Mediators of Inflammation, 2006; 2006(4): (más artículos en esta revista)

Efectos de la Talidomida en la expresión de moléculas de adhesión en Rat cirrosis hepática

Hindawi Publishing Corporation
Lv Peng, Chireyath Paul Shelley, Yanjv Xiao, Shiquan Liu, Luo Hesheng

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Resumen

Este estudio fue evaluar los efectos de la talidomida en la expresión de moléculas de adhesión en la cirrosis hepática. La cirrosis es inducida en ratas Wistar por inyección intraperitoneal de CCL 4 , Y la talidomida (10 mg / kg / día o 100 mg / kg / día) fue dada por la administración intragástrica de 8 semanas. Hígado histopatología e inmunohistoquímica fueron significativamente mejorados y las expresiones de ICAM-1, VCAM-1, E-selectina, y TNF-α mRNA y proteínas se redujo significativamente en las ratas tratadas con una dosis alta de la talidomida. Cerrar correlación positiva se observó en la expresión del TNF-α mRNA y de ICAM-1, VCAM-1 y E-selectina ARNm, respectivamente. Estos resultados indican que la talidomida ejerce su efecto sobre la downregulation de moléculas de adhesión a través de TNF-α señalización vía para inhibir la fibrosis hepática.

INTRODUCCIÓN

Moléculas de adhesión son proteínas expresadas en una variedad de células que median la interacción entre las células endoteliales con los linfocitos, monocitos y leucocitos [1].

Molécula de adhesión intercelular-1 (ICAM-1) y vasculares molécula de adhesión celular-1 (VCAM-1), dos miembros de la inmunoglobulina supergene familia, desempeñan un papel clave en la promoción de la migración de las células inmunológicas de la circulación al objetivo del sitio en el estado inflamatorio [2, 3]. Girón-González et al informaron de que la activación endotelial desempeña un papel activo en las modificaciones del aparato circulatorio estado de los pacientes cirróticos, luego de novo expresión de ICAM-1 y VCAM-1 en células endoteliales medie la transmigración de células inflamatorias, que inducen la inflamación y el tejido daños en el hígado [4]. Hasta reguladas ICAM-1 y VCAM-1 de expresión en las enfermedades crónicas del hígado ha sido reportado en varios estudios, lo que sugiere que pueden desempeñar funciones en la patogénesis de la hepatitis crónica o cirrosis [5 - 12]. La selectina familia de moléculas de adhesión celular es generalmente pensado para promover reacciones inflamatorias de facilitar el reclutamiento de leucocitos [13]. Los altos niveles de soluble E-selectina, se han registrado en agudos y crónicos de trastornos inflamatorios. Cervello et al informaron de que los niveles séricos elevados de soluble E-selectina se asocian con hepatitis crónica y cirrosis hepática, sobre todo en los pacientes con cirrosis hepática soluble E-selectina se redujo con la gravedad de la enfermedad de acuerdo a la clasificación de Child-Pugh de clasificación [14].

Talidomida fue retirada del mercado mundial a principios del decenio de 1960 para su bien conocida trágicos efectos teratogénicos. Pero en los últimos años, muchos ensayos clínicos han validado su utilidad clínica en el tratamiento de diversas neoplasias hematológicas como el mieloma múltiple y tumores sólidos, y una variedad inflamatoria de enfermedades autoinmunes y sobre la base de sus importantes efectos sobre la inflamación, la reglamentación de reacción inmunológica y angiogénesis [15, 16]. Talidomida objetivos de leucocitos, las células endoteliales y queratinocitos, que les afecta en diferentes maneras y en diferentes niveles celulares. Los cambios en la densidad de moléculas de adhesión alterar la extravasación de leucocitos y la respuesta inflamatoria en los tejidos involucrados [17]. Se instala et al informaron de que la talidomida puede reducir significativamente la molécula de adhesión celular expresión como ICAM-1 y LFA-1 en humanos leucemia T (CEM) y células humanos vena umbilical células endoteliales (HUVEC) y la adhesión celular entre ellos [18]. Si la baja regulación de moléculas de adhesión de la talidomida pueden ser utilizados en el tratamiento de la fibrosis hepática no ha sido reportado aún.

