menor concentración en plasma de calor inactiva incluidos 12 quimiocinas, 4 factores de crecimiento, el 4 de la matriz metalloproteases, y 3 moléculas de adhesión. El calor inactiva descalcificadas plasma se utiliza a menudo en lugar de suero inactivado de calor y los niveles de 19 diferentes factores solubles entre estos dos suplementos.

Conclusión

Nuestro informe proporciona un amplio perfil de proteínas de suero, plasma recalcified plasma, y el calor inactiva suplementos. Esto representa un perfil cualitativo y cuantitativo de datos que pueden ayudar en la selección adecuada de los derivados sanguíneos humanos para complementar los cultivos celulares con necesidades especiales.

Fondo

Existe un interés creciente en la generación in vitro de un gran número de variedades y tipos de células para aplicaciones clínicas incluidas las células dendríticas (DCS) para mejorar la eficacia de las terapias inmunes [1 - 4], las células T citotóxicas terapia de cáncer [5], VEB inducida por linfoma [6], y la infección por CMV [7, 8], y para ampliar las células madre hematopoyéticas para ofrecer mayores cantidades de células transplantable [9, 10]. La cultura y la expansión de células, normalmente implica la adición de citoquinas y / o factores de crecimiento. Además, el suero o plasma a menudo se añaden a los medios de cultivo [1, 3, 6 - 8].

A pesar de suero de ternera fetal ha sido a menudo los medios de comunicación estándar para completar la investigación in vitro estudios, suero de ternera fetal no es adecuado para la producción de células para uso clínico. El uso de suero bovino expone a los pacientes al riesgo potencial de transmisión de agentes patógenos como la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (CJD) [11] y el desarrollo de un celular o humoral respuesta a las proteínas bovina [4]. A pesar de estas cuestiones, algunos protocolos clínicos el uso de suero de ternera fetal [3, 6], pero a menudo suero humano se utiliza en lugar de suero de ternera fetal [1, 7, 8]. En algunos casos el plasma humano [1] o complementar los medios de comunicación no se utiliza [2, 4, 9, 10].

Mientras que el suero humano es probablemente el mejor sustituto de suero de ternera fetal, el plasma humano es más fácilmente accesible que el suero. El plasma es regularmente la sangre producidos por los centros de las buenas prácticas de fabricación de donantes seleccionados y probados para las enfermedades de transmisión transfusional. El plasma se guarda congelado y se utiliza para transfusión. En contraste, los niveles séricos no son utilizados para la transfusión y no es habitualmente fabricados por los centros de sangre.

El uso de plasma humano en lugar de suero en el cultivo de células, sin embargo, presenta algunos problemas. Citrato, un quelante de calcio, es el estándar de plasma anticoagulante utilizado en el proceso de recogida de plasma. Cuando el plasma se añade a la cultura los medios de comunicación, que generalmente contiene calcio, fibrina o pueden formar coágulos. Esto puede prevenirse mediante la adición de calcio y trombina a plasma para inducir la formación del coágulo y defibrination. Recalcified plasma se utiliza en lugar de suero de ternera fetal en algunos protocolos clínicos.

Cuando el suero o plasma se utiliza como complemento de medios de cultivo, a menudo es modificado por la inactivación de calor que consiste en calentar a 56 ° C durante 1 hora para inactivar el complemento de los componentes y prevenir la incidencia de lisis mediada por complemento a los cultivos celulares [1]. Sin embargo, la calefacción tiene un amplio abanico de efectos de desnaturalización y, por tanto, afecta a otros suero y plasma factores.

Aunque el suero, plasma, recalcified plasma, y el calor inactiva suero y plasma se utilizan para complementar los medios de cultivo se sabe poco sobre las diferencias en la composición de estos suplementos. El objetivo de este estudio fue determinar si las diferencias en los niveles de factores solubles entre estos suplementos los medios de comunicación podrían contribuir a las diferencias en su eficacia. Los resultados de este estudio pueden ayudar a determinar que el plasma o plasma derivado de los componentes sería más apropiado para los cultivos celulares humanos con necesidades especiales.

