Journal of Autoimmune Diseases, 2007; 4: 2-2 (más artículos en esta revista)

Hepatitis autoinmune-anticuerpos específicos contra antígenos solubles de hígado y el hígado citosol tipo 1 en pacientes con hepatitis viral crónica

BioMed Central
Eirini I Rigopoulou (erigopoulou@med.uth.gr) [1], Maria Mytilinaiou (marionmyt@hotmail.com) [1], Ourania Romanidou (raniarom@yahoo.gr) [1], Christos Liaskos (liaskosch@med.uth . gr) [1], George N Dalekos (dalekos@med.uth.gr) [1]
[1] Departamento de Medicina, Unidad Académica de hígado y Laboratorio de Investigación de Medicina Interna, Larisa la Escuela de Medicina, Universidad de Tesalia, Larisa, Grecia
[2] Instituto de Tecnología Biomédica (BIOMED), Centro de Investigación y Tecnología de Tesalia (CE.RE.TE.TH), Larisa, Grecia

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Resumen
Fondo

No órgano-específicas autoanticuerpos son altamente prevalentes en pacientes con hepatitis crónica C (VHC). Entre ellos, anti-microsomales de hígado riñón tipo 1 (LKM1) de anticuerpos - los marcadores serológicos de tipo 2 hepatitis autoinmune (AIH-2) - se detecta hasta en un 11% de los infectados por el VHC temas. Por otra parte, anti-citosol hepático tipo 1 anticuerpos (anti-LC1) - ya sea en asociación con anti-LKM1, o de forma aislada-y anti-antígeno soluble de hígado de anticuerpos (anti-SLA), han sido considerados como útiles y específicos de diagnóstico marcadores de hepatitis autoinmune. Sin embargo, su especificidad para AIH ha sido cuestionado por algunos estudios recientes, han demostrado que la detección de anti-LC1 y anti-Ejército de Liberación del Sudán por immunoprecipitation ensayos de VHC en los pacientes con independencia de su anti-LKM1. El objetivo del presente estudio fue la prueba anti-LC1 y anti-Ejército de Liberación del Sudán presencia de la enzima específica ensayos de inmunoabsorción ligado (ELISA), en un gran grupo de griego-VHC pacientes infectados con o sin anti-LKM1 como reactividad en primer lugar, los ensayos de immunoprecipitation se limitan a unos laboratorios especializados en todo el mundo y no se puede utilizar habitualmente y en segundo lugar, para evaluar si la aplicación de estas pruebas tiene ninguna relevancia en el contexto de los pacientes con hepatitis viral desde la detección de anticuerpos sobre la base de tales pruebas ELISA no se ha descrito en detalle en los grandes grupos de Pacientes VHC.

Métodos

Ciento treinta y ocho pacientes VHC (120 anti-LKM1 negativos y 18 anti-LKM1 positivo) fueron investigados por la presencia de anti-LC1 y anti-Ejército de Liberación del Sudán por pruebas ELISA comerciales. Un número similar (120) crónica de virus de la hepatitis B (VHB) los pacientes infectados por seronegativos para anticuerpos anti-LKM1 También se puso a prueba los controles como patológicos.

Resultados

Seis de cada 18 (33%) y anti-LKM pos / pos pacientes VHC positivos para anti-LC1, frente a 1 / 120 (0,83%) y anti-LKM neg / VHC pos pacientes y 0 / 120 (0%) de la lucha contra - LKM1 neg / VHB pos pacientes (p <0,001 para ambas comparaciones). Lucha contra el Ejército de Liberación del Sudán anticuerpos no estaban presentes en ninguno de los VHC (con o sin anti-LKM1) o VHB los pacientes infectados.

Conclusión

Nos mostró que la lucha contra la LC1 y anti-Ejército de Liberación del Sudán autoanticuerpos no son detectadas por los ensayos convencionales en un gran grupo de anti-LKM1 negativas de los pacientes con hepatitis crónica B y C infecciones. Con base en estos resultados no podemos encontrar ninguna justificación para la aplicación de anti-LC1 y anti-Ejército de Liberación del Sudán en las pruebas de rutina de los ensayos de laboratorio de hepatitis viral relacionados con autoanticuerpos serología con la única posible excepción de los anti-LC1 de cribado en anti-LKM1 pos / POS pacientes VHC.

