Arthritis Research & Therapy, 2006; 8(4): R119-R119 (más artículos en esta revista)

Valor diagnóstico de anticuerpos contra un modificado citrullinated vimentina en la artritis reumatoide

BioMed Central
Christian Dejaco (christian.dejaco @ student.uibk.ac.at) [1], Werner Klotz (werner.klotz @ uibk.ac.at) [1], Heike Larcher (heike.larcher @ gmx.net) [1] , Christina Duftner (christina.duftner @ uibk.ac.at) [1], Michael Schirmer (michael.schirmer @ ekh.at) [2], Manfred Herold (manfred.herold @ uibk.ac.at) [1]
[1] Departamento Clínico de Medicina Interna, División de Medicina Interna General, Innsbruck Medical University, Anichstrasse 35, 6020 Innsbruck, Austria
[2] del Hospital General de la Elizabethenians, Voelkermarkterstrasse 15-19, 9020 Klagenfurt, Austria

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Resumen

Los anticuerpos dirigidos contra citrullinated vimentina son miembros de la familia de autoanticuerpos citrullinated reactiva con las proteínas y se encuentran entre los más marcadores serológicos específicos para el diagnóstico de la artritis reumatoide (AR). Este estudio se realizó para probar el valor diagnóstico de un recién creado inmunoensayo enzimático (ELISA) para la detección de anticuerpos contra una modificados genéticamente citrullinated vimentina (anti-MCV) en comparación con una segunda generación de anti-cíclica citrullinated péptidos ( anti-CCP2) prueba ELISA sistema. Cegado los sueros de 631 pacientes (409 consecutivos pacientes ambulatorios y 222 seleccionados al azar almacenados sueros) con AR (n = 164) y la no-RA (osteoartritis [n = 120], la polimialgia reumática y arteritis de células gigantes [n = 80], spondyloarthritis [N = 36], y otras inflamatorias reumáticas o no la enfermedad inflamatoria [n = 67]) se realizarán las pruebas de la presencia de anti-MCV y anti-CCP2 anticuerpos de acuerdo a las las instrucciones del fabricante. El rendimiento diagnóstico de la lucha contra la MCV es comparable con el anti-CCP2 ensayo para el diagnóstico de la RA de acuerdo con el cálculo del área bajo la curva (0,824, y el 95% intervalo de confianza (IC) 0.778-0.870 versus 0,818, IC 95%-0.767 0,869) según el análisis de la recepción de la curva característica de funcionamiento. Cuando se clasifican con un valor de corte de 20,0 U / ml (según lo recomendado por el fabricante), la sensibilidad y la especificidad de la anti-MCV ELISA fueron 69,5% (95% IC 61,9% -76,5%) y el 90,8% (86,9% -93,8% ), Respectivamente, en comparación con el 70,1% (62,5% -77,0%) y 98,7% (96,7% -99,6%), de la anti-CCP2 ensayo. Usando el valor de corte de 19,0 U / ml y 81,5 U / ml para los grupos anti-MCV prueba para obtener una sensibilidad y especificidad idéntica a la anti-CCP2 ensayo, mostraron una reducción de la especificidad (89,8%, 85,8% -92,9%) y sensibilidad (53,7%, 45,7% -61,5%), respectivamente, de la anti-MCV ELISA en comparación con los anti-CCP2 prueba. En conclusión, el suero de prueba ELISA para anticuerpos anti-anticuerpos MCV, así como los anti-CCP-2 ensayo realizar comparativamente bien en el diagnóstico de la AR. En la reunión de alto rango de especificidad, sin embargo, los anti-CCP2 ensayo parece ser superior a los anti-MCV prueba.

