Journal of Orthopaedic Surgery and Research, 2006; 1: 15-15 (más artículos en esta revista)

Expresión diferencial de colágeno tipo X en un mecánicamente activo 3-D condrocito sistema de la cultura: un estudio cuantitativo

BioMed Central
Xu Yang (xu_yang@brown.edu) [1], Peter S Vezeridis (peter_vezeridis@brown.edu) [1], Brian Nicholas (bwnicholas@gmail.com) [1], Joseph Crisco J (Joseph_Crisco@Brown.edu) [1], Douglas C Moore (Douglas_Moore@Brown.edu) [1], Chen Qian (Qian_Chen@Brown.edu) [1]
[1] Laboratorios de Investigación Ortopédica, Departamento de Ortopedia, Brown Medical School / Rhode Island Hospital, Providence, RI 02903, EE.UU.

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Resumen
Objetivo

Mecánica de carga de cartílago influencias condrocito el metabolismo y la expresión génica. El gen que codifica el colágeno tipo X se expresa específicamente por hipertrófica condrocitos y hasta regulado en la artrosis. En este estudio se prueba la hipótesis de que la mecánica microambiente resultante de mayores niveles de tensión local en un período de tres dimensiones de cultivo celular construir daría lugar a un aumento en la expresión de colágeno tipo X mRNA de condrocitos en esas zonas.

Métodos

Hipertrófica condrocitos fueron aislados a partir de embriones de pollo y semillas Sterna rectangular en Gelfoam esponjas. La siembra esponjas fueron sometidos a distintos niveles de tensión uniaxial cíclico cepas a 1 Hz con el ordenador controlado por Bio-Reducir el sistema. Cuele la distribución a través de la esponja fue cuantificado por análisis digital de imágenes. Después de carga mecánica, esponjas y se cortaron el final y las regiones centro fueron separados de acuerdo para construir cepa distribución. Total RNA fue extraído a partir de las células cosechadas de estas regiones, y en tiempo real cuantitativa RT-PCR se realizó para cuantificar los niveles de mRNA para colágeno tipo X y un mantenimiento de la vivienda gen 18S del RNA.

Resultados

Condrocitos distribuidos en alto (9%) cepa áreas locales, más de dos veces el colágeno tipo X mRNA en comparación con los no menores de condiciones de carga, mientras que los condrocitos situados en baja (2,5%) cepa ámbitos local no había diferencia apreciable en el colágeno tipo X mRNA producción en comparación con los no-cargado muestras. El aumento de cepas locales por encima de 2,5%, ya sea en el centro o al final regiones de la esponja, se tradujo en un aumento de expresión de mRNA X Col de condrocitos en esa región.

Conclusión

Estos hallazgos sugieren que el umbral de sensibilidad condrocito a la inducción de colágeno tipo X mRNA producción es superior al 2,5% cepa local, y que el aumento de cepas locales por encima del umbral se traduce en un aumento de X Col expresión mRNA. Tales análisis cuantitativo tiene importantes implicaciones para nuestra comprensión de mechanosensitivity de cartílago y la regulación mecánica de condrocito la expresión génica.

Fondo

Cartílago en articulaciones humanas es sometido a diversas cargas que regulan el metabolismo de condrocito y la matriz extracelular del cartílago en proteínas. La tensión mecánica en el cartílago en vivo juega un papel importante en la regulación de condrocito proliferación, diferenciación y la hipertrofia. Una de las maneras en que este reglamento se produce es a través de complejos condrocito control de la expresión génica. Mecánica de carga de cartílago es la sensación de condrocitos embebidos dentro de la matriz extracelular. Mecánica señales mechanotransduction luego activar las vías para modificar la expresión génica [1 - 3]. Estos condrocito mechanoregulatory vías son la hipótesis de involucrar a varios niveles de señalización, incluida la transducción a través de canales de iones [2], la activación de factores de transcripción [4], y alteración de los microtúbulos en el citoesqueleto [5].

