Journal of Orthopaedic Surgery and Research, 2006; 1: 8-8 (más artículos en esta revista)

Sitio específico de análisis de expresión génica a principios de la artrosis mediante la Pond-Nuki modelo en perros

BioMed Central
Aaron M Stoker (stokera@missouri.edu) [1], James L Cook (cookjl@missouri.edu) [1], Keiichi Kuroki (kkuroki@vet.k-state.edu) [2], Derek Fox B (foxdb @ missouri.edu) [1]
[1] El comparativo Ortopédica Laboratory, University of Missouri, Columbia, 379 E Campus Dr, Columbia, MO, EE.UU.
[2] Kansas State University Laboratorio de Diagnóstico Veterinario, la Universidad Estatal de Kansas, 1800 Denison Avenue, Manhattan, KS, EE.UU.

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Resumen
Fondo

La osteoartritis (OA) es una progresiva y debilitante enfermedad que a menudo se desarrolla a partir de un centro de la lesión y pueden tardar años en manifestarse clínicamente a una completa pérdida conjunta de la estructura y la función. Actualmente, no existe una cura para la OA, pero el diagnóstico temprano y el inicio del tratamiento puede mejorar el pronóstico y la calidad de vida para los individuos afectados. Este estudio fue diseñado para determinar la viabilidad de analizar los cambios en la expresión génica de que el cartílago articular mediante la Pond-Nuki modelo de dos semanas después de ACL-transection en perros, y para caracterizar los cambios observados en este momento.

Métodos

La ACL de cuatro perros fue completamente transected arthroscopically, y la extremidad contralateral fue utilizado como la falta de control que funciona. Después de dos semanas los perros se euthanatized y tejidos cosechados de la meseta tibial y femoral condilar de ambas extremidades. Dos perros fueron utilizados para el análisis histológico y Mankin puntuación. De los otros dos perros de la superficie del cóndilo femoral y meseta tibial se dividieron en cuatro regiones, cada una, y los tejidos fueron cosechadas de cada región para bioquímicos (GAG y HP) y el análisis de la expresión génica. Cambios significativos en la expresión génica se determinaron utilizando REST-XL, y Mann-Whitney test rango suma se utilizó para analizar los datos bioquímicos. Significación se fijó en (p <0,05).

Resultados

Importantes no se observaron diferencias entre ACL-X extremidades y control de resultados Mankin o GAG y HP tejido contenido. Además, los daños a los tejidos no se observó gravemente por la India manchas de tinta. Sin embargo, cambios significativos en la expresión génica se observaron entre ACL-X tejidos y control de cada una de las regiones analizadas, e indican que una única regional perfil de expresión génica para la próxima ACL-X inducida por patología común pueden ser identificados en estudios futuros.

Conclusión

Los datos obtenidos de este estudio se prestan credibilidad a la investigación y enfoque de modelo para la caracterización de la OA, así como la identificación y validación de las futuras modalidades de diagnóstico. Además, los cambios observados en este estudio puede reflejar la mayor brevedad los cambios en AC informó durante el desarrollo de OA, y puede significar cambios patológicos en un estadio de la enfermedad que es potencialmente reversible.

Fondo

La osteoartritis (OA) es una progresiva y debilitante enfermedad que pueden tardar años en manifestarse clínicamente en los individuos afectados [1, 2]. OA a menudo progresa de un centro de pérdida de la integridad del cartílago articular a una completa pérdida conjunta de la estructura y la función. Actualmente, no existe una cura para la OA, y los tratamientos disponibles sólo la lenta progresión de la enfermedad. El diagnóstico precoz con el inicio del tratamiento puede mejorar el pronóstico y la calidad de vida para los individuos afectados [3 - 5]. Evaluación radiográfica y avanzadas modalidades de imágenes como la tomografía computarizada y la resonancia magnetica estándar de imágenes puede ser útil para determinar el alcance y la gravedad de la enfermedad [6 - 9]. Sin embargo, no las técnicas de imagen que actualmente proporcionan datos definitivos para el diagnóstico precoz, un seguimiento preciso de la respuesta o progresión, o pronóstico en la OA. Otras técnicas de pronto, los diagnósticos más sensibles se están desarrollando, incluyendo el suero y líquido sinovial biológicos, biomecánicos pruebas de que el cartílago articular de tejidos, y tomografía de coherencia óptica [10 - 12]. Sin embargo, ninguno dispone de datos definitivos para el diagnóstico de OA antes de patología irreversible. Además, las primeras etapas de la OA están pobremente caracterizados y los métodos para determinar un diagnóstico definitivo de OA potencialmente reversible en las fases de la enfermedad no están disponibles actualmente para los autores de los conocimientos.