Introducción

La artritis reumatoide (AR) es el más común de enfermedad inflamatoria común, con una prevalencia entre el 0,5% y 1% en todo el mundo [1]. En la mayoría de los pacientes, el diagnóstico de la AR se basa en los criterios propuestos por el American College of Rheumatology (ACR) en 1987, consistente en síntomas clínicos y los hallazgos radiológicos, mientras que la única prueba de laboratorio se incluye los niveles séricos de factor reumatoide (RF) determinación [2] . Los criterios ACR, sin embargo, se desarrolló principalmente como criterios de clasificación establecidos por la enfermedad, y las deficiencias en los pacientes con AR de reciente aparición de enfermedades se han convertido en evidentes [3]. Actualmente, los datos disponibles sugieren que el diagnóstico de la AR se pueden beneficiar de análisis para la detección de anticuerpos frente a citrulina que contienen péptidos como factores antiperinuclear (APFs), antifillagrin anticuerpos, los anticuerpos antikeratin (AKAS), y anti-cíclica citrullinated péptidos (anti-CCP) [4 -- 7]. Debido a inconvenientes prácticos, APF nunca fue introducido en clínica de rutina, mientras que la detección de AKA por inmunofluorescencia indirecta fue uno de los principales exámenes de laboratorio utilizados antes de anti-CCP inmunoensayo enzimático (ELISA) se convirtió en kits disponibles comercialmente. El anti-CCP ELISA se basa en altamente purificada de péptidos sintéticos dedicado bibliotecas modificados que contengan residuos de arginina (citrulina) que actúa como antígenos, tiene una especificidad comparable con AKA, y es más específico que APF y las pruebas de RF [8 - 10].

Históricamente, anti-Sa anticuerpos se identificó por primera vez en un paciente francés canadiense cuyo nombre se inició con Sa. La reactividad de estos anticuerpos resultó ser altamente específico para la AR [11]. Estudios posteriores confirmaron el alto grado de especificidad RA, que supera el 95%, en varias poblaciones de prueba [12 - 15]. La sensibilidad de este anticuerpo varía con la fase de la enfermedad a prueba, que van desde un 20% -25% a principios de RA cohortes al 47% en pacientes con enfermedad más establecidas [14, 15]. El antígeno Sa, originalmente derivados de tejido placentario, recientemente se ha identificado como citrullinated formas de vimentina [11, 16]. Vimentina es un filamento intermedio que es ampliamente expresado en células mesenquimales y macrófagos y es fácilmente detectable en sinovial y fibroblastos-like synoviocytes [17 - 19]. In vivo, vimentina no suele ser en un estado citrullinated, pero deimination de esta proteína se produce en apoptosis en los macrófagos. Anti-citrullinated anticuerpos vimentina, puede surgir como consecuencia de la falta de limpieza de material de apoptosis en pacientes con AR [20].

En este estudio, hemos probado el valor de un recién creado ELISA para la detección de anticuerpos contra una modificados genéticamente citrullinated vimentina (anti-MCV) en comparación con un anti-CCP2 basado en sistema de ELISA para el diagnóstico de la AR.

Materiales y métodos
Los pacientes

Consecutivos sueros (n = 409) se obtuvieron entre octubre de 2005 y febrero de 2006, de pacientes que consultan en el ambulatorio reumáticas (Departamento Clínico de Medicina Interna), de la Universidad Médica de Innsbruck (Innsbruck, Austria) y se almacena hasta la utilización final. Congelado sueros (n = 222) de pacientes con enfermedades reumáticas inflamatorias obtenidos entre 2003 y 2005 fueron seleccionados al azar y se incluyeron en el análisis. El diagnóstico definitivo fue utilizado como patrón de referencia y se obtuvo el gráfico de revisión. No queda claro los casos fueron examinados por tres investigadores (Dejaco C, C Duftner, y MH) y excluidos en caso de ausencia definitiva el diagnóstico podría ser alcanzado (Servicio de Archivo 1]. Ciento sesenta y cuatro pacientes fueron diagnosticados de AR que se reunió por lo menos cuatro de los siete criterios de acuerdo a la clasificación ACR 1987 [2]. En el resto de los casos, los siguientes diagnósticos fueron realizados: la osteoartritis (OA [n = 120]), la polimialgia reumática y / o arteritis de células gigantes (PMR / GCA [n = 80]) [21], spondyloarthritis (SpA [n = 36], incluida la artritis psoriásica [n = 10] [22], la espondilitis anquilosante [n = 9] [23], y colitis-associated/undifferentiated SpA [n = 17] [24]], o de otro tipo inflamatorias reumáticas o no - enfermedad inflamatoria (n = 67; enfermedad del tejido conectivo [n = 12], cristal arthopathy [n = 4], la fibromialgia [n = 9], dolor de espalda mecánico o enthesopathy [n = 29], la infección por el virus asociados artralgia [n = 6], y el síndrome mielodisplásicos [n = 7]). Estadísticas demográficas, clínicas, serológicas y los datos de los pacientes con RA fueron obtenidos por examen gráfico (Tabla 1]. Asimismo, los datos sobre los niveles séricos de inmunoglobulinas (Ig) M-RF (IgM-RF), que habitualmente se determinará por un método de nefelometría (valores normales 0-13 U / ml), se recuperaron de examen gráfico. El promedio de edad de los pacientes con AR y los pacientes con AR no fueron 60,4 (± 12,0) y 58,5 (± 15,7) años (no significativo), respectivamente. En el grupo RA, hubo ligeramente más mujeres (85,4%) que en el grupo control (76,2%, p = 0,026 de acuerdo con la prueba χ 2 con corrección de Yates). Los pacientes con AR estaban bajo tratamiento actual con un solo o combinado modificador de la enfermedad reumática anti-drogas (metotrexato [n = 95], leflunomida [n = 21], azatioprina [n = 3], sulfasalazina [n = 13], hidroxicloroquina [n = 13], la ciclosporina A [n = 2], y Escherichia coli extracto OM-89 [n = 8]) solo o en combinación con corticoides (n = 84), y factor de necrosis tumoral-α agentes bloqueantes (infliximab [n = 2], etanercept [n = 6], adalimumab [n = 10], o anakinra [n = 2]). No se encontró asociación entre la enfermedad y los marcadores de actividad de la enfermedad (datos no presentados). El estudio fue aprobado por el comité de ética local. Escrito y el consentimiento informado se obtuvo de cada paciente.