Anterior estudio utilizando el Bio-Reducir el sistema de la cultura ha demostrado que los condrocitos sometido a tensiones de tracción mantener su fenotipo condrocito [2]. Estas células son estimuladas a proliferar primero y luego de madurar y de la hipertrofia cíclica de tracción uniaxial tensión inducida por el dispositivo [2]. Hemos identificado el colágeno tipo X gen como uno de los genes en mechanosensitive cartílago [2]. Colágeno tipo X es un marcador para hipertrófica del cartílago desde su mRNA está muy regulado hasta hipertrófica en condrocitos. Curiosamente, el colágeno tipo X ARNm es inducida en los condrocitos articulares durante osteoartríticos patogénesis [6 - 9]. No está claro cómo el colágeno tipo X mRNA expresión se estimula sólo a una parte específica del cartílago, por ejemplo, la región hipertrófica y / o la lesión osteoartríticos. Elucidación de la expresión diferencial de colágeno tipo X regulado por medios mecánicos de carga proporcionará una comprensión más clara de la mechanoregulatory las vías normales que participan en los cartílagos y los procesos patógenos.

Nuestro estudio previo ha demostrado que el colágeno tipo X ARNm es significativamente hasta regulada en respuesta a un 5% general deformación en la matriz 1 Hz en 3-D condrocito cultura sistema después de 48 horas de carga cíclica [2]. La cepa específica de carga y la frecuencia fueron escogidos porque estimulan la proliferación y diferenciación de la placa de crecimiento condrocitos [2]. En el presente estudio, probar la hipótesis de que diferentes cepas locales en diferentes regiones del 3D andamiaje resultado en los distintos niveles de colágeno tipo X expresión mRNA de condrocitos en esas zonas.

Métodos
Condrocito aislamiento

Cultivos primarios de condrocitos hipertrófica principios fueron establecidos de 17 días de edad, de embriones de pollo Sterna como hemos descrito anteriormente [10, 11]. Condrocitos de la parte cefálica de pollos de Sterna se utilizaron en el examen de colágeno tipo X los niveles de mRNA. En pocas palabras, trozos de cartílago esternal se disocian enzimáticamente utilizando 0,1% de tripsina (Sigma, St Louis, MO, EE.UU.), la colagenasa 0,3% (Worthington, Freehold, NJ), y el 0,1% de tipo I testicular hialuronidasa (Sigma). Después de una incubación de 30 min a 37 º C y el 5% de CO 2, los medios de comunicación fue sustituido y la incubación se siguió a 37 ° C por un período adicional de 1 h. Condrocitos fueron centrifugadas y suspendida a las 5 × 10 6 células / ml en Ham's F-12 medianas (Life Technologies, Grand Island, NY, EE.UU.), que contiene 10% de suero fetal bovino (HyClone, Logan, UT, EE.UU.). Un centenar de μ l de suspensión celular fue agregado en cada una esponja.

3D condrocito cultura

Gelfoam esponjas (Dupont, Delaware) fueron cortadas en pedazos rectangulares (2 cm x 2 cm), montados en cámaras de cultivo celular, sin semillas y con condrocitos, tal como se describe anteriormente [2]. El Bio-Reducir el dispositivo (ICCT Technologies, Markham, ON, Canadá) se extendía el condrocito de semilla esponjas en general de diferentes cepas (la medida de la deformación de toda la esponja) a 1 Hz con un ciclo de trabajo del 25%. Control de condrocito de semilla esponjas se mantuvieron en las mismas condiciones de prueba con la salvedad de que las esponjas eran cargados no mecánicamente. Después de 48 h de la cultura, las esponjas se lavaron una vez en HBSS, y 2 mm de longitud fija y los extremos libres de cada esponja (alta tensión) fueron cortadas y separadas de la zona centro (baja tensión) (ver Fig. 1 y 3] . 2 mm de longitud se examinaron desde la caracterización mecánica de la esponja Gelfoam demostrado que la cepa local se redujo a un nivel constante de la mitad global cepa de 2 mm de cada extremo de la esponja. Condrocitos fueron cosechadas por la digestión de muestras de esponja de colágeno con el 0,03% en la colagenasa HBSS durante 20 min a 37 ° C. Las células se recogieron por centrifugación a 1000 rpm durante 7 min y luego resuspendido en HBSS y contó con un hemacytometer (American Optical Corporation, Buffalo, NY, EE.UU.). Cada uno de los cuatro grupos (non-stretch/stretch, centro / extremos) que figuran n = 5 muestras.

