Journal of Immune Based Therapies and Vaccines, 2007; 5: 6-6 (más artículos en esta revista)

A la fase I, estudio aleatorizado de la combinación de IL-2 y la vacunación terapéutica con la terapia antirretroviral

BioMed Central
AD Gareth Hardy (gareth.hardy @ case.edu) [1], Nesrina Imami (n.imami @ imperial.ac.uk) [1], Mark R Nelson (sandra.mead @ chelwest.nhs.uk) [2] , K Ann Sullivan (ann.sullivan @ chelwest.nhs.uk) [2], Ron Moss (shotdoc92130@yahoo.com) [3], Marlén MI AASA-Chapman (Chapman-m.aasa @ ucl.ac.uk) [4], Brian Gazzard (eileen.witney @ chelwest.nhs.uk) [2], Frances Gotch M (f.gotch @ imperial.ac.uk) [1]
[1] Departamento de Inmunología, el Imperial College de Londres, Chelsea y Westminster Hospital, 369 Fulham Road, London, SW10 9NH, Reino Unido
[2] Departamento de VIH / GU Medicina, Imperial College London, Chelsea y Westminster Hospital, 369 Fulham Road, London, SW10 9NH, Reino Unido
[3] Respuesta Inmune Corporation, Carlsbad, CA, EE.UU.
[4] Wohl Virion Centre, Windeyer Institute of Medical Sciences, UCL, Londres, W1T 4JF, UK

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Resumen
Fondo

Totalmente funcional por VIH-1 específicos CD4 y CD8 efectoras de células T respuestas son vitales para la contención de actividad viral y la progresión de la enfermedad. Estas respuestas son insuficientes, infectadas por VIH-1 los pacientes con enfermedad progresiva. Hemos intentado aumentar completamente funcional por VIH-1 específicos CD4 y CD8 efectoras de células T respuestas en pacientes con avanzada crónica infección por VIH-1.

Diseñar

Los pacientes con infección crónica con bajos recuentos de células CD4 de células T cuenta que comenzó la terapia antirretroviral (TAR) fueron tratados con combinación interleucina-2 y la vacunación terapéutica.

Métodos

Treinta y seis anti-retrovirales ingenuo pacientes fueron reclutados y se inició el tratamiento antirretroviral de combinación de 17 semanas antes de la aleatorización a: A) ART curso por sí solo; B) ART con IL-2 dos veces al día durante 5 días cada cuatro semanas a partir de 17 semanas durante 3 ciclos; C) ART con IL-2 como en el grupo B y Remune VIH-1 vacuna administrada una vez cada 3 meses, comenzando en la semana 17, y D) ART con la vacuna Remune como en el grupo C. Los pacientes fueron estudiados para 65 semanas después del comienzo de ART , Con un adicional de 6 semanas antes de plomo en el período de observación. CD4 y CD8 T-células, las evaluaciones de ARN del VIH-1 y los niveles de proliferación respuestas a recordar y el VIH-1 antígenos fueron complementadas con la evaluación de IL-4-junto con la secreción de cuantificación de anti-VIH-1-T CD8 células respuestas y neutralizar títulos de anticuerpos.

Resultados

Ni IL-2 ni Remune ™ inducida por la vacunación sostenida por VIH-1 específica de células T respuestas. Sin embargo, nos informe una relación inversa entre el VIH-1-proliferativa respuestas concretas e IL-4 que la producción aumentó continuamente en los pacientes que recibieron inmunoterapia, pero no los pacientes que reciben tratamiento antirretroviral por sí solo.

Conclusión

La inducción del VIH-1 específica mediada por células respuestas es un reto importante en crónicamente infectadas por VIH-1, incluso cuando los pacientes la combinación de inmunización con IL-2 terapia. Un antígeno específico de IL-4-supresores de respuesta asociados pueden desempeñar un papel en atenuar el VIH-respuestas concretas.

Fondo

Inmune recuperación posterior a la terapia antirretroviral (TAR) a menudo parece ser parcial y no comprende el VIH-1 específica de CD4 o CD8 células T proliferativa y la IL-2 que producen las respuestas que están asociadas con la protección de la progresión de la enfermedad [1 - 5 ]. Estos potencialmente protectora por VIH-1 específica de células T respuestas [6 - 9], convertido en disfuncionales y agotado con la enfermedad progresa. Una serie de enfoques intento de modulación celular mediada por las respuestas, incluida la vacunación terapéutica [2, 10 - 12]. Remune ™ es un conjunto, gp120-agotado, inactivadas, el VIH-1 en inmunógeno incompleta Adyuvante de Freund (IFA), elaborado a partir de la primaria recombinante aislar HZ-321 [13] (Un clade dotación, clade G gag). Los ensayos clínicos de intramuscular (I / M) Remune ™ uno de los cuales la fase III [14], no han demostrado el aumento en la supervivencia libre de enfermedad a pesar del tiempo del Remune ™ inducción del VIH-1 específica de CD4 de células T respuestas [15]. El análisis de subgrupos no pudo demostrar ningún efecto consistente en la carga viral o CD4 + [16]. A pesar de ello, Remune ™ puede retrasar la progresión de la enfermedad y reducir el desarrollo de la resistencia antirretroviral [17].