Anti-CCP2 y anti-ensayo MCV

Lucha contra el MCV y anti-CCP2 ensayo se realizó en un investigador ciego de moda. Anti-CCP2 reactividad de anticuerpos fue probada usando un comercialmente disponibles automatizado ELISA (Elia ™ CCP de ensayo; Phadia GmbH, Freiburg, Alemania) en un analizador automático ImmunoCAP100 (Phadia AB, Uppsala, Suecia), con arreglo a las recomendaciones del fabricante. Los valores de 10,0 U / ml o más se consideraron positivos. Anti-MCV anticuerpos fueron medidos usando un puesto en marcha recientemente y ahora comercialmente disponible ELISA (amablemente proporcionados por ORGENTEC Diagnóstica GmbH, Mainz, Alemania), con arreglo a las instrucciones del fabricante [25]. En resumen, las muestras de suero fueron diluidas 1:100 y se incubaron a MCV-revestido microtiter pozos durante 30 minutos a temperatura ambiente en una plataforma horizontal agitación (100/second). Las placas fueron lavadas tres veces y se incubaron con peroxidasa marcado anti-IgG humana-conjugado durante 15 minutos. 3,3 ', 5,5'-Tetramethylbenzidine sustrato se incubó durante 15 minutos adicionales después de lavado. Color desarrollo fue detenido con 1 M HCl solución, y la densidad óptica de cada pocillo se midió con un Anthos 2020 microtitulación fotómetro (Anthos Labtec Instruments GmbH, Wals, Austria). Los resultados se expresan en U / ml utilizando un simple punto a punto la curva ajustada método. Los valores de 20,0 U / ml o mayores se consideran anormales de acuerdo a las recomendaciones del fabricante. Este punto de corte fue determinado en un estudio anterior de 232 donantes de sangre saludables realizados por ORGENTEC Diagnóstica GmbH y se compone de dos desviaciones estándar (SDS) de la media de lucha contra la MCV título en esta cohorte (de acuerdo con el manual de usuario de la anti-MCV proporcionada por ELISA ORGENTEC Diagnóstica GmbH y comunicación personal).

El análisis estadístico

Distribuciones de los resultados de las pruebas de laboratorio se describen como el porcentaje por categoría de temas y cualitativos como media (± SD) o mediana (y rango) para los temas cuantitativos como se indica. Por anti-CCP2 y anti-MCV, la recepción de funcionamiento característico (ROC) se construyó la curva de sensibilidad complot contra uno menos especificidad (1 - especificidad), variando los puntos de corte [9, 26]. De diagnóstico de los valores de la lucha contra la MCV, anti-CCP2, e IgM-RF se describen como la sensibilidad y especificidad, con un 95% intervalo de confianza (IC). Para comparar datos cuantitativos, la U de Mann-Whitney y la de Kruskal-Wallis pruebas (para comparaciones múltiples) se realizaron mediante el programa SPSS, versión 11.0 (SPSS Inc, Chicago, IL, EE.UU.).