Métodos
Diseño del estudio

Un total de 450 ml de sangre fue recolectada de cada una de las 10 investigaciones de donantes sanos. La sangre fue recolectada en dos alícuotas: una de 375 ml y los otros 125 ml. La mayor alícuota se recogió en CP2D (citrato-fosfato-2dextrose) y anticoagulante se utilizó para preparar el plasma. Un tercio de plasma preparado a partir de la CP2D sangre fue procesada para hacer recalcified plasma, una tercera parte a hacer calor inactiva plasma, y una tercera parte no fue procesado. La alícuota 125 ml de sangre se recogió en una bolsa sin anticoagulante y se utilizó para hacer el suero. Uno y medio mL alícuotas de todos los componentes han sido congelados a -80 ° C. Alícuotas de cada uno de los 10 sujetos se les realizó pruebas de 100 factores solubles mediante un multiplex de ELISA. En la primera parte del estudio en suero, plasma, recalified plasma y el calor inactived plasma fueron probados. En la segunda parte del estudio de muestras de suero, plasma, y recalcified plasma almacenados en -80 ° C fueron descongelados, el calor inactiva y prueba.

La recogida de sangre

Toda la sangre se recogió mediante un conjunto montado especialmente de bolsas de extracción de sangre que consiste en una bolsa seca de una bolsa de recogida de Pall sistema (sistema Leukotrap BM, CP2D/AS-3 doble bolsa de unidad de sangre, Pall Corporation, East Hills, NY 11548, EE.UU.) y Baxter, 150 ml bolsa transferencia (Baxter Health Corporation, Fenwal división, Deerfield, IL 60015, EE.UU.). Las bolsas de extracción de sangre se reunieron utilizando un dispositivo estéril de conexión (SCD 312, Terumo Medical Corp, Elkon, MD). Los siete bolsa incluía una serie de agujas de flebotomía tubería que se conecta a un tubo Y anastomosis con un lado conectado a una bolsa de recolección de la etiqueta (A), que contenía 55 mL de CP2D como anticoagulante. Una bolsa fue conectado a un satélite seco bolsa etiquetada B, que a su vez estaba conectado a tres de transferencia de 150 ml bolsas etiquetadas C, D y E. El segundo fin de sangre Y fue retirada la tubería conectada a un satélite seco CLX bolsa (Pall) F etiquetados, que estaba conectado a un segundo seco bolsa etiquetada G.

Después de 375 ml de sangre fue recolectada en la primera bolsa de primaria (A), la tubería principal de la bolsa (F), se abrió y 125 ml de sangre fue recolectada en esta bolsa (F), que se colocó en hielo durante la flebotomía. Bolsas AyF se separaron al final de la reunión y la sangre en una bolsa se utilizó para preparar el plasma y productos derivados del plasma, mientras que en la bolsa de sangre F fue utilizado para preparar el suero.

Plasma y suero de preparación y almacenamiento

Para preparar plasma, la sangre entera en una bolsa fue centrifugada a 4000 rpm durante 6,5 minutos (RC3C, Sorval Instruments, Newton, CT). El plasma se expresó en bolsa B que luego se dividirá en partes iguales entre las tres bolsas (C, D y E), con un volumen final de 60 a 75 mL en cada bolsa. E bolsa de plasma no fue procesado.

Para preparar recalcified plasma cloruro de calcio (CaCl 2) y la trombina se han añadido a bolsa C y el plasma se incuba a 37 ° C durante una hora y luego almacenarse a 4 ° C durante la noche. La bolsa fue centrifugada a 4000 rpm durante 6,5 minutos a temperatura ambiente y el sobrenadante, recalcified plasma se expresó en una bolsa de satélite.

Calor inactivadas en plasma fue preparado por la incubación de plasma D en la bolsa a 56 ° C durante una hora. La bolsa fue centrifugada a 4000 rpm durante 6,5 minutos y el sobrenadante expresó, el calor inactiva plasma, fue trasladado por satélite en bolsa.

Para preparar el suero, la sangre total en bolsa de F se almacena en hielo durante una hora. Luego se centrifuga a 4000 rpm durante 6,5 minutos y el sobrenadante fue trasladado en bolsa de G.

Inmediatamente después de la preparación de cada uno de los componentes fue completa, 1,5 mL alícuotas fueron colocados en cryovials (1,8 mL Nunc) y broche de congelado en hielo seco y etanol. Después de congelación, todas las muestras fueron luego transferidos a -80 ° C para su almacenamiento.

