Mediators of Inflammation, 2007; 2007: (más artículos en esta revista)

No existe correlación entre la actividad de la enfermedad y la Expresión de Killer-Cell Inmunoglobulina-Receptores Al igual que en pacientes con artritis reumatoide

Hindawi Publishing Corporation
Toshiaki Kogure [1], Takeshi Tatsumi [1], Atsushi Niizawa [2], Hiroshi Fujinaga [3], Tomoyuki Ito [4], Yutaka Shimada [5], Katsutoshi Terasawa [6]

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Resumen

Objetivo. Los genes de las células asesinas similares a la inmunoglobulina de los receptores (KIRs) han sido clonadas y sus funciones y de expresión en pacientes con artritis reumatoide (AR) se han aclarado en parte. Sin embargo, la correlación entre su expresión y la actividad de la enfermedad no ha sido analizado en pacientes con AR. Por lo tanto, medirse KIR expresión en los linfocitos en pacientes con RA, y se evaluó la correlación entre KIR expresión y la actividad de la enfermedad. Pacientes y métodos. En el estudio transversal, 15 pacientes (9 mujeres y 6 varones) que cumplieron con los criterios diagnósticos para la AR fueron evaluados. En el estudio longitudinal, los pacientes que fueron seguidos durante 3 meses fueron evaluados. CD158a / b expresión en sangre periférica de células mononucleares (PBMC) de los pacientes con AR se analizaron mediante citometría de flujo. Resultados. No hay correlación significativa entre KIR expresión y de PCR, VSG, o IgM-RF se observó. No hubo cambios notables en la expresión de KIRs entre la línea base y después de 3 meses. Además, en los 5 pacientes cuya expresión de KIRs cambiado en particular, los relacionados con el tiempo los cambios en la expresión de KIRs son independientes de los parámetros de la inflamación y IgM-RF. Conclusión. No se encontró correlación entre KIR expresión y la actividad de la enfermedad, por lo que el uso clínico de KIR expresión debería ser limitada, mientras que antinatural KIR expresión puede estar implicada en la patogénesis de la AR, pero no una contratación de la inflamación crónica de inducir daño articular.

1. INTRODUCCIÓN

La clonación molecular de los receptores NK novela (NKRs) se informó de [1 - 3], y posteriormente se demuestra que los receptores de transmitir señales negativas [4, 5]. En humanos, NKRs pueden dividirse en 3 clases: la inmunoglobulina (Ig)-como receptores, incluyendo las células asesinas Ig-al igual que los receptores (KIRs) y leucocitos Ig-al igual que los receptores (LIRs), lectine-al igual que los receptores (CD94/NKG), y citotoxicidad natural de los receptores (NCRs), incluidos los NKp30, NKp44, y NKp46 [6].

KIRs se expresan en muchas células NK y en subpoblaciones de células T [7], y han estado implicados en condiciones autoinmunes como la artritis reumatoide (AR) [8, 9] y la esclerodermia [10], donde las asociaciones se han encontrado con 3 - dominio KIRs (KIR2DL1, 2 y 3) se sabe que reconocer HLA-C alelos [11, 12]. También hemos demostrado que la expresión de KIR2DL1 en linfocitos T CD8 + se redujo en los pacientes con AR en comparación con sujetos sanos, y que el upregulation de KIR2DL1, 2 y 3 por el tratamiento con IL-2 fue menor en los pacientes con AR que en sujetos sanos [9]. Baja KIR expresión en linfocitos T CD8 + en la AR podría estar asociado con el mecanismo de auto-atacar a las características de las enfermedades autoinmunes. Además, los bajos niveles de KIRs respuesta a IL-2 sugiere que los pacientes con AR puede ser altamente susceptibles a Mycobacterium tuberculosis (TB). Basándose en estos resultados, se considera que la situación de KIR expresión puede estar implicada en la patogénesis de la AR, así como la susceptibilidad a los microbios, como la tuberculosis [13].

RA es una crónica destructiva enfermedad común y un síndrome heterogéneo. Por lo tanto, la perturbación de KIR expresión en la AR plantea una pregunta interesante: ¿KIR expresión en los linfocitos periféricos en pacientes con AR cambio con la actividad de la enfermedad o no? Sin embargo, los cambios en KIR expresión en los linfocitos aún no han sido analizados en los pacientes con AR.