Resultados
Características de los pacientes

Los sueros de 631 pacientes fueron incluidos en el estudio. Todos los sueros fueron sometidos a la lucha contra el MCV y anti-CCP pruebas. Los sueros de 170 pacientes (26,9%) fueron anti-MCV-positivas (utilizando el valor recomendado de corte de 20,0 U / ml), mientras que los de 137 (21,7%) dieron resultado positivo en el anti-CCP2 ensayo (punto de corte recomendado valor de 10,0 U / ml). Lucha contra el MCV y anti-CCP2 fueron significativamente, pero no perfectamente, correlacionados entre sí (coeficiente de correlación = 0,594, p <0,001 mediante coeficiente de correlación de Spearman). En 467 pacientes, un claro diagnóstico clínico (164 pacientes con RA y 303 con no-RA) estaba disponible y, por tanto, estos diagnósticos se incluyeron en el análisis final (Servicio de Archivo 1]. Los datos sobre IgM-RF estaban disponibles en 415 (88,9%) de estos 467 pacientes, y 178 (42,9%) fueron positivos para IgM-RF.

Valor diagnóstico de la lucha contra el MCV y anti-CCP2 pruebas

Los pacientes con AR tuvieron mayor suero títulos de anti-anticuerpos MCV (mediana de 101,0 U / ml, rango 2-1094) que los pacientes con artrosis (7,0 U / ml; 1-87), PMR / GCA (6,9 U / ml; 2 -- 101), SpA (7,0 U / ml; 2-39), y otras inflamatorias reumáticas o no enfermedades inflamatorias (8,0 U / ml; 2-101, p <0,001 para cada comparación de acuerdo con el Mann-Whitney U test) .

Por comparación directa de los valores diagnósticos de la lucha contra el MCV y el anti-CCP2 ensayos, hemos realizado un análisis ROC. El calcula el área bajo la curva (AUC) fue comparable entre los anti-MCV (0,824, IC 95% 0.778-0.870) y el anti-CCP2 ELISA (0,818; 0.767-0.869) (Figura 1].

Para comparar la sensibilidad y especificidad de ambas pruebas, no sólo hemos utilizado el valor recomendado de corte de 20,0 U / ml para los grupos anti-MCV ELISA, sino también otros dos puntos de corte, es decir, 19,0 y 81,5 U / ml. Los resultados se resumen en la Tabla 2. En la corte de 19,0 U / ml, ambas pruebas tienen una sensibilidad idéntica, pero la especificidad de la anti-MCV se redujo. En contraste, cuando un corte de 81,5 U / ml se utilizó con el fin de obtener una especificidad para la igualdad de ambos ensayos, los anti-MCV ELISA ha demostrado menor sensibilidad que los anti-CCP2 prueba.

Con respecto a los pacientes con AR con la reciente aparición de la enfermedad (<1 año; n = 23), la sensibilidad de la lucha contra la MCV (de corte 20,0 U / ml) y anti-CCP2 ensayos fueron más bajos (62,5%, 40,6% -- 81,2%) en comparación con los pacientes con AR con la enfermedad.

El diagnóstico de las actuaciones de lucha contra el MCV y el anti-CCP2 ensayos fueron similares en los consecutivos cohorte que incluyó 49 pacientes con AR (29,9% de todos los pacientes con AR) y 223 pacientes con AR no (73,6% de todos los pacientes con organizaciones no-RA) en comparación con la cohorte total, calculado con una AUC de 0.809 (0.725-0.893) para la lucha contra el MCV ELISA y 0.843 (0.765-0.922) para la lucha contra el CCP2 prueba. Con los valores de corte recomendado de 20,0 U / ml para los grupos anti-MCV prueba y 10,0 U / ml para el CCP2 ELISA, ambos ensayos mostró una sensibilidad del 65,3% (50,4% -78,3%) para detectar los pacientes con AR, sin embargo, la especificidad de la anti-MCV prueba (91,5%, 87,0% -94,8%) fue menor que la de la anti-CCP2 ELISA (98,7%, 96,1% -99,7%). Tomando el valor de corte de 81,5 U / ml en la que la lucha contra el MCV y el anti-CCP2 ensayos idénticas características había puesto de manifiesto la ex ensayo a tener menor sensibilidad (49,0%, 34,4% -63,7%) en comparación con el segundo.