El objetivo de este estudio es investigar los cambios de expresión de moléculas de adhesión como ICAM-1, VCAM-1 y E-selectina en el tetracloruro de carbono inducida por la cirrosis tratados con talidomida, y para analizar su mecanismo.

MATERIAL Y MÉTODOS
Animales

Sesenta ratas Wistar macho, cuatro a cinco semanas de edad, con un peso de 85-95 g (obtenida a partir de Centro Experimental de Animales de Hubei Academia de Ciencias Médicas) fueron utilizados. Las ratas fueron alojadas en una temperatura y humedad controladas por el medio ambiente, y que fueron alimentados con ratas chow y el agua ad libitum a lo largo del periodo de estudio

Diseño experimental

El trabajo se realizó de conformidad con los principios de 1983 la Declaración de Helsinki y con la aprobación del comité de ética de la Universidad de Wuhan. Las ratas fueron divididas aleatoriamente en cuatro grupos (cada grupo, n = 15) de la siguiente manera: grupo control normal, modelo de grupo, grupo tratado con dosis bajas de la talidomida, el grupo tratado con altas dosis de talidomida. El modelo de ratas en grupo y grupos terapéuticos fueron inyectados por vía intraperitoneal con tetracloruro de carbono ( CCL 4 ) (16,67% en aceite de cacahuete) tres veces a la semana durante 8 semanas para inducir cirrosis hepática, y las ratas normales en el grupo control sólo recibieron aceite de cacahuete por inyección intraperitoneal. Talidomida fue disuelto en solución salina normal para preparar diferentes concentraciones (.1% y 1%). Talidomida (10 mg / kg / día o 100 mg / kg / día) fue dada por la administración intragástrica en los dos grupos terapéuticos, respectivamente, durante 8 semanas, mientras que las ratas normales en el grupo control y el modelo de grupo se les dio el vehículo (normal salina) durante 8 semanas. Todos los ratones fueron sacrificados al final de la octava semana. 5 ml de sangre venosa se obtuvo del ventrículo derecho del corazón, mientras que la rata se encontraba bajo anestesia con éter, y se almacenó en -80 ° C. El tejido hepático de el lóbulo derecho se fijó en un 40 gL formaldehído, incrustado de parafina y las secciones continuas fueron tomadas, el resto del hígado se ha mantenido a -80 ° C

Un examen patológico

Dos patólogos hicieron el examen patológico independiente después de la tinción de las secciones del hígado con hematoxy-lin-eosina (HE) método de tinción con tricrómico de Masson y el método de tinción.

Knodell El índice de actividad de la hepatitis (HAI) se utilizó para el grado de severidad de la inflamación y la fibrosis actividad en el hígado. Se compone de cuatro independientes resultados de la siguiente manera: necrosis periportal con o sin necrosis de transición (0-10), intralobulares degeneración y necrosis focal (0-4), inflamación portal (0-4), y fibrosis (0-4).

Suero de ensayo

El suero fue obtenido por centrifugación de sangre de ratas en 1500 RMP / min durante 15 minutos. A continuación, la alanina aminotransferasa (ALT), aspartato aminotransferasa (AST), prealbúmina (AP), albúmina (ALB), y globulina (GLB) fueron detectados por análisis bioquímico. Ácido hialurónico (AH), laminina (LN), procollagen Tipo III, (PCIII), y el colágeno tipo IV (C IV) fueron detectados por radioinmunoensayo.

Tinción inmunohistoquímica de ICAM-1, VCAM-1 y E-selectina

La expresión de marcadores fue detectado mediante el paso de tres streptavidina-biotina método de inmunoperoxidasa. En pocas palabras, después de cortes de tejido fueron deparaffinized y rehidratada, que se calienta en el microondas durante 10 minutos para aumentar la recuperación de antígenos. Láminas fueron incubadas durante 10 minutos con un 3% H 2 O 2 para inactivar la actividad peroxidasa endógena. Después de 20 minutos bloqueando el paso con el 5% de suero normal de cabra diluida en buffer fosfato salino-(.01% PBS), los anticuerpos primarios (ICAM-1, Santa Cruz, Calif, EE.UU.; VCAM-1 y E-selectina, Bosider , Wuhan, China) se aplicaron y se incubaron por 2 horas en una cámara de humedad a 37 ° C. Tras el tratamiento con biotina hircine anti-ratón (o conejo) IgG e avidina durante 30 minutos cada una a 37 ° C, Diaminobencidina 1 mg / ml en PBS que contenía .03% de peróxido de hidrógeno se aplicó a la cromógeno. Las secciones se counterstained con hematoxilina durante 15 segundos. Para cada anticuerpo, control negativo se han realizado estudios de PBS en la que se utilizó en lugar de anticuerpos primarios.