Sub-cutánea (S / C), interleuquina (IL) -2, administre con ART, el aumento de CD4 de células T números [18 - 21] y recordar de antígenos específicos de proliferación de linfocitos CD4 [22, 23]. Sin embargo el calendario puede ser de crucial importancia para la inducción de células mediada por las respuestas [24]. Hemos demostrado anteriormente que la IL-2 administración posterior a la inmunización se asoció con impulsado respuestas a los antígenos en cuestión, sugiriendo un papel terapéutico para IL-2 en la mejora de proliferación de células T en las respuestas infección por VIH-1 [2, 25].

Hemos investigado la posibilidad de Remune ™ e IL-2, combinada y por separado, para inducir el VIH-1 específica de CD4 y CD8 de células T en las respuestas crónicamente infectadas por VIH-1 en pacientes con tratamiento antirretroviral en un estudio observacional, abierto, aleatorizado, estudio piloto. También evaluamos el antígeno específico de IL-4, ya que la liberación de citoquinas juega un papel importante en el equilibrio y / o la supresión de células mediada por las respuestas [26, 27], aquí nos informe de evaluación específico de células T proliferación, el antígeno específico de IL-4 liberación, CD8 células T IFN-γ respuestas y títulos de anticuerpos neutralizantes, con el fin de describir exhaustivamente la respuesta inmune específica de interés para el control de la replicación viral.

Métodos
Los pacientes y el diseño del estudio

En esta observación, fase I, estudio piloto realizado en el Chelsea y Westminster Hospital, Londres, 36 antirretroviral de los pacientes ingenuos se iniciaron en ART en la semana 0, lo que se continuó durante toda la duración del estudio. ARTE comprende 2 análogos de nucleósidos y un inhibidor de la proteasa o no-nucleósido inhibidor de la transcriptasa inversa. En la semana 17 pacientes fueron randomizados para recibir la inmunoterapia con IL-2 y / o terapéuticos de inmunización con una gp120-agotado todo el inactivada VIH-1 inmunógeno. Suficiente Remune ™ fue donado para su uso en 20 pacientes de la Respuesta Inmune Corporation (IRC), Carlsbad, CA, EE.UU.. Los pacientes fueron divididos aleatoriamente en la semana 17 sólo si su carga viral fue <50 copias ml / plasma y CD4 de células T se cuentan ≥ 300 células / μ l de sangre en la semana 16. Grupos de tratamiento para la asignación al azar fueron los siguientes: a) Art sola (n = 9); B) ART más IL-2 (Proleukin ™) (n = 11); C) ART más IL-2 y Remune ™ (n = 7) , Y d) Art más Remune ™ (n = 9). IL-2 (5 × 10 6 U), se administró, S / C, dos veces al día, durante 5 días a las semanas 17, 21 y 25. 100 μ g ™ Remune se administra I / M en las semanas 17, 29, 41 y 53. Laboratorio de análisis se llevó a cabo en las semanas--6, -3 y 0 antes de ART, y las semanas 1, 2, 4, 8, 16, 17, 21, 25, 29, 41, 53 y finalización en estudio en la semana 65. El resultado primario fue la inducción de cambios positivos de proliferación de linfocitos en las respuestas al VIH-1 antígenos. Además de estudiar los principales puntos de tiempo, un nuevo sub-estudio de carga viral y de linfocitos subconjunto números se llevó a cabo en un subconjunto de pacientes (n = 15) que reciben IL-2 en los grupos B y C en el 5 º día de cada uno de IL-2 ciclo, es decir, a las semanas 18, 22 y 26. Este sub-estudio se inició después de que el estudio principal se había iniciado y se incluirán todos los pacientes que reciben IL-2 en los grupos B y C a partir de la fecha de su creación. Reglamentario adecuado que se concedió la aprobación de Riverside Comité de Ética y los pacientes dieron su consentimiento informado por escrito.

