Annals of Clinical Microbiology and Antimicrobials, 2006; 5: 24-24 (más artículos en esta revista)

Susceptibilidad in vitro de aislados de Brucella melitensis a once antibióticos

BioMed Central
Aun Turkmani (auntur@gmail.com) [1], Alexandros Ioannidis (aquatical@lycos.com) [1], Athanasia Christidou (athachristidou@in.gr) [1], Anna Psaroulaki (annapsa@med.uoc.gr) [1], Feidias Loukaides (director@vs.moa.gov.cy) [2], Yiannis Tselentis (tselendi@med.uoc.gr) [1]
[1] Departamento de Bacteriología Clínica, Parasitología, Zoonosis, geográfica y Medicina, Facultad de Medicina de la Universidad de Creta, Grecia
[2] Los servicios veterinarios de Chipre, Athalassa, Nicosia, Chipre

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Resumen
Fondo

La brucelosis es una enfermedad endémica presente en muchos países de todo el mundo, pero es rara en Europa y América del Norte. Sin embargo brucelar se incluye a las bacterias potencialmente utilizarse para el bioterrorismo. El objetivo de este estudio fue la investigación del perfil de susceptibilidad antibiótica de Brucella aisladas de las zonas del Mediterráneo oriental, donde ha sido endémica.

Métodos

La susceptibilidad de 74 cepas de Brucella melitensis procedentes de muestras clínicas (57) y los productos de origen animal (17) fueron probados in vitro. Las cepas proceden de Creta (59), Chipre (10) y Siria (5). CIMs de la tetraciclina, rifampicina, estreptomicina, gentamicina, norfloxacina, ciprofloxacina, levofloxacino, trimetoprima / sulfametoxazol, ampicilina, amoxicilina / ácido clavulánico, eritromicina y fueron detectados por E-método de prueba. El NCCLS criterios de crecimiento lento bacterias fueron considerados para interpretar los resultados.

Resultados

Todas las cepas fueron sensibles a la tetraciclina, estreptomicina, gentamicina, ciprofloxacino, norfloxacina, y levofloxacino. Dos cepas presentaron susceptibilidad reducida a rifampicina (MIC valor: 1,5 mg / l) y ocho para el SXT (MIC valores: 0.75-1.5 mg / l). Eritromicina, tuvo el mayor (4 mg / l) 90 MIC tanto valor y norfloxacina y eritromicina la más alta (1,5 mg / l) 50 MIC valor.

Conclusión

Brucella aislados siguen siendo susceptibles in vitro a la mayoría de los antibióticos utilizados para el tratamiento de la brucelosis. El establecimiento de una normalización de susceptibilidad antibiótica método de Brucella spp sería útil para determinar la resistencia a estas bacterias y las posibles bioterorism evaluación de riesgos.

Fondo

Brucella es un patógeno de propagación mundial, que afecta a los seres humanos y animales. Esta dispersión ha mostrado una tendencia hacia los países asiáticos, por el contrario hay una reducción significativa en los casos de brucelosis, en los países donde la brucelosis es endémica en el pasado, como España e Italia [1]. Por el momento la brucelosis es escasa en Europa occidental y América del Norte desde eficaz las medidas de salud pública se han establecido, sin embargo esos países están considerando la posibilidad de Brucella a ser una amenaza potencial de bioterrorismo que conduzcan a un mayor interés en esos países [2].

Brucella es un patógeno intracelular bacteriana que infecta las células huésped macrófagos. En consecuencia, los agentes especializados que son capaces de penetrar en los macrófagos y la función dentro de su citoplasma se requieren para el tratamiento de la brucelosis. Tetraciclinas, rifampicina, trimetoprim-sulphamethoxazole (SXT), estreptomicina, y otros aminoglucósidos, por separado o en combinaciones, son los más comúnmente utilizados para el tratamiento de brucelosis [3, 4]. Las fluoroquinolonas, macrólidos y pueden servir como una alternativa de drogas elección [5, 6]. En 1986, la OMS ha publicado recomendaciones para el uso de doxiciclina, ya sea en combinación con rifampicina o estreptomicina para el tratamiento de la brucelosis humana. Esta recomendación se encuentra todavía en función.

Brucella aislados son generalmente considerados susceptibles a la recomendada por la OMS antibióticos. Sin embargo casos esporádicos de una especie de resistencia a los antibióticos se han reportado [7, 8]. El objetivo de este ensayo fue determinar la susceptibilidad a antibióticos de las bacterias identificadas Brucella en el Laboratorio de Bacteriología Clínica, Parasitología, Zoonosis, geográfica y medicina de la Universidad de Creta.