El citoplasma o membrana de la célula fue positivo teñidas de color marrón y amarillo. Las secciones se observaron bajo el microscopio Olympus por dos patólogos independiente. No menos de 5 campos de alta potencia (400 cadenas) y no menos de 1000 células fueron contados. A continuación, el porcentaje de células positivas de las mismas.

Western blot

Congelado tejido homogeneizado en 1 ml de helado amortiguador de lisis (10 mM Tris-HCl. PH 7,5, 10 mM NaCl , .1 MM EDTA, .5% Triton-X, .02% NaN3 , .2 MM phenylmethylsulfonyl fluoruro). Después de la incubación durante 30 minutos sobre el hielo, el homogenado se centrifuga a 16000 g durante 30 minutos a 4 ° C, el sobrenadante a un nuevo tubo. Concentración de proteínas fue determinado usando el método de Bradford con BSA como estándar. Total de proteínas (30 μ g) fueron a través de electrophoresed estándar del 12% SDS-PAGE en Tris-glicina electroforesis en buffer [25 mm Tris, 192 mM glicina (pH 8,3), y .1% SDS] y borrado en la membrana de nitrocelulosa en la transferencia de buffer [380 mM glicina, 50 mM Tris (pH 8,3) y el 20% de metanol] a 80 mA por 2 horas en refrigeración por agua de transferencia de aparato. La membrana se pre-incubadas en el amortiguador de bloqueo (TBS que contengan 5% nonfat la leche en polvo) durante 2 horas a temperatura ambiente y luego probaron con un anticuerpo primario (1: 200 diluido en el amortiguador de bloqueo) de la noche a 4 ° C. La membrana se lavó tres veces con el .1% PBS-Tween, entonces se incubó con anti-cabra (IgG de conejo o ratón IgG) IgG conjugada con peroxidasa de rábano (Santa Cruz, Calif, EE.UU.) diluido al 1: 2000 en el bloqueo de amortiguación por 2 horas a temperatura ambiente. Antígeno-anticuerpo complejos se detectaron por quimioluminiscencia utilizando sustrato quimioluminiscente mejorado kit (Santa Cruz, Calif, EE.UU.). β-actina (1: 1000 diluida en el amortiguador de bloqueo) fue utilizado como la limpieza de control interno. Anticuerpos primarios utilizados fueron: anti-rata TNF-α anticuerpo policlonal (Santa Cruz, Calif, EE.UU.), anti-ratón β-actina de anticuerpos monoclonales (Sigma, Mo, EE.UU.). Las imágenes fueron capturados, y que las señales han sido cuantificados en unidades arbitrarias (OD) x área de la banda usando Vilber Lourmat sistema de análisis de imagen (Vilber Lourmat, Marne-la-Vallee Cedex 1, Francia). Los resultados se expresan los coeficientes de densidad de β-actina.