Análisis de colágeno tipo X niveles de mRNA

Total RNA fue extraído a partir de células con RNeasy mini kits (Qiagen, Valencia, CA, EE.UU.). La cuantificación del tipo X colágeno mRNA se realizó por tiempo real para la cuantificación de PCR transcriptasa inversa (RT-PCR). 1 μ g RNA total se utilizó para cada reacción de la transcriptasa inversa en una reacción de una solución tampón que contiene 1 μ l oligo (dT) y 1 μ l 10 mM dNTP Mix (Invitrogen, Carlsbad, CA, EE.UU.). PCR cuantitativa en tiempo real la amplificación se realizó mediante SYBR Green I (Finnzymes, Keilaranta, Finlandia) con el ADN del motor Opticon 2 continua sistema de detección de fluorescencia (MJ Research, Waltham, MA, EE.UU.). Primers utilizados en la amplificación de colágeno tipo X ARNm se muestran en la Tabla 1. Tipo X colágeno ARNm se normalizaron los niveles de limpieza gen 18S del RNA. Puesto que el nivel de 18S del RNA es constante en todas las células, el valor normalizado refleja el nivel relativo de colágeno tipo X mRNA en cada celda, independientemente del número de células. Cálculo del colágeno tipo X mRNA valores se llevó a cabo tal como está descrita anteriormente [2]. El 18S del RNA se amplificó al mismo tiempo y se utiliza como un control interno. El ciclo umbral (Ct) para los valores y 18S del RNA de muestras que fueron medidos y calculados por los programas de ordenador (PE ABI). Transcripción niveles relativos se calcularon como x = 2 - ΔΔ Ct, en la que ΔΔ Ct = Δ E - Δ C, y Δ E = Ct exp-18 Ct; Δ C = Ct CTL-18 Ct.

Western blot

Western blot se realizó con células recogidas lisados de cultivo celular. Lisados de células fueron extraídas con 4 M urea, 50 mM Tris a pH 7,5. Para no reducir la condición, recogida de muestras se mezclaron con la norma 2 × SDS-gel tampón de carga. Para reducir las condiciones, el tampón de carga contiene un 5% b-mercaptoetanol y 0,05 M de TDT. Las muestras fueron hervidas durante 10 minutos antes de que cargaron en un 10% SDS-PAGE geles. Después de la electroforesis, las proteínas se transfirieron a Immobilon-PVDF membrana (Millipore Corp, Bedford, MA, EE.UU.) en 25 mM Tris, 192 mM glicina, y el 15% de metanol. Las membranas fueron bloqueadas en el 2% de albúmina sérica bovina fracción V (Sigma Co, St Louis, MO, EE.UU.) en PBS durante 30 minutos y luego probaron con anticuerpos. Los anticuerpos primarios utilizados fueron un anticuerpo policlonal contra Col X [10], y un anticuerpo monoclonal contra la β-actina. Conjugado con peroxidasa de rábano cabra anti-ratón o de cabra anti-conejo IgG (H + L) (Bio-Rad Laboratories, Melville, NY, EE.UU.), diluido 1:3000, se utilizó como anticuerpo secundario. Visualización de proteínas inmunorreactivas se logró mediante la ECL Western Blot detección reactivos (Amersham Corp, Heights, IL, EE.UU.) y exponer la membrana a Kodak X-Omat AR película. Pesos moleculares de las proteínas inmunorreactivas se determinaron en contra de dos conjuntos diferentes de la proteína marcadora escaleras.

La cuantificación de la tensión de distribución a través de la esponja

Cuele la distribución se determinó para Gelfoam esponjas de colágeno (n = 4) cargado en la cultura plato de la Bio-Reducir el sistema electromagnético (ICCT Technologies, Markham, ON, Canada). Gelfoam esponja (Upjohn, Kalamazoo, MI, EE.UU.) fue cortado en pedazos rectangulares (20 mm × 20 mm × 6 mm). A-clip de montaje de plástico con una barra de metal incrustada se atribuye a uno de los extremos de la esponja y el otro extremo de la esponja se fijó a la cultura plato con una pinza de plástico dejando a aproximadamente a 12 mm de longitud expuestos esponja. Usando un buen marcador de punta de permanente, a 6 de 7 malla de puntos que se incluyó en cada esponja para proporcionar marcador de puntos para la medición de tensión de distribución de esponja (Fig. 1]. La esponja se pre-empapado con Hanks' Balanced Salt Solution (HBSS, Gibco, Grand Island, NY) la noche a la mañana a 37 ° C y el 5% de CO 2.