Métodos

Un número de 74 cepas fueron incluidos en esta investigación, tanto de origen humano y animal. Las muestras humanas fueron cultivadas utilizando la sangre automatizado sistema de la cultura (Organon Teknika BacT / Alert, Biomerieux ®, Francia) y el animal se aislaron cepas de Brucella selectivo utilizando medios de cultivo. Si escribes de todos los aislados de Brucella se basa en métodos microbiológicos convencionales (el requisito de CO 2 para el crecimiento, producción de ureasa y H 2 S, la sensibilidad a los tintes de fucsina básica y thionin, y lisis de los fagos y Tiblissi Weybridge).

Además de las 74 cepas, 6 Brucella cepas de referencia: B. abortus 104 M, B. abortus 2308, B. melitensis 16 M biotipo 1 (ATCC 23456), B. B3196 abortus biotipo 5 (ATCC 23452), B. 513 suis biotipo 5, y B. neotomae 5K33 (ATCC 23459) también fueron probados. Las cepas de referencia: Esherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 29213 se utilizaron como control.

Las pruebas de sensibilidad antibiótica fue realizado por el E-método de prueba (AB biodisk), de acuerdo con las directivas del fabricante. Los 11 antibióticos probados fueron los siguientes: tetraciclina, rifampicina, estreptomicina, gentamicina, norfloxacina, ciprofloxacina, levofloxacino, trimetoprima / sulfametoxazol, ampicilina, amoxicilina / ácido clavulánico y eritromicina. La suspensión bacteriana en una concentración igual a 10 5 - 10 6 ufc / ml, se inoculó en agar Mueller Hilton placas, complementado con un 5% de agar sangre ovina, y la E-tiras de prueba se aplicaron. Las placas fueron incubadas a 35 ° C en el 5% de atmósfera de CO 2 durante 48 h.

Los criterios interpretativos del NCCLS para bacterias de crecimiento lento (Haemophilus) también se tomaron en cuenta para evaluar los resultados de CIMs determinación [9].

Resultados

El análisis de los datos relativos a los aislamientos resultó en lo siguiente. Todas las cepas aisladas son a partir del momento en período 1999-2005 y proceden de distintas regiones del Mediterráneo oriental (Creta, 59; Chipre, 10, y Siria, 5).

Diecisiete aislados fueron obtenidos a partir de animales enfermos (ovejas y cabras), la fuente de aislamiento fue productos de origen animal, principalmente la leche. Los restantes 57 cepas proceden de los pacientes (Tabla 1]. Entre los 55 pacientes de Creta, 5 eran inmigrantes de la zona de los Balcanes, inmigrado recientemente y, por consiguiente, posiblemente infectados en sus anteriores asentamientos. Además, cuatro de los pacientes se encontraban en recaída, mientras que el resto se encontraban en fase aguda. Las cepas clínicas fueron obtenidas a partir de sangre (44), médula ósea (3), el líquido sinovial (2), líquido cefalorraquídeo (1), tejido óseo (2), y juxtaspinal absceso (1).

Todos los aislamientos fueron identificados como Brucella melitensis.

El MIC 50 y MIC 90 valores de los antibióticos se muestran en la Tabla 2. Los valores de MIC de la tetraciclina, ciprofloxacino, levofloxacino, y amoxicilina / ácido clavulánico, interpretado de acuerdo a criterios de la NCCLS para bacterias de crecimiento lento, han mostrado rangos por debajo de la interrupción de sensibilidad determinación. Los valores de MIC de la ampicilina, rifampicina, y SXT rango en niveles por debajo de la ruptura de la resistencia determinación. El MIC de rifampicina es de 1,5 mg / l para los dos aislamientos y los valores de MIC de SXT rango de 0,75 mg / l para 1,5 mg / l para ocho de los aislamientos. Las CIMs de la estreptomicina y la gentamicina son también bajos. La eritromicina entre el total de los antibióticos y la norfloxacina entre las quinolonas presentan los más altos valores de MIC.

Por otra parte, ningún tipo de resistencia se detectó en los aislamientos obtenidos de pacientes en recaída y sus valores de MIC se encontraban en niveles bajos.

Discusión

Brucella especies son altamente patógenos infecciosos y el nivel 3 de bioseguridad precauciones deben mantenerse durante el procedimiento de las pruebas de sensibilidad. Estos agentes patógenos se consideran susceptibles a los antibióticos recomendados por la OMS para el tratamiento de la brucelosis. Posteriormente, Brucella las pruebas de sensibilidad no es realizada de forma rutinaria. Además, no hay método estandarizado para las pruebas de sensibilidad recomendados por NCCLS para estos microorganismos. Recaídas, a una tasa de alrededor del 10 por ciento, por lo general se producen en el primer año después de la infección, sino que son causados por la falta de tratamiento en la mayoría de los casos [3]. Resistentes a los antibióticos cepas de Brucella rara vez son causa de fracaso de terapia [4]. Sin embargo, las cepas resistentes a los principales agentes antimicrobianos pueden surgir [10] y dar lugar a la inhibición al tratamiento.