Análisis de plasma y proteínas séricas

Los niveles de factores solubles 100 fueron evaluados en un ensayo de ELISA basada en la plataforma (Pierce Buscar Light proteoma Arrays, Boston, MA) que consiste en ensayos de multiplexado que miden hasta 16 proteínas por así estándar en placas de 96 y [12]. Los arreglos se produjeron manchas de 2 × 2, 3 × 3, o 4 × 4 patrones diferentes de anticuerpos monoclonales en cada uno de los pocillos de una placa de 96 pocillos. Tras un típico sandwich ELISA procedimiento, la señal fue generada usando un sustrato quimioluminiscente. La luz producida en cada lugar en la serie fue capturado por imágenes de toda la placa con una venta en el comercio refrigerado por cámara CCD. Los datos se redujo el uso de análisis de imágenes de software que calcula los valores exactos (pg / mL) sobre la base de las curvas de calibración. Los 100 factores incluyen: el interferón alfa (IFN-α), IFN gamma (IFN-γ), interleucina 1 alfa (IL-1 α), IL-1 β, IL-1R α, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12p40, IL-12p70, IL-13, IL-15, IL-16, IL - 18, factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α), células epiteliales derivadas de la activación de la proteína de neutrófilos 78 (ENA-78), eotaxin/CCL11, eotaxin II/CCL24, el éxodo II, el crecimiento relacionados con el oncogén alfa (GRO-α / CXCL1), inducible 309 (I-309/CCL1), proteína interferón inducible 10 (IP-10/CXCL10), el interferón-inducible T-cell chemoattractant alfa (ITAC/CXCL11), lymphotactin (LTN), los monocitos chemoattractant proteína 1 (MCP-1 / CCL2), MCP-2/CCL8, MCP-3/CCL7, MCP-4/CCL13, macrófagos derivados de quimioquinas (MDC/CCL22), monokines inducida por interferón (MIG/CXCL9), proteína inflamatoria de macrófagos α 1 (MIP-1 α / CCL3), MIP-1 β / CCl4, MIP-3 α / CCL20, MIP-3 β / CCL19, mieloides progenitoras factor inhibitorio (MPIF-1), neutrófilos chemoattractant péptido 2 (NAP-2/CXCL7), derivados del estroma-β factor 1 (SDF - 1β / CXCL12), regulada en la activación de células T normales expresadas y secretadas (RANTES/CXCL5), el timo y la activación regulado de quimioquinas (TARC/CCL17), de colonias de granulocitos de factor estimulante (G-CSF), granulocito-macrófago el factor estimulante de colonias (GM-CSF), factores de angiogénesis, angiopoietin-2 (ANG-2), factor de crecimiento de fibroblastos-α (FGF-α), factor de crecimiento de fibroblastos básico (FGF-b), del factor de crecimiento de queratinocitos (KGF), factor de crecimiento de hepatocitos (HGF ), Heparina vinculante del factor de crecimiento epidérmico (EGF-HB), plaquetas factor de crecimiento derivado de BB (PDGF-BB), factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), hormona de crecimiento humana (HGH), TGF-α, metaloproteasa de matriz extracelular 1 (MMP-1 ), MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-13, tejido inhibidor de metalloprotease 1 (TIMP-1), TIMP-2, obtenida de cerebro de factor neurotrófico (BDNF), nervio del factor de crecimiento-beta (β-NGF), factor neurotrófico ciliar (CNTF), neurotrophin-3 (NT3), factor inhibidor de leucemia (LIF), el suero amiloide A (SAA), embarazo asociado proteínas plasmáticas-A (PAPP-A) , Amphiregulin (AR), la leptina, adiponectin (ACRP-30) adipocitos secretan proteínas, Apo-A1, ApoB-100, CD14 soluble (sCD14), CD40 ligando (CD40L), proteína C reactiva (CRP), myeloperoxidase (MPO), fibrinógeno, osteoprotegrin (OPG), osteopontin (OPN), inhibidor del activador del plasminógeno-1 activa (PAI-1), PAI-1Total, aminoterminal proBNP (NT-proBNP), el receptor activador del factor nuclear kappa B (RANK), el receptor activador de factor nuclear kappa B-ligando anticuerpos (RANK-L), vascular molécula de adhesión celular (VCAM-1), molécula de adhesión intracelular (ICAM-1), L-selectina, E-selectina, TNF receptor-1 y 2 (TNFR1, TNFR2), IL-1 receptor (IL-2R), e IL-6R.