Fondo

No autoanticuerpos órgano específico (NOSA), en particular los anticuerpos del músculo liso (SMA) y anticuerpos antinucleares (ANA) los anticuerpos son altamente prevalentes en pacientes con hepatitis crónica C virus (HCV) la infección [1 - 7]. Anti-microsomales de hígado riñón tipo 1 (LKM1) de anticuerpos - los marcadores serológicos de tipo 2 hepatitis autoinmune (AIH-2) - es también detectado hasta en un 11% de los infectados por el VHC temas [1, 8 - 11]. Lucha contra el citosol de hígado de tipo 1 (LC1) anticuerpos han sido descritos originalmente o bien en asociación con anti-LKM1, o de forma aislada, y en ambos casos definir una entidad clínica indistinguible de la AIH-2 [12, 13]. Anti-LC1 También se ha encontrado en ocasiones en anti-LKM1 positivo crónica virus de la hepatitis C (VHC) pacientes infectados [10, 14]. La detección de anti-antígeno soluble de hígado de anticuerpos (anti-SLA) se estudió inicialmente para identificar un tercer tipo de AIH seronegativos para el convencionales ANA, SMA, anti-LKM1 [15], pero estudios recientes indican que también puede estar presente en conjunción AIH con otros anticuerpos específicos que sugiere que la lucha contra la SLA es más bien un importante marcador para el diagnóstico de hepatitis autoinmune tipo 1, un marcador de un tercer tipo de AIH [11, 16 - 19].

Por lo tanto, anti-LC1 y anti-Ejército de Liberación del Sudán autoanticuerpos parece útil en el diagnóstico de hepatitis autoinmune marcadores, pero su detección exacta hasta hace poco era obstaculizada por el hecho de que los anti-LC1 es oscurecida por la presencia concomitante de anti-LKM1 utilizando la inmunofluorescencia indirecta (IIFL) de cribado de rutina , Mientras que contra el Ejército de Liberación del Sudán son indetectables por IIFL [9 - 11]. En los últimos años, las dianas moleculares de anti-LC1 y anti-Ejército de Liberación del Sudán han sido identificados como formiminotransferase cyclodeaminase (FTCD) y UGA tRNA supresor de la proteína antigénica asociada (tRNP (Ser) Sec), respectivamente y comerciales de enzimas vinculadas ensayo inmunoenzimático (ELISA) kits para su detección se han convertido en disposición [9, 20 - 25]. Su especificidad para AIH, sin embargo, ha sido cuestionado por los estudios del grupo de Alvarez [26, 27]. Por immunoprecipitation de radiomarcada humanos FTCD, Beland et al han encontrado que FTCD anti-anticuerpos están presentes en el 10% de anti-LKM1 positivo y el 15% de anti-LKM1 crónica por el VHC negativo pacientes infectados [26]. De interés y la utilización de un enfoque similar, el mismo grupo ha detectado anti-SLA anticuerpos en el 28% de los anti-LKM1 positivo y en el 12% de anti-LKM1 negativas de los pacientes infectados por el VHC [27]. Estos hallazgos desafío que prevalece la idea de que los anticuerpos contra la FTCD y tRNP (Ser) Sec son altamente específicos para enfermedades hepáticas autoinmunes [20 - 25, 28, 29]. Según los autores de los citados estudios [26, 27], anti-LC1 y anti-Ejército de Liberación del Sudán autoanticuerpos pueden ser considerados como marcadores serológicos de autoinmunidad y deben ser analizadas cuando la investigación de la autoinmunidad, sobre todo en infección crónica por el VHC.

Immunoprecipitation ensayos, sin embargo, se limitan a unos laboratorios especializados en todo el mundo y no puede utilizarse rutinariamente. De hecho, la mayoría de los no-laboratorios especializados han comenzado a hacer uso del kit de base semi-automatizado comerciales anti-LC1 y anti-Ejército de Liberación del Sudán pruebas ELISA. La cuestión de si la aplicación de estas pruebas tiene ninguna relevancia en el contexto de los pacientes con hepatitis viral sigue sin respuesta, como la detección de anticuerpos sobre la base de tales pruebas ELISA no se ha descrito en detalle en los grandes grupos de pacientes con hepatitis viral crónica B y C.

El objetivo del presente estudio fue poner a prueba anti-FTCD (anti-LC1) y anti-tRNP (Ser) Sec (anti-SLA) de anticuerpos, en un gran número de griego-VHC pacientes infectados con o sin anti-LKM1 seropositividad. Un número similar de la hepatitis crónica B virus (VHB) pacientes infectados También se puso a prueba los controles como patológicos. Hemos podido demostrar que no hay ninguna razón adicional de rutina para las pruebas de laboratorio para anti-LC1 y anti-Ejército de Liberación del Sudán anticuerpos del VHC en pacientes infectados a menos que haya anti-LKM1 anticuerpos presentes.