Hay pocos informes de la susceptibilidad in vitro de Brucella y diversas metodologías se han aplicado. Caldo de microdilución [11 - 13], de dilución en agar [5, 14], y E-métodos de ensayo [7, 13, 15] se han aplicado para la determinación de antibióticos MIC. Brucella agar [11], Muller-Hinton agar, y Muller-Hinton caldo suplementado con 1% Polyvitex [12 - 14], o combinadas 1% Polyvitex y el 1% de hemoglobina [5], y Muller-Hinton agar suplementado con 5% de las ovejas de agar sangre de carnero [7, 13] son los medios usados para las pruebas de sensibilidad antibiótica de Brucella. E-es una prueba confiable, reproducible, y de fácil método para realizarse las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos y se ha empleado con éxito para el ensayo de cepas de Brucella [7, 13, 14].

Los aislamientos incluidos en este estudio, se originó a partir de tres países del Mediterráneo oriental (Grecia, Chipre y Siria) y son muy susceptibles a la mayoría de los antibióticos probados, lo cual es consistente con informes anteriores. Tetraciclina (MIC90: 0,5 mg / l) se ha demostrado ser activa in vitro contra todos los aislamientos, este hallazgo coincide con los informes anteriores [7, 11, 14, 15]. Rifampicina (MIC90: 1) también mostraron una buena actividad. No obstante, dos del total (74) cepas fueron inhibidas por 1,5 mg / l de rifampicina. Desde interrupción aún no se han establecido para las especies de Brucella, estas cepas no pueden calificarse de confianza de resistencia intermedia, si bien una susceptibilidad reducida puedan existir. Valores de MIC de rifampicina que van de 1 a 4 mg / l ya se han comunicado [7, 8]. Un resultado similar se obtuvo para el SXT. Ocho de los 74 aislamientos con valores de MIC de 0,75 a 1,5 mg / l puede ser caracterizado como cepas de resistencia intermedia de acuerdo a la NCCLS criterios interpretativos para bacterias de crecimiento lento. Tasas significativas de la resistencia SXT se han notificado en estudios previos [7, 8].

CIMs de aminoglucósidos (estreptomicina, gentamicina y) fueron bajas, lo que corresponde a la susceptibilidad in vitro de todas las cepas, lo cual es consistente con informes anteriores [6, 11].

Varios estudios se centraron en las quinolonas actividad contra Brucella, ya que estos agentes apareció como una alternativa atractiva para la elección de drogas brucelosis humana tratamiento. Aunque in vitro la resistencia a quinolonas no es muy alta, la eficacia de estos antibióticos sigue siendo controvertida [5, 6, 11, 12]. Nuestro cepas fueron inhibidas in vitro de bajas concentraciones de las quinolonas.

El papel de los macrólidos en el tratamiento de la brucelosis sigue siendo controvertida [5, 6]. Valores de CMI de eritromicina osciló de 0,5 a 8 mg / l, lo que indica actividad reducida. La eritromicina, ampicilina y amoxicilina / ácido clavulánico se incluyeron en el estudio con fines de investigación únicamente, como los agentes son ineficaces en vivo tratamiento de la brucelosis. Posteriormente, los bajos valores de CMI de ampicilina y amoxicilina / ácido clavulánico en los aislamientos no se corresponden con ningún efecto terapéutico.

Conclusión

La brucelosis sigue siendo un importante problema de salud pública en países con bajos socialeconomical estado. La necesidad de mantener la rifampicina para tratamiento de la tuberculosis y el requisito alternativo de la terapia con medicamentos especializados para los casos implica la investigación para el uso de otros antibióticos. Posteriormente, las pruebas de susceptibilidad a antibióticos de Brucella pueden ayudar a la elección de tratamiento en casos específicos, los estudios epidemiológicos y la predicción pottential amenazas. Por lo tanto, el establecimiento de un sistema sencillo, confiable y de bajo método de cálculo de costos para las pruebas de sensibilidad a Brucella sería útil para una detección temprana de cualquier resistencia a los medicamentos que se pueden desarrollar.

Conflicto de intereses

Los autores declaran que no tienen intereses en conflicto.

Autores de las contribuciones

AT llevó a cabo la adquisición, análisis e interpretación de los datos. AI realizó el cómputo de análisis del estudio y revisión crítica del manuscrito. AC realizó el análisis y la interpretación de los datos y redactó el manuscrito. FL contribuido a la adquisición de datos. AP YT y llevó a cabo el diseño y coordinación del estudio. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

Agradecimientos

Los autores desean agradecer a Eleni Tzani por su asistencia en los procedimientos técnicos de laboratorio del estudio.