Esponjas se deforme utilizando configuración de energía en el Bio-Reducir el sistema del 20%, 30%, 40%, 50% y 60%, y el 70%. Las imágenes digitales de cada esponja fueron capturados en la sin estirar y estirado al máximo en cada estado ajuste de la potencia en 16-bit escala de grises a 16 × ampliación Polaroid utilizando un microscopio digital DMC2 cámara (Polaroid, Wayland, MA, EE.UU.), conectado a una Leica M26 estereomicroscopio (Leica, Bannockburn, IL, EE.UU.). Scion Image software (Scion, Frederick, MD, EE.UU.) se utilizó para analizar la esponja imágenes. El uso de este software, cada imagen se thresholded para asignar y x-y-valores para coordinar el centroide de cada marcador. El x-y-y coordinar los valores de puntos a lo largo de la abrazadera de borde y borde clip También se registraron. X-La dirección se definió en la dirección de la principal resistencia a la tracción y la carga y de dirección fue en la dirección perpendicular. La cepa local se calculó como un cambio de longitud entre estirada y sin estirar las posiciones como un porcentaje del estado sin estirar. Cuele valores se calcularon para todas las combinaciones de puntos adyacentes marcador. La cepa en la dirección transversal (y dirección) fue cero en ambos extremos debido a que la esponja se fija en cada extremo con un rango de valores indetectables en la parte inferior de energía a valores muy pequeños a máxima potencia. Así, todos los valores de tensión aquí, en los que están en la dirección-x. Cuele valores se presentan con respecto a su posición inicial sin estirar en la esponja y son los promedios de los valores de tensión para que la columna concreto (y dirección) de marcador de puntos.

El análisis estadístico

Dos de cola-t-pruebas se utilizaron para comparar el colágeno tipo X los niveles de mRNA mecánicamente cargado condrocitos en la Gelfoam esponja a los de la región correspondiente, en ausencia de condiciones de carga. Col X niveles de mRNA de condrocitos en el centro o al final regiones de la esponja en respuesta a las diferentes cepas fueron analizados por ANOVA de un factor con Dunnett para comparaciones múltiples post-hoc test. Para estos cálculos, p <0,05 se consideró estadísticamente significativa.

Resultados
Tipo X colágeno expresión mRNA en respuesta a un 5% general cepa

Hemos demostrado anteriormente que los condrocitos hipertrófica aumentado significativamente su X Col mRNA producción en respuesta a un 5% general cepa siguientes 48 h cíclica uniaxial mecánico de carga [2]. Sin embargo, encontramos que el colágeno tipo X los niveles de mRNA no estaban reguladas por los condrocitos en la región centro de esponjas, que se define como la región central de 2 mm de cada extremo, en respuesta a la mecánica de carga cíclica (Figura 2]. En contraste, los condrocitos hipertrófica de los ámbitos de 2 mm en los extremos de la esponja (fin región), más de 2 veces de colágeno tipo X mRNA en comparación con los de la región fin de no cargar esponja (Figura 2A]. Condrocitos de ambos extremos de la esponja producido significativamente más altos niveles de mRNA Col X bajo condiciones de carga que las regiones correspondientes, en ausencia de condiciones de carga (Figura 2B]. Por lo tanto, el aumento de ARNm Col X nivel en respuesta a un 5% general cepa se atribuyó a los condrocitos que residen en las regiones final, pero no los de la región central de la esponja.

Cuele la distribución a través de la esponja de colágeno

La cuantificación de la superficie de cepas de una esponja Gelfoam indicó que la propiedad mecánica era diferente en la región de final frente a la región central de colágeno andamio. Resistencia a la tracción de carga de la esponja de la Bio-Reducir el sistema dio lugar a una no muy uniforme cepa de distribución - la cepa en la final región era mucho más alto que la tensión en la región central (Figura 3]. Como resultado, el 5% global tensión causada 2,5% cepa local en la región central y el 9% cepa local en la final región de una esponja. Sin embargo, la tensión en la región central de la esponja es casi constante. Esta constante tensión en la región central fue constantemente 1 / 2 de la cepa valores a través de una amplia gama de valores de tensión general de la prueba. En concreto, para los seis grupos de la cantidad total de valores de tensión a prueba, la relación de centrales cepa a cepa fue general 0,497 ± 0,067 (Figura 4].