En este sentido, medido KIR expresión en los linfocitos en pacientes con RA, y se evaluó la correlación entre KIR expresión y la actividad de la enfermedad y los cambios en KIR expresión durante el curso de la enfermedad.

2. PACIENTES Y MÉTODOS
2,1. Los pacientes

Quince pacientes (9 mujeres y 6 varones) con las erupciones de la AR, tal como se define por los criterios revisados de la American College of Rheumatology [14] se incluyeron en este estudio. Las características de estos pacientes fueron los siguientes: media ± desviación estándar era de 62,0 ± 9,4 años (rango: 42-72), con una media ± DE enfermedad duración de 8,1 ± 6,2 años (rango: 2-24), con una media ± DE ESR (eritrocitos velocidad de sedimentación) 48 ± 35 mm / h (rango: 28-86), con una media ± DE CH50 (complemento sérico titer/50% unidad hemolítica del complemento) 36,9 ± 7,0 U / ml (rango: 28-52), anatómicos etapa [ 15] 2,2 ± 1,4, y la clase funcional de 2,1 ± 0,5. Todos estaban recibiendo antiinflamatorios no esteroideos (AINE). Dos de ellos fueron también teniendo Bucillamine, 7 Salazosulfapyridine, y 4 Prednisolona (PSL, 2.5-7.5 mg / día). Ocho pacientes estaban recibiendo metotrexato. Ningún paciente estaba recibiendo Infliximab.

2,2. Reactivos y células

Isotiocianato de fluoresceína (FITC)-CD16 conjugado antihuman, ficoeritrina (PE) y conjugado con antihuman CD158a (EB6), y PE-conjugados antihuman CD158b (GL183) fueron adquiridos de Immunotech, Marseille, Francia. EB6 anticuerpo reacciona con KIR2DL1 y KIR2DS1, y GL183 reacciona con KIR2DL2, KIR2DL3, y KIR2DS2 [11, 12].

De sangre periférica de células mononucleares (PBMCs) obtenidas de pacientes con RA fueron separados de heparinized sangre de Lymphoprep (Nyegaard, Oslo, Noruega) gradiente de centrifugación [16]. Cada PBMC se incubaron en una cultura en un plato humidificado 5% CO 2 / 95% del aire ambiente a 37 ° C durante 60 minutos. Después de la incubación, las células nonadherent fueron recogidos. Estas suspensiones celulares se lavaron dos veces en buffer fosfato-salino (PBS).

2,3. Fenotipo de células

Superficie fenotipificación, se llevó a cabo utilizando una de dos colores inmunofluorescencia técnica de coloración, con isotipo específico de ratón antihuman anticuerpo conjugado con FITC o bien PE [17]. Cada una de las muestras de células teñidas, suspendida en 0,5 ml de PBS y analizadas por citometría de flujo. Linfocitarias fueron identificados por gating análisis, y los perfiles de fluorescencia se obtuvieron de 10000 células de cada muestra. Controles negativos para cada experimento se realizaron con FITC y PE-etiquetados ratón-inmunoglobulina G (Ig-G).

2,4. El análisis estadístico

Los datos son expresados como media (desviación estándar) valores. Todos los datos fueron recogidos en una base de datos y se analizaron utilizando el Statview-J 4,02 programa (Abacus Concept, Berkeley, Calif, EE.UU.). La U de Mann-Whitney test se realizó para cada conjunto de la superficie del antígeno. Para todas las pruebas estadísticas, las diferencias se consideran significativas si p <.05.

3. RESULTADOS

La correlación entre los condes de KIR-expresando las células y la actividad de la enfermedad en la AR.

La correlación entre las células y CD158a/b-expressing PCR, VSG, IgM y de factor reumatoide (IgM-RF) se resume en la Tabla 1. No se encontró correlación entre los condes de CD158a de expresar las células y la actividad de la enfermedad, aunque hubo una tendencia hacia una correlación entre CD158a de las células que expresan y ESR. Por otra parte, los condes de CD158b de las células que expresan no se correlacionó con los parámetros inflamatorios clásicos (CRP: proteína C reactiva, y ESR) e IgM-RF.

Los cambios de CD158a y CD158b de las células que expresan durante el seguimiento adjetivo forma de 3 meses.