La transcriptasa inversa-reacción en cadena de polimerasa

Total RNA fue extraído a partir de la congelada el tejido hepático con reactivo Trizol (Invitrogen Corporation, Calif, EE.UU.), que se basa en el método de tiocianato de guanidina. Congelado hígado era mecánicamente a homogeneizar el hielo en 1 ml de helado reactivo Trizol. Total RNA fue disuelto en RNasa libre de H 2 O , Y cuantificados por duplicado de la medición de la densidad óptica (DO) a 260 nm. Pureza de RNA se asegura mediante el examen de la OD 260 / OD 280 ratio. Dos microgramos de RNA fueron transcritas inversa con oligo DT myeloblastosis aviar y el virus de la transcriptasa inversa (RT) (Promega, Wisconsin, EE.UU.) en un volumen total de 20 μ l. Un microlitro de ADN complementario (ADNc) fue amplificado por PCR utilizando 1 microlitro de adelante y atrás primers (50 PM), 2,5 mM deoxyribonucleotide trifosfatos (dNTPs), 2,5 μ l 1 × PCR buffer y 2,5 unidades de Taq ADN polimerasa (Takara, Shiga , Japón) en un volumen final de 25 μ l. PCR se realizó con un termociclador programado (Biometra, Goettingen Alemania). Los pasos de amplificación se TNF-α (95 ° C durante 3 min, 94 ° C durante 30 s, 53 ° C durante 30 s, 72 ° C durante 45 s, 72 ° C 7 min durante 35 ciclos); ICAM-1 (95 ° C durante 3 min, 94 ° C durante 60 s, 55 ° C durante 60 s, 72 ° C durante 60 s, 72 ° C 7 min durante 32 ciclos); VCAM-1 (95 ° C durante 3 min, 95 ° C durante 60 s, 55 ° C durante 60 s, 72 ° C durante 60 s, 72 ° C 7 min durante 32 ciclos); E-selectina (95 ° C durante 3 min, 94 ° C durante 30 s, 53 ° C durante 45 s, 72 ° C durante 60 s, 72 ° C 7 min durante 32 ciclos); GAPDH (95 ° C durante 3 min, 94 ° C durante 30 s, 53 ° C durante 30 s, 72 ° C durante 45 s, 72 ° C 7 min durante 35 ciclos). El primer pares fueron diseñados a partir de las secuencias publicadas en GenBank. El primer pares fueron: TNF-α: delantero: 5'-GCCAATGGCATGGATCTCAAAG-3 '; inversa: 5'-CAGAGCAATGACTCCAAAGT-3'; ICAM-1: adelante: 5'-CTGCAGAGCACAAACAGCAGAG-3 '; inversa: 5'-AAGGCCGCAGAGCAAAAGAAGC - 3 '; VCAM-1: adelante: 5'-TAAGTTACACAGCAGTCAAATGGA-3'; inversa: 5'-CACATACATAAATGCCGGAATCTT-3 '; E-selectina: delantero: 5'-CAACGTGCACGTTTGACTGT-3'; inversa: 5'-AGGTCAAGGCTTGAACACTG-3 ' ; GAPDH: delantero: 5'-TCCCTCAAGATTGTCAGCAA-3 '; inversa: 5'-AGATCCACAACGGATACATT-3'. Glyceraldehyde-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) se utilizó como los controles internos, mientras que todos RT-PCR se normalizaron las señales a la señal de la correspondiente RT producto de GAPDH para eliminar el error de medición de muestra desigual carga, y proporcionar una medida semicuantitativa de la los cambios relativos en la expresión génica. Los cDNAs de todas las muestras de hígado fueron amplificados simultáneamente utilizando alícuotas de la misma mezcla de PCR. Después de la amplificación por PCR, 5 μ l de cada reacción electrophoresed fue del 1,5% en geles de agarosa y teñido con bromuro de etidio. Las imágenes fueron capturados, y que las señales han sido cuantificados en unidades arbitrarias como OD x área de la banda usando Vilber Lourmat sistema de análisis de imagen (Vilber Lourmat, Marne-la-Vallee Cedex 1, Francia). Los resultados se expresan los coeficientes de densidad de GAPDH.

El análisis estadístico

Los datos se presentaron como media ± SEM, y se analizaron mediante ANOVA de un factor seguido de Student-Newman-Keuls test post hoc y análisis de correlación. .05 El nivel de probabilidad fue utilizado como la significación estadística.

RESULTADOS
Buen estado de salud de la rata y el aspecto de su hígado

En el modelo de grupo, cinco ratas murieron durante las 8 semanas, y los supervivientes parecían anoréxicos, la pérdida de peso corporal y berrinche, mientras que su pelaje perdido el brillo. El hígado de la rata de supervivencia fue de color rojo oscuro después de haber sido sacrificado. Hubo muchos granular de nódulos distribuidos en la superficie de la rata. El hígado sentía mucho difíciles y se convirtió en su borde obtuso (Figura 1 (a)]. Tres ratas murieron durante este período en el grupo tratado con dosis bajas de la talidomida (10 mg / kg / día), y, en general, la condición saludable y el aspecto de hígado de las ratas de supervivencia eran los mismos que los normales en el grupo control. Sólo una rata murió después de las ocho semanas en el grupo tratado con altas dosis de talidomida (100 mg / kg / día). La sana condición de la supervivencia en ratas de este grupo era mejor que se observó de buen apetito, peso corporal y el brillo del pelo. Y hay muy pocos granular de los nódulos detectados en la superficie roja de hígado, que pasan a ser suave en comparación con la de cirrosis rata. El hígado sentía suave y su borde no es obtuso (Figura 1 (b)].