Es evidente que durante el desarrollo de OA, el metabolismo del tejido del cartílago cambios de matriz extracelular (ECM) para la degradación de la homeostasis. Además, una vez que el cartílago articular (CA) está irreversiblemente dañado, al igual que en la OA, regenerativa curación no se produce y se altera la función [13, 14]. El ECM de normal que el cartílago articular puede remodelar en respuesta a la carga aplicada, y la matriz de moléculas se degradan y se sustituye durante el proceso fisiológico de ECM volumen de negocios. Por lo tanto, parece que AC tiene cierta capacidad para reparar los daños a las ECM. Lo que no se sabe es en qué momento el grado de daño al ECM está más allá de la capacidad de los mecanismos de reparación tisular. Además, y tal vez lo más importante, los métodos para diagnosticar el momento en que la recuperación ya no es posible que no se conocen.

Dos posibles factores que pueden influir en el "punto de no retorno" en la progresión de la OA se condrocito viabilidad y fenotipo. Durante el desarrollo de OA, a menudo existe un centro de aumento de muerte celular [15 - 18]. Dado que es la teoría de que cada condrocito es responsable del mantenimiento de la ECM que la rodean, y que la matriz de moléculas producidas en una región del tejido tienen una capacidad muy limitada para atravesar el tejido, la pérdida focal de células viables podría ser parcialmente responsable de la incapacidad de los tejidos para reparar daños menores [19]. Además, sobrevivientes condrocitos se someten a un cambio fenotípico que incluye la expresión de moléculas de la matriz inadecuado [20 - 22], disminución de la sensibilidad a la insulina como factor de crecimiento-1 (IGF-1) [23], el aumento de expresión de factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y los receptores de VEGF [24, 25], disminución de expresión de chondromodulin-I (CHM-I) [24], modificado interleuquina (IL) -4 señalización [25], y una alteración de la integrina que dependen de las vías mechanotransduction [26]. Sin embargo, el calendario exacto y completo de naturaleza fenotípica cambios osteoartríticos en los condrocitos y las correspondientes alteraciones en la expresión de genes no se conocen en este momento.

Con el fin de comprender las primeras etapas en la patogénesis de la OA, los estudios deben ser diseñados de forma que examinar los cambios que se producen en CA antes de daños irreversibles. Los modelos animales se han desarrollado que permiten estudio longitudinal de la OA con un conocido momento de la apertura [27 - 33]. Para el presente estudio, los Pond-Nuki modelo de OA [34] fue elegido. Dos semanas después de la cirugía los animales fueron euthanatized AC y de regiones definidas del proceso condilar femoral y tibial de ambas mesetas los operados y no operados por control ahoga fue analizada para histológicos, bioquímicos, moleculares y celulares de medidas y cambios de matriz.