La separación de PBMCs

PBMC fueron separados de toda la sangre de densidad gradiente de centrifugación y cultivadas en RPMI-1640 con Naco 3 (Sigma, Poole, Reino Unido) y 100 UI / ml de penicilina, 100 μ g / ml estreptomicina y 2 mM L-glutamina suplementado con 10% humanos AB plasma (todos Sigma).

La carga viral y de linfocitos subconjuntos

Carga viral plasmática se midió usando el Bayer HIV-1 RNA 3,0 ensayo (bDNA) (límite inferior de 50 copias / ml) (Bayer Diagnostics, Newbury, Reino Unido). Plenario linfocitos de sangre se contó con anticuerpos monoclonales: CD3, CD4, CD8 y CD45 (Tetra Uno, Beckman Coulter, High Wycombe, Reino Unido) en un Epics XL-MCL citómetro de flujo (Beckman Coulter).

Recordatorio y el VIH-1 antígenos

Recombinantes del VIH-1 y recordar los antígenos (Consejo de Investigaciones Médicas instalación centralizada para el SIDA Reactivos, Instituto Nacional de Estándares Biológicos y Control, Potters Bar, Reino Unido) se han utilizado como se describe anteriormente [2], a una concentración final de 10 μ g / ml. Remune ™ y su nativo p24 (IRC, Ca) se utilizaron a 3 μ g / ml [28].

Los ensayos de proliferación de linfocitos

Ensayos de proliferación y el sobrenadante colección de IL-4 se llevaron a cabo la evaluación tal como está descrita anteriormente [2]. Índices de estimulación (SI) para triplica (error estándar <15%) se calcularon como antígeno-β-estimulado cuenta de partículas por minuto (cpm) o por la falta de antígeno cpm. Una respuesta positiva es considerada como un SI> 5.

Medición de la producción de citoquinas

IL-4 bioensayos se llevaron a cabo tal como está descrita anteriormente [2] utilizando IL-4 (CT.h4S) dependiente de líneas celulares. En pocas palabras, IL-4 se midió en la cultura sobrenadantes de VIH-1 antígeno de proliferación ensayos. Proliferación de la IL-4-dependiente CT.h4S línea celular se midió mediante la incorporación de tritio, la timidina. Los resultados se presentan como IL-4 impulsadas cpm.

Hipersensibilidad retardada (DTH) las pruebas que a Remune ™

En vivo retraso del tipo de hipersensibilidad (DTH) en pruebas cutáneas a Remune ™ antígeno se realizaron para evaluar el VIH-1 específica de células mediada por la respuesta inmune, tal como se describe en otro lugar [29] en todos los pacientes en las semanas 17, 29 y 53.

HLA-escribiendo

Haplotipos HLA de los pacientes fueron evaluados por PCR-SSP [30].

IFN-γ ELISPOT ensayos

IFN-γ ELIspots se llevaron a cabo tal y como se describe anteriormente [31]. En pocas palabras, 2,5 × 10 5 PBMC de los pacientes individuales que se han tejido a máquina se cultivaron con o sin 10 μ g / ml apropiado de HLA-Restringido péptidos o PHA (control positivo) a 96-y anti-IFN-γ (Mabtech, Estocolmo, Suecia) PVDF revestido respaldados por placas (Millipore, Watford, Reino Unido). Después de la noche a la mañana de incubación IFN-γ in situ la formación de células (SFC) se detectaron de acuerdo a las instrucciones del fabricante (Mabtech).

Neutralización ensayos

Inmunoglobulina (Ig) G fue purificado de los pacientes y el VIH-1 negativos plasma MAbTrap utilizando el kit (Amersham Biosciences, Little Chalfont, UK), y cuantificados de Determinación de proteínas (Bio-Rad, Munich, Alemania). Dos veces diluciones seriadas de la IgG purificada, a partir del 1 mg / ml, fueron incubadas con 100 unidades formadoras de atención (FFU) del VIH-1 SF162 de 1 hora a 37 ° C y, a continuación, chapados en NP2/CD4 + / + células CCR5. La infección se detectó después de 48 horas de p24-inmunoticción, como se detalla antes de [32]. El porcentaje de reducción de la infección se ha calculado: 100 × (1 - (media FFU paciente con IgG) / (media FFU seronegativos con IgG a 1 mg / ml)).

Análisis Estadístico

Los cambios en subgrupos de linfocitos y carga viral entre la semana 0 y 16, las semanas 0 y 65 y las semanas 16 y 65, se evaluaron utilizando los rangos con signos de Wilcoxon test. Proliferación y la IL-4 los datos fueron evaluados con medidas repetidas análisis de varianza utilizando el procedimiento MIXED de SAS en software estadístico. Para log-transformado de antígenos específicos de estimulación índices de proliferación, entre sujeto y dentro de las semanas 0 a 17, semanas 17 a 65 y las semanas 0 a 65, ajustado por separado laderas se estiman para cada brazo de estudio, con un 95% intervalo de confianza. Las diferencias en general la carga viral de 18-26 semanas, entre los grupos B, C y se evaluaron utilizando el Pearson Chi-cuadrado.