Histopatología

Figuras 2 y 3 muestran la histopatología de las ratas de HE y método de tinción de Masson. La arquitectura de lóbulos hepáticos de las ratas normales de control se completa, y no hay fibroplasia y la infiltración de células inflamatorias. Pero en las ratas del grupo modelo, los lóbulos del hígado fueron separados y rodeados por la fibras colágenas, lo que resultó en aparente pseudolobules. Y hubo graves necrosis y degeneración grasa de los hepatocitos que fueron generalizados en el pseudolobules de cirrosis, mientras que las células inflamatorias infiltrado ampliamente en el estroma. La puntuación total de Knodell fue significativamente mayor en el modelo de grupo que no sea normal en el grupo control (P <.01) (Figura 4]. En comparación con el modelo de grupo, la fibroplasia de la rata de hígado en el grupo tratado con dosis bajas de la talidomida era relativamente grave. Y la gravedad y la amplitud de distribución de la necrosis hepatocelular se redujeron ligeramente, mientras que la infiltración de células inflamatorias también se redujo ligeramente en este grupo. En comparación con el modelo de grupo, la gravedad de la necrosis hepatocelular y fibroplasias disminuyó significativamente en el grupo de ratas tratadas con dosis altas de talidomida, mientras tanto hubo fibroseptal delgado y la disminución de la infiltración de células inflamatorias en el hígado, lo que dio lugar a la mejoró notablemente o normal arquitectura de lóbulo hepático. En general, la histopatología del hígado en las ratas tratadas con dosis altas de talidomida se asemejaba relativamente que el mando normal. Su puntuación total de Knodell fue significativamente más elevada que en el modelo de grupo (P <.01) (Figura 4).

El análisis de los marcadores séricos

ALT y AST fueron significativamente mayores y PA y ALB fueron significativamente inferiores en el modelo de grupo que los normales en el grupo control (P <.01). ALT y AST fueron significativamente inferiores en el grupo tratado con dosis bajas de la talidomida que los del modelo de grupo (P <.01). ALT y AST también fueron significativamente menores en el grupo tratado con altas dosis de talidomida que los del modelo de grupo (P <.01), mientras que PA y ALB fueron significativamente mayores en este grupo que los del modelo de grupo (P < .01) (Tabla 1].

Suero HA, LN, PCIII, IV y C fueron significativamente mayores en el modelo de grupo que los normales en el grupo control (P <.01). Ellos fueron significativamente inferiores en el grupo tratado con altas dosis de talidomida que los del modelo de grupo (P <.01) (Cuadro 2].

El análisis inmunohistoquímico de ICAM-1, VCAM-1 y E-selectina

Hubo algunas expresiones positivas de estas tres proteínas en las células hepáticas sinusoid y las células endoteliales vasculares en el hígado de ratas normales, y no había expresión positiva en los hepatocitos. Pero en la cirrosis hepática, hubo expresiones positivas de estas tres proteínas en estos tres tipos de células, mientras que el positivo ICAM-1, VCAM-1 y E-selectina células se distribuyen principalmente en la banda fibrosepta, el área de necrosis y la infiltración de células inflamatorias en los lóbulos hepáticos (Figura 5 (a], Figura 6 (a], Figura 7 (a)]. La relación de estos tres células positivas para el total de células en el modelo de grupo fue significativamente más alta que la normal en el grupo control (P <.01) (Figura 5 (b], Figura 6 (b], figura 7 (b)] . En comparación con el modelo de grupo, tanto en dosis bajas y altas dosis de talidomida que proporción reducida significativamente (P <.01) (Figura 5b, la figura 6 (b], figura 7 (b)]. Y hubo una diferencia significativa de este efecto entre estos dos grupos terapéuticos (P <.01) (Figura 5 (b], Figura 6 (b], figura 7 (b)].