Este estudio fue diseñado para determinar la viabilidad de analizar los cambios en la expresión génica de que el cartílago articular dos semanas después de ACL-transection. Los objetivos específicos de este estudio fueron determinar si los cambios pertinentes en la expresión de genes se pueden observar dos semanas después de ACL transection en perros que se correlaciona con la patología futuro según lo indicado por los datos históricos en este modelo; determinar si el cartílago articular de diferentes regiones de las superficies articulares han únicos cambios relativos en los niveles de expresión génica en respuesta a ACL transection, y caracterizar los cambios en la expresión génica en este momento. Es la hipótesis de que un aumento significativo en la expresión génica de enzimas degradative (MMPs y ADAMTS), así como indicadores inflamatorios (INOS y la COX-2) se observó en las regiones del cartílago articular que históricamente se someten en cifras brutas y los cambios histológicos después de ACL-X , Mientras que la expresión de antidegradative (TIMPs) y moléculas de la matriz (Col 1, Col 2, Aggrecan) sería sin cambios oa la baja en estas mismas regiones. Un posible patrón regional de la expresión génica diferencial se observó en este estudio indicativo de una mayor inflamación, degradative, y la reparación y remodelación de respuesta con el tejido del cartílago articular. Estos datos se utilizarán en los futuros estudios encaminados a caracterizar mejor los cambios que se producen en el conjunto durante el desarrollo de OA y de estudios destinados a la elaboración y evaluación de diagnóstico, prevención y estrategias terapéuticas para la OA.

Métodos
Pond-Nuki modelo

Todos los procedimientos fueron aprobados por la Universidad de Missouri Cuidado de Animales y el empleo. Adultos (2-4 años de edad), perro de mezcla (peso promedio = 27,6 kg, rango: 24.3-33.1 kg)) perros de investigación (n = 4) fueron premedicados, anestesiados, y asépticos preparados para la cirugía de un asignados aleatoriamente sofocar . Craniolateral de rutina y craniomedial arthroscope instrumento y se establecieron portales y la del ligamento cruzado anterior estaba completamente transected arthroscopically. Complete transection de la ACL fue confirmado por la observación visual y palpación del tibial anterior translocación. Analgésicos (morfina o la aspirina) se les administró a los perros en el momento de la extubación y, a continuación, según sea necesario para controlar los signos de dolor (aspirina se suspendió 48 horas post-op). Los perros fueron recuperados y devueltos a sus perreras. Los perros se les permitió utilizar la extremidad afectada en un 10 × 10 pies jaula. Además, los perros se caminaba sobre una correa dos veces al día durante 10 minutos a un ritmo que garantiza el uso de las cuatro extremidades.

Dos semanas después de la cirugía, los perros fueron euthanatized por vía intravenosa una sobredosis de barbitúricos. Después de la eutanasia, tanto ahoga de cada perro fueron cuidadosamente examinadas y disarticulated. El menisci fueron examinados y toda patología meniscal ha sido registrada. La meseta tibial y femoral condilar fueron fotografiados. Todas las superficies articulares fueron pintados con tinta china, lavado después de 60 segundos con el agua del grifo, y fotografió. Si la tinción se observó, a continuación, sin impresionar película radiográfica fue colocado sobre cada cóndilo y la meseta, y corte a la altura de la superficie del cóndilo. Las zonas de la India manchas de tinta se describieron utilizando un marcador permanente. Trazados de la India manchados de tinta tibial y femoral condilar fueron evaluados sin el conocimiento del número de perros o grupo de tratamiento. Los trazados fueron escaneados utilizando un programa informático y el porcentaje de la superficie total de la tibia y el fémur condilar calcula que tiñen y se registrará como% de área de daño del cartílago (ACD%). La ACD% fue determinado por el tibial y femoral condilar, por separado y en conjunto, para cada perro. Tejido fue cosechada de los afectados y unoperated extremidad contralateral como se describe a continuación.

Cosecha de tejidos

Espesor total del cartílago articular se obtuvieron muestras de los craneal cóndilo femoral medial (CrMFC), caudal cóndilo femoral medial (CaMFC), craneal cóndilo lateral del fémur (CrLFC), caudal cóndilo lateral del fémur (CaLFC), craneal meseta tibial medial (CrMTP), caudal medial meseta tibial (CaMTP), craneal meseta tibial lateral (CrLTP), y el caudal meseta tibial lateral (CaLTP) de afectados y contralateral de control de parte de dos perros (Figura 1]. Una muestra por cada región por animal fue evaluado en relación a la expresión de genes nivel y la composición bioquímica de la matriz. Cartílago muestras recogidas para el análisis de la expresión génica se snap-congelado en nitrógeno líquido y se almacenan a -80 ° C. Cartílago muestras recogidas para los ensayos bioquímicos se pesaron para determinar el peso húmedo y se almacena a -20 ° C. Los afectados y contralateral meseta tibial y femoral condilar de los otros dos perros han sido recolectados, y de serie de secciones sagital se hicieron desde medial a lateral para incluir el cartílago articular y subchondral hueso. Las secciones fueron fijadas en 10% formalina tamponada y descalcificadas de emersion en Surgipath Decalsifier II a temperatura ambiente durante 24 horas. Los tejidos fijados en parafina fueron incorporados, y 5 micras secciones fueron cortadas y teñidas con hematoxilina y eosina (H & E) y azul de toluidina para la evaluación subjetiva histológico.