Resultados
Paciente demografía

Cincuenta y dos anti-retrovirales pacientes no tratados fueron seleccionados para este estudio que se llevó a cabo en el Chelsea y Westminster Hospital, Londres durante un período de seis años. De los 16 pacientes seleccionados abandonaron antes de la aleatorización en la semana 17. Todos los restantes 36 pacientes fueron aleatorizados que completaron el estudio. La edad media de los pacientes en estudio la entrada fue 38,75 años. Hubo un paciente (2,78%) y el 100% de los pacientes eran de origen étnico europeo blanco.

La carga viral y CD4 de células T cuenta

La mediana de la carga viral y CD4 de células T cuenta para cada grupo se muestran en la Figura 1. La mediana de semana 0 de carga viral para todos los pacientes fue de 88699 copias / ml de plasma (rango 50-779254). La mediana de CD4 absolutos de células T se cuentan 294 células / μ l de sangre (rango 76-551). Diecinueve de los 36 pacientes (53%) tenían CD4 de células T cuenta inferiores a 300 células / μ l en sangre pre-ART puntos temporales.

En la semana 17 la mediana de carga viral en todos los grupos es inferior a 50 copias. Todos los pacientes, excepto 5 (uno en el grupo A, tres en el grupo B, uno en el grupo D), mantuvo la supresión viral en los principales puntos de tiempo de estudio desde la semana 17 en adelante, mientras que reciben tratamiento antirretroviral en curso. Un paciente en el grupo C (paciente 11) eligió poner fin a las ART en la semana 47 causando posterior rebote en la viremia. En la semana 17, la mediana de CD4 de células T contar en cada grupo fue la siguiente: Grupo A, 456 células / μ l (rango 261-673) (Figura 1A); Grupo B, 377 células / μ l (rango 81-742) ( Figura 1B); Grupo C, 468 células / μ l (rango 306-680) (Figura 1C); Grupo D, 337 células / μ l (rango 289-702) (Figura 1D]. IL-2 inducida por los aumentos en valor absoluto de CD4 de células T se cuenta también evidente en los grupos B y C. Por semana 65 estos valores fueron 602 células / μ l (rango 300-918) para el Grupo A, 731 células / μ l (rango 253 -- 1025) para el Grupo B, 619 células / μ l (rango 358-1404) para el Grupo C y 505 células / μ l (rango 345-768) para el Grupo D.

Proliferación de linfocitos al VIH-1 antígenos

VIH-1 respuestas concretas proliferativa aumentó transitoriamente para muchos pacientes. El análisis de regresión de estas respuestas no reveló cambios significativos en el grupo A (Fig. 2A]. En el grupo B de la semana 0 a 65 un incremento significativo en la np24 respuesta (p = 0,005) se observó (Figura 2B]. En el grupo C no aumento de VIH-1 respuestas concretas proliferativa fueron vistos (Fig. 2C]. De nota es una respuesta excepcional a Remune ™ con un SI de 95 a 65 semanas para 11 pacientes en este grupo (datos no presentados), coincidiendo con rebote viremia (152536 copias / ml) después de impuesto a sí misma la suspensión ART. En el grupo D positivo de regresión se vio en las respuestas a Nef (p = 0,004) y el conjunto del Remune ™ antígeno (p = 0,005) desde la semana 0 a 65. (Fig. 2D]. La única respuesta que aumentó significativamente entre la semana 17 y 65 en cualquiera de los grupos fue la respuesta de p24 en el grupo D (p = 0,039). 8 de pacientes en este grupo demostró una gran respuesta a Remune ™ (SI = 261) y np24 (SI = 144) en la semana 29 tras avance de virus resistentes en la semana 25 (6315 copias / ml) (datos no presentados). Ningún otro aumento sustancial en las respuestas se produjeron entre la semana 17 y 65 años para cualquier grupo o en cualquier momento entre los grupos.

En vivo retraso reacciones de hipersensibilidad de tipo a Remune ™

Induración tamaño de reacciones de hipersensibilidad a Remune ™ no se convierta en positivo (> 9 mm de diámetro) en cualquier paciente en cualquier parte del tiempo los puntos a prueba (semanas 17, 29 y 53).