Métodos
Los pacientes

Ciento veinte pacientes consecutivos con hepatitis crónica C (edad media 47 ± 12,3 desviación estándar (SD) años, 62 mujeres), seronegativos para anticuerpos anti-LKM1 (anti-LKM neg / VHC pos) de IIFL seguido en el Departamento de Medicina, Hígado Unidad Académica de la Universidad de Tesalia la Escuela de Medicina se estudiaron. El diagnóstico de infección crónica por el VHC se basa en: (a) la detección de anti-VHC mediante un anticuerpos de tercera generación ELISA (Murex Diagnostics, Temple Hill, Dartford, Reino Unido) por lo menos dos veces dentro de 6 meses antes de su matriculación en el estudio, y (b) la replicación del virus activo, tal como se define por la detección de ARN del VHC mediante una venta en el comercio PCR cualitativa kit (VHC Vigilancia Cobas Amplicor, Roche, Ginebra, Suiza), tal como se describe anteriormente [1, 2, 30]. En el momento de la recogida de muestras de suero, 45 pacientes habían completado el tratamiento antiviral con interferón-alfa (IFN-a) solo o en combinación con ribavirina. Todos los pacientes fueron negativos para los siguientes marcadores virales prueba utilizando kits comerciales (equipos de diagnóstico de Abbott, North Chicago, IL, EE.UU.): La hepatitis B antígeno de superficie (HBsAg), anti-HBsAg de anticuerpos (anti-HBs), anti-hepatitis B, anticuerpo del núcleo (anti-HBc), y anti-virus de inmunodeficiencia humana (anti-VIH, VIDAS HIVDUO Bio MER © IEUX, Marcy-l'Etoile, Francia). Histológica, serológica y clínica detalles de estos pacientes se han descrito en informes anteriores [1, 2, 30]. Los resultados obtenidos por la prueba ELISA de los anti-LKM1 negativo pacientes con hepatitis C se compararon con los obtenidos de las pruebas de 18 anti-LKM1 pos / VHC pos pacientes (edad media 47 ± 11,3 años, 12 mujeres) y 120 anti-LKM1 neg / VHB pos griego pacientes (edad media 49,1 ± 11,2; 81 hombres) todos de ADN del VHB positivo por un delicado juego de PCR (VHB Cobas Amplicor Monitor, Roche; de corte: 200 copias / ml) y negativos para el VHC marcadores.

Detección de autoanticuerpos

La presencia de ANA, SMA, anti-LKM1, anti-LC1 y anti-mitocondriales anticuerpos fue inicialmente detectado por IIFL a 5 μ m congelados en los sectores de la casa de roedores que varios órganos (riñón, el hígado y el estómago) de tejido utilizando sustratos que puede revelar un reactivo total anti-IgG humana conjugado isotiocianato de fluoresceína (Dako Ltd, High Wycombe, Bucks, Reino Unido), tal como está descrita anteriormente [1, 9]. En pocas palabras, se diluye el suero (1 / 40) en tampón fosfato salino (PBS) se pusieron a prueba en casa-snap-congelados secciones de rata hígado, riñón y estómago. Sueros positivos fueron titred de doble dilución a la extinción. Los patrones de reactividad fueron evaluados bajo un microscopio de fluorescencia (Orthoplan, Leitz, Wetzlar, Alemania). Anti-LKM1, anti-LC1 y anti-Ejército de Liberación del Sudán reactividad fue también evaluada por inmunotransferencia utilizando tanto humanos citosólicas y microsomales fracción fuentes como antígeno (Euroimmun, Lübeck, Alemania). ELISA comercialmente disponibles (Euroimmun) fueron utilizados para la detección de anti-FTCD (anti-LC1) y tRNP (Ser) Sec (anti-SLA) autoanticuerpos, de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Unión de los anticuerpos títulos expresados como densidad óptica (DO) testserum / OD calibrador de extinción y los valores de muestras de suero superiores a los del calibrador (OD testserum / OD calibrador> 1) fueron considerados positivos.

Los estudios de inhibición

Para investigar si la banda de 58-60 kDa immunofixed de anti-LC1 es FTCD, la inhibición experimentos se realizaron con el anti-LC1 suero positivo, diluido a 1 / 200, y pre-incubadas con fase sólida FTCD recombinante (Euroimmun), como ya se describe [31, 32].