Papaína digestión de los tejidos

El cartílago articular muestras fueron digeridos la noche a la mañana a 65 ° C utilizando 500 μ l de buffer de digestión papaína (20 mM tampón fosfato de sodio, 1 mM EDTA, 300 μ g / ml (14 U / mg) de papaína, y 2 mM TDT) y, a continuación, almacenados a -20 ° C hasta el momento de analizar más a fondo.

Glucosaminoglucanos (GAG) ensayo

Total GAG sulfatados contenido se determinó a través de la dimethylmethylene azul (DMMB) ensayo [35]. El GAG contenido de cada una de las muestras se determinó mediante la adición de 245 μ l de DMMB a 5 μ l de cada muestra papaína digeridos, y se determinó la absorbancia a 530 nm. Conocido concentraciones de chondroitin sulfato (2,5 μ g de .3125 μ g) (Sigma, St Louis, MO) fueron utilizados para crear una curva estándar. Los resultados fueron normalizados para el peso húmedo de cada tejido y como informó μ g / mg de peso húmedo del tejido.

Hidroxiprolina (HP) ensayo

Total colágeno contenido se determinó mediante un ensayo colorimétrico para medir el contenido de HP [36]. El ensayo fue modificado a un 96-así formato. Un 50 μ l de muestra de la papaína digiere los tejidos se mezclan con un volumen igual de hidróxido de sodio 4N en un 1,2 ml de profundidad y 96-así placa de polipropileno. La placa fue cubierto con alfombra de sellado de silicona, una cubierta de polipropileno se encuentre por encima de la estera, y las placas se apilan. Las placas fueron selladas por compresión con una C-Clamp, y en autoclave a 120 ° C durante 20 min para hidrolizar la muestra. Cloramina T reactivo (450 μ l) se mezclan con cada una de las muestras, y se incubarán durante 25 minutos a 25 ° C. Ehrlich aldehído reactivo (450 μ l) se mezclan con cada muestra y se incubarán durante 20 minutos a 65 ° C para desarrollar el cromóforo. Conocido concentraciones de CV (Sigma, St Louis, MO) se utilizaron para construir una curva estándar (20 μ g de 2 μ g). Una parte (100 μ l) de cada muestra fue trasladado a un nuevo 0,2 ml placa de 96 pocillos, y leer absorbancia a 550 nm. Los valores obtenidos fueron normalizados para el peso húmedo del cartílago explante y como informó mg / mg de peso húmedo del tejido.

La extracción de RNA

Total RNA fue extraído utilizando el método Trispin [37]. Explantes fueron interrumpidas en nitrógeno líquido el tejido utilizando una trituradora, homogeneizado en 1 ml de TRIzol (Invitrogen, Carlsbad, CA) con un mini-beadbeater (Biospec Productos, Bartlesville, OK) y 2 mm bolas de circonia (Biospec Productos, Bartlesville, OK) . El homogenado fue trasladado a un nuevo tubo, material e insoluble fue pildoradas por centrifugación. El sobrenadante fue transferido a un nuevo tubo y Cloroformo (200 μ l) se añadió a cada muestra. El orgánica y acuosa fases fueron separadas por centrifugación de alta velocidad. La fase acuosa superior se transfirió a un nuevo tubo y el etanol (ETOH) se añadió a la fase acuosa a una concentración final de 35%, mezclado por agitación, y se aprueban a través de un RNeasy mini-columna (Qiagen Valencia, CA) de obligar a la RNA. La columna fue lavada con tampón de lavado; contaminación de ADN fue digerido en la columna con DNasa 1 (Qiagen Valencia, CA), y la columna fue lavada tres veces más. ARN se eluye de la columna usando 30 μ l de RNasa libre de agua. El rendimiento de ARN total extraído fue determinada mediante la medición de absorbancia a 260 nm, y la pureza se evaluó a través de la relación de lecturas de absorbancia a 260 nm a 280 nm. El promedio de rendimiento fue de RNA de aproximadamente 1 μ g de ARN total por muestra.