El análisis estadístico

Vinculados dos de cola t-test de log natural transformado los datos se utilizó para comparar el suero y plasma los factores solubles de los niveles. Las diferencias se consideraron significativas a un corte p-valor de ≤ 0,01. Relación de patrones de expresión de citoquinas en diferentes tipos de plasma y suero se puso a prueba mediante la aplicación sin supervisión Eisen la agrupación jerárquica métodos [13] para el conjunto de datos que abarque los factores solubles a través de todas las muestras. Unsupervised clustering implicados, la clasificación de los factores solubles y las muestras. Por el contrario, para la agrupación sin factores fueron ordenados, pero no las muestras. Veinte de los 100 factores fueron excluidos del análisis ya que sus niveles estaban en el ensayo de los límites de detección. Estos factores fueron los siguientes: TGF-β, IL-1 β, IL-4, IL-5, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-15, IL-17, LIF, NT-proBNP, rango, rango - L, PAPPA, MMP-8, B-NGF, VEGF, HB-EGF, IL-3, B-NGF y FGF-α.

Resultados
Perfiles proteómicos de suero, plasma, recalcified plasma y el calor del plasma inactivado

Análisis de los niveles de los 80 factores de utilización de agrupación jerárquica sin supervisión entre suero, plasma, recalcified componentes del plasma y el calor inactiva plasma preparado a partir de 10 temas producido tres grupos de factores. El primer grupo estaba compuesto predominantemente de calor inactiva plasma componentes (Figura 1, negro bar), el segundo de los componentes de suero (Figura 1, la barra roja), y la tercera parte de plasma y componentes recalcified plasma (Figura 1, una barra de color azul). El calor inactiva grupo figuran 11 muestras: todos los 10 de calor inactiva las muestras de plasma (P-HI-01, P-HI-02, P-HI-03, P-HI-04, P-HI-05, P-HI-06 , P-HI-07, P-HI-08, P-HI-09 y P-HI-10) y una muestra de plasma recalcified (CP-9). El grupo de suero que figura 9 muestras de suero (S-01, S-02, S-03, S-04, S-05, S-06, S-07, S-09 y S-10). El plasma y el plasma recalcified grupo estaba constituido por 20 muestras: 10 de plasma (P-01, P-02, P-03, P-04, P-05, P-06, P-07, P-08, P-09 , Y P-10), 9 recalcified plasma (CP-01, CP-02, CP-03, CP-04, CP-05, CP-06, CP-07, CP-08, y CP-10) y uno suero (S-08) muestras. La media de los niveles de los 80 factores se muestran en archivo adicional 1.

El más prominente disimilitud entre las 40 muestras fue un grupo de 15 factores cuyos niveles eran notablemente más bajos que en los 10 el calor inactiva plasma que en las otras muestras (Figura 2]. Estos factores fueron el fibrinógeno, MIP-1 α, MIP-3 α, MIP-3 β, MDC, MMP-2, MMP-3, MMP-10, ICAM-1, VCAM, SDF-1 β, ITAC, MPIF-1, IL-6R , Y Ang2.

Estos resultados muestran que el plasma y recalcified plasma son muy similares en cuanto a los factores analizados. Sin embargo, el suero y plasma son bastante diferentes como se informó anteriormente por nuestro grupo [14] y el calor afectaron a la inactivación de los niveles de varios factores.

Comparación de suero y plasma

Estudios anteriores han encontrado que los niveles de varios factores entre los diferentes preparados a partir de suero de la sangre recogida en BD vacutainer colección tubos de suero y plasma preparado a partir de sangre recogidas en vacutainers con EDTA [14]. Una comparación de los factores solubles en las 10 muestras de plasma preparado en este estudio citrated de sangre recogidas en las bolsas y las 10 muestras de suero recolectadas en bolsas reveló que los niveles de 20 factores diferentes entre suero y plasma (Tabla 1]. Los niveles de fibrinógeno y OPN fueron mayores en el plasma y los niveles de 18 factores fueron mayores en el suero. Entre los otros 18 factores cuyos niveles eran mayores en el suero que en plasma fueron 11 las quimiocinas (MCP-2, MCP-3, MIP-1 α, MIP-1 β, MIP-3 α, PAN-2, ITAC, lymphotactin, eotaxin 2, el éxodo 2, y RANTES) y 4 factores que normalmente se encuentran en las plaquetas PAN-2, RANTES, PDGF-BB, y PAI-1 total.