Proliferación de linfocitos recordar antígenos

Línea de base para la semana 16 de células T respuestas se han descrito en detalle anteriormente [1]. El análisis de regresión reveló un aumento significativo en las respuestas a recordar todos los grupos entre semana 0 y 65 (Fig. 2E-H], principalmente para recordar la persistencia de antígenos: En el grupo A (Figura 2E] las respuestas a CMV y Candida aumentó significativamente (p = 0,027 y p = 0,006 respectivamente), para el grupo B (Figura 2F] HSV respuestas aumentó significativamente (p = 0,007), CMV aumento de las respuestas, p = 0,002 y Candida aumento de las respuestas (p = 0.0006); en el grupo C (Figura 2G] Candida CMV y respuestas aumentó (p = 0,002 yp = 0,007 respectivamente); en el grupo D (Figura 2H] VHS y CMV respuestas aumentó significativamente (p = 0,002 yp = 0,001). Las respuestas a antígenos transitorios son menos evidentes. En el grupo A el PPD y el tétanos mostró respuestas positivas significativas regresiones más de las 65 semanas (p = 0,018 yp = 0,018 respectivamente); en el grupo B, sólo el PPD curva de respuesta de regresión fue significativa (p = 0,044), y en el grupo C sólo el tétanos la respuesta fue significativa (p = 0,0003). No hubo diferencias significativas en recordar las respuestas entre los grupos de tratamiento.

VIH-1 específica de IL-4 la producción

Antígeno específico de IL-4 la producción puede estar asociada con la supresión de la respuesta proliferativa de mojado y de la respuesta inmune inflamatoria. Por lo tanto, medirse IL-4 en la producción de la proliferación de ensayo cultura sobrenadantes en respuesta a la estimulación cada VIH-1 antígeno, tal como está descrita anteriormente [1]. Aumentos significativos de VIH-1 específica de IL-4 semanas de producción de 17 a 65 se observaron en respuesta a p24 en el grupo-B (p = 0,023), y grupo C (p = 0,032) y en respuesta a gp120 en el grupo D ( p = 0,037) (Fig. 3A]. VIH-1 específica de IL-4 la producción no aumentó significativamente en el grupo A (datos no presentados).

Se observó una aparente relación entre la IL-4 y la pérdida de producción y falta de proliferación en 17 de 28 pacientes a prueba, distribuidos uniformemente entre los grupos, evidente desde la semana 0 a 16 y de la semana de 17 a 65. Paciente 11 (grupo C) se muestra como un ejemplo, donde el VIH-1-proliferativa respuestas concretas a p24, gp120, nef y Remune ™ son altos en la semana 29 (Fig. 3B], con ausencia de IL-4 (Fig. 3C] , Mientras que en la semana 41 IL-4 secreción aumenta a medida que disminuye la proliferación.

T CD8 de células IFN-γ respuestas a HLA clase I Restringido péptidos

Cuando sea posible, es investigado T CD8 de células IFN-γ producción en respuesta a las caracteriza HLA clase I Restringido péptidos (que figuran en el cuadro 1], por ELISPOT ensayo utilizando la crio-preservado PBMCs. Como se informó anteriormente [15] Remune ™ no inducir aumentos CD8 en las células T respuestas. Aunque se produjeron fluctuaciones en T CD8 de células IFN-γ estas respuestas no fueron sostenidos y no podía atribuirse a ART o inmunoterapia. Resumen de los datos se presentan de semana 0, a raíz de ART por sí solo en la semana 16 y en la semana 65 en el cuadro 2. Los ensayos en los que las respuestas no se observaron a las postive control, PHA, se considera que han fracasado, como indican con "F". Cabe destacar la observación de que ningún paciente en los grupos B, C ó D demostrado un aumento en las respuestas entre la semana 16 y la semana 65. Paciente 11 es una excepción, aunque este paciente había elevado nivel básico y las respuestas de 65 semanas ha suspendido ART causando considerable rebote viremia, concomitante con una fuerte VIH-1 específicos de proliferación de linfocitos respuestas, según se detalla más arriba.