Real Time RT-PCR
Análisis histológico

Secciones histológicas de todos los sitios de ambos ACL-X control y se ahoga teñidas con hematoxilina y eosina (H & E) y azul de toluidina. Las secciones fueron evaluados subjetivamente por un investigador ciego a grupo de muestra o el número. Evaluación subjetiva incluyó pruebas histológicas de la viabilidad celular, densidad celular, y la morfología celular; superficie del cartílago articular la arquitectura y las características manchas proteoglicanos.

El análisis estadístico

Los niveles relativos de la expresión génica se determinaron utilizando Q-Gene [38] y la limpieza gen GAPDH como patrón interno. Para evaluar las diferencias en la expresión génica, la no-paramétricos expresión relativa herramienta estadística (REST-XL) [39, 40] se utilizó. Las diferencias en la expresión génica se consideró significativo cuando p <0,05 y la diferencia de expresión entre ACL-X y extremidades contralateral fue> 2X para los animales. El software estadístico SigmaStat 2.03 (Jandel la Ciencia, San Rafael, CA) fue usado para comparar los datos de ensayos bioquímicos. Los datos de cada una de las muestras se combinaron grupo y una de Mann-Whitney Rank Sum prueba se realizó para determinar diferencias significativas entre ACL-X Control y tejidos para análisis bioquímicos. Significación se fijó ap <0,05.

Resultados
Gross y análisis histológico

AC daños no estuvo presente en la femoral o tibial condilar mesetas en ninguna de las ACL-X ahoga o el control sobre la base de manchas de tinta India (datos no presentados). No hay pruebas histológicas compatibles con degenerativas o cambios osteoartríticos se observó en toda la sección sobre la base de evaluación subjetiva (datos no presentados).

Análisis bioquímico

No se observaron diferencias significativas en los niveles del total de glicosaminoglicanos (p = 0,21, potencia = 0,16) o en hidroxiprolina (p = 0,21, potencia = 0,16) se observaron entre ACL-X y el control ahoga en todas las regiones estudiadas (Figuras 2 y 3]. Sin embargo los poderes de los análisis fueron inferiores a 0,8, y, por tanto, deben interpretarse con cautela.

Análisis de la expresión génica

Diferencias significativas (p <0,05) en la expresión de genes entre ACL-X ahoga y control se observaron en todas las regiones analizadas (Cuadro 2 y 3, Figura 4], y cada región exhibió un único patrón de expresión génica. El CrMFC, CaMFC, CaMTP, CaLTP, y CrLTP regiones exhiben el mayor número de genes expresados diferencialmente al comparar ACL-X para controlar los tejidos. El CrMTP exhibido el menor número de genes que muestran expresión diferencial, seguido por el CrLFC y CaLFC.

La única de genes analizados han encontrado a una disminución significativa (p <0.05) disminución de expresión en ACL-X AC se TIMP-2 y esto sólo se observó en el CaLTP y CaMTP regiones. MMP-13 la expresión génica fue significativamente (p <0,05) más altos para los ACL-X cartílago en todas las regiones, excepto la CaLFC, y tuvo el mayor incremento de veces la expresión génica relativa. Regional aumentos en TIMP-1, COX-2 y INOS se detectaron en ACL-X cartílago, así como la degradative enzimas ADAMTS5 y MMP-3. Aggrecan expresión se incrementó en los CaLFC y la CrMFC, en tanto que expresión de colágeno 2 se incrementó en los CaLTP, CaMTP, y CrLTP de ACL-X ahoga. Col 1 la expresión génica se upregulated en las regiones de la femoral condilar y las mesetas tibiales en ACL-X ahoga. La expresión de genes de MMP-1 y ADAMTS 4 fueron muy variables y no significativamente diferente entre ACL-X control y tejidos (datos no presentados).