X colágeno tipo de expresión en respuesta a diferentes cepas general

Para determinar si el colágeno tipo X mRNA producción se vio afectada por la cepa de una esponja, Col X cuantificado los niveles de mRNA de ambas centrales y poner fin a las regiones de las esponjas sometido a diferentes cepas incluidas global 0% (sin carga), un 2,5%, 5%, y el 7,5% (Figura 5A]. Para la región central, sólo el ARNm X Col valor del 7,5% cepa grupo global fue significativamente (p = 0,02) más elevada que la de la región central de no cargar esponja (0% cepa grupo). Esto ponía de manifiesto la tensión local en el 3,75% (la mitad de la cepa) es necesaria para la regulación de hasta X mRNA Col. Para el final regiones, las muestras de 5% y el 7,5% en general cepa grupos, pero no que el 2,5% de tensión general del grupo, tuvieron significativamente (p <0,01) superior Col X los niveles de mRNA que a partir del final de la región no muestra cargada . Por lo tanto, Col X mRNA producción se incrementó con el aumento de cepas locales con independencia de la región de esponja. También cuantificados Col X la producción de proteínas de condrocitos en el centro y poner fin a las regiones de la esponja sometido a diferentes cepas general (Figura 5B]. Western blot Col indicó que los niveles de proteína X son regulados hasta en las muestras de mayor tensión regiones (5% End, Centro 7,5%, 7,5% y Fin). De este modo cada vez más global de las cepas se traduce en un aumento de X Col producción de proteínas.

Discusión

Este estudio probó la hipótesis de que la mecánica microambiente resultante de mayores magnitudes de tensión local en un período de tres dimensiones condrocito cultura sistema conduce a un aumento de colágeno tipo X expresión mRNA de condrocitos en esas zonas. Esta hipótesis fue probada en dos maneras: 1) en una sola esponja en respuesta a diferentes cepas locales, y 2) en diferentes esponjas en respuesta global a las distintas cepas. Los datos de ambas pruebas apoya la conclusión de que la inducción de mRNA Col X fue el resultado de una creciente tensión local por encima de un determinado umbral.

En primer lugar, aprovechando la falta de tensión de distribución uniforme de propiedad de la esponja, hemos demostrado que el colágeno tipo X expresión mRNA en hipertrófica condrocitos sometido a una deformación cíclica matriz depende de la diferencia de las cepas locales dentro de la misma esponja. En idénticas condiciones de cultivo, los condrocitos de la región experimentan de alta tensión local producido niveles más altos de colágeno tipo X ARNm distintos de los del no-cargado condiciones, mientras que no hubo diferencias significativas de producción Col X entre la región con experiencia local baja tensión y que en ningún cepas. Curiosamente, no uniforme distribución de la cepa, tal como se describe para la esponja de colágeno existe en el cartílago articular, con la cepa más alto observado en el final las zonas de cartílago [12, 13]. El sistema utilizado en el presente estudio diferencial ejerce las cepas locales en el andamiaje de colágeno condrocitos implantados. Esta propiedad es importante en el sentido de que permite la diferencia de las cepas dentro de una sola cámara de cultivo celular, limitando con ello la variación en el medio de cultivo celular de los condrocitos. Sin embargo, una precaución es la cepa local de valores medidos en este estudio representan las cepas de superficie, debido a las tensiones en el interior de la esponja en la región final no se pudo determinar. Por otra parte, no existe necesariamente una clara transición de una zona de alta tensión a una zona de baja tensión dentro de la esponja andamio.

Para superar este inconveniente, hemos probado esponjas sometido a diferentes magnitudes de tensión general. Tipo X colágeno ARNm se cuantificó y comparación de las regiones centrales de las esponjas que experimentaron relativamente constante cepas locales (1 / 2 de la cepa). Se demuestra que sólo la región centro muestra sometida a 7,5% en general cepa (3,75% cepa local) tuvo un aumento significativo de colágeno tipo X mRNA nivel en comparación a los no-cargado de control. Este resultado es consistente con los datos de la esponja único experimento que muestra que sólo local cepa más de 2,5% tradujo en un aumento significativo del tipo X síntesis de colágeno. Esto sugiere que el umbral de inducción mecánica cíclica de colágeno tipo X mRNA de producción es superior a 2,5% cepa local. Esta observación in vitro pueden tener consecuencias para la situación in vivo en el cartílago. Dado que el colágeno tipo X es un marcador de hipertrófica del cartílago y osteoartríticos cartílago, nuestros datos sugieren que la tensión mecánica por encima de cierto umbral (2,5%) puede contribuir a la activación de hipertrófica fenotipo endochondral durante la osificación.

La osteoartritis se ha descrito como una pérdida de la regulación de condrocito maduración, en la que los condrocitos no se vean excluidas del avance de condrocitos maduros para hipertrófica condrocitos y, a continuación, a través de la osificación endochondral [12]. Por lo tanto, osteoartríticos condrocitos pueden compartir algunas propiedades comunes con condrocitos embrionarias utilizadas en este estudio. Nuestros datos sugieren que el aumento de locales cepa más allá de un cierto umbral en el osteoartríticos lesión también puede contribuir a la activación local del tipo X síntesis de colágeno, similar a su activación en la región hipertrófica. Los estudios futuros deben determinar si el umbral de activación mecánica Col X de la expresión génica es la misma placa de crecimiento entre los condrocitos y la osteoartríticos condrocitos.