Western blot de TNF-α proteína

La expresión de TNF-α proteínas fue significativamente mayor en el tejido hepático de las ratas en el modelo de grupo que no sea normal en el grupo control (P <.01) (Figura 8]. Las expresiones de TNF-α proteínas fueron significativamente inferiores en el tejido hepático de ratas en el grupo tratado con altas dosis de talidomida que no sea aquel en el modelo de grupo (P <.01) (Figura 8].

RT-PCR análisis de TNF-α, ICAM-1, VCAM-1 y E-selectina mRNA

La expresión de TNF-α mRNA fue significativamente mayor en el tejido hepático de las ratas en el modelo de grupo que no sea normal en el grupo control (P <.01). La expresión de TNF-α mRNA fue significativamente menor en el tejido hepático de las ratas en el grupo tratado con altas dosis de talidomida que no sea aquel en el modelo de grupo (P <.01) (Figura 9].

Las expresiones de ICAM-1, VCAM-1 y E-selectina mRNA fueron significativamente mayores en el tejido hepático de las ratas en el modelo de grupo que los normales en el grupo control (P <.01). Las expresiones de ICAM-1, VCAM-1 y E-selectina mRNA fueron significativamente inferiores en el tejido hepático de las ratas en el grupo tratado con dosis bajas de la talidomida o altas dosis de talidomida que no sea aquel en el modelo de grupo, respectivamente, ( P <.01) (Figura 9). Y hubo una diferencia significativa de este efecto entre estos dos grupos terapéuticos (P <.01) (Figura 9).

El análisis de correlación

Existe una estrecha correlación positiva entre la expresión de TNF-α mRNA y de ICAM-1 mRNA (r = .83, P <.01), VCAM-1 mRNA (r = .92, P <.01) , Y E-selectina ARNm (r = .94, P <.01).

DISCUSIÓN

Fibrosis hepática es un proceso patológico común de enfermedades crónicas del hígado de diferentes etiologías. La enfermedad hepática crónica de diversas etiologías produce fibrosis hepática progresiva y continua de la fibrosis acabará finalmente en la cirrosis [19, 20]. Se ha informado de que la fibrosis hepática puede ser revertido por tantos tratamientos, que incluían la terapia antiviral, la regulación del metabolismo de la matriz, la facilitación de la apoptosis de células satellate hepatocelular (HSC), la terapia génica, etc [21, 22].

En los últimos años, la talidomida ha sido utilizada en algunos aspectos básicos y los ensayos clínicos para el tratamiento agudo o enfermedades crónicas del hígado [23 - 29]. Muriel et al informaron de que la talidomida redujo significativamente el aumento de ALT, γ-GTP, y ALP, impidió la peroxidación lipídica y la disminución de glucógeno, y la mejora de la histopatología del hígado en ratas inducida por la cirrosis CCL 4 [30]. Su mecanismo puede estar relacionado con anti-inflamatorios, anti-TNF-α, y antifibrotic propiedades de la talidomida. En otro estudio, Yeh et al informaron de que la inyección intraperitoneal de la talidomida inhibe letal hepática necroinflammation, aceleró la recuperación de la rata en vivo cirrosis inducida por thioacetamide, y el mecanismo puede ser la supresión de la expresión de TNF-α y TGF β1 de células de Kupffer del [31] .

En nuestro estudio, las ratas cirrosis hepática inducida por CCL 4 fue tratado con talidomida por la administración intragástrica. La mortalidad de las ratas y se redujo su buen estado de salud se ha mejorado. Y el aspecto del hígado después de la terapia con altas dosis de talidomida se convirtió en suave y flexible. El estudio histopatológico de tejido hepático de ratas tratadas con dosis altas de talidomida apareció aproximada a la normal del hígado. La disminución de la necrosis hepatocelular, infiltración inflamatoria, y fibroplasias y la absorción de fibrosepta fueron evidentes en el hígado. La disminución significativa de Knodell Resultado demostrado que la actividad de la inflamación y el grado de fibrosis eran notablemente reducidos por la talidomida (dosis alta). Además de esto, la talidomida (dosis baja y dosis alta) impidió la evaluación de suero ALT y AST, lo que sugiere que puede prevenir eficazmente la inflamación. El aumento de los niveles de PA y ALB a la talidomida (dosis alta) grupo tratado sugiere que la talidomida puede mejorar el estado nutricional de ratas con cirrosis. La reducción de la fibrosis hepática en suero como los encargados de HA, LN, PCIII, y C IV cirrosis en ratas indicaron la talidomida (dosis alta) efecto sobre la mejora de fibrosis hepática en otro lado.