Sensibilidad y especificidad de IgM-RF pruebas para el diagnóstico de la AR fue 76,1% (68,6% -82,5%) y 77,7% (72,1% -82,7%), respectivamente, mientras que en pacientes con enfermedad temprana, IgM-RF puesto de manifiesto la sensibilidad de 68,2% (45,1% -86,1%).

Discusión

Cada vez hay más pruebas de que la intervención terapéutica temprana en el curso de la AR conduce a la más eficiente de lucha contra la enfermedad, menos daño articular, y mejor pronóstico de la enfermedad resultados. Por lo tanto, pruebas específicas de laboratorio son convenientes para ayudar en la diferenciación temprana de la AR y otras formas de reumáticas conjunta y enfermedad del tejido conectivo [14, 27 - 29]. Hasta la fecha, una serie de informes han demostrado el alto valor diagnóstico de anticuerpos dirigidos contra proteínas citrullinated en el diagnóstico de la AR. A pesar de que la especificidad fue del más del 90% en la mayoría de los estudios, la sensibilidad de los mismos anticuerpos variaron entre 33% y 87,2%, reflejando posiblemente diversos orígenes genéticos y / o diferencias metodológicas en diversas preparaciones de antígenos y detección de las técnicas aplicadas [30]. El valor diagnóstico de la anti-CCP2 prueba en el presente informe se encuentra dentro de la gama de estas publicaciones anteriores [7].

Anti-citrullinated vimentina anticuerpos han sido detectados en 23% -43% de los pacientes con AR, pero en menos del 8% de los pacientes con AR no y controles sanos por inmunotransferencia [11, 13, 15]. El objetivo de este estudio fue investigar la precisión diagnóstica de una novela y comercialmente disponibles sistema ELISA para la detección de anticuerpos contra un modificado citrullinated vimentina (anti-MCV) en una gran cohorte de pacientes con diagnóstico confirmado de la AR y la no-RA en comparación directa con la lucha contra el CCP2 ensayo. Como se muestra en la Figura 1, la República de China reveló un análisis comparable rendimiento diagnóstico global de la lucha contra el MCV y anti-CCP2 pruebas ELISA (AUCs de 0,824 y 0,818, respectivamente). Sin embargo, las curvas de ambas pruebas se cruzan entre sí, y en la especificidad de alta gama, que es clínicamente de mayor interés, el anti-CCP2 ensayo es la prueba más sensible, mientras que en la especificidad de bajo rango, el anti-MCV ELISA tiene una mayor sensibilidad. De hecho, teniendo el valor de corte de 81,5 U / ml para obtener idénticos valores de especificidad para ambos sistemas de prueba, la sensibilidad del anti-MCV ensayo (53,7%, 45,7% -61,5%) se redujo significativamente (como el IC del 95% no incluir la correspondiente sensibilidad de los anti-CCP2 prueba). Utilizando el punto de corte de 19,0 U / ml con idéntica sensibilidad de ambas pruebas dio lugar a una menor especificidad de la anti-MCV prueba (89,8%, 85,8% -92,9%) en comparación con los resultados de anteriores informes de anti-citrullinated vimentina y el anti - CCP2 ensayo [31]. Debido a que un consecutivos cohorte de pacientes que mejor refleja el número de pacientes con AR y la no-RA visto en clínicas de rutina, hemos analizado el rendimiento de los anti-MCV prueba en este grupo por separado. Sin embargo, el rendimiento diagnóstico de la lucha contra el MCV y anti-CCP2 pruebas ELISA consecutivo en este grupo no difieren de que en toda la cohorte.