Discordante viremia entre los pacientes que reciben IL-2, con o sin Remune ™

Secundaria a la principal protocolo de estudio, más la carga viral y de linfocitos subconjunto de análisis se llevó a cabo en otros puntos temporales - 18 semanas, 22 semanas y la semana 26 - para un subgrupo de 15 pacientes que reciben IL-2 en los grupos B (n = 9) y C (n = 6) en el último día de cada IL-2 ciclo. Pequeño, elevaciones transitorias de ARN del VIH-1 se carga aparente en 12 ocasiones para el 7 de 9 (78%) pacientes del grupo B-, y 2 de 6 pacientes (33%) en el grupo-C. Todas estas elevaciones de la carga viral había resuelto espontáneamente por la próxima prueba de carga viral 3 semanas más tarde, a las semanas 21, 25 y 29. La diferencia en la incidencia de estas elevaciones de la carga viral sigue siendo evidente al comparar la mediana de la carga viral para todos los pacientes en los grupos B y C, como se muestra en la Fig. 1B y 1C. La mediana de cambio de carga viral (de 50 copias / ml) para los pacientes que habían día 5 mediciones de carga viral en el grupo B fueron 23,5 copias / ml, 53 copias / ml y 0 copias / ml al final de cada IL-2 ciclo. En comparación la mediana del cambio en la carga viral para los pacientes del grupo C, que ha día 5 mediciones de carga viral fue 0 en cada momento. Cambio en la carga viral no fue significativamente diferente al comparar el sub-estudio de los pacientes del grupo B con los del grupo C, en cualquiera de los 3 individuales IL-2 el día 5 puntos temporales. Sin embargo, cuando teniendo los tres día 5 puntos tiempo juntos por cada grupo, la comparación entre los dos grupos revelaron una tendencia hacia la significación (p = 0,071, Pearson Chi-cuadrado).

De anticuerpos neutralizantes en las respuestas discordantes virológica respondedores

Como Remune ™ muestra la transmembrana (gp41) dotación de antígenos con una fuerte neutralización epítopos [33 - 35], es posible que prime anticuerpos neutralizantes a los nuevos epítopes. Pusimos a prueba la capacidad de IgG en plasma de pacientes en el grupo C que no experimentaron el día 5 viral blips para neutralizar el VIH-1 SF162 a las semanas 0, 16 y 65. No hubo efecto de la inmunoterapia o el arte en neutralización del virus (datos no presentados).

Discusión

En este estudio experimental del sistema de inmunoterapia combinada con la terapéutica del VIH-1 vacuna Remune ™ y subcutánea IL-2 en el contexto del arte, ni la IL-2 ni Remune ™ inmunización confered sustanciales beneficios para el efecto de ART con respecto al VIH-1 específicas de CD4 o CD8 células T respuestas, o anticuerpos neutralizantes. Para la mayoría de estos crónicamente infectadas por VIH-1 respuestas a los pacientes VIH-1 antígenos siguieron siendo insignificantes y había poca diferencia entre los cuatro inmunoterapia armas. Las posibles razones para esto podrían ser: la baja CD4 T-células de estos pacientes cuando se inició ART resultante en la inmunosupresión prolongada y / o disfunción clonal, con una necesidad de larga duración del tratamiento antirretroviral antes de immunotherapeutic intervención, lo que permite una mayor recuperación inmune; permanente el agotamiento del VIH-1 específica de CD4 de células T de forma directa infección por VIH-1, y / o el momento de la IL-2 con la terapia de inmunización que puede tener importantes consecuencias para la inducción o la supresión de las respuestas inducidas.

Anterior Remune ™ estudios que proliferativa inducida por las respuestas compuesto pacientes con mayor pre-ART media de CD4 de células T cuenta de 617 células / μ l [36] y 700 células / μ l de sangre [15]. La media en este estudio fue 303 células / μ l. 53% de estos pacientes tenían CD4 nadirs por debajo de 300 células / μ l. La reconstitución inmune en pacientes que iniciar TAR con bajos CD4 de células T que cuenta es afectada en comparación con los que iniciar TAR con CD4 más altos de células T cuenta [37, 38]. La capacidad para responder a la inmunización es también dependiente de CD4 más altos de células T contar nadirs anterior y el inicio de arte [39].

El destino de los desaparecidos por VIH-1 específicos CD4 de células T respuestas no está claro. VIH-1 infecta preferentemente y elimina muchos de VIH-1 específica de CD4 de células T [7], mientras que algunos siguen siendo detectable, expresando IFN-γ, aunque no pueden proliferar o expresar IL-2 [40, 41]. El aumento significativo de VIH-1 específica de IL-4 semanas de producción de 17 a 65 en el grupo B (p24), C (p24) y D (gp120) podrían indicar disfunción clonal en estos pacientes. Sólo el grupo A (TAR por sí sola) no tenían aumento de VIH-1 específica de IL-4 la producción. Así, la inmunoterapia en estos pacientes al parecer está asociada con el aumento de los niveles de VIH-1 específica de IL-4 la producción. IL-4, un anti-inflamatorio de tipo-2 de citoquinas, tiene un efecto supresor sobre la proliferación de linfocitos [26, 42]. La observación en un número de pacientes que el VIH-1 específica de IL-4 se incrementa cuando disminuyen las respuestas proliferativa puede indicar un mecanismo por el cual la proliferación clonal sigue siendo reprimidas, aunque para ello se necesita una investigación más a fondo. Anteriormente encontrado un equilibrio IL-4/IL-2 fenotipo del VIH-1 específica de CD4 de células T en las respuestas que los pacientes permanecen libres de la enfermedad [27]. Mientras que la IL-4 expresión por el VIH-1 específica de CD4 de células T puede ser pensado como una patológica anti-proliferativa efecto, debe considerarse que este fenotipo puede ser de protección, de amortiguación de activación inmune y anulación replicación viral. Esta relación requiere una investigación más a fondo.