Cada paciente dio su consentimiento informado para participar en este estudio. El Comité Local de Ética de la Facultad de Medicina, Universidad de Tesalia aprobó el protocolo de estudio.

El análisis estadístico

Los datos se presentan en forma de porcentaje (%) o media ± SD salvo indicación en contrario. Las diferencias entre los diferentes grupos se compararon mediante t-test, Mann-Whitney U test, χ 2, (de dos en dos con Yates' corrección) y la prueba exacta de Fisher, según corresponda. Dos caras valores p <0,05 se consideraron estadísticamente significativas.

Resultados y discusión

La prevalencia de diversas NOSA se resume en la Tabla 1. Anti-FTCD (anti-LC1) anticuerpos estaban presentes en 6 / 18 (33%) y anti-LKM pos / pos del VHC en comparación con 1 / 120 (0,83%) y anti-LKM neg / VHC pos pacientes (de 47 años masculino paciente en el tercer mes de IFN-a un tratamiento sin evidencia de aminotransferasas bengalas y sin historia de las manifestaciones inmunopatológicas extrahepática) y 0 / 120 (0%) de los anti-LKM1 neg / VHB pos pacientes (p <0,001 para ambos; Figura 1A]. Por Western blot utilizando un hígado humano fracción citosólica como sustrato, la lucha contra la FTCD positivo anti-LKM neg / VHC pos immunofixed un caso relativamente débil banda de 58-60 kDa correspondiente a autoantígenos LC1 (Figura 2, carril 1). Esta banda fue abolido casi por completo cuando se reactiva el suero se pre-incubaron con FTCD recombinante como competidor en fase sólida (Figura 2, carril 2), indicando que se debe a la lucha contra el FTCD reactividad. Repita IIFL de este caso puso de manifiesto la ausencia de un patrón típico de anti-LC1; no había manchas de citoplasma de las células hepáticas con relativa ahorradores de la zona centrolobulillar, incluso cuando el suero se puso a prueba a la dilución de 1 / 20.

Anti-tRNP (Ser) Sec (anti-SLA) de anticuerpos no estaban presentes en ninguno de los VHC (con o sin anti-LKM1 reactividad) o los pacientes infectados por el VHB (Figura 1B]. Similares datos que hemos obtenido en el momento de un anti-SLA ELISA de otro fabricante (Inova Diagnostics, San Diego, California, EE.UU.) se utilizó (datos no presentados).

Infección crónica por el VHC con frecuencia se caracteriza por una alteración en la homeostasis inmune se ha puesto de manifiesto por la elevada prevalencia de NOSA, y, en particular, SMA y ANA que, según algunos informes, supera el 50% de la población infectada [1 - 7]. Anti-LKM1 de anticuerpos - los marcadores serológicos de hepatitis autoinmune tipo 2-es también detectado hasta en un 11% de los infectados por el VHC temas [1, 8 - 11]. Bajo este contexto, la detección de anti-LC1 y anti-Ejército de Liberación del Sudán anticuerpos en una proporción significativa de pacientes VHC en los dos estudios recientes - con independencia de los anti-LKM1 estado - [26, 27] no puede ser un hallazgo sorprendente ya que podría seguir apoyando la autoinmunes propensión del virus.

Los resultados del presente estudio, sin embargo, sugieren que los ensayos disponibles comercialmente son incapaces de detectar anti-LC1 y anti-Ejército de Liberación del Sudán anticuerpos en un gran número de anti-LKM1 negativas de los pacientes, ya sea con o crónica por el VHC con infección crónica por VHB. Por el contrario, hemos encontrado que un porcentaje considerable de anti-LKM pos / VHC pos pacientes (33%) tenían detectable anti-LC1 anticuerpos por ELISA, que está de acuerdo con estudios previos de Italia [14].