La Figura 1 muestra los cambios en las poblaciones de células que expresan CD158a (Figura 1 (a)] y CD158b (Figura 1 (b)] durante el seguimiento adjetivo forma de 3 meses. Diez de los pacientes con AR no mostraron cambios en la expresión de CD158a y CD158b. Dos pacientes mostraron una expansión de las poblaciones de ambos CD158a-y expresar-CD158b células. Por el contrario, 3 pacientes mostraron disminución en las poblaciones de ambos CD158a-y expresar-CD158b células. Sin embargo, el tiempo relacionados con los cambios en la expresión de CD158a / b son independientes de los parámetros de la inflamación y IgM-RF en los 5 casos (Figura 1]. Además, no hubo diferencias en las características clínicas entre los tres grupos: (i) los pacientes sin cambios en la expresión KIR, (ii) pacientes con una disminución en KIR expresión, y (iii) los pacientes con un aumento de la expresión KIR (datos no muestra).

4. DISCUSIÓN

Las funciones biológicas de KIRs han sido investigadas a fondo. En resumen, NK función de la célula es generalmente reguladas por un equilibrio entre las señales transmitidas por inhibitoria y estimulantes de receptores. Ligando vinculante para los receptores inhibitorios reclutas fosfatasas que dephosphorylate abajo activación de proteínas, con lo cual se da por concluida la activación de la vía de señalización. De este modo, la activación de las células NK función se produce cuando hay un excedente neto de más de estimulantes señales inhibitorias [18].

Estudios recientes han demostrado los resultados de apoyo a las importantes funciones de las células NK en la regulación de la autoinmunidad [19]. También hemos demostrado que la población de CD8 + + CD158a células se redujo en los pacientes con AR en comparación con sujetos sanos [9]. Del mismo modo, Nakiri et al han informado de que entre los pacientes con AR, NKB1 + linfocitos T CD8 + disminuido considerablemente en comparación con los controles [20]. Se considera que la baja población de KIR-las células que expresan en las células T podrían estar asociadas con el mecanismo de auto-atacar a las características de las enfermedades autoinmunes, y que una expresión antinatural de KIRs puede contribuir a la patogénesis de la AR. Sin embargo, no se ha demostrado si KIR expresión se correlaciona con la actividad de la enfermedad en la AR.

Hasta donde sabemos, este es el primer informe para evaluar la correlación entre KIR expresión y la actividad de la enfermedad. En este estudio, no encontramos una relación significativa entre CD158a / b expresión en los linfocitos periféricos, los clásicos parámetros inflamatorios (PCR y VSG), e IgM-RF. Estos hallazgos sugieren que la expresión antinatural KIR contribuye a uno de los factores desencadenantes patogénesis de la AR, pero no una contratación de la inflamación crónica de inducir daño articular. Otros investigadores han revelado que el gen se KIR2DS2 enriquecido significativamente entre los pacientes con vasculitis en la AR [8].

Por otra parte, hemos observado los cambios en la población de células CD158a/b-expressing. En este seguimiento adjetivo forma, el tiempo relacionados con los cambios en la población de KIR-expresando células son independientes de los parámetros de la inflamación y IgM-RF. Además, los pacientes fueron divididos en 3 grupos de acuerdo al patrón de cambios en la población de KIR-expresando células. Sin embargo, no hubo diferencia en las características clínicas entre los 3 grupos: (i) los pacientes sin cambios en la expresión KIR, (ii) pacientes con una disminución en KIR expresión, y (iii) los pacientes con un aumento de la expresión KIR. Asimismo, no encontró ninguna correlación en la actividad de la enfermedad entre estos 3 grupos. Estos hallazgos pueden también sugieren que la expresión antinatural KIR contribuye a uno de los factores desencadenantes patogénesis de la AR, pero no una contratación de la inflamación crónica de inducir daño articular. Para apoyar esta hipótesis, un análisis más detallado de KIR expresión en las células de varios linajes es obligatorio.

Por último, no hubo correlación entre KIR expresión y la actividad de la enfermedad, por lo que el uso clínico de KIR expresión debería ser limitada, mientras que antinatural KIR expresión puede estar implicada en la patogénesis de la AR, pero no una contratación de la inflamación crónica de inducir daño articular.

Este estudio fue apoyado por una subvención de Investigación Científica de la Sociedad Japonesa para la Promoción de la Ciencia.