Discusión

Los resultados presentados en este trabajo indican que los cambios en la expresión génica condrocito puede ser detectada en perros de dos semanas después de completar transection de la ACL. Para los autores el conocimiento, esta es la primera vez notificado el punto de sitio-específico de análisis de expresión génica en perros utilizando este modelo. Anterior condrocito análisis de la expresión génica mediante la ACL-X transection modelo dentro de un marco de tiempo similar se realizó en conejos [41, 42]. El Pond-Nuki modelo en perros parece proporcionar un modelo más apropiado para la OA en los seres humanos con respecto a la participación del tejido, la naturaleza de la patología, diagnóstico y conclusiones, así como una extensa base de datos histórica para la comparación [34, 43 - 46]. Por lo tanto, optamos por usar este modelo en perros para el análisis molecular de determinadas regiones del cartílago articular durante las primeras etapas de la OA, antes de que en cifras brutas o pruebas histológicas de la patología en un intento de producir la más completa, translacional, y clínicamente relevante de datos posible .

En el presente estudio, AC de la meseta tibial (TP) y condilar femoral (CF) no mostró evidencia de osteoartritis basa en cifras brutas, histológicos, bioquímicos y evaluaciones. La lámina splendens no fue interrumpido en cualquier lugar sobre la base de la falta de manchas de tinta India, lo que indica que AC integridad de la superficie se mantuvo durante dos semanas en los perros en este estudio. Histológicamente, todas las AC subjetivamente parece haber morfología normal de las células, la densidad y la distribución y la arquitectura de ECM y la composición. Además, no se observaron diferencias significativas en proteoglicanos o entre los niveles de colágeno ACL-X ahoga y control, tal como se determina por el total de GAG y HP contenido. Al examinar conjuntamente, estos datos indican que la AC en la ACL-X todavía se ahoga "normal" de medidas fenotípicas 2 semanas después de ACL-X transection. La falta persistente de violaciones manifiestas, histológicos, bioquímicos o cambios en CA apoya el trabajo previo que indica que los cambios observables en CA no se producen antes de 4 semanas después de ACL-X en perros [47, 48].

Los cambios regionales en la expresión de genes observados en este estudio sugieren que focal bioquímicos, histológicos, y las graves cambios en áreas específicas de AC visto constantemente en OA comenzar con alteraciones en la expresión génica. El FC medial había un mayor número de genes con cambios significativos en los niveles de expresión relativa en comparación con el lateral FC después de ACL-X. Estos datos indican que en este modelo el FC medial es más afectados por los insultos al conjunto inducida por transection de la ACL, que está de acuerdo con estudios anteriores en perros [49] y otras especies [42]. La expresión génica diferencial datos de la TP indican que tibial cartílago es más difusa que afecta el cartílago articular del fémur después de ACL transection. El CrLTP, la CaLTP, y la CaMTP fueron más afectados por transection de la ACL con respecto a los cambios en la expresión génica en este estudio. Estos datos también están de acuerdo con los estudios anteriores utilizando el Pond-Nuki modelo informaron de que la formación de lesión en ambos laterales y medial aspectos de cartílago tibial [42, 49]. Continuación de la investigación es necesaria para determinar si el diferencial regional perfil de expresión génica observada en este estudio se producen constantemente, y si el potencial regional de la expresión génica perfil observado en este momento el punto puede predecir con precisión los cambios fenotípicos que constantemente se producen en otro momento durante la progresión de la OA . Además, dos semanas después de artroscópica ACL-X cirugía procesos inflamatorios asociados con la curación cabría esperar. El incremento en la expresión de la COX-2 visto en muchas regiones del AC puede indicar que la inflamación de la cirugía está afectando a los tejidos y, por tanto, probable que afectan a la expresión de genes cambios observados en este estudio. Las funciones de la inflamación inducida por la cirugía y post operatorio de curación en los cambios regionales en condrocito la expresión génica, debe investigarse más a fondo. El curso estudios en nuestro laboratorio incluyen simulacro operado perros, así como del ligamento cruzado posterior transected perros para distinguir los efectos de estas variables sobre la naturaleza, gravedad y progresión de la patología común.