Se plantea la cuestión de si la incapacidad de la detección de anti-LC1 y anti-Ejército de Liberación del Sudán pruebas ELISA de anticuerpos en pacientes con infección crónica por el VHC se debe a la sensibilidad superior de la immunoprecipitation ensayos utilizados por Beland et al [26] y Vitozzi et al [27]. Radioligand ensayos de mayor sensibilidad que las pruebas convencionales han sido cada vez más informado de autoanticuerpos en el diagnóstico establecimiento de una plétora de enfermedades autoinmunes como la diabetes, la esclerosis múltiple, lupus eritematoso sistémico y la AIH [1, 28, 33 - 38]. Todavía hay algunas reservas sin embargo, en cuanto a si esta es la única razón para el discrepante entre los resultados de las pruebas ELISA y immunoprecipitation ensayos específicos para los anti-LC1 y anti-Ejército de Liberación del Sudán detección. En primer lugar, ha habido un acuerdo generalizado de que como equipo se vuelve más sofisticada, una mayor sensibilidad diagnóstica de un ensayo con frecuencia se realiza a expensas de una menor especificidad [38]. Beland et al [26] y Vitozzi et al [27] sostienen que esto no puede ser el caso de su immunoprecipitation anti-LC1 y anti-Ejército de Liberación del Sudán ensayos porque pueden detectar estos autoanticuerpos en los pacientes con hepatitis C crónica, pero no en otros controles patológicos. Estos investigadores, en particular, fueron incapaces de detectar anti-LC1 en cualquiera de los 22 pacientes con hepatitis autoinmune tipo 1 o los 25 pacientes no relacionados con otras enfermedades crónicas del hígado (que sin embargo, no describir en detalle).

El objetivo del presente estudio no es la validación de las conclusiones del francés / grupo canadiense. Estamos más bien decidido a investigar la prevalencia de anti-LC1 y anti-Ejército de Liberación del Sudán en anti-LKM1 neg / VHC en pacientes pos comerciales de ELISA y poner a prueba su utilidad diagnóstica en el día a día la práctica clínica. Nuestra hipótesis se ha basado en el hecho de que si anti-LC1 y anti-Ejército de Liberación del Sudán están presentes en anti-LKM1 neg / VHC pos pacientes y estos anticuerpos pueden ser detectados por pruebas ELISA realizada de forma rutinaria, los médicos deberían ser conscientes y solicitud de su detección. Nos hemos dado cuenta de que ni anti-LC1, ni anti-SLA autoanticuerpos son detectables en anti-LKM1 negativo pacientes con hepatitis viral crónica B o C por pruebas ELISA.

Conclusión

Nos mostró que la lucha contra la LC1 y anti-Ejército de Liberación del Sudán autoanticuerpos no son detectadas por los ensayos convencionales en la gran mayoría de los pacientes con hepatitis viral crónica B y C. Con base en estos resultados no podemos encontrar ninguna justificación para la aplicación de anti-LC1 y anti - SLA pruebas de rutina en los ensayos de laboratorio de hepatitis viral relacionados con autoanticuerpos a menos que la serología anti-LKM1 están presentes anticuerpos del VHC en pacientes infectados. En este último caso, sólo anti-LC1 de selección podría ser de su interés. El intercambio de sueros y la estandarización de la metodología empleada, si es radioligand, western blot o ELISA se justifica con urgencia para abordar definitivamente si anti-LC1 y anti-Ejército de Liberación del Sudán autoanticuerpos son marcadores serológicos de la hepatitis C crónica

Abreviaturas

AIH, autoimmune hepatitis; SMA, el músculo liso de anticuerpos; ANA, anticuerpos anticuerpos anti-LKM1, hígado riñón microsomales de anticuerpos de tipo 1; IIFL, inmunofluorescencia indirecta; anti-LC1, el hígado citosol tipo 1 de anticuerpos anti-SLA, anticuerpos contra soluble de hígado antígeno; VHC, virus de la hepatitis C, hepatitis B, virus de la hepatitis B; FTCD, formiminotransferase cyclodeaminase; tRNP (Ser) Sec, UGA tRNA supresor de la proteína antigénica asociados; ELISA, enzima vinculada ensayo inmunoenzimático; IFN-a, interferón-alfa.

Conflicto de intereses

Los autores declaran que no tienen intereses en conflicto.

Autores de las contribuciones

EIR y GND tuvieron la idea original para el estudio y escribió el documento; MM, CL y Oregón llevan a cabo los autoanticuerpos pruebas serológicas, así como la inhibición de experimentos y junto con ER realizó el análisis estadístico; EIR y GND contribuido a la versión final de el artículo. Todos los autores han leído y aprobado la versión final del manuscrito.

Agradecimientos

Esta obra fue financiada en parte por una beca de investigación de la Comisión de Investigación de la Universidad de Tesalia, Grecia (código n º: 2446); C Liaskos fue apoyada por CE.RE.TE.TH y de una beca de la Asociación Helénica para la Estudio del Hígado.