Comparación de los niveles de factor en plasma recalcified, regular el suero y plasma

Para producir recalcified plasma trombina y calcio se han añadido a plasma. Como era de esperar, los niveles de fibrinógeno fueron más bajos en plasma recalicified que en plasma (262 ± 38 microg / ml vs 4810 ± 1780 microg / L, p = 0,026). Los niveles de sólo el 4 por otros factores difieren entre recalcified plasma y plasma (MDC, PAN-2, IL-16 e IFN-α) (Cuadro 2]. Los niveles de MDC, IL-16, e IFN-α fueron mayores en el plasma y el nivel de PAN-2 fue mayor en recalcified plasma.

Había más diferencias entre recalcified plasma y suero recalcified que entre el plasma y plasma. Los niveles de 19 factores que difieren entre recalcified plasma y suero (Tabla 3]. Dieciocho de los 19 factores fueron mayores en suero y uno de los factores es mayor en recalcified plasma, OPN. Catorce de los 19 factores que difieren entre plasma y suero también difiere entre recalcified plasma y suero (OPN, MIP-1 β, MIP-3 α, PAN-2, APO-A1, eotaxin 2, MCP-2, MCP-3, TIMP - 1, Lymphotaxin, PDGF-BB, ITAC, PAI-1 total, y TNFR1). Los 5 factores que difieren entre recalcified plasma y suero, pero no en plasma y suero fueron MDC, MMP-2, L-selectina, APO-B100, y ENA-78.

Comparación de los niveles de factor de entre recién extraído el plasma y el calor del plasma inactivado

Calor inactivación se realizó sobre un conjunto seleccionado de completar las muestras inmediatamente después de la colecta para hacer una evaluación preliminar de calor inducido por los niveles de proteína variación. El plasma fue seleccionado como el candidato para completar la prueba. Un factor de comparación entre los niveles plasmáticos de calor inactiva y plasma encontró que los niveles de 36 factores cambiado con el calor de inactivación de plasma (Tabla 4]. Los niveles de 5 factores, MPO, MCP-1, eotaxin 2, MIP-1, PAI-1 total, y TNFR1, fueron mayores en el calor del plasma inactivado (Cuadro 4]. Los 31 factores cuyos niveles eran mayores en el plasma que en el calor del plasma inactivado incluyó varias quimiocinas y factores de crecimiento.

Comparación de calor inactiva suero, plasma, y recalified plasma no tratados con suero, plasma y plasma recalcified

Dado que la inactivación de calor cambiado los niveles plasmáticos de muchos factores, almacenados en suero, plasma, y recalified muestras de plasma de los 10 sujetos fueron inactivados calor y los factores solubles se midieron los niveles. Una comparación de los niveles de factores solubles entre todos el calor inactiva y sin tratamiento supervisado de productos utilizando la agrupación jerárquica determinó que, en general, había más diferencias en los niveles de proteína entre el calor inactiva las muestras y los que no son inactivados calor que entre las muestras que fueron inactivados o calor entre las muestras que no son (Figura 3]. Análisis mediante pruebas t encontró que los niveles de 19 factores diferentes entre suero inactivado calor y el calor inactiva recalcified plasma (Tabla 5].

Discusión

Este estudio reporta el perfil de proteínas de 80 factores en el suero, plasma, recalcified plasma y componentes calor inactiva. Diferencias significativas en los factores solubles de los perfiles y las concentraciones se han observado entre estos cuatro suplementos habitualmente utilizados en clínica cultivos celulares. Suero y plasma mostró muy distintos perfiles, recalcification de plasma tenido poco efecto en los niveles de la mayoría de los factores solubles en comparación con no recalcified plasma, y el calor de inactivación plasma cambiado drásticamente y el contenido de proteínas de suero

El suero se diferencia del plasma y recalcified plasma de muchas maneras. Los niveles de 18 de los 80 factores fueron mayores en el suero que en plasma. El aumento de los factores en el suero probablemente debido a la estimulación de las plaquetas por la cascada de coagulación y la liberación de factores de plaquetas PAN-2, RANTES, y PPGF-BB. Las quimioquinas PAN-2 estimula los glóbulos blancos probable que conduzcan a la producción y liberación de citoquinas, factores de crecimiento y otras quimiocinas.