A pesar de la falta de inducida por VIH-1 específica de células T respuestas en estos pacientes se presenta un aumento significativo de recordar las respuestas antígeno de proliferación, en particular para la persistencia de antígenos. Estos aumentos fueron en gran medida evidente entre la semana 0 y 65, sin diferencias entre los grupos, lo que sugiere que la inmunoterapia es eficaz en este sentido. Mientras que algunos aumentos significativos en las respuestas proliferativas al VIH-1 antígenos se desprende de semana 0 a 65 (grupo B y D), el mismo no puede decirse con respecto a la inmunoterapia período entre las semanas 17 y 65. Tampoco se registraron diferencias significativas en las respuestas entre los grupos. Estos resultados sugieren que las mejoras fueron singularmente atribuible a la duración del tratamiento antirretroviral.

Cabe destacar el caso de un paciente en el grupo B, el tétanos vacunados con 4 semanas antes de recibir la IL-2. Alto tétanos específicos de proliferación es mayor y sostenido en posteriores IL-2, tal como se informa por separado [25]. En contraste un segundo paciente recibió la vacunación de tétanos después de IL-2 y no respondió. Estas respuestas pueden ser dependientes de la administración de IL-2 con posterioridad al antígeno cebado, durante las células T contracción. Los modelos animales demuestran la IL-2 durante la administración de células T contracción aumenta y prolonga las respuestas, a diferencia de la administración conjunta de IL-2 con antígenos cuando la supervivencia de las células T en respuesta sea anulada [24]. Nuestro protocolo y otros que también limita logrado la inducción de respuestas [43] utilizó un co-administra modelo. Los ensayos futuros se ocupará de cuestiones tan importantes.

Hemos observado bajos niveles de autonomía transitoria de limitación de viremia resultante de la IL-2 terapia como se informó anteriormente [44]. A pesar de la falta de detectable mediada por células inducida por las respuestas de la inmunoterapia en estos pacientes, la carga viral transitoria blips nos han informado de que se produzcan aparecen menos en los pacientes que reciben IL-2 cuando se administra con Remune ™ en el grupo C, con una tendencia hacia la significación (p = 0,071). Más amplio de tamaños de grupo han puesto de manifiesto una relación más fuerte entre Remune ™ y la protección de IL-2 indujo viremia transitoria, pero este estudio piloto no se alimenta de esas observaciones. Este posible efecto de Remune ™ no se debe a la inducción de anticuerpos neutralizantes, por la pantalla de epítopos potencialmente sensibles a gp41 resultantes de la supresión de gp120 de Remune ™ [45]. Hemos separado la inducción de respuestas de anticuerpos contra el HLA-B62 y HLA-DR4 en algunos de estos pacientes que recibieron la inmunización Remune ™ [46], como Remune ™ contiene estos antígenos derivados de la HUT-78 línea celular en la que se cultiva . Grupo de los tamaños son demasiado pequeños en este estudio para determinar si esas respuestas pueden haber desempeñado un papel potencial en la protección de blips viral en el grupo C.

Conclusión

Combinada Remune ™ e IL-2 con ART en avanzado infección por VIH-1 confiere beneficios inmunológicos no al TAR. Tomando en conjunto la ausencia de inducida por VIH-1 específicos de proliferación de linfocitos respuestas, CD8 células T IFN-γ en las respuestas y las respuestas DTH in vivo estos resultados implican que la inducción de la renovada por VIH-1 específica mediada por células de las respuestas terapéuticas de inmunización, aun cuando complementado con IL-2, es sumamente problemático en pacientes que iniciar TAR con CD4 más bajos de células T cuenta. A pesar de que recientemente informó de ensayo clínico de la viruela vCP1433 canario-terapéutico de la vacuna p24-suscitó respuestas específicas que se asociaron significativamente con el tiempo fuera de la terapia en un tratamiento posterior de protocolo, estas respuestas también se mantuvo transitorio, la disminución de estudio a fin [47]. Esto pone de relieve las dificultades para inducir la respuesta inmunitaria protectora de la vacunación terapéutica de los pacientes con infección crónica. Por otra parte la protección inmunológica en personas con infección crónica pueden ser mejor conferida por el virus autólogo, a diferencia de la vacuna contra antígenos derivados que se encuentran con la vCP1452 canario viruela vacuna [48] para que las células T respuestas pueden ser asociados con más rápido rebote viral después del tratamiento interrupciones [49]. En nuestro estudio se produjo el mayor proliferativa respuestas al VIH-1 antígenos en pacientes que experimentaron virológica rebotes, lo que demuestra que el virus induce autólogo más respuestas, aunque sea transitoriamente, a más de inmunización o IL-2 terapia.