La expresión de moléculas de adhesión como ICAM-1, VCAM-1 y E-selectina fue alta en la hepatitis crónica, cirrosis o se informó en varios estudios, y estas moléculas de adhesión puede desempeñar funciones en la patogénesis de la fibrosis hepática. En nuestro estudio muy menor expresión de estas moléculas se encuentran en el hígado normal, pero en la cirrosis hepática, hubo expresiones de alta en la sinusoid células hepáticas, las células endoteliales vasculares, y hepatocitos. Fueron distribuidos en las fibrosepta banda, zona rica de necrosis, células inflamatorias y en cirrosis hepática. Se encontró que las expresiones de ICAM-1, VCAM-1 y E-selectina, tanto en mRNA y los niveles de proteína se redujo significativamente por la talidomida que fue dosis dependiente. Esto sugiere que la talidomida puede reprimir más eficazmente la sobre regulación de moléculas de adhesión en la cirrosis hepática. Esto puede ser útil para ilustrar el mecanismo del efecto de la talidomida en la prevención de fibrosis hepática.

TNF-α / TNFR-vía de señalización mediada por la activación de las células de Kupffer desempeña un papel importante en la patogénesis de la fibrosis hepática [32]. Sudo et al informaron de que la fibrosis hepática inducida por CCL 4 Se impidió a los receptores de TNF (TNFR) tipo 1 knockout (KO) los ratones [33]. Pero como un importante citoquinas proinflamatorias, TNF-α también desempeña un papel importante en la regulación de moléculas de adhesión [34 - 40]. Mejoramiento de la NF κ B vía de señalización mediada por la activación de citocinas como el TNF-α puede ser crítica en la que participan sobre regulación de quimiocinas y moléculas de adhesión [41 - 43]. Paik et al informaron de que HSC puede ser activado por la producción de TNF-α inducida por LPS, y activado HSCs estimular NF κ B-que hasta regula moléculas de adhesión como ICAM-1 y VCAM-1 [44]. Se trata de una cascada proinflamatoria mediador que desempeña papel importante en la patogénesis de la fibrosis hepática. Un prometedor abordaje terapéutico de la fibrosis hepática, por lo tanto, para inhibir el TNF-α inducida por moléculas de adhesión de expresión en la transcripción. La talidomida se ha demostrado que reducir la producción de TNF-α de manera efectiva [45 - 47]. En este estudio, la expresión de TNF-α en mRNA y los niveles de proteína se redujo notablemente por la talidomida (dosis alta) en la cirrosis hepática inducida por CCL 4 . Y hay una estrecha correlación positiva entre la expresión de TNF-α mRNA y de ICAM-1 mRNA (r = .83, P <.01), VCAM-1 mRNA (r = .92, P <.01 ), Y E-selectina ARNm (r = .94, P <.01), que manifiesta que los cambios de moléculas de adhesión están estrechamente correlacionados con TNF-α en los niveles de ARNm inducida por la talidomida en ratas cirrosis hepática. Por lo tanto, quizás la supresión de moléculas de adhesión a través de TNF-α vía de señalización de la talidomida desempeña un papel esencial en el tratamiento de la fibrosis hepática. Aunque hubo 10 veces la diferencia entre la dosis alta y baja dosis de talidomida, dos de ellos redujo significativamente la expresión de ICAM-1, VCAM-1 y E-selectina en mRNA y los niveles de proteína. Es tan interesante. Tal vez ya sea había otras citoquinas proinflamatorias reprimidas por la talidomida que también mediada por la expresión de moléculas de adhesión o hubo algunas vías de señalización desconocido que desempeñan funciones en el presente Reglamento.

En conclusión, la talidomida ejerce su efecto sobre la baja regulación de moléculas de adhesión a través de TNF-α vía de señalización para evitar daño hepático e inhibir el desarrollo de fibrosis hepática.