El patrón general de la expresión génica observada en la ACL-X AC indica un posible cambio en el metabolismo celular en consonancia con principios de la artrosis. Los aumentos de la COX-2 y INOS en las regiones más afectadas por la inestabilidad conjuntas eran compatibles con señalización de eventos que normalmente ocurren en las articulaciones OA [50, 51]. Los concurrentes y, a menudo, co-localizados aumentos en la expresión génica de COL 2, aggrecan, MMP 13, y ADAMTS 5 visto en este estudio estrechamente relacionadas con el elevado sintéticas y degradative informó de los cambios que se produzcan en el nivel de proteínas a principios de OA [41, 52 -- 54].

Curiosamente, tres genes, MMP 13, la COX-2, COL y 1, se upregulated en todas las regiones de ACL-X cartílago que había relativamente alto número de genes expresados diferencialmente. Por otra parte, el presente estudio proporciona datos sobre el potencial jerarquía de expresión de estos tres genes. El CrLFC mostró upregulation de ambas MMP 13 y COX-2, mientras que el CaMTP mostró upregulation de MMP 13. Esto podría indicar que durante el desarrollo temprano de la OA, MMP 13 la expresión de genes se ve afectada en primer lugar, seguido por la COX-2 y, a continuación, COL 1. Sobre la base de esta upregulation coherente de estos 3 genes importantes en el metabolismo del cartílago, parece plausible que en conjunto estos genes pueden ser útiles marcadores para el diagnóstico y el seguimiento de la progresión de la enfermedad en la OA. Si esta posibilidad pueda ser validada, la evaluación de estos marcadores puede resultar una valiosa herramienta como una prueba de diagnóstico precoz para la OA.

Conclusión

Aunque el número de animales analizados en este estudio fue examinado por los autores a ser demasiado pequeño (n = 2 para todas las cuotas) para hacer conclusiones definitivas con respecto a pathophysisology de principios de OA o relevancia clínica de estos datos, las conclusiones de este estudio se prestan credibilidad a la investigación enfoque y el uso de este modelo para la caracterización de la OA, así como la identificación y validación de las futuras modalidades de diagnóstico. Además, los cambios observados en este estudio puede reflejar la mayor brevedad los cambios en AC informó durante el desarrollo de OA, y puede reflejar los cambios patológicos en un estadio de la enfermedad que es potencialmente reversible. En la investigación de determinadas regiones que tienen el mayor número de genes expresados diferencialmente, es posible que los posibles marcadores de diagnóstico se identificó que pueden utilizarse para diagnosticar la OA con suficiente antelación para evitar la progresión de la enfermedad, o al menos minimizar forma óptima los signos clínicos y síntomas de la OA. Además, los blancos potenciales para el tratamiento podría ser identificados. Las investigaciones en curso en nuestro laboratorio con este enfoque experimental se centra en identificar y desarrollar métodos de diagnóstico y marcadores, así como las estrategias para la prevención y el tratamiento de la OA en las primeras etapas de la enfermedad.

Conflicto de intereses

Los autores declaran que no tienen intereses en conflicto.

Autores de las contribuciones

AS: el diseño del estudio, muestra la cosecha, el procesamiento de la muestra, adquisición de datos, análisis e interpretación de datos, la escritura de manuscrito. KK: el cuidado de los animales, recolección de muestras, adquisición de datos, edición del manuscrito. DF: el cuidado de los animales, los procedimientos quirúrgicos, la recolección de muestras, la edición del manuscrito. JC: el cuidado de los animales, los procedimientos quirúrgicos, la recolección de muestras, análisis e interpretación de datos, la escritura de manuscrito.