En estos tratados crónicamente infectados pacientes, encontramos que la inmunoterapia se asoció con el aumento de VIH-1 específica de IL-4 la producción, que parece tener un efecto negativo en las respuestas proliferativa. VIH-1 específica de IL-4 la producción puede ser el resultado de una disfunción del VIH-1-T CD4 específicas de las células patológicas con implicaciones para la inducción del VIH-1 respuestas concretas. Sugerimos que estos resultados ponen de relieve la importancia de la pronta iniciación de ART. Como Remune ™ puede tener efectos positivos en los pacientes menos avanzados [17], le sugerimos seguir las investigaciones, con o sin adyuvantes de citoquinas, se llevó a cabo en pacientes para quienes amplia daños inmunológicos se le ha impedido anteriormente con el inicio de ART.

Abreviaturas

ARTE (terapia antirretroviral), CMV (citomegalovirus), cpm (cargos por minuto), ADN (ácido desoxirribonucleico), el VIH-1 (virus de la inmunodeficiencia humana tipo-1), HLA (antígeno leucocitario humano), HSV (Herpes Virus), IgG (inmunoglobulina G), IFN (interferón), IL (interleucina), I / M (intramuscular), PBMC (células sanguíneas mononucleares periféricas), PCR (Polymerase Chain Reaction), ARN (ácido ribonucleico), S / C (subcutánea) , SI (Estimulación Index).

Conflicto de intereses

Los autores declaran que no tienen intereses en conflicto.

Autores de las contribuciones

Todos los autores han leído y aprobado la versión final de este manuscrito. GH, FG, NI y BG concibió el estudio y co-coordinado el diseño del estudio. GH y BG participado en la solicitud de los gobiernos y la aprobación ética, y en la coordinación del estudio; dirigió los trabajos de laboratorio y ensayos inmunológicos celulares, realizó el análisis de datos y de interpretación, y la preparación y realización del manuscrito. NI tenía la responsabilidad de gestión general y la coordinación del estudio, llevado a cabo trabajos de laboratorio y ensayos inmunológicos celulares, bajo la coordinación de análisis de datos e interpretación, y participó en la preparación del manuscrito. FG NI y fondos asegurados para el estudio. FG participó en el análisis de datos e interpretación, y en la preparación del manuscrito. RM siempre vacuna Remune ™ ™ Remune y de antígenos y su nativo antígeno p24 y participó en el diseño del estudio. MAA llevó a cabo ensayos de neutralización del virus. BG participado en el diseño del estudio, co-coordinada aplicación para el gobierno y la aprobación ética, y coordinada el manejo del paciente. AS llevó a cabo la atención de los pacientes y la gestión y participó en el estudio de coordinación, y la interpretación de los datos. MN participó en la atención de los pacientes y la gestión y la interpretación de los datos.

Agradecimientos

Los autores desean extender su agradecimiento a La Bienvenido Trust (Grant números 050020 y 058700) y el St Stephen's Trust SIDA / Crusaid para su financiación. NI FG y también fueron financiados por la UE (Grant número LSHP-CT-2004-503487) y MRC (Grant número G0501957). Clade B del VIH-1 recombinante antígenos fueron proporcionados por el Programa de la UE EVA / MRC instalación centralizada para el SIDA Reactivos, NIBSC, Reino Unido (Becas QLK-CT 1999-00609 y G9828102). ™ vacuna Remune, Remune ™ y nativo de antígenos p24 fueron proporcionados por Ron Moss, en el momento de escribir con la Respuesta Inmune Corporation, Carlsbad, CA, EE.UU.. También queremos dar las gracias a Aine McKnight de contribuciones para el estudio y el diseño y ejecución de experimentos de neutralización, Sundhiya Mandalia y Benigno Rodríguez para ayudar con el análisis estadístico, el personal de laboratorio de rutina en el Departamento de Inmunología, el personal de enfermería, y lo que es más importante la pacientes en el St Stephen's Centre, Chelsea y Westminster Hospital, Londres, Reino Unido