Aplicado a in vivo la función del cartílago, estos resultados pueden indicar que ciertos mechanosensitive vías de expresión de genes tienen un umbral para la inducción mecánica. Diferencial estrés experimentado en conjunto cartílago podría ser responsable de la activación diferencial de genes implicados en la remodelación de la matriz. En apoyo de esta hipótesis, la aplicación de una tensión mecánica a la normalidad condrocitos ha revelado que la magnitud de alta resistencia a la tracción de carga cíclica provoca un desequilibrio entre las metaloproteinasas de la matriz (MMPs) y tejidos de los inhibidores de metaloproteinasas de la matriz (TIMPs), y un aumento de la expresión de citoquinas proinflamatorias IL - 1β y TNF-α [14 - 16]. De este modo, la expresión diferencial de genes activados por locales de alta tensión puede contribuir a osteoartríticos degeneración de algunas zonas de cartílago, mientras que otros sectores sigan siendo viables. Esto puede explicar la heterogeneidad de la distribución osteoartríticos lesión dentro de una sola pieza de cartílago o incluso dentro de la heterogeneidad osteoartríticos lesiones.

Comúnmente utilizados para la aplicación de sistemas de carga mecánica a los condrocitos se encuentran los sistemas de tracción que ejercen tensión, el estrés de cizallamiento, presión hidrostática y la fuerza compresiva [17]. Estas diversas formas de mecánica de carga diferente al alza oa la baja regular del cartílago matriz extracelular de proteínas. Por ejemplo, los estudios que utilizan tracción cíclica cepa han demostrado una upregulation de varios marcadores de condrocitos hipertrófica, entre ellos el colágeno tipo X [2]. Tipo X colágeno hasta la regulación también se encuentra en los condrocitos articulares sometido a la presión hidrostática [18]. Comparación de la tensión cíclica de tracción y presión hidrostática encontró que, si bien ambas fuerzas mecánicas significativamente hasta regular el colágeno tipo X de expresión, la tensión cíclica ejerce un efecto más pronunciado en el colágeno tipo X hasta la regulación [18]. Además, el examen de las fuerzas in vivo ejercida sobre el cartílago articular que revela la resistencia a la tracción cíclica cepa es análoga a la fuerza creada tangencial a la superficie conjunta donde se articula y en el cartílago de hueso interfaz donde el colágeno tipo X se expresa [17]. Así pues, cíclica de tracción cepa es un buen mecánico de carga modelo para la investigación de colágeno tipo X.

Resistencia a la tracción aplicada a las cepas en 3D, construir en una dimensión puede llevar a compresión en las otras dimensiones. Cíclicos de compresión también se ha demostrado que el condrocito regular la expresión génica [15]. Por otra parte, mecánica de carga-deformación inducida por la matriz, según la medición de la tensión de la esponja, conduce a un cambio del condrocito microambiente dentro de la matriz, que incluye flujo de fluidos cizalla estrés, streaming potencial, la presión hidrostática, y transporte de nutrientes. Todos estos factores pueden contribuir a la mecánica de señalización de condrocitos [17]. Desde nuestra cultura 3D sistema contiene estos factores biofísicos, alteración de la matriz local cepa puede dar lugar a cambios del microambiente compuesto por estos factores. Es particularmente interesante para nuestro enlace para encontrar las observaciones anteriores [19 - 21], lo cual sugiere que el alto flujo del fluido intersticial puede ser responsable por el aumento de la expresión génica en las áreas locales. Por lo tanto, nuestros datos se prestan apoyo a la idea de que la alteración mecánica microambiente en el cartílago puede conducir a la activación local de la expresión génica en esas zonas. Por otra parte, la falta de uniformidad en la distribución de la cepa Gelfoam esponjas, tal y como se describe en este estudio, tienen implicaciones para biomecánico y estudios de ingeniería de los tejidos que emplean este tipo scaffoldings [2, 3, 22 - 26].

Agradecimientos

Esta labor fue apoyada por subvenciones de NIH (AG17021, AG 14399), la Fundación de la Artritis y la Fundación Ortopédica RIH, Inc