Los niveles de dos factores fueron más bajos en el suero que en plasma, fibrinógeno y OPN. Los niveles más bajos de ambos factores es probable un efecto directo de la generación de trombina en el suero. La trombina cataliza la conversión de fibrinógeno a fibrina y OPN tiene una división de la trombina sitio y es degradado durante la activación de la cascada de coagulación [15]. La presencia de la trombina-exfoliados OPN en el suero puede afectar a las células en cultivo desde exfoliados OPN promueve la vinculación de células y difundir en mayor medida que uncleaved OPN [15].

Desde recalcified plasma tiene niveles más bajos de fibrinógeno de plasma, los coágulos son menos propensos a formar en los medios de comunicación completará con recalcified plasma en lugar de plasma. Sin embargo, los niveles de casi todos los demás factores son similares en el plasma y recalcified plasma y el comportamiento de las células cultivadas en medios de comunicación más recalcified plasma es probable ser similares a las cultivadas en los medios de comunicación además de plasma.

Suero o plasma es a menudo el calor inactiva para prevenir la activación del complemento de los componentes durante el cultivo de células [1]. Hemos encontrado que la inactivación de calor afecta a los niveles de muchos de los factores estudiados. Los niveles de casi una tercera parte, 31, de los factores de plasma se redujeron inactivación por el calor. Calefacción desnaturaliza las proteínas y las causas que se conviertan en insoluble y estos resultados muestran que los efectos de la inactivación de calor son muy amplios.

Los niveles de cinco factores de aumento de la inactivación con calor; MPO, eotaxin 2, MCP-1, PAI-1 y TNFR1. Aunque el plasma ha marcado reducción de los niveles de elementos celulares en comparación con toda la sangre, que contiene algunas plaquetas y leucocitos. El aumento en los niveles de factor de estos 5 niveles siguientes inactivación de calor puede ser el resultado de calor inducido por la interrupción de células y la liberación del contenido intracelular. MPO es un abundantes neutrófilos secundaria gránulo de proteína, PAI-1 se encuentra en las plaquetas [16], TNFR1 se encuentra en todos los leucocitos, eotaxin 2 en monocitos y macrófagos [17] y MCP-1 en monocitos y linfocitos T. Dado que los niveles de muchos quimiocinas, factores de crecimiento y moléculas de adhesión celular cambiado como resultado de la inactivación de calor, el comportamiento de las células en los medios de comunicación completará con el calor inactiva plasma es probable que sea muy diferente que el comportamiento de las células en los medios de comunicación además de plasma.

Nuestro laboratorio a menudo utiliza el calor inactiva recalcified plasma en lugar de suero inactivado de calor. Nuestro múltiplex proteína análisis reveló varias diferencias entre los dos tipos de suplementos. Dado que los niveles de muchos quimiocinas y moléculas de adhesión celular difieren en suero inactivado calor y el calor inactiva recalified plasma, el comportamiento de las células cultivadas en medios de comunicación más calor inactiva suero pueden ser diferentes de aquellos que cultivaron en los medios de comunicación más calor inactiva recalcified plasma. Estas diferencias no impiden la utilización de calor inactiva recalcified plasma, pero cuando se utiliza en lugar de suero de calor inactiva las células deben ser cuidadosamente analizadas para garantizar el producto final no ha cambiado.

Medios sin suero o plasma suplementos se han utilizado a la cultura una serie de tipos de células incluyendo las células progenitoras hematopoyéticas, dendríticas, neutrófilos, células de leucemia y [2, 4, 9, 10, 18, 19]. Sin embargo, cuando los medios de comunicación con el suero o plasma debe ser utilizada, nuestro informe proporciona un útil caracterización de suero y plasma componentes que pueden ayudar a seleccionar el más adecuado de sangre para completar un determinado tipo de cultivo celular o clínicas hematológicas procedimiento. Además, puede arrojar luz sobre los factores solubles que faltan cuando los investigadores sujetos a las culturas suero medios de comunicación libres condiciones

Material complementario
Archivo Adicional 1
Cuadro comparativo de los niveles de 80 factores solubles entre suero, plasma, recalcified plasma, y el calor inactiva plasma. Esta tabla incluye los niveles de factores solubles a los 40 suero, plasma, recalcified plasma, y el calor inactiva plasma se muestra en la figura
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