En pacientes con principios de curso de la enfermedad, la sensibilidad del anti-MCV ELISA fue inferior a la recomendada de corte de 20,0 U / ml en comparación con aquellos con larga data RA pero fue equivalente a la de la anti-CCP2 ensayo, la detección de 62,5% de los pacientes con AR. Anteriores estudios informaron anti-CCP anticuerpos en el 47% -63% de los pacientes con reciente inicio de la AR, mientras que los anti-citrullinated anticuerpos vimentina, se han registrado en sólo una quinta parte de los pacientes con AR con enfermedad temprana por inmunotransferencia [13, 15], lo que indica un superior rendimiento de los anti-MCV ELISA en esta temprana de la enfermedad en comparación con el grupo la técnica de inmunotransferencia [8, 9, 26, 32]. Además, la presencia de anti-CCP anticuerpos se ha demostrado que preceden a la aparición clínica de la artritis reumatoide, y uno podría especular que la lucha contra la MCV anticuerpos también están presentes en la enfermedad antes de muestras de suero [33]. Por lo tanto, no podemos excluir la posibilidad de que algunos de nuestros anti-MCV (alta) de pacientes sin RA RA podría desarrollar en el futuro. En ese caso, el verdadero grado de especificidad de la lucha contra el MCV las pruebas en esta cohorte podrían ser subestimada [1].

Las principales limitaciones de nuestro estudio son el pequeño número de pacientes con AR temprana la enfermedad (n = 23) y la falta de datos de seguimiento de los pacientes con AR no. Los estudios prospectivos abordar el transcurso de los pacientes con artritis indiferenciada principios y largo plazo de seguimiento de las medidas anti-MCV-positivos los pacientes con AR no son necesarios para evaluar el pronóstico y el valor diagnóstico de esta prueba para los pacientes con AR temprana. Debido en parte gráfica comentarios carecían de datos de fase aguda reactivos y evaluación clínica, no investigar posibles asociaciones de la lucha contra el MCV título y otros parámetros de laboratorio clínico y la actividad de la enfermedad. Asimismo, la comparación del valor diagnóstico de la lucha contra el MCV con IgM-RF deben interpretarse con cautela debido a la retrospectiva e incompleta recuperación de la IgM-RF. La sensibilidad y especificidad de IgM-RF en nuestro presente estudio, sin embargo, son coherentes con los datos publicados [7].

Conclusión

Autoanticuerpos a citrullinated proteínas son específicas para el diagnóstico de la AR. El anti-MCV ELISA es una novela, disponible comercialmente sistema de pruebas para la detección de anticuerpos dirigidos contra una versión modificada citrullinated vimentina que demuestra comparables general de diagnóstico en relación con los anti-CCP2 ensayo de acuerdo con el análisis ROC, con el calculado AUCs de 0,824 versus 0,818, respectivamente. En la reunión de alto rango de especificidad de ambas pruebas, lo cual es clínicamente la más relevante, el anti-CCP2 ELISA parece ser superior a los anti-MCV ensayo.

Abreviaturas

ACR = American College of Rheumatology; AKA = antikeratin de anticuerpos anti-CCP = anti-péptido cíclico citrullinated; anti-MCV = anti-citrullinated vimentina modificados; APF = antiperinuclear factores; AUC = área bajo la curva; IC = intervalo de confianza; ELISA = Inmunoensayo enzimático; Ig = Inmunoglobulina; IgM-RF = inmunoglobulina M-factor reumatoide, osteoartritis, OA =; PMR / GCA = polimialgia reumática y / o arteritis de células gigantes; AR = artritis reumatoide; RF = factor reumatoide; ROC = recibir característica de funcionamiento; SD = desviación estándar; SpA = spondyloarthritis.

Conflicto de intereses

Los autores declaran que no tienen intereses en competencia.

Autores de las contribuciones

Dejaco C, C Duftner, MS, MH y diagnosticados y tratados los pacientes. MH, Dejaco C, HL, y C Duftner diseñó el estudio y se lleva a cabo el análisis. WK llevado a cabo las pruebas ELISA. MS ayudó a coordinar el estudio. Todos los autores participaron en la redacción del manuscrito y leído y aprobado la versión final.

Material complementario
Archivo Adicional 1
Un archivo TIFF con un diagrama de flujo de la matrícula y los resultados.
Agradecimientos

Esta labor fue apoyada por la Universidad de Medicina de Innsbruck, el "Verein zur Förderung der wissenschaftlichen Ausbildung und Tätigkeit von Südtirolern an der Universität Innsbruck '(a Dejaco C), y el Tirol fondos de investigación